Гепатопротекторний засіб

Реферат: Винахід належить до експериментальної біології, медицини та харчової промисловості та стосується гепатопротекторного засобу, що містить високовуглеводний компонент - харчові волокна бурякового жому. Засіб може додатково містити лактобактерії та/або біфідобактерії та продукти їх життєдіяльності. UA 101723 C2 (12) UA 101723 C2 UA 101723 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Винахід належить до експериментальної біології, медицини і харчової промисловості, а саме біохімії, фармакології, патфізіології, ендокринології і використання біологічно активних добавок (БАД) з пробіотичними мікроорганізмами. Засіб може бути використаний як гіполіпідемічний і гепатопротекторний препарат. Відомий засіб, що має гепатопротекторні властивості (див. патент РФ № 2008125589, опубл. 27.12.2009), на основі біомаси бактерій і продуктів їх метаболізму, який як біомасу бактерій містить Bacillus subtilis. Недоліком засобу є те, що використовується водно-гліцеринове середовище, яке є несприятливим для розвитку мікроорганізмів та зберігання їх в певній визначеній кількості, необхідній для досягнення лікувального ефекту, крім того, наявність гліцерину і ароматизатору звужує можливості використання засобу. Відомий гіполіпідемічний і гепатопротекторний засіб (див. патент РФ № 97114385, опубл. 27.02.1999), що містить сухий буряковий сік, екстракти рослинної сировини. Недоліком засобу є необхідність отримання сухих екстрактів рослин, що передбачає складну енерговитратну технологічну обробку та використання у складі композиції легкозасвоюваних вуглеводів бурякового соку у кількості 80 % і більше. Це робить композицію висококалорійною. Найбільш близьким по технічній суті до пропонованого засобу є гепатопротектор і фармакологічна композиція на його основі, що містить біомасу лактобактерій Lactobacillus acidophilus і продуктів їх метаболізму, отримана шляхом культивування штамів вказаної культури на знежиреному молоці з наступною інактивацією і висушуванням разом із середовищем культивування (патент РФ № 2290941, опубл. 10.01.07). Композиція виконана у формі таблетки або драже та крім біомаси лактобактерій і продуктів їхнього метаболізму містить мікрокристалічну целюлозу, стеарат кальцію або магнію, аеросил і арабіногалактан. Композиція може бути використана для профілактики й лікування гострих токсичних поразок печінки. Ця композиція вибрана прототипом. Прототип і винахід, що заявляється, мають такі спільні ознаки: наявність біомаси лактобактерій і продуктів їхнього метаболізму та вуглеводного компоненту. Але засіб за прототипом має наступні недоліки: - композиція передбачає інактивацію молочнокислих бактерій, внаслідок чого втрачається їх пробіотична дія; - препарат містить стеарат кальцію або магнію, аеросил, які є нейтральними наповнювачами і не мають фізіологічної дії. В основу винаходу поставлено задачу розробити гепатопротекторний засіб для профілактики і лікування гострих токсичних уражень печінки. Технічний результат полягає в запобіганні гострої токсичної дії на печінку, поліпшенні функціонального стану органів і систем організму зумовленого покращенням ліпідного обміну, стабілізації оксидантно-антиоксидантних систем організму. Метою винаходу є розширення спектру гепатопротекторних засобів, які мають гіпохолестеринемічні властивості. Поставлена задача вирішена гепатопротекторним засобом, що містить високовуглеводний компонент, тим, що як високовуглеводний компонент він містить харчові волокна бурякового жому. Окрім цього даний засіб додатково містить лактобактерії та продукти їх життєдіяльності, при наступному співвідношенні компонентів, масова частка %: харчові волокна бурякового жому 5,0-10,0 біомаса лактобактерій і продукти їх життєдіяльності решта. Засіб також додатково містить лактобактерії і біфідобактерії та продукти їх життєдіяльності, при наступному співвідношенні компонентів, масова частка %: харчові волокна бурякового жому 5,0-10,0 біомаса біфідобактерій і продукти їх життєдіяльності 40-45 біомаса лактобактерій і продукти їх життєдіяльності решта. Вуглеводний комплекс (харчові волокна), які використовують у винаході, є неспецифічним сорбентом та непоганим субстратом як для мікрофлори шлунково-кишкового тракту, так і для сквашування лакто- та/або біфідобактерій, оскільки призводить до збільшення біомаси пробіотичної мікрофлори та до збільшення активності вказаних мікроорганізмів, що пов'язано із розщепленням вуглеводів. 1 UA 101723 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Приклад 1 Приготування харчових волокон бурякового жому для використання їх як гепатопротекторного засобу. Наважку бурякового жому піддають гідролізу розчином гідроксиду натрію з концентрацією 0,1 % при температурі 60-65 °C протягом 20-30 хвилин при співвідношенні твердої маси до лужного розчину 1:(7-10), потім проводять обробку твердого залишку розчином перекису водню з масовою часткою Н 2О2 33-38 % при 60-65 °C протягом 1,52 годин при співвідношенні твердого залишку та розчину перекису водню 1:1, фільтрацію, промивання твердого залишку дистильованою водою, фільтрацію та висушування готового препарату до вологості 6-9 %. Готовий препарат – харчові волокна бурякового жому (ХВБурЖ) після висушування і подрібнення являють собою порошок світло-кремового кольору, з солодкуватим присмаком, термін придатності продукту не менш 12 місяців, при температурі зберігання 18±1 °C. Дисперсійний склад порошку - 0,25-0,5 мм. Приклад 2 Приготували гепатопротекторний засіб з лактобактеріями. Для цього вносили в поживне середовище (знежирене молоко) харчові волокна бурякового жому, подрібнені до розміру часток 0,1-0,25 мм при співвідношенні жом: поживне середовище 1:(7-10), потім додавали консорціум культур бактерій Lactobacillus acidophilus і Lactobacillus bulgaricus з титром не менше 6 10 КУО/г при співвідношенні до об'єму поживного середовища 1:20. Проквашування здійснювали 18-24 годин при температурі 37±1 °C. Отриманий препарат являє собою густу рідину кремового кольору з приємним молочним запахом і смаком. При необхідності довгострокового зберігання препарат ліофільно висушують, використовують до або під час їжі для поліпшення ліпідного обміну та як гепатопротектор. Приклад 3 Приготували гепатопротекторний засіб з лакто- та біфідобактеріями. Для цього вносили в поживне середовище (знежирене молоко) харчові волокна бурякового жому, подрібнені до розміру часток 0,1-0,25 мм при співвідношенні жом: поживне середовище 1:(7-10) потім до поживного середовища послідовно вносили спочатку консорціум бактерій Bifidobacterium 5 adolescentis і Bifidobacterium bifidum з титром не менше 10 КУО/г при співвідношенні до об'єму поживного середовища 1:20 та культивували 18-24 години при температурі 37±1 °C, потім додавали консорціум пробіотичних культур лактобактерій Lactobacillus acidophilus і Lactobacillus 6 bulgaricus з термофільним стрептококом Streptococcus thermophilus з титром не менше 10 КУО/г при співвідношенні до об'єму поживного середовища 1:20, бактерії культивували ще 18-24 години при температурі 37±1 °C та постійному перемішуванні. Отриманий препарат являє собою густу кремоподібну масу світло-кремового або молочного кольору з приємним запахом і молочним смаком. При необхідності довгострокового зберігання препарат ліофільно висушують, використовують до або під час їжі. Висушений препарат можливо таблетувати при температурі 45±1 °C, тиск становить 30 МПа протягом 10 хвилин. Таблетована форма продукту 8 8 містить 7·10 КУО/г лактобацил та 5·10 КУО/г біфідобактерій, що відповідає пробіотичній дозі для даного виду препаратів. Термін зберігання не менше 9 місяців при температурі 4±2 °C. Гепатопротекторну дію засобу досліджували на білих безпородних щурах з експериментальним хронічним гепатитом, який викликали внутрішньочеревно введенням 50 % розчину тетрахлорметану у олії. В крові тварин визначали вміст загального білірубіну, лужної фосфатази, аланінамінотрансферази (АлАТ), мкмоль/л/хв, аспартатамінотрансферази (АсАТ), мкмоль/л/хв, в тканинах печінки визначали вміст загальних ліпідів, відновленого глутатіону (GSH), мкмоль/г, коефіцієнт де Рітіса - співвідношення вмісту АсАТ до АлАТ. В дослідженнях були задіяні 8 груп по 20 тварин. У період введення в раціон гепатопротекторного засобу спостерігали за темпами росту, загальним станом тварин. У тварин, що одержували в складі раціону ХВБурЖ, ХВБурЖ з лактобактеріями та ХВБурЖ з лакто- і біфідобактеріями не спостерігалося відхилень у поведінці, загальному стані від контрольних тварин. Тварини були розділені наступним чином: 1 - контрольна - інтактні тварини, 2 - введення тетрахлоретану на протязі трьох днів, 3 - тварини, що у складі раціону отримували харчові волокна бурякового жому (ХВБурЖ), 4 - тварини з гепатитом, що у складі раціону отримували ХВБурЖ, 5 - тварини, що у складі раціону отримували препарат на основі ХВБурЖ з лактобактеріями, 6 – тварини з гепатитом, що у складі раціону отримували засіб з лактобактеріями, 7 - тварини, що у складі раціону отримували препарат на основі ХВБурЖ з лакто- та біфідобактеріями, 8 - тварини з гепатитом, що у складі раціону отримували засіб з лакто- та біфідобактеріями. 2 UA 101723 C2 5 10 15 20 25 Оцінка ступеня ураження печінки здійснювалася за допомогою тесту на визначення активності сироваткової АсАТ крові. Активність визначали через 1, 3, 5, 7 діб після введення тетрахлоретану у порівнянні із зразками крові інтактних тварин, та тварин без гепатиту (табл. 2). Гепатопротекторна дія засобів має комплексний характер і виражається в зниженні ліпідемії у тварин, що отримували їх у складі раціонів; зменшенні ступеня втрати маси тіла тварин з гепатитом (табл. 1); зниженні перекисного окиснення ліпідів (ПОЛ), активації антиокислювального захисту (АОЗ). Тварини, що отримували засоби, мають різні значення активності ферментних систем та відрізняються станом оксидантної та антиоксидантної систем. На фоні токсичного гепатиту, викликаного у тварин тетрахлоретаном, в групах на раціонах з пропонуємими засобами виявлені неоднозначні зміни вивчених показників, при цьому всі добавки позитивно впливають на фізіолого-біохімічні показники стану експериментальних тварин (табл. 2). На 3-5 добу у тварин розвився виражений токсичний гепатит, вага тварин зменшилася на 25-33 %, вага печінки збільшилася на 18-23 % в групі на ЗВР, відмічено по надлишкове наповнення кров'ю та помітні зміни кольору і структури органу. Печінка тварин в групі на раціоні із введенням ХВБурЖ збільшилася лише на 6-12 %, некротичні зміни відсутні, групі на раціоні із введенням ХВБурЖ з лактобактеріями на 4-8 %, в групі на раціоні із введенням ХВБурЖ з лакто- і біфідумбактеріями на 3-4 %. Активність АсАТ в контрольній групі з гепатитом підвищилася в 2,5-4 рази, порушилося співвідношення вмісту аспартатамінотрансферази АсАТ мкмоль /л/хв до аланінамінотрансферази - АлАТ мкмоль/л/хв - коефіцієнта де Рітіса. В результаті проведених досліджень з'ясовано, що всі засоби попереджають гіперліпідемію та гіпербілірубіномію, зменшується активність АсАТ і АлАТ, в результаті досягається стабілізація коефіцієнта де Рітіса, а також зменшується активність лужної фосфатази. У засобу, що містить ХВБурЖ та лакто- і біфідобактерії найбільш виражений нормалізуючий вплив на підвищену токсикантом концентрацію ліпідів у сироватці крові. З наведених у таблицях 1, 2 даних випливає, що всі види засобів: ХВБурЖ, композиції, що містять ХВБурЖ та лактобактерії, ХВБурЖ та лакто- і біфідобактерії при використанні перорально в складі раціонів харчування до або під час їжі здатні виявляти гепатопротекторні властивості, можуть бути використані для поліпшення ліпідного обміну. 30 Таблиця 1 Гепатопротекторна активність засобів при токсичному гепатиті у щурів, викликаному тетрахлорметаном, (Р≥0,95) Вид раціону ЗВР ХВБурЖ ХВБурЖ з лактобактеріями ХВБурЖ з біфідобактеріями лакто та ХВБурЖ ХВБурЖ з лактобактеріями ХВБурЖ з біфідобактеріями лакто та ХВБурЖ ХВБурЖ з лактобактеріями ХВБурЖ з біфідобактеріями лакто Летальність, % 3 доби 7 діб інтактні 0 0 з гепатитом 25 35 ЗВР з додаванням 10 % засобу здорові 0 0 з гепатитом 6 8 здорові 0 0 з гепатитом 4 6 здорові 0 0 з гепатитом 2 4 ЗВР з додаванням 20 % засобу здорові 0 0 з гепатитом 8 10 здорові 0 0 з гепатитом 4 6 здорові 0 0 з гепатитом 2 4 ЗВР з додаванням 30 % засобу здорові 0 0 з гепатитом 6 8 здорові 0 0 з гепатитом 2 4 здорові 0 0 з гепатитом 0 2 Група тварин та 3 Зміна маси тіла, г Вага печінки, г + 1,0 - 1,8 2,6±0,5 3,2±0,7 + 0,95 - 1,1 + 1,0 - 0,65 + 1,1 -0,55 2,5±0,4 2,8±0,5 2,4±0,5 2,6±0,5 2,5±0,4 2,5±0,5 + 0,98 - 1,1 + 1,2 - 0,55 + 1,0 - 0,43 2,4±0,5 2,6±0,5 2,6±0,4 2,7±0,5 2,3±0,3 2,4±0,4 + 0,92 - 1,2 + 1,2 - 0,35 + 1,0 - 0,40 2,5±0,4 2,6±0,4 2,6±0,4 2,7±0,3 2,4±0,4 2,5±0,3 UA 101723 C2 Таблиця 2 Результати дослідження впливу засобів на деякі біохімічні показники щурів, (Р≥0,95) Вид раціону Показники 1 кров Холестерин, ммоль/л Білірубін, мкмоль/л Загальний білок, г/л АлАТ, мкмоль /л/хв АсАТ, мкмоль /л/хв Коефіцієнт де Рітіса GSH, мкмоль/г ЛФ, нкмоль /л/с МДА, нмоль/см АОА, % печінка МДА, нмоль/мг білка Коефіцієнт де Рітіса здорові тварини 3 5 7 2 тварини з гепатитом 4 6 8 3,56 7,4 76,4 8,59 11,42 1,33 19,72 334,1 3,6 22,7 2,85 6,2 61,9 8,23 10,45 1,27 19,58 325,5 3,5 21,5 2,35 6,5 78,5 8,15 10,35 1,27 20,15 348,2 3,4 22,3 1,45 6,4 75,2 8,35 10,86 1,30 22,42 330,5 3,5 21,8 4,65 12,3 91,5 9,25 18,97 2,05 16,20 457,9 8,3 28,5 3,34 7,5 67,3 10,55 16,14 1,53 17,81 416,1 5,6 24,5 3,15 6,8 81,1 9,88 14,85 1,50 18,53 485,2 4,8 21,6 2,75 6,6 82,7 12,14 14,15 1,17 19,21 358,7 3,6 22,5 2,61 1,32 2,33 1,32 2,06 1,22 2,14 1,31 4,78 2,14 3,82 1,36 2,76 1,34 2,54 1,32 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 5 10 1. Гепатопротекторний засіб, що містить високовуглеводний компонент, який відрізняється тим, що як високовуглеводний компонент він містить харчові волокна бурякового жому. 2. Засіб за п. 1, який відрізняється тим, що він додатково містить лактобактерії та продукти їх життєдіяльності, при наступному співвідношенні компонентів, масова частка %: харчові волокна бурякового 5,0-10,0 жому біомаса лактобактерій і продукти їх життєдіяльності решта. 3. Засіб за п. 1, який відрізняється тим, що він додатково містить лактобактерії і біфідобактерії та продукти їх життєдіяльності, при наступному співвідношенні компонентів, масова частка %: харчові волокна бурякового жому 5,0-10,0 біомаса біфідобактерій і продукти їх життєдіяльності 40,0-45,0 біомаса лактобактерій і продукти їх життєдіяльності решта. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4