8-оксихінолінію 5-бром-n-фенілантранілати, що проявляють антимікробну, протигрибкову та протизапальну активність

Реферат: Винахід належить до хіміко-фармацевтичної промисловості, зокрема до хімічних сполук 8оксихінолінію 5-бром-N-фенілантранілатів. Суть винаходу полягає в одержанні нових індивідуальних хімічних сполук 8-оксихінолінію 5бром-N-фенілантранілатів загальної формули: UA 110477 C2 (12) UA 110477 C2 Br + N H OH COOR N H , дe: R=4'-OC2H5 aбo 4'-Cl, що виявляють антимікробну, протигрибкову та протизапальну активність. Br + N H OH COOR N H UA 110477 C2 5 10 15 Винахід належить до хіміко-фармацевтичної промисловості, зокрема, до індивідуальних хімічних сполук, а саме 8-оксихінолінію 5-бром-N-фенілантранілатів, які проявляють протизапальну та антимікробну активність. У сучасній світовій медицині існує велика кількість лікарських препаратів, які тим чи іншим шляхом впливають на мікроорганізми, серед яких певне місце належить сполукам на основі 8оксихіноліну. Але пошук нових протизапальних засобів залишається актуальною проблемою сучасної медицини через значну кількість медичних наслідків, викликаних інфекційними процесами різної етіології. Відомий цілий ряд лікарських засобів синтетичного походження, кожен з яких має свою домінуючу дію: етакридину лактат (антимікробна дія), нітрофурал та гризеофульвін (протигрибкова дія), натрію диклофенак (протизапальна дія) (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - M: OOO "Издательство Новая Волна", 2005. - 1200 с: ил. - С. 951, 852, 913, 170). До недоліків зазначених засобів можна віднести, зокрема, наявність у тій чи іншій мірі негативної побічної дії. У комплексному лікуванні виникає необхідність призначення хворому одночасно декілька лікарських засобів з моноспрямованою фармацевтичною дією, внаслідок чого загальна побічна дія підсилюється. Головними недоліками відомих препаратів є висока токсичність (натрію диклофенак) та моноспрямованість фармакологічної дії (етакридину лактат, нітрофурал та гризеофульвін). За прототип вибрано 8-оксихінолінію 2-хлор-3,5-динітробензоат формули: 20 COO O2N + N H Cl OH 25 30 NO2 , який виявляє протизапальну та антимікробну активність (Патент на корисну модель 58679, Україна МПК С07D 215/02, А61D 31/00, А61Р 29/00, заявл. 13.08.2010, опубл. 26.04.2011, Бюл. № 8). Дія цього засобу направлена на протизапальну та антимікробну активність. Актуальним питанням залишається створення засобів з розширеною фармакологічною дією і більш низьким токсичним впливом. В основу винаходу поставлено задачу створення нових хімічних сполук, що проявляють високу антимікробну, протигрибкову та протизапальну активність при низькій токсичності. Поставлена задача вирішується шляхом синтезу нових хімічних сполук - 8-оксихінолінію 5бром-N-фенілантранілатів загальної формули: Br + N H OH COOR N H , 35 40 45 де: R=4'-OC2H5 (1) або R-4'-Cl (2), які виявляють антимікробну, протигрибкову та протизапальну активність. Речовини, які заявляються, утворені взаємодією 5-бром-N-(4'-етоксифеніл)-антранілової або 5-бром-N-(4'-хлорфеніл)-антранілової кислот з 8-оксихіноліном у ацетоновому середовищі. Отримані сполуки - блідо-сірого кольору порошки, погано розчинні у гексані, добре розчинні у етанолі, діоксані, ДМСО, ДМФА. Структура сполук підтверджена за допомогою елементного аналізу та ІЧ-спектроскопії. Запропоновані сполуки суттєво перевищують за зазначеними видами активності натрію диклофенак та етакридину лактат, крім того, описані сполуки значно менш токсичні, ніж препарати порівняння та сполука за прототипом. Винахід ілюструється наступними прикладами: Приклад 1 1 UA 110477 C2 5 10 15 20 25 30 35 До 1,45 г (0,01 моль) 8-оксихіноліну, розчиненого у 15 мл безводного ацетону, додають 3,36 г (0,01 моль) 5-бром-N-(4'-етоксифеніл)-антранілової кислоти, розчиненої у 15 мл безводного ацетону. Осад, що випав, відфільтровують та сушать. Одержано сполуку № 1 - 8-оксихінолінію 5-бром-N-(4'-етоксифеніл)антранілат. Вихід - 4,43 г (92 %), Ттопл. - 221-224 °C, М.м. - 481,35. Бруто-формула: C24H21BrN2O4. Розраховано, %: С - 59,89; Н - 4,40; N - 5,82. Знайдено, %: С - 59,87; Н - 4,44; N - 5,89. -1 ІЧ-спектр у KВr, см : 3400, 3320, 2925, 1630, 1598,1570, 1418, 1238, 705. Приклад 2 До 1,45 г (0,01 моль) 8-оксихіноліну, розчиненого у 15 мл безводного ацетону, додають 3,27 г (0,01 моль) 5-бром-N-(4'-хлорфеніл)-антранілової кислоти, розчиненої у 15 мл безводного ацетону. Осад, що випав, відфільтровують та сушать. Одержано сполуку № 2 - 8-оксихінолінію 5-бром-N-(4'-хлорфеніл)антранілат. Вихід - 4,44 г (94 %), Ттопл. - 212-214 °C, М.м. - 471,74 Бруто-формула: C22H16BrClN2O3 Розраховано, %: С - 56,04; Н - 3,42; N - 5,94. Знайдено, %: С - 56,09; Н - 3,43; N - 5,98. -1 ІЧ-спектр у KВr, см : 3395, 3318, 2938, 1642, 1605, 1572, 1422, 1228, 830, 795. Приклад 3 Вивчення антимікробної активності заявлених сполук проводилося за методом двократних серійних розведень у рідких поживних середовищах (Навашин С.И., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М: Медицина, 1982. - С. 40-42). Для культивування бактерій використовувався амінопептид, попередньо розведений у два 5 6 рази дистильованою водою, рН 7,2. Мікробне навантаження склало 10 -10 мікробних тіл в 1 мл середовища. Для випробування використовувалися 8 штамів мікроорганізмів. Тест-культури мікробів вносили у пробірки з амінопептидом у кількості 5 млн мікробних тіл у 1 мл розчину і додавали розчин досліджуваної сполуки, концентрацію якої поступово зменшували методом розведення. Вміст пробірок інкубували у термостаті протягом 18-20 годин при температурі 37 °C, після чого візуально визначали мінімальну пригнічуючу концентрацію (МПК) сполуки за інтенсивністю або відсутністю замутнення середовища у пробірках. Результати визначення антимікробної активності 8-оксихінолінію 5-бром-N-(4'етоксифеніл)антранілату (сполука № 1), 8-оксихінолінію 5-бром-N-(4'-хлорфеніл)антранілату (сполука № 2), етакридину лактату та сполуки за прототипом (8-оксихінолінію 2-хлор-3,5динітробензоат) наведені у таблиці 1. Таблиця 1 Визначення антимікробної активності сполук № 1, № 2, етакридину лактату та сполуки за прототипом 1 0,65 0,65 0,75 2 0,65 0,65 0,75 МПК (мкг/мл) Штами мікроорганізмів * 3 4 5 1,10 1,10 10,0 1,05 1,05 10,0 1,25 1,25 12,5 31,2 15,6 31,2 Сполука Сполука № 1 Сполука № 2 Прототип Етакридину лактат 62,5 * - Штами мікроорганізмів: 1 - Staphylococcus aureus, штам АТСС 25923; 2 - Bacillus subtilis, штам АТСС 25922; 3 - Echerichia coli, штам АТСС 7241; 4 - Pseudomonas aeruginosa, штам АТСС 27853; 5 - Salmonella choleraesuis; 6 - Salmonella thyphimurium; 7 - Salmonella thyphisuis; 8 - Salmonella dublin. 2 125 6 10,0 11,5 12,5 7 5,0 5,0 6,0 8 4,8 4,3 5,0 250 125 250 UA 110477 C2 5 10 15 За даними таблиці 1, сполуки № 1 та № 2 активніші за етакридину лактат відносно Staphylococcus aureus у 48,7 разу, Bacillus subtilis у 24,00 рази, Echerichia coli - 28,36-29,71 разу, Pseudomonas aeruginosa - 56,82-59,52 разу та відносно мікроорганізмів роду Salmonella у 12,558,14 разу. Сполуки № 1 та № 2 також перевищують за антимікробної активністю сполуку за прототипом та етакридину лактат відносно Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Echerichia coli, Pseudomonas aeruginosa та мікроорганізмів роду Salmonella. Приклад № 4 Визначення протигрибкової активності проводилось за відомою методикою (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Бригера, - 3-е изд. перераб. и доп. - М.: Медицина, 1982. - 462 с.). Для вирощування грибів використовувалось середовище Сабуро (рН=6,5-6,7). Навантаження складало 500-600 репродуктивних тілець штамів Candida albicans або Trichophyton rubrum в 1 мл середовища. Протигрибкову дію оцінювали за мінімальною мікостатичною концентрацією (ММК), вираженою в мкг/мл. Результати вивчення протигрибкової активності та токсичності 8-оксихінолінію 5-бром-Nфенілантранілатів (сполука № 1 та № 2) у порівнянні з нітрофуралом та гризеофульвіном наведені в таблиці 2. Таблиця 2 Протигрибкова активність та токсичність сполук № 1, № 2 нітрофуралу та гризеофульвіну Сполука Сполука № 1 Сполука № 2 Нітрофурал Гризеофульвін Штами грибків, ММК (мкг/мл) Candida albicans Trichophyton rubrum 12,5 12,5 12,5 12,5 64,0 50 DL50 (внутрішньо очеревинно) мг/кг >3700 >3700 82,5 20 25 30 35 40 Як видно за результатами дослідження, наведеними у таблиці 2, сполуки № 1 та № 2 інгібують ріст Candida albicans у концентрації, у 5,12 разу меншій, ніж нітрофурал. Також, сполуки № 1 та № 2 проявляють протигрибковий ефект відносно Trichophyton rubrum у концентрації 12,5 мкг/мл і перевищують за дією гризеофульвін у 4 рази. Прототип протигрибкову дію відносно Candida albicans та Trichophyton rubrum не проявляє. В результаті експерименту встановлено також, що заявлені сполуки є менш токсичними, ніж наведені препарати порівняння. Приклад 5 Вивчення протизапальної активності заявлених сполук проводилося на моделі карагенінового набряку у дослідах in vivo за наступною методикою: набряк викликали введенням 1 % розчину карагеніну ("Sigma", США) у об'ємі 0,05 мл субплантарно у ліву задню лапу щура. Досліджувані сполуки вводили перорально у вигляді водно-олійної суспензії (розчинник ТВІН-80, дистильована вода у дозі ДЕ50 (Яковлева Л.В., Зупанец И.А. Использование модели каррагенинового отека у мышей при поиске противовоспалительных средств // Деп. в УкрЧИИНТИ 07.07.87. - № 1908. - Ук. 87). Терапевтичний індекс (ТІ) розрахували відносно DL50 до DE50. Ступінь протизапальної активності і токсичності досліджених сполук визначали за критеріями: DE50, DL50, ТІ та відносний ТІ за натрію диклофенаком. Результати вивчення протизапальної активності та токсичності 8-оксихінолінію 5-бром-N-(4'етоксифеніл)антранілату (сполука № 1), 8-оксихінолінію 5-бром-N-(4'-хлорфеніл)антранілату (сполука № 2), натрію диклофенаку та сполуки за прототипом (8-оксихінолінію 2-хлор-3,5динітробензоат) наведені у таблиці 3. 3 UA 110477 C2 Таблиця 3 Визначення протизапальної активності та токсичності сполук № 1, № 2, натрію диклофенаку та сполуки за прототипом Сполука 10 Відносний ТІ за натрію диклофенаком 12,85 13,26 10,16 360 45 1 DL50, мг/кг 6,4 6,2 7,0 8,0 Сполука № 1 Сполука № 2 Прототип Натрію диклофенак 5 >3700 >3700 3200 Терапевтичний індекс (ТІ) 578,13 596,77 457,14 DE50, мг/кг За даними таблиці 3 сполуки № 1 та № 2 мають виражену протизапальну дію та за широтою терапевтичного ефекту перевищують натрію диклофенак в 12,85-13,26 разу, а прототип в 1,261,31 разу. Таким чином, заявлені 8-оксихінолінію 5-бром-N-(4'-етоксифеніл)антранілат (сполука № 1) та 8-оксихінолінію 5-бром-N-(4'-хлорфеніл)антранілат (сполука № 2) виявляються малотоксичними сполуками, які мають виражену антимікробну, протигрибкову та протизапальну активності. Заявлені сполуки можуть знайти застосування у медичній практиці як лікарські субстанції у складі фармацевтичних препаратів для лікування інфекційних процесів різної етіології. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 15 8-Оксихінолінію 5-бром-N-фенілантранілати загальної формули: Br + N H OH COOR N H , де: R=4'-OС2Н5 або 4'-Сl, які проявляють антимікробну, протигрибкову та протизапальну активність. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4