Спосіб прогнозування перебігу неспецифічного виразкового коліту

Спосіб прогнозування перебігу неспецифічного виразкового коліту, який включає дослідження стану імунної системи, який відрізняється тим, що визначають експресію рецепторів на лімфоцитах периферичної крові до ІЛ2 (CD25), FAS/APO-1 (CD95) і до HLA-DR, при кількості CD25 від 19 % до 39 %, CD95 від 15 % до 23 % та HLA-DR від 20 % до 35% прогнозують сприятливий перебіг неспецифічного виразкового коліту, а при їх кількості від 4 % до 7 %, від 8 % до 14 %, від 9 % до 13 % - відповідно, несприятливий перебіг захворювання. Спосіб, що заявляється, відноситься до медицини, зокрема до способів прогнозування перебігу захворювань внутрішніх органів людини, і може використовуватися для прогнозування перебігу неспецифічного виразкового коліту (НВК). НВК залишається тяжким захворюванням з прогресуючим перебігом, системними проявами та небезпечними для життя ускладненнями, що часто приводить до інвалідизацм осіб молодого віку. В зв'язку з поліморфізмом клінічних проявів захворювання оцінка активності патологічного процесу та прогнозування подальшого перебігу представляє значні труднощі. Незважаючи на те, що під впливом лікування за допомогою сучасних лікарських засобів покращується загальний стан хворих, зменшується ректальна кровотеча та діарея, запальний процес в слизовій оболонці товстої кишки має хронічний характер із здатністю до рецидивування [1]. У зв'язку з цим прогнозування перебігу захворювання є необхідною умовою для визначення адекватної терапії та її терміну. Способи прогнозування перебігу НВК відомі. Запропоновані методи прогнозування перебігу НВК грунтуються на аналізі клінічних симптомів (кількість дефекацій, домішки крові у випорожненнях, інтенсивність больового синдрому), наявності позакишкових проявів, ступеня вираженості патологічних ознак за результатами ендоскопічних досліджень, показників лабораторних даних (індекси Truelove та Rachmilewitz) [2]. Клінічні методи дозволяють прогнозувати перебіг захворювання за оцінкою ступеня порушення функції кишечнику, загального стану організму, системних проявів захворювання [3]. Разом з тим вони припускають оцінку стану самим хворим, що може носити суб'єктивний характер. Відомий спосіб прогнозування перебігу НВК, який грунтується на ендоскопічних даних (ректороманоскопії, колоноскопії), що дають можливість прогнозувати перебіг НВК за оцінкою змін слизової оболонки кишки, але суттєвим недоліком цього методу є інвазивність, травматичність та недостатня точність прогнозування перебігу захворювання [4]. Відомий спосіб прогнозування перебігу НВК шляхом вивчення показників крові, які характеризують активність запального процесу, таких як підвищення 2- та -тобулинів, маркера аутоїмунного запалення 2мікроглобуліна [5]. Цей спосіб, як найбільш близький до заявленого нами за своєю суттю та ефектом, який досягається, прийнятий за прототип. Однак цей спосіб не забезпечує високої точності прогнозування перебігу НВК. В основу корисної моделі поставлене завдання розробити спосіб прогнозування перебігу НВК, який дозволив би підвищити точність прогнозу. Поставлене завдання відносно предмету винаходу досягається тим, що в способі прогнозування перебігу НВК, який включає дослідження показників (О CM < 10426 анамнезу: хворіє біля 8 років. За медичною допомогою не зверталася. Лікувалась самостійно травами. Останнє загострення на протязі 1 міс. При об'єктивному обстеженні - стан хворої відносно задовільний. Шкіра та видимі слизові звичайного кольору. Над легенями дихання везикулярне. Пульс - 7В ударів за хвилину, задовільних властивостей. AT - 140/90 мм рт.ст. Язик вологий з білим налітом біля кореня. Живіт при пальпації м'який, болючий в нижніх відділах. Печінка не збільшена. Дані лабораторних та інструментальних методів дослідження: Загальний аналіз крові 08.04.03: гемоглобін - 122 г/л, еритроцити - 4,0x10іа/л, кольоровий показник - 0,92, лейкоцити - 7,6x10%, ШОЕ - 15 мм/ч, базофіли - 1%, еозинофіли - 2%, паличк. - 6%, сегм. - 48 %, лімф. - 34 %, мон. - 9% Загальний аналіз сечі 08.04.03: РН - кисл., питома вага 1018, білок - відс, глюкоза - відс, лейкоц - 0-1. в п. зр., епітелій - одиничний, слиз - +, добова сеча на сахар - відс, амілаза сечі - 68,8 г/л Біохімічний аналіз крові 21.04.03: загальний білок - 82,2 г/л, білірубін загальний 10,6 мкмоль/л, прямий - негативи., АлАТ - 0,11 ммоль/л, глюкоза - 4,9 ммоль/л, амілаза - 28,8 г/л Дослідження мікрофлори калу 09.04.03: заключения: відсутні біфщо- та лактобактерґі. Значно підвищений вміст Staph. aureus (106). Копрограма 04.04.03: неоформл., м'як., коричнев., мила - незначна кількість, неперетравлена клітковина - незначна кількість. Ректороманоскопія 07.04.03: Огляд проведений на 18 см. На дослідженій ділянці -гіперемія, зернистість, рихлість слизової оболонки, місцями геморагії та ерозії, на стінках фібрин, слиз, тонус кишки знижений, судинний рисунок не простежується, контактна кровоточивість помірна, сфінктер подразнений. Заключения: НВК, стадія загострення, помірна активність. Іригоскопія 01.04.03: Заключения: НВК, хронічна форма з ураженням товстої кишки до печінкового вугла. Морфологічне дослідження 07.04.03: Заключения: Товста кишка. Регенераторна гіперплазія крипт з ерозуванням зі слабко вираженою проліферативною активністю покровного епітелію. Картина характерна для неспецифічного виразкового коліту. Імунологічне дослідження: імунного статусу, визначають експресію рецепторів на лімфоцитах периферичної крові до ІЛ-2 (CD25), FAS/APO-1 (CD95) і до HLA-DR. При кількості CD25 від 19 % до 39 %, CD95 від 15 % до 23 % та HLA-DR від 20 % до 35% прогнозують сприятливий перебіг НВК, а при їх кількості від 4 % до 7 % , від 8 % до 14 % , від 9 % до 13 % - відповідно, несприятливий перебіг захворювання. Роль факторів імунного захисту, які суттєво змінюються у процесі хронізації НВК, загальновідома. Останнім часом багато уваги надається запрограмованій клітинній гибелі -апоптозу, що є одним з головних механізмів регулювання імунної системи [б]. Спеціалізованим рецептором для індукції апоптозу є CD95 (Fas/APO-1), який бере участь у розвитку аутоімунних захворювань. Маркером активації Т-лІмфоцитів є експресія антигенів гістосумюності II класу (HLA-DR). Відповідно до зниження Т-клітинної ланки імунітету визначається й зменшення цього показника в усіх хворих, з максимальним зниженням у хворих з тяжким перебігом захворювання. В останні роки найбільш активною областю наукових досліджень стало вивчення ендогенних цитокінів - розчинних продуктів (медіаторів) активованих імунокомпетентних клітин та їх рецепторів. В цьому зв'язку ми вивчали рівень IL-1 , IL-2 та експресію рецепторів до IL-2 (CD25) у досліджених хворих. Спосіб прогнозування перебігу НВК, який заявляється, здійснюється таким чином: із 5 мл гепаринизованої периферичної венозної' крові пацієнтів в градієнті щільності фіколуверографіну 1,077 г/мл виділяли мононуклеарні клітини (лейкоконцетрат). Субпопуляційний склад лімфоцитів визначали за допомогою моноклональних антитіл фірми "Сорбент ТМ" (Москва) до кластерів: CD25, CD95, HLA-DR методом непрямої імунофлюоресценції. Проводили оцінку отриманих показників: при кількості CD25 від 19 % до 39 %, CD95 від 15 % до 23 % та HLA-DR від 20 % до 35% прогнозували сприятливий перебіг НВК, а при їх кількості від 4 % до 7 % , від В % до 14 % , від 9 % до 13 % відповідно, несприятливий перебіг захворювання. Спосіб прогнозування перебігу НВК ілюструється наступними прикладами. Приклад 1 Хвора П., 45 років (історія хвороби № 1025) поступила у відділення захворювань кишечнику Інституту гастроентерології 03.04.03р. При надходженні скаржилася на біль у нижній частині живота, більш у лівих відділах, збільшення частоти стулу до 3-4 разів на день з домішками у калі слизу та крові, хибні позиви до дефекації, слабкість. З Показники Лейкоцити Лімфоцити СДЗ (Т-лімфоцити) СД 9 (В-лімфоцити) СД4 (Т-хелпери) СД8 (Т-супресори) СД25 (рецептори до IL-2) СДІб(Т-кіпери) Отримані результати абс. значення % 6,0x107л 1,44хЮу/л 24 0,61хЮа/л 28 0,39x107л 18 0,57x10у/л 26 0,39x107л 18 0,44x107л 20 0,17хЮ7л 8 Нормальні величини абс. значення 4,0-8,0x107л 1,40-2,50х107л 1,09-3,32x107л 0,38-0,52 х107л 0,39-0,77х107л 0,22-0,44хЮ7л 0,09-0,26 х107л 0,16-0,29x107л % 18-38 53-56 15-22 32-45 14-22 8-15 12-18 10426 Продовження табл. Показники Cfl95(Fas\APO-1) HLA - DR СДЗ/СД19 СД4/СД8 ЦИК IqA IflM IqG Отримані результати абс.значення % а 17 0,37x10 /л у 0,41хЮ /л 20 1,55 1,4 4,3 од.оп.пл 3,30 г/л 1,76г/л 13,0 г/л За даними скарг хворої, анамнезу та результатів додаткових лабораторних та інструментальних методів дослідження був виставлений діагноз: НВК хронічна рецидивуюча форма середнього ступеня тяжкості, з помірною активністю запалення, з лівобічним ураженням товстої кишки, фаза загострення. Проведене лікування; сульфасалазин, панкреатин, сілібор, біфідум-бактерин, віт. В 12, В6, мікроклизми з гідрокортизоном. В результаті проведеного лікування стан хворої покращився, біль і диспептичні явища зникли, зменшилась частота випорожнень кишечнику до 1 разу на добу, припинилося виділення крові з калом. Вивчення віддалених результатів лікування показало, що стійка ремісія в даному випадку спостерігалась на протязі 1,5 років. Визначення експресії рецепторів на лімфоцитах периферичної крові до ІЛ-2 (CD25), FAS/APO-1 (CD95) і до (HLA-DR) дозволило передбачити у хворої сприятливий перебіг захворювання. Приклад 2 Хворий В., 31 рік {історія хвороби № 141) знаходився у відділенні захворювань кишечнику Інституту гастроентерології з 12.01.04 р. по 20.02.04 При надходженні скаржився на біль у нижній частині живота, збільшення частоти стулу до 15 разів на добу, домішки у калі слизу та крові, хибні позиви до дефекації, гурчання в животі, слабкість. З анамнезу: хворіє на НВК 3 роки. Неодноразово лікувався в Інституті гастроентерології, останній раз півроку тому. При надходженні загальний стан хворого відносно задовільний. Астенізований. Відзначається блідість шкіри та слизових оболонок. Над легенями дихання везикулярне. Тони серця приглушені, ритмічні. Пульс - 74 ударів за хвилину, задовільних властивостей. AT - 110/70 мм рт.ст. Язик вологий обкладений білим налітом. Живіт при пальпації м'який, болючий в нижніх відділах. Печінка не збільшена. Данні лабораторних та інструментальних методів дослідження; Загальний аналіз крові 16.01.04: Показники Лейкоцити Нормальні величини абс. значення % у 15-23 0,17-0,30 хЮ /л у 14-23 0,18-0,38 х10 /л 1,6-3,0 1,8-2,2 2-5 од.оп.пл 1,0-3,0 г/л 0,5-2,0 г/л 8,0-17,0 г/л гемоглобін - 102 г/л, еритроцити - 3,4x10 /л, 9 кольоровий показник - 0,91, лейкоцити - 4,0x10 /л, ШОЕ - 25 мм/ч, еозинофіли - 14%, палочк. - 11%, сегм. - 24%, лімф. - 5 1 % Загальний аналіз крові 18.02.04: гемоглобін - 97 г/л, еритроцити - 2,8x1012/л, кольоровий показник - 0,91, лейкоцити -5,6x10%, СОЕ - 16 мм/ч, еозинофіли - 4%, палочк. - 4%, сегм. - 48 %, лімф. - 44 %, анізоцитоз, гіпохромія Загальний аналіз сечі 13.01.04: РН- нейтр., питома вага 1032, білок - відс, глюкоза - відс, лейкоц. - 1-3 в п. зр., епітелій - 1-2 в п. зр., оксалати - знач., добова сеча на сахар відс, амілаза сечі - 56,0 г/л Біохімічний аналіз крові 14.01.04: загальний білок - 80 г/л, білірубін загальний 8,5 мкмоль/л, прямий - негативи., АлАТ - 0,23 ммоль/л, АсАт.- 0,11, глюкоза - 4,0 ммоль/л, амілаза - 20,8 г/л Дослідження мікрофлори калу 10.02.04. Заключения: знижений вміст біфідофлори, підвищений вміст кишкової палички та дрожджоподібних грибів роду Candida. Копрограма 15.01.04: неоформл., м'який., коричнев., мила - незначна, кількість, неперетравлена клітковина - незначна кількість. УЗД 01.04.03: Заключения: Дифузні зміни печінки, хронічний холецистит, Ректороманоскопія 14.01.04: В ділянці анального сфінктера гемороїдальні вузли. При пальцевому досліджені болючість виражена. Тубус ректоскопу введений на 13 см. На глибині 8 см частково звужений просвіт, проходимий для дитячого ректоскопу. Слизова оболонка дослідженої ділянки кишки бліда, рихла, місцямі з геморагічноєрозівним компонентом, виразками, тонус кишки знижений, судинний рисунок відсутній, контактна кровоточивість виражена, сфінктер різко гіперемований. Взята біопсія. Заключения: НЯК, стадія вираженого загострення. Морфологічне дослідження 15.01.04: Заключения: Ознаки ерозування слизової оболонки, дисплазія епітелію. Картина відповідає НВК в стадії загострення. імунологічне дослідження: Отримані результати о/ абс. Значення /0 4,9x10ы/л Нормальні величини абс Значення 4,0-8,0x10й/л /о 10426 Продовження табл. Показники Лімфоцити СДЗ (Т-лімфоцити) СД19 (В-лімфоцити) СД4 (Т-хелпери) СД8 (Т-супресори) СД25 (рецептори до IL-2) СД16(Т-кілери) Cfl95jFas\APO-1) HLA-DR СДЗ/СД19 СД4/СД8 ЦИК IgA IqM IgG Отримані результати абс. Значення % 38 1,86хЮ7л а 0,37x10 /л 20 а 0,37x10 /л 20 у 0,48x10 /л 26 0,30x107л 16 9 0,33x10 /л 6 у 0,22x10 /л 12 0,28x107л 12 у 0,22x10 /л 12 1,0 1,6 6,9 од.on.пл 2,25 г/л 0,84 г/л 14,5 г/л За даними скарг хворого при надходженні до стаціонару, анамнезу захворювання, даних додаткових лабораторних та інструментальних методів дослідження був виставлений діагноз: НВК хронічна рецидивуюча форма, тяжкий перебіг, з вираженою активністю запалення, фаза загострення. ПостгеморагІчна анемія. Проведене лікування: Дієта, преднізолон з ЗО мг на добу, сульфасалазин, панангін, солізим, глутарпн, смекта, метрогіл, абаістал, неогемодез, глюкоза, біфідум-бактерин, віт. В 12, В6, мікроклизми з гідрокортизоном, свічки салофальк. В результаті проведенного лікування стан хворого покращився, біль і диспептичні явища зникли, частота випорожнень скоротилася до 7-8 разів на добу, зменшилась кількість крові у випорожненнях. Ремісія тривала 6 місяців та не була стійкою. Визначення експресії рецепторів на лімфоцитах периферичної крові до ІЛ-2 (CD25), Нормальні величини абс. Значення % а 1,40-2,50x10 /л 18-38 53-56 1,09-3,32x107л а 15-22 0,38-0,52x1 О /Л 0,39-0,77x107л 32-45 14-22 0,22-0,44 хЮ7л 8-15 0,09-0,26 х107л 0,16-0,29 хЮ7л 12-18 15-23 0,17-0,30 х107л 14-23 0,18-0,38 хЮ7л 1,6-3,0 1,8-2,2 2-5 од.оп.пл 1,0-3,0 г/л 0,5-2,0 г/л 8,0-17,0 г/л FAS/APO-1 (CD95) і до (HLA-DR) дозволило передбачати у хворого несприятливий перебіг захворювання. Даний спосіб прогнозування перебігу НВК використано при дослідженні 31 хворого, які знаходились на лікуванні у відділені захворювань кишечнику Інституту гастроентерології АМН України. У групі хворих із сприятливим перебігом НВК (термін ремісії понад 1,5 роки) спостерігалися нормальні показники CD95, збільшення експресії CD25 та HLA-DR, що є показником активації імунної відповіді організму. У групі хворих з тяжким перебігом НВК виявлено вірогідне зниження цих показників, що свідчило про глибоке порушення імунологічної рівноваги та пригнічення імунної відповіді організму і співпадало з коротким терміном ремісії захворювання. Результати проведених досліджень представлені у таблиці 1. Таблиця 1 Прогностичні маркери перебігу НВК Показники CD25, % CD95, % HLA-DR, % Сприятливий перебіг НВК (п=23) 29±9 19±4 26±5 Термін ремісії (роки) Таким чином, визначення рецепторів CD25, CD95 і HLA-DR на поверхні мембран лімфоцитів периферичної крові є прогностичним маркером перебігу неспецифічного виразкового коліту. Метод простий у виконанні та забезпечує достовірну точність, може бути запропонований для масового використання в медичних закладах. Джерела інформації: 1. Rachmilewitz D. Coated mesalazine (5aminosalicylic acid) versus sulphsalazine in the treatment of active ulcerative colitis: a randomized trial // Med. J. - 1989. - Vol. 289.- P. 82-86. 2. Парфенов А.И. Энтерология. - M: Триада-Х, 1,7±0,3 Несприятливий перебіг НВК (п=8) 6±1,5 11±3 11±2 Термін ремісії (роки) 0,5±0,2 2002.-744 3. Modigliani R. Clinical assessment of disease activity // Congress short report Falk symposium IBD.Strasbourg6 September 6-8. - 1993. - Vol.72.- P.16 17. 4. Адлер Г. Болезнь Крона и язвенный колит. М.: Гэотар - мед. - 2001. 5. Heatley R.V. Disodium cromoglycate in the treatment of chronic proctitis //Gut. -1985.-Vol. 16.-P. 559-563. 6. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза.- М.: Эдиториал УрСС, 2002.-320 с. 10426 Комп'ютерна верстка М. Клюкін Підписне 10 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м, Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601