Спосіб корекції оксидантно-антиоксидантного гомеостазу у щурів, порушеного за умов тетрахлорметанового токсичного гепатиту

Реферат: Спосіб корекції оксидантно-антиоксидантного гомеостазу у щурів, порушеного за умов тетрахлорметанового токсичного гепатиту, шляхом відновлення стану оксидантноантиоксидантної рівноваги за допомогою лікарських препаратів. Проводять корекцію тетрахлорметанового токсичного гепатиту шляхом перорального введення у дозі 0,01 мл/кг упродовж п'яти діб комбінації екстрактів п'яти лікарських рослин в однакових співвідношеннях (1:1:1:1:1): Arnica montana L., Ehinacea purpureum L., Inula helenium L., Rhodiola rosea L., Potentilla erecta L. UA 121630 U (54) СПОСІБ КОРЕКЦІЇ ОКСИДАНТНО-АНТИОКСИДАНТНОГО ГОМЕОСТАЗУ У ЩУРІВ, ПОРУШЕНОГО ЗА УМОВ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОВОГО ТОКСИЧНОГО ГЕПАТИТУ UA 121630 U UA 121630 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі медицини, а саме до експериментальної патології та біохімії, гастроентерології та фітотерапії, і може бути використана для корекції оксидантноантиоксидантного гомеостазу у щурів, порушеного за умов токсичного гепатиту, за допомогою запропонованої комбінації екстрактів лікарських рослин. Біохімічна оцінка стану систем антиоксидантного захисту організму з використанням різних методик дослідження тканин печінки та шлунка, а також плазми крові дозволяє зі значною достовірністю виявити ступінь відхилення біохімічних показників від значень норми досліджуваних тканин, а також передбачити можливий прогноз перебігу патологічного процесу в печінці за умов токсичного гепатиту та у шлунку. Як відомо (Є.Г. Гончарук, М.М. Коршун, 2004), важливою ланкою патогенезу багатьох захворювань, зокрема гепатитів різної етіології, є оксидативний стрес, в результаті якого відбувається накопичення активних форм кисню (АФК), активація вільнорадикального окислення ліпідів (ВРОЛ) та біополімерів і як результат - суттєві зміни обміну речовин у клітинах. Загальновідомо (Н.П. Скакун, Г.Т. Писько, И.П. Мосейчук, 1989), що в основі формування токсичного тетрахлорметанового гепатиту накопичення в тканинах печінки вільних радикалів, що утворюються в процесі метаболізму тетрахлорметану та ініційовані ними процеси ВРОЛ, розвиток синдромів цитолізу та холестазу, дискоординація у функціонуванні систем антиоксидантного захисту, зокрема зміни активностей антиоксидантних ферментів і функціонування системи глутатіону. Отже, у пацієнтів із токсичним тетрахлорметановим гепатитом відзначається порушення оксидантно-антиоксидантної рівноваги, що вказує на необхідність включення до комплексної терапії захворювання препаратів антиоксидантів. Пошук ефективних специфічно діючих на ту чи іншу антиоксидантну систему засобів усе більше спрямовується на використання природних біологічно активних речовин, важливим джерелом яких є лікарські рослини. Фармакологічна дія багатьох із цих рослин пов'язана з наявністю у їх складі природних антиоксидантів, які, не поступаючись своєю активністю синтетичним, мають низку суттєвих переваг - більша функціональність і стабільність, екологічна безпечність, відсутність побічної дії (Г.Н. Липкан, 2010). Препарати рослинного походження, завдяки своєму унікальному хімічному складу (біофлавоноїди й інші поліфенольні сполуки, фенолкарбонові кислоти, сесквітерпенові лактони, ефірні олії, вітаміни, мікроелементи тощо) є ефективними, безпечними, порівняно недорогими, виявляють м'яку дію на організм та одночасно по кілька позитивних ефектів (антиоксидантний, мембраностабілізуючий, гепатопротекторний, жовчогінний, противиразковий, адаптогенний тощо), а тому з успіхом використовуються в сучасній медицині (D.P. Briskin, 2000; S. Burda, W. Oleszek. 2001; Е.Г. Доркина, 2004). Саме тому, в комплексній терапії гепатитів різної етіології доцільно застосовувати лікарські засоби, зокрема рослинного походження, які виявляють не тільки пряму антиоксидантну дію як "перехоплювачі вільних радикалів", але й активують ферменті системи антиоксидантного захисту. Найближчим аналогом корисної моделі є спосіб корекції токсичного гепатиту (Спосіб корекції токсичного гепатиту: пат. 42922 Україна. № u200902084; заявл. 10.03.2009; опубл. 27.07.2009, бюл. № 14), в якому моделюють парацетамоловий гепатит у щурів, який корегують з використанням впродовж тижня біологічно активної добавки "Альфа + омега" (містить поліненасичені жирні кислоти родини омега-3) та ентеросорбента "Ентеросгель". Недоліками найближчого аналога-способу є те, що проводять корекцію парацетамолового токсичного гепатиту з використаним біологічно активної добавки та ентеросорбента, що не дозволяє досягти відповідного біологічного та фармакологічного ефекту, не враховано корекцію тетрахлорметанового токсичного гепатиту. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалити спосіб корекції оксидантноантиоксидантного гомеостазу у щурів порушеного за умов тетрахлорметанового токсичного гепатиту шляхом призначення комбінації екстрактів п'яти лікарських рослин: Arnica montana L., Ehinacea purpureum L., Inula helenium L., Rhodiola rosea L., Potentilla erecta L. Спільними ознаками корисної моделі та найближчого аналога є відновлення стану оксидантно-антиоксидантної рівноваги за допомогою лікарських препаратів. Відмінними ознаками корисної моделі від найближчого аналога є те, що проводять корекцію тетрахлорметанового токсичного гепатиту шляхом перорального введення у дозі 0,01 мл/кг упродовж п'яти діб комбінації екстрактів п'яти лікарських рослин в однакових співвідношеннях (1:1:1:1:1): Arnica montana L., Ehinacea purpureum L., Inula helenium L., Rhodiola rosea L., Potentilla erecta L. Відмінності корисної моделі від найближчого аналога наведені у наступній таблиці. 60 1 UA 121630 U Таблиця Порівняння прототипу та корисної моделі за ознаками Ознаки Експериментальна модель у щурів Проведення корекції оксидантно-антиоксидантного гомеостазу лікарським препаратом 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Найближчий аналог парацетамоловий токсичний гепатит біологічно активна добавка "Альфа + омега", ентеросорбент "Ентеросгель» Корисна модель тетрахлорметановий токсичний гепатит комбінація екстрактів п'яти лікарських рослин: Arnica montana L., Ehinacea purpureum L., Inula helenium L., Rhodiola rosea L., Potentilla erecta L. Визначення термінів, які використовуються при описі корисної моделі: тетрахлорметановий токсичний гепатит, щури, оксидантно-антиоксидантний гомеостаз, екстракти лікарських рослин. Теоретичні передумови здійснення корисної моделі. В запропонованому способі проводять експериментальну інтоксикацію щурів тетрахлорметаном для отримання моделі тетрахлорметанового токсичного гепатиту. У основі використання моделі терахлорметанового гепатиту як моделі, за якої відзначаються порушення в організмі тварин оксидантно-антиоксидантної рівноваги, що подібні до таких у людини при гепатитах різної етіології, лежить вільнорадикальний механізм порушення структури клітин печінки метаболітами тетрахлорметану з наступним розвитком синдромів цитолізу та холестазу (Н.П. Скакун, Г.Т. Писько, И.П. Мосейчук, 1989). Для з'ясування причин розвитку патологічного процесу в організмі при токсичному гепатиті актуальним є встановлення співвідношення між інтенсивністю перебігу процесів утворення та знешкодження АФК, а також з'ясування характеру впливу досліджуваної комбінації екстрактів лікарських рослин (ЕЛР) на оксидантно-антиоксидантний гомеостаз на тлі розвитку вищезазначеної експериментальних патологій. Запропонована комбінація ЕЛР складається з однакових співвідношень (1:1:1:1:1), стандартизованих згідно з вимогами Державної Фармакопеї України та відповідних ТУ спиртових екстрактів і настоянок лікарських рослин: Tinctura Arnicae з суцвіть Arnica montana L. (1:10) на 70 % етанолі, Tinctura Echinaceae з кореневищ із коренями Ehinacea purpureum L. (1:10) на 50 % етанолі, Rhodiolae Extractum Fluidum з кореневищ із коренями Rhodiola rosea L. (1:1) на 40 % етанолі, Tinctura Inula helenium (L.) із коренів із кореневищами Inula helenium L. (1:5) на 40 % етанолі та Tinctura Potentilla erecta (L.) з коренів із кореневищами Potentilla erecta L. (1:5) на 40 % етанолі. Кожна зі запропонованих лікарських рослин виявляє антиоксидантну дію [Гарифуллина Г.Г. Антиокислительная активность экстрактов из корневищ и корней Rhodiola rosea L. и R. Iremelica borris//Pacт. ресурсы. - 1998. - T. 34, № 3. - С. 69-74; Вплив препаратів Ехінацеї пурпурової на перекисне окиснення ліпідів і стан глутатіонової системи/І.Ю. Яковлева, Г.М. Войтенко, В.А. Барабой [та ін.]//Фітотерапія в Україні. - 1999. - № 3-4. - С.111-113; Васюк В.Л. Біохімічні аспекти обґрунтування застосування настоянки оману високого при ерозивно-виразковому ураженні гастродуоденальної зони/В.Л. Васюк, І.Ф. Мещишен//Мед. хімія. - 2001. - Т. 3, № 2. - С. 44-48; Деклараційний патент на корисну модель № 4656 Україна МПК 7А61К35/78, Застосування настоянки арніки гірської як засобу корекції оксидантно-антиоксидантного гомеостазу/Мещишен І.Ф., Яремій І.М.; заявник: Буковинський державний медичний університет - заявл. № u20040705684 від 12.07.2004; опубл. 17.01.2005, Бюл. № 1, 2005 p.; Деклараційний патент на корисну модель № 4655 Україна МПК 7А61К35/78, Застосування настойки перстачу прямостоячого як антиоксидантного засобу /Мещишен І.Ф., Тефтюєва Н.Б., Яремій І.М.; заявник: Буковинський державний медичний університет - заявл. № u20040705650 від 12.07.2004; опубл. 17.01.2005, Бюл. № 1, 2005 p.]. Дослідження стану прооксидантної й антиоксидантної систем шляхом визначення в тканинах (печінка, шлунок) МА, активностей КАТ і показників глутатіонової системи вмісту Г-SH; активностей глюкозо-6-фосфатдегідрогеназитази (Г-6-ф-ДГ), глутатіонредуктази (ГР), ГП та глутатіон-S-трансферази (Г-S-T)); у плазмі крові - загальної антиоксидантної активності (АОА), вмісту ОМБ і церулоплазміну (ЦП) може бути основним критерієм оцінювання порушень оксидантно-антиоксидантної рівноваги при виборі лікарських препаратів, зокрема з рослинної сировини, визначенні способу їх прийому, терапевтичних доз та тривалості курсу лікування. Корисна модель здійснюється наступним чином. 2 UA 121630 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Білих щурів-самців масою 18010 г утримують за стандартних умов та на раціоні віварію. Утримання тварин та виконання маніпуляцій проводять відповідно до методичних рекомендацій ДЕЦ МОЗ України з доклінічного вивчення лікарських засобів [Доклінічні дослідження лікарських засобів (методичні рекомендації)/за ред. О.В. Стефанова. - К.: Авіценна, 2001. - 528с]. Дотримують вимог "Європейської конвенції із захисту хребетних тварин, яких використовують із експериментальною та науковою метою" (ETS № 123) (Страсбург, 18 березня 1986 р.). Тетрахлорметановий токсичний гепатит у щурів викликають інтоксикацією тварин тетрахлорметаном (ССl4) шляхом дворазового (через день) внутрішньошлункового введення 50 %-ного олійного (оливкового) розчину ССl4 із розрахунку 0,25 мл/100 г маси тіла. Проводять корекцію оксидантно-антиоксидантного гомеостазу у щурів порушеного за умов тетрахлорметанового токсичного гепатиту шляхом перорального введення у дозі 0,01 мл/кг упродовж п'яти діб комбінації екстрактів п'яти лікарських рослин: Arnica montana L., Ehinacea purpureum L., Inula helenium L., Rhodiola rosea L., Potentilla erecta L. Приклади використання корисної моделі. Білих щурів-самців масою 180±10 г утримували за стандартних умов, вказаних у запропонованому способі. Тетрахлорметановий токсичний гепатит у щурів викликали інтоксикацією тварин тетрахлорметаном (ССl4) шляхом дворазового (через день) внутрішньошлункового введення 50 %-ного олійного (оливкового) розчину ССl4 із розрахунку 0,25 мл/100 г маси тіла. Потім проводили корекцію оксидантно-антиоксидантного гомеостазу у щурів порушеного за умов тетрахлорметанового токсичного гепатиту шляхом перорального введення у дозі 0,01 мл/кг упродовж п'яти діб комбінації екстрактів п'яти лікарських рослин: Arnica montana L., Ehinacea purpureum L., Inula helenium L., Rhodiola rosea L., Potentilla erecta L. Для оцінки ефективності проведеної корекції тварин забивали шляхом декапітації у відповідності до етичних принципів експериментів на тваринах, ухвалених Першим Національним конгресом з біоетики (Київ, 2000), що узгоджується з положеннями "Європейської конвенції із захисту хребетних тварин, яких використовують із експериментальною та науковою метою". Кров для дослідження відбирали у присутності етилендіамінтетраацетату. У плазмі крові щурів визначали вміст окисно-модифікованих білків (ОМБ) за реакцією з 2,4динітрофенілгідразином за методикою І.Ф. Мещишена (1998), загальну антиоксидантну активність (АОА) та вміст церулоплазміну (ЦП) за модифікованим методом Ревіна. У 5 % супернатантах печінки щурів, які готували на льоду з використанням 50 мМ трис-НСl-буфера (рН=7,4) проводили визначення вмісту малонового альдегіду (МА) за реакцією з тіобарбітуровою кислотою за методом Ю.В. Владимирова та А.И. Арчакова (1972), ОМБ - за реакцією з 2,4-динітрофенілгідразином за І.Ф. Мещишеним (1998), Г-SH - титрометричним методом за модифікованим І.Ф. Мещишеним (1992) методом Травіної О.В. (1955); активності каталази (КАТ) - спектрофотометричним методом за Королюк М.А. та співавт. (1998), глюкозо-6фосфатдегідрогенази - спектрофотометрично, за приростом НАДФН за методом Kornberg A, Horecker B.L.b модифікації Захар'їна Ю.Л. (1969), глутатіонредуктази (ГР) спектрофотометрично, за зменшенням вмісту НАДФН по методу Beutler E. (1969), глутатіонпероксидази спектрофотометрично, за кількістю окисненого глутатіону, що утворився з відновленого глутатіону при знешкодженні пероксиду водню в глутатіонпероксидазній реакції за Власова С.Н. та співавт. (1990) та Г-S-T спектрофотометрично, за вмістом утвореного в ході реакції глутатіону відновленого з 1-хлор-2,4-динітробензолом кон'югату за методикою Habig W.H. et al. (1974). Отримані дані дослідження ефективності запропонованого методу вказали на нормалізацію оксидантно-антиоксидантного гомеостазу у щурів, порушеного за умов тетрахлорметанового токсичного гепатиту. Технічний результат. Запропонований спосіб дозволяє ефективно проводити корекцію оксидантно-антиоксидантного гомеостазу у щурів порушеного за умов тетрахлорметанового токсичного гепатиту шляхом перорального застосування комбінації екстрактів лікарських рослин Arnica montana L., Ehinacea purpureum L., Inula helenium L., Rhodiola rosea L., Potentilla erecta L. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб корекції оксидантно-антиоксидантного гомеостазу у щурів, порушеного за умов тетрахлорметанового токсичного гепатиту, шляхом відновлення стану оксидантноантиоксидантної рівноваги за допомогою лікарських препаратів, який відрізняється тим, що проводять корекцію тетрахлорметанового токсичного гепатиту шляхом перорального введення 3 UA 121630 U у дозі 0,01 мл/кг упродовж п'яти діб комбінації екстрактів п'яти лікарських рослин в однакових співвідношеннях (1:1:1:1:1): Arnica montana L., Ehinacea purpureum L., Inula helenium L., Rhodiola rosea L., Potentilla erecta L. Комп’ютерна верстка О. Рябко Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4