Склад для обробки проб досліджуваного матеріалу при проведенні досліджень біологічних матеріалів

Реферат: Розробка стосується складу для обробки проб матеріалу при проведенні досліджень біологічних матеріалів. За рахунок застосування нових інгредієнтів та їх співвідношення у такому складі для обробки проб відібраного матеріалу при проведенні лабораторних досліджень забезпечується подовження терміну зберігання яєць гельмінтів і цист найпростіших і підвищення ефективності та достовірності досліджень проб біологічного матеріалу та проб з зовнішнього середовища (довкілля). UA 114976 C2 (12) UA 114976 C2 UA 114976 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Розробка належить до засобів для проведення лабораторних методів досліджень біологічних матеріалів і може бути використана для діагностики глистової інвазії. У наш час збільшення поширення багатьох паразитарних хвороб пояснюється зростаючими масштабами туризму, торгівлі, завезенням і розведенням екзотичних тварин, змінами клімату (потеплінням). Відомо, що паразитарні хвороби домашніх і диких тварин, можуть викликати тяжкі захворювання людини, так звані зоонози, що іноді призводить до необхідності застосовувати складні методи при їх лікуванні, аж до хірургічного втручання. Тому діагностика паразитарних хвороб людини і тварин, що викликаються гельмінтами і патогенними найпростішими є актуальною проблемою і потребує подальшого спрощення обробки проб та підвищення достовірності досліджень. Відомий склад для обробки проб досліджуваного матеріалу при проведенні досліджень (RU2557973, МПК G01N 1/28, G01N 33/483, дата публікації: 2015.07.27), що містить ізотонічний розчин (0,9 %) хлориду натрію. Недоліком такого складу є трудомісткість відбору проб досліджуваного матеріалу, що вимагає чистого відбору яєць паразитарного збудника. Обмеженість сфери застосування складу обробкою проб досліджуваного матеріалу лише зі збудником Trichuris vulpis, необхідність експозиції пробірок з самицями Trichuris vulpis при t° = 37,5-39 °C впродовж 5 годин в умовах термостатування. Необхідність застосування зазначених у способі застосування спеціальних режимів тривалої термообробки ускладнює технологію обробки проб та технологію використання цього складу. Відомий склад для обробки проб досліджуваного матеріалу при проведенні досліджень біологічних матеріалів та диференціальної діагностики Trichocephalus vulpis і Thominx (Capillaria) aerophilus (RU2482481, МПК G01 N33/48, дата публікації: 20.05.2013) що містить суміші 98,5 %-ного розчину гліцерину (щільністю 1,256) і 40 %-ної молочної кислоти, узятих в співвідношенні 1:1. Недоліком такого складу є трудомісткість відбору проб досліджуваного матеріалу, що вимагає чистого відбору яєць паразитарного збудника, Обмеженість сфери застосування складу обробкою проб досліджуваного матеріалу лише зі збудниками Trichocephalus vulpis і Thominx (Capillaria) aerophilus. При цьому такий склад не забезпечує можливість тривалого зберігання паразитарних збудників, а лише покращує просвітлення границь паразитарних збудників у полі зору дослідника що дозволяє лише посилити ефект чіткості об'єкту. Відомий склад для обробки проб досліджуваного матеріалу при проведенні досліджень біологічних матеріалів (RU2472154, МПК G01N 33/48, A61D 99/00, дата публікації: 10.01.2013), що містить наступні компоненти: перший у вигляді рідини - вода – 48 % і натрію хлорид – 25 %, другий - також у вигляді рідини, що містить: лаурилсульфат натрію 16,3 %, насичений розчин солі, поліетиленгликоль – 10 %, бензоат натрію - 0,7 %, при цьому перший і другий компоненти змішані у в співвідношенні 1:1. Недоліком такого складу є те що такий склад не забезпечує можливість тривалого зберігання паразитарних збудників, а лише покращує відокремлення паразитарних збудників. Відомий склад для обробки проб досліджуваного матеріалу при проведенні досліджень (RU2473899, МПК G01 N33/48, дата публікації: 27.01.2013), що складається з насичених розчинів цинку хлориду (1,5 кг ZnCl2 на 1 л води), натрію хлориду (0,42 кг NaCl на 1 л води) і цукру (1,67 кг С12Н22О11 на 1 л води), узятих в співвідношенні 1,75:1:1. Недоліком такого складу є те, що такий склад не забезпечує можливість тривалого зберігання паразитарних збудників, а лише покращує просвітлення границь паразитарних збудників у полі зору дослідника. Задачею розробки є створення складу для обробки проб досліджуваного матеріалу при проведенні досліджень біологічних матеріалів при здійсненні діагностики глистової інвазії в якому за рахунок застосування нових інгредієнтів та нового їх співвідношення забезпечується подовження терміну зберігання яєць гельмінтів і цист найпростіших, розширення сфери можливих досліджуваних видів субстратів досліджуваного матеріалу та підвищення ефективності та достовірності досліджень проб біологічного матеріалу. Для вирішення цієї задачі склад для обробки проб досліджуваного матеріалу при проведенні досліджень біологічних матеріалів включає хлорид натрію та етанол. Новім у складі є те, що він додатково містить формалін 40 %, орто-етилртутьтіосаліцилат натрію (C9H9HgNaО2S), а хлорид натрію застосовано у вигляді 0,15 М розчину, при наступному співвідношенні компонентів: етанол 96° 50,0-62,0 г формалін 40 % 18,0-26,0 г 1 UA 114976 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 орто-етилртутьтіосаліцилат 18,0-21,0 мг натрію (C9H9HgNaO2S) хлорид натрію 0,15 M до 1000 мл. Новій склад має низку нових технічних характеристик: За рахунок застосування нових інгредієнтів та їх співвідношення у такому складі для обробки проб відібраного матеріалу при проведенні лабораторних досліджень забезпечується подовження терміну зберігання яєць гельмінтів і цист найпростіших і підвищення ефективності та достовірності досліджень проб біологічного матеріалу та проб з зовнішнього середовища (довкілля). Застосування формаліну за новим призначенням, а саме як засобу збереження збудників у живому стані, є нетрадиційним видом застосування формаліну, оскільки у господарстві формалін отримав протилежне застосування, як дезінфікуючого засобу, а також для знезараження ґрунту та для дезінфекції приміщень. При цьому такий склад є рідиною гомогенною, прозорою, яку зручно та просто використовувати при обробці проб досліджуваного матеріалу. Така рідина не потребує особливих умов зберігання і транспортування, при денному світлі не втрачає своїх властивостей, зберігає гомогенність протягом тривалого часу. При цьому розроблений склад має термін зберігання до 1 року, що суттєво більше терміну зберігання його окремих компонентів (наприклад термін зберігання формаліну складає три місяці з дня випуску речовини) (що підтверджує синергізм компонентів складу). Такий склад дозволяє використати його при підтвердженні діагнозів не лише на гельмінтози і протозоози, але і на саркоспороїдози, демодекози і деякі ентомози, тобто забезпечує збільшення спектру визначуваних хвороб. На відміну від відомих рідин, створений склад для обробки досліджуваного матеріалу що містить яйця гельмінтів різних класів, цисти/ооцисти найпростіших, кліщів, комах, і їх окремих стадій розвитку дозволяє обстежувати нові субстрати (наприклад, пил), що знаходяться в звірівницьких і тваринницьких приміщеннях. Розроблений склад для обробки проб досліджуваного матеріалу при проведенні досліджень біологічних матеріалів ілюструється прикладами його виконання та застосування наведеними у Таблиці 1 та у Таблиці 2. У наведених у Таблиці 1 прикладах склад готували наступним способом. Застосовували інгредієнти у кількостях зазначених у відповідних прикладах. Готувався розроблений склад в наступній послідовності. В мірний циліндр наливали відміряну кількість етанолу 96-градусного, в якому розчиняли наважку ортоетилртутьтіосаліцилатнатрію (C9H9HgNaO2S), яка була зважена на аналітичних вагах. В циліндр, градуйованою піпеткою, додавали формаліну 40 %-ного. Окремо в колбі готували розчин хлориду натрію: наважку NaCl (ДСТУ 3583-97, ДОСТ 13830-97 сорт 1), зважену на медичних вагах, розчиняли у дистильованої води, для отримання 0,15 М розчину NaCl. До отриманої суміші речовин: етанолу 96-градусного і формаліну 40 %-ного та розчинного в цій суміші орто-етилртутьтіосаліцилатнатрію (C9H9HgNaO2S), у флакон добавляли 0,15 М розчин хлориду натрію, яким доводили загальний об'єм до 1000 мл. В подальшому флакони з сумішшю залишали на світлі при кімнатній температурі (+16…+25 °C) протягом терміну зазначеного у Таблиці 1 для якісної оцінки отриманої суміші, тобто за гомогенністю та її прозорістю. Результати досліджень представлені в Таблиці 1. Дані проведених досліджень зразків складу свідчать, що отримана рідина стійка до світла, тобто не втрачає свої властивості при денному світлі і зберігає гомогенність та прозорість протягом тривалого часу (до одного року) і компоненти, які входять в склад рідини, не кристалізуються. 2 UA 114976 C2 Таблиця 1 Склад Досліди С9Н9НgNaO2S, етанол мг 96°, г Приклад 1 18 50 Приклад 2 18 50 Приклад 3 20 50 Приклад 4 20 52 Приклад 5 19 56 Приклад 6 20 62 Приклад 7 21 60 Приклад 8 21 62 5 Показники Гомогенність Прозорість місяці місяці формалін 0,15 М хлорид 40 % г натрію, г 1 6 12 1 6 12 18 932 Гомог. гомог. гомог. проз. проз. проз. 18 932 гомог. гомог. гомог. проз. проз. проз. 20 930 гомог. гомог. гомог. проз. проз. проз. 20 928 гомог. гомог. гомог. проз. проз. проз. : 23 921 гомог. гомог. гомог. проз. проз. проз. 24 914 гомог. гомог. гомог. проз. проз. проз. 26 914 гомог. гомог. гомог. проз. проз. проз. 26 912 гомог. гомог. гомог. проз. проз. проз. Отримані різнобічні зразки: свіжі фекалії людини, об'єкти зовнішнього середовища (річна вода, ґрунт, пил - змиви з предметів). Кожний зразок розділяли на 2 частини до кожного із яких у співвідношенні 1:2 додавали зазначений у Таблиці 2 варіант прикладу виконання (зазначеного в Таблиці 1) розробленого складу. В кожну Частину відповідного зразка, вносили по 1000 яєць аскариди свиней та по 200 цист лямблій та зберігали (при денному світлі) протягом зазначеного у Таблиці 2 терміну. Після зазначеного терміну зберігання, зразки досліджували під мікроскопом та по зміні у часі визначали термін зберігання життєздатності яєць аскариди і цист лямблій. 10 Таблиця 2 Зразки фекалії ґрунт вода пил 15 Вміст зразка яйця аскариди цисти лямблій яйця аскариди цисти лямблій яйця аскариди цисти лямблій яйця аскариди цисти лямблій Застосований приклад складу Приклад 1 Приклад 2 Приклад 3 Приклад 4 Зразу після обробки % живих 99 98 99 98 99 98 99 98 Термін зберігання обробленого зразка 2 тижні 1 місяць 2 місяці 3 місяці % живих % живих % живих % живих 99 99 99 99 98 98 96 95 99 99 99 99 98 98 96 95 99 99 99 99 98 98 96 95 99 99 99 99 98 98 96 95 Як показують проведені дослідження, розроблений склад для обробки проб досліджуваного матеріалу при проведенні досліджень біологічних матеріалів забезпечує подовження терміну зберігання яєць гельмінтів і цист найпростіших (пропагативні форми паразитів) і підвищує ефективність та достовірність досліджень різнобічних проб біологічного матеріалу. Розроблений склад не потребує особливих умов зберігання і транспортування, при денному світлі не втрачає своїх властивостей, зберігає гомогенність протягом тривалого часу. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 20 Склад для обробки проб матеріалу при проведенні досліджень біологічних матеріалів, що містить хлорид натрію, етанол, який відрізняється тим, що додатково містить формалін 40 %, орто-етилртутьтіосаліцилат натрію (C9H9HgNaO2S), хлорид натрію у вигляді 0,15 М розчину, при наступному співвідношенні компонентів: етанол 96° 50,0-62,0 г формалін 40 % 18,0-26,0 г орто-етилртутьтіосаліцилат натрію 18,0-21,0 мг (C9H9HgNaO2S) хлорид натрію 0,15 M до 1000 мл. 3 UA 114976 C2 Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4