Спосіб визначення імупротекторної дії препарату регоплант проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди globodera rostochiensis (woll.)

Реферат: Спосіб визначення імунопротекторної дії препарату РЕГОПЛАНТ проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.) включає обробку бульб картоплі препаратом, зараження сортів картоплі глободерою в лабораторних умовах. Реакцію рослин на зараження збудником хвороби після обробки препаратом визначають на 20 добу шляхом визначення активності окисно-відновних ферментів, що дозволяє визначити імунопротекторну дію препарату. UA 120146 U (12) UA 120146 U UA 120146 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі фітопатології, зокрема до визначення стійкості картоплі до картопляних нематод Globodera. Відомими аналогами є способи визначення дії препаратів проти картопляних нематод для отримання високих врожаїв. Останньою тенденцією сучасного насінництва картоплі є використання елітних сортів даної культури. Вони відпрацьовані відповідно їх призначення і відрізняються між собою [3,6]. Найближчим аналогом до корисної моделі є визначення ефективності дії препаратів проти хвороб [5], що включає обробку бульб картоплі препаратом, зараження зразків картоплі золотистою картопляною цистоутворюючою нематодою в лабораторних умовах на штучно створеному інфекційному фоні та визначення ефективності дії препарату проти глободери. Аналоги мають такі недоліки: 1. Вони є трудомісткими. 2. Довготривалими (вегетаційний період розвитку картоплі) 3. Отримані результати не розкривають механізм імунопротекторної дії препаратів. В основу корисної моделі поставлена задача вивчити їх імунопротекторну дію за зараження рослин картоплі золотистою картопляною цистоутворюючою нематодою Globodera rostochiensis (Woll.). Поставлена задача вирішується тим, що перед зараженням бульб картоплі глободерою, їх обробляють 0,1 % розчином препарату РЕГОПЛАНТ, та після 20 діб після обробки заражених сортів картоплі патогеном способом визначення активності окисно-відновного ферменту пероксидази визначають імунопротекторну дію препарату проти збудника хвороби. Корисна модель пояснюється кресленням, де показано фото корінців сорту картоплі Лугівська, усіяні цистами золотистої картопляної цистоутворюючою нематодою Globodera rostochiensis (Woll.). Приклад 1 (найближчий аналог). 1. Для визначення імунопротекторної дії препарату РЕГОПЛАНТ (вміщує продукти біотехнологічного культивування грибів-мікроміцетів з кореневої системи женьшеню і продуктів життєдіяльності бактерій Streptomyces Avermetilis - аверсектину з хелатними мікроелементами) проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.) бульби з паростками сортів картоплі Поліська рожева, Лорх та Лугівська обробляли 0,1 % розчином до зараження паростків бульб картоплі цистами глободер. Після обробки препаратом їх висаджували у лабораторних умовах у контейнери із зараженим субстратом, який вмістив 120 цист/100 см3. В якості контролю використовували необроблені зразки картоплі. Протягом 60 діб оброблені та контрольні зразки картоплі поливали, розрихлювали і потім проводили облік їх ураження глободерою [2]. Визначають ефективність дії препаратів за формулою: Ед=100×(Рк-Рд/Рк), де Рк - показник розвитку хвороби у контролі, відповідно, до обробки; Рд - показник розвитку хвороби у досліді після обробки. Розрахунки проводились згідно "Методики випробування і застосування пестицидів" [5]. Статистичну обробку результатів досліджень проводили за Масловим Ю.І. [4] На основі проведених досліджень встановлено ефективність біопрепарату РЕГОПЛАНТ для обробки бульб картоплі проти картопляної нематоди. Використання препарату РЕГОПЛАНТ в нормі витрати 50 мл/га на трьох сортах (Лорх, Поліська рожева та Лугівська) сприяло зниженню розвитку хвороби до 30 % (для сорту Лорх) та 20 % (для сортів Поліська рожева та Лугівська), тоді як у контролі розвиток хвороби склав 100 % для всіх сортів картоплі. При цьому ефективність використання імунопротектора склала 70 % для сорту Лорх та 80 % - для сортів Поліська рожева та Лугівська (табл. 1-3, додатки 1-3). При збільшенні норми використання імунопротектора до 70 мл/га виявлено зниження розвитку хвороби також до 30 % для сорту Лорх. При цьому ефективність використання препарату склала також 70 %. При використанні 100 мл/га розвиток хвороби зменшився відповідно на 80 % у сортів Лорх, Поліська рожева та Лугівська, ефективність використання препарату склала 80 % (табл. 1-3, рис. 1, додатки 1-4). Приклад 2 (корисна модель). Після обробки бульб картоплі препаратом РЕГОПЛАНТ та їх зараження золотистою картопляною цистоутворюючою нематодою, як за прикладом 1, з заражених паростків картоплі сортів Лорх, Поліська рожева та Лугівська через 20 днів виділяли білковий екстракт для визначення активності окисно-відновного ферменту пероксидази, який рахується "аварійним ферментом" [1], що миттєво реагує на будь-який стресовий чинник (температура, вологість, дія патогенів) за методом Починка Б.П. [7]. 1 UA 120146 U 5 10 15 Для цього з 5 г паросткової частини заражених збудником глободери виділяли білковий екстракт шляхом розтирання з 5 мл трис-боратним буфером (рН 7,8) та центрифугуванням за 6000 об./хв. на протязі 10 хвилин. Для визначення пероксидазної активності 1 мл екстракту інкубували з 1 мл 0,1 % розчином перекису водню та фарбували 0,01 % розчином бензидину на протязі 5-10 хвилин. Визначали величину екстинкції на спектрофотометрі "Ломо-46" за 600 нм. Активність пероксидази визначали за формулою: А=Ε К/1 (у мкмоль/1 г хв). У результаті проведених досліджень активність пероксидази на 20 добу після зараження глободерою у оброблених препаратом РЕГОПЛАНТ сортів картоплі Лорх, Поліська рожева та Лугівська склала 0, 36-0,40 мкмоль/1 г хв. У контрольних (необроблених) сортів картоплі активність пероксидази коливалась у межах 0,59-0,71 мкмоль/1 г хв. (табл. 4, додаток 5). Таким чином, спосіб визначення активності пероксидази протягом 20 діб можна визначити імунопротекторну дію препарату РЕГОПЛАНТ проти картопляної нематоди: чим вища активність пероксидази, тим більший відсоток ураження рослин картоплі патогеном, і, відповідно менша ефективність дії імунопротектора і навпаки. Корисну модель було підтверджено експериментальною перевіркою, яка здійснювалась при зараженні сортів картоплі, отриманих з Інституту картоплярства НА-АН. Таблиця 1 Визначення ефективності препарату РЕГОПЛАНТ проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.) (лабораторний дослід 2016 р., сорт картоплі Лорх) Варіанти досліду Контроль препарату) Регоплант Регоплант Регоплант НІР05 (без Норма витрати Ураження рослин, Розвиток хвороби, % % Ефективність препарату, % 100 100 50 мл/га 70 мл/га 100 мл/га 30 30 20 3,0 30 30 20 1,5 70 70 80 1,5 Таблиця 2 Визначення ефективності препарату РЕГОПЛАНТ проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.) (лабораторний дослід, сорт картоплі Поліська рожева) Варіанти досліду Контроль препарату) Регоплант Регоплант Регоплант НІР05 (без Норма витрати Ураження рослин, Розвиток хвороби, % % Ефективність препарату, % 100 100 50 мл/га 70 мл/га 100 мл/га 20 20 20 3,5 20 20 20 1,5 80,0 80,0 80,0 1,5 20 2 UA 120146 U Таблиця 3 Визначення ефективності препарату РЕГОПЛАНТ проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll (лабораторний дослід, сорт картоплі Лугівська) Варіанти досліду Контроль препарату) Регоплант Регоплант Регоплант НІР05 Норма витрати (без Ураження рослин, Розвиток хвороби, % % Ефективність препарату, % 100 100 50 мл/га 70 мл/га 100 мл/га 20 20 20 3,5 20 20 20 1,5 80,0 80,0 80,0 1,5 Таблиця 4 Визначення ефективності препарату РЕГОПЛАНТ та активності пероксидази сортів картоплі у процесі зараження золотистою картопляною цистоутворюючою нематодою Globodera rostochiensis (Woll.) Сорти картоплі Лорх Поліська рожева Лугівська НІР05 5 10 15 20 Активність Активність пероксидази у пероксидази у контрольних рослин оброблених рослин (мкмоль/1 г хв.) (мкмоль/1 г хв.) (спосіб, що (спосіб, що заявляється) заявляється) 0,59 0,36 Ураження рослин, % Ефективність препарату, % (прототип) 20 80 20 80 0,67 0,37 20 3,5 80 3,5 0,71 0,05 0,40 0,06 Джерело інформації: 1. Витол И.С. Использование пероксидазы и глютомат дегидрогеназы в качестве биохимических маркеров в биотехнологических исследованиях на картофеле /Витол И.С., Мелик-Саркисов B.C., Аветисов В.Н., Дубровский И.Г //Доклады ВАСХНИЛ. 1989. - № 10. - С. 14-15. 2. Виявлення та ідентифікація картопляних нематод Globodera. /Зеля А.Г., Гунчак В.М., Сухарева Р.Д., Пилипенко Л.А., Сігарьова Д.Д. 3. Сігарьова Д.Д. Золотиста картопляна нематода в Україні і боротьба з нею /Д.Д. Сігарьова, Т.Г. Мірошник //Вісник аграрної науки. - 1994. - № 5. - С. 25-31. 4. Маслов Ю.И. Статистическая обработка данных биохимических исследований //Методы биохимического анализа растений. /Ю.И. Маслов. Л., 1986. - С. 163-178. 5. Методики випробування і застосування пестицидів /С.О. Трибель, Д.Д. Сігарьова, Μ.Π. Секун, О.О. Іващенко та ін. За ред. проф. С.О. Трибеля. - К. - Світ. - 2001. - 448 с. 6. Пилипенко Л.А. Нематодостійкі сорти картоплі в системі протинематодних заходів: перспективи та проблеми /Л.А. Пилипенко //Захист і карантин рослин: міжвід. темат. наук. зб. 2002. - № 48. - С. 104-111. 7. Починок Б.П. Методы биохимических исследований //Б.П. Починок, Μ. - 1986. – 364 с. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 Спосіб визначення імунопротекторноїдії препарату РЕГОПЛАНТ проти золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди Globodera rostochiensis (Woll.), що включає обробку бульб картоплі препаратом, зараження сортів картоплі глободерою в лабораторних умовах, який відрізняється тим, що реакцію рослин на зараження збудником хвороби після обробки препаратом визначають на 20 добу шляхом визначення активності окисно-відновних ферментів, що дозволяє визначити імунопротекторну дію препарату. 3 UA 120146 U Комп’ютерна верстка О. Рябко Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4