Спосіб прогнозування хронізації вірусних гепатитів в та с у дітей

Спосіб прогнозування хронізації вір усни х гепати тів В та С у ді тей, що включає дослі дження гістоло гічни х, елек тронномікроскопічни х та імуногісто хімічни х показників, який від різняє ться тим, що в печінці до слі дж ують ся та кі пок аз ник и як : гі столо гі чн і оз нак и а поп то з у і апонекрозу; елек тронномікроскопі чні ознаки апоптоз у і апонекроз у; оцінка стан у гепа тоци ті в (некрози , ха рактер дистро фі ї) та кількість ацидофільних та апоптозних тілець Каунсільмена, при значенні: 0 - змін не виявлено; 1 - наявність 30 % змінених гепатоцитів у полі зору; 2 - до 50 % 3 22383 4 чинній формах. Зв'язування Fas-L розчинною єю шля хом некроз у, що може бути о харак териформою Fas (APO-1/CD95) зменшує ушкодження зовано як апоптозно - некроти чний контінуум чи печінки цитотоксичними імунними клітинами. Ексапонекроз [Formigli L et.all.,2000; Мартынова Е.А., пресія Fas (APO-1/CD95) на мембрані гепатоцитів Поддубская Е.В., П оло сухина Е.Р. Климо ва С В., індукується інтерлейкінами (ІЛ-1,2,6), інтерферо2004]. Таким чином , ан аліз дани х сві тової літератури показав, що процес клітинної смерті окрім нами (ІФН- g ), фактором некроза пухлин (TN F- a ) апоптозу та некрозу, які широко ви світлені в літа інш. Таким чином, запалення будь-якої притера турі , існ ують і відмінні від ни х стр уктурні роди може сприяти Fas (APO-1/CD95) - залежнозміни в клітинах, які мають як особливості притаму ушкодженню печінки . Згідно з останніми поманні апоптозу так і некроз у. В осно вн ом у ці відомленнями, при хронічному гепа титі С стр ук турн і зміни вивча лися на к уль турі тканини. [Дмитриева Е.В., Москалева Е.Ю., Буеверов Представлені зміни клітин по типу апонекрозу А.О.,2002] та хронічному гепатиті В [Mochizuki К., можуть відігравати роль в процесах патологічної Hiramatsu N. et.al., 1996] спостерігається збіль(неадекватної) регуляції, особливо хронізації прошення експресії Fas (APO-1/CD95) на ге п а тоц ицесів при тривалій дії вірусних, бактеріальних фата х п ер е важн о в пе рип ор та льні й о бла сті , кторів, а також інших н е сп рия тли ви х чи нн икі в. о собли во в зон а х активного запалення та на У з в’ язк у з важли ві стю про блем и н абува є межі ступінчатого некроза і паренхіми, який є ревеликого значення визначення ролі деструктивнозультатом загибелі гепатоцитів як шляхом некродистрофічни х факторів, трансформації колагенів, за, так і шляхом апоптоза [Searle J., Harmon В., апоптоза і апонекроза в розвитку склеротичних Bishop С, 2002 ]. У хво ри х на хро нічний вір усний процесів з метою виявлення маркерів хронізації гепа ти т В та С було виявлен о зн ачн у кількі сть вірусних гепатитів В та С у дітей. клі тин пе чінки у стані ап о п то за я ка к ор е люНайбіль ш близьким за те хні чною суттю є ва ла з р і вн ем ек сп ре сі ї Fa sL у к лі ти н а х ["Сп осіб пр огн оз ування о з н а к і н дук о ва н о го лімфогістіоцитарного інфільтрата. Ці дані свідчать а п о п то з у в к лі ти н н и х п о п уля ц і я х п л а це н про важливість ролі білка FasL лімфоциті в ін фіти " Задорожна Т.Д., Єщенко О.І. і співав. Патент льтра та в індукці ї апоп тоза гепато циті в [ДмитУкраїни №69855А]. риева Е.В., Москалева Е.Ю., Буеверов А.О.,2002]. Основними показниками в прототипі досліВсе вище зазначене підтверджує важливе значендження були гістологічні ознаки апоптоза, індекс ня системи Fas-FasL у розвитку апоптоза гепатоапоптоза, ступінь експресії антиапоптоти чного цитів. Дослідженнями італійських вчених, які вони проте їн у b cl-2 , проапоп то ти чно го про те їн у р 53, провели на культурі гепатоцитів щурів було покаале ві дсутні дані про гістоло гічні ознаки апонекзано, що стримування активності казпаз перешкорозу, індекс апонекрозу, гістологічний індекс джало виникненню апоптозу гепатоцитів, але при склерозу, виявлення антигену HbsAg, ступень цьому посилювалася загибель шля хом некроз у, експресії рецепторів Fas(Apo-l /C D95), фак тор у що вказ ує на відп овідний балан с між цими некроз у п ухли н, кола гені в р ізно го тип у, що вашля хами елімінації клітин, здійснюваний імунною жливо для прогнозування хронізації вірусних гепасистемою [Formigli L et.all., 2000]. титів у ді тей. При гістологічному та імуногістохімічному доВ основу корисної моделі покладено задачу слідженні різних тканин ми спостерігали зміни пастворення способу прогнозування хронізації віруренхіматозних та епітеліальних клітин, які не можсних гепатитів В та С у дітей, у якому шляхом на було віднести по структурі до типових морфологічних, електронномікроскопічних та імунекротично змінених або апоптотично змінених ногістохімічних досліджень да на оцінка з в’язк у клітин. Італійськими вченими [Formigli L et.all.,2000] дестр ук ти вно -дистр о фі чн и х фак торі в, ап оп тобуло описано тип клітинно ї смер ті , яка спостеріза , ап он екр оз а та тра н сфо рма ці ї к о ла ге ні в галася в к уль турі тканини фі бробласті в м и ші р із но го тип у з р оз ви тком склеротичних процеп ісля їх ек сп ози ці ї високим и к он це н тр аціями сів при вірусній персистенції, що дозволить істота н тим іцин а А (метаболічний яд), який ушкоджує но поліпшити якість надання медичної допомоги мітохондриальний дихальний ланцюг (комп лекс дітям, які хворіють на вірусні гепатити. 11 1). В рез уль та ті про веден о го до слідження Поставлена задача способу прогнозування було вия влено клітини, які мають динамічні, мохронізації вірусних гепатитів В та С вирі шується лекулярні та морфологічні особливості як апоптошля хом дослідження гі сто ло гічни х, електронно зу так і некрозу. Вчені назвали цей тип загибелі мікроскопічних, гісто хімічних та імуногісто хімічних клітин апонекрозом і встанови ли , що виникнення особливостей - згідно корисної моделі досліджуцього тип у за гибелі клітин залежить від ін тенються такі показники як: - гістологічні ознаки сивності та три валості дії ін дук уючо го фактор у. апоптоз у та апонекроз у; - електронномікроскоЦей факт є дуже важливим для розуміння розвипічні ознаки апоптозу і апонекрозу; - оцінка статку процесів регенерації, оскільки порушення рену гепа тоциті в (некрози, характер ди стро фі ї) та генер аторни х пр оце сі в у ви гляді апонекроз у кількість ацидофільних та апоптозних тілець Каунможуть приве сти до неадекватного розвитку сільмена, при значенні: 0 - змін не виявлено; 1 склеротичних змін в тканинах [Дмитриева Е.В., наявність 30% змінених гепатоцитів у полі зору; 2 Москале ва Е.Ю., Буе веров А.О.,2002 ]. Якщо до 50% змінених гепатоцитів у полі зору; 3 - більапоптоз не наступає, клі тина ги не чер ез н екше 50% змінених гепатоцитів у полі зор у; - стан р оз . За даним и лі тер а тури , це на ступ ає в р езірча сти х ре тик улоен до телі оци ті в, їх ак ти ваз уль та ті енергетичного виснаження під час апопцію, проліферацію, проліферацію дуктул оцінютозного каскаду і призводить до незавер ше ної вали за такою ж шкалою; - гістоло гі чний індекс програми апоп тоза з по слі дуючо ю де гене раці 5 22383 6 склероз у (ГІС ); - гісто ло гічн ий індекс апоп тоза, гепатит С та В. Характерно, що ацидофільні апопякий характеризує кількість клітин з морфологічтозні тільця Каунсільмена були виявлені у всіх ними ознаками апоптозу, в п е р е р а хун к у н а 1 00 дітей з хронічними вірусними гепатитами. їх вирадо слі дж ен и х к лі ти н і на ступ н им о бчи слен зність складала в сере дньому (1,06 +0 ,09) ба лі в. н ям відсотків; - гістоло гічний індекс апонекроза, У 55% обстежени х ті льця Ка унсі льмена виявлеякий характеризує кількість клітин з морфологічні в 30% клітин, у 20-50% всіх гепатоцитів. Наявними ознаками апонекрозу, в перерахунку на ність гепатоцитів з ознаками апоптозу підтвер100 досліджени х клітин і наступним обчисленджено даними електронномікроскопічного ням відсо тків; - гісто хімічне виявлення антигену дослідження , рез ульта том якого було вия вгепатиту HBsAg; - ступінь експресії рецепторів лення ядер з кон денса ці єю хроматину у вигляді Fas(Apo-1/CD95), фактору некрозу пухлин TNFнапівкільця у внутрішньої поверхні мембран, при цьому, органели місцями утворювали агрегати, a , антиапоптотичного протеїну bcl-2 та проапопщо характерно для морфологічних ознак апоптототичного протешу р53, колагенів І, III та ІV типів зу. Клі тини з ознаками апоптозу часті ше з устрічаінтенсивність реакції оцінювали напівкількісним лися при хронічному вірусному гепатиті В, однак, методом в балах, від 0 до 3 балів. при хронічному вірусному гепатиті С в більшій Г і сто ло гі чні о зна ки ап оп тоз а та ап он ек кількості виявляються гепатоцити з виразною р оз а встан о влюють з а допомогою загальногісконденсацією цитоплазми. Поряд із вивченням тологічних методів: забарвлення зрізів гематоксиморфологічних особливостей апоптоза в к лі ти на х лінеозином та пікрофуксином по ван-Гізон; пе чінки , ми в на шом у дослі дженні особли ву електронномікроскопічні ознаки апоптозу і апонеува гу пр иді ляли а на ліз у з на ченн я в реа ліза ці ї врозу - готували зрізи і досліджували на електроге не ти чн о ї пр о гр ами к лі тин но ї сме р ті важлинному мікроскопі ПЕМ-125К; - оцінка стан у геви х факторів її розвитк у Всl-2 , р53 . Цен тральн у патоци ті в (некрози , харак тер дистрофі ї) та роль у роз ви тк у апоптоза відіграє так званий „дикількість ацидофільних та апоптозних тілець Каукий" тип гену - онкосупресора wt p53, який локалінсільмена: 0 - змін не виявлено; 1 - наявність 30%зується в ядрі, і протеїн який він кодує. При імунозмінених гепатоцитів у полі зору; 2 - до 50% змігісто хімічному дослідженні особли востей нених гепатоцитів у полі зору; 3 - більше 50% зміекспресії ан ти ген у р53 при хр онічни х вір усни х нених гепатоцитів у п олі зор у; - стан зір ча сти х ге па ти та х В ви я влен о сла бк у ек сп ре сі ю в ретик улоен до те ліоци тів, їх актива цію, проліфея др а х геп а то ци ті в до 1 ба лу (80,5%) та помірну рацію, проліферацію дуктул оцінювали за такою ж - 2 бали (12,5%). При хронічних гепатитах С ексшкалою; пресія була менше 0,5 бала. Порушення механіз- гістологічний індекс склерозу (ГІС) виявляли му розвитку апоптоза виникає тоді, коли ключовий ранговим методом по системі МЕТАВИР , що ген цього процессу wt p53 втрачає свою функцію, найбіль ш ре тельно вра ховує склер о тичні прощо може наступити в результаті його блокади цеси в дослі джувани х біопта та х печінки - гістоіншими протеїнами. До протеїнів, які блокують логі чний індекс апоп тоза - це визначення кількоwtp53 та апоптоз, в першу чергу належить Всl - 2, сті клітин , в яких є мор фологі чні ознаки який є головним інгібітором апоптоза. Він локаліапоптоза, в перерахунку на 100 досліджених клізується на зовнішній мембрані мітохондрій, стабітин з наступним обчисленням відсотків; - гістологілізує її, управляє транспортом іонів, утворюючи іоні чний індекс апонекроза - це визначення кількості пори, перешкоджає виходу факторів, індук уючи х клітин, в яких є морфологічні ознаки апонекроза, в апоптоз (цитохрома С, AIF та ін.) При імуногістоперерахунку на 100 досліджених клітин з наступхімічному дослідженні антиапоптотичного фактору ним обчисленням відсотків; - виявлення антигену Всl-2 виявлено низький ступінь його експресії на гепатиту HBsAg про во ди ться за допомогою гімембранах гепатоцитів - при хронічному вірусносто хімі чно ї ре акці ї по Шико ту; - ступінь е к сму гепатиті В - 1 бал (12,5%); при хронічному віруп р е с і ї Fa s ( Ap o -l /C D 9 5 ), а н ти а п о п то ти чн о сному гепатиті С - 0-0,5 бала в поодиноких гепатого п р о те їн у b cl , проапопто тично го про теїн у цитах. р53, фактор у некрозу п ухлин TN F- a та інтенсиДостовірним гістологічним маркером перенесевність реакції на колагени І, III та ІV типу визначаного гострого гепатиту є „капіляризація" синусоїдів ється за допомогою непрямого імуногісто хімічного - накопичення колагена і фібронектина в просторі стрептовідін-пероксидазного методу з викорисДісе і пери синусоїдах, що порушує дифузію пожитанням Kit моноклональних антитіл, ступінь ексвних речовин із судин до клітин печінки. При перепресії оцінюється в бала х: 0 - немає ви димого несеному вірусному гепатиті С „капіляризація" забарвлення; 1 - слабка ступінь; 2 - помірний синусоїдів складала 2-3 бала у 50% пацієнтів, а ступінь; 3 - виразний ступінь; 4 - дуже виразний при перенесеному вір усному гепатиті В - 1-2 бала ступінь. в 10-15% пацієнтів. Найбільш значимими у формуАналізуючи отримані гістологічні дані слід заванні патології печінки, у тому числі цирозу, є змізначити, що у ді тей з хронічним вірусним гепатини склеротичного характеру (фіброзу). ГІС у 58% том С (ХВГС) в 100% випадків була характерна біопсій печінки в дітей з маркерами гепатиту С значна жирова дистрофія гепатоцитів печінки, був помірний 2-го ступеня (тобто відзначалося здебільшого велико крапельна (2-3 бали). У дітей, розширення портальних трактів з поодинокими які перенесли хронічний вірусний гепатит В (ХВГВ) септами) і в 33% 1-го ступеня (розширення порвона була незначною - 1 бал і відмічена в 55,5% тальних трактів без септ). У біоптатах дітей, які обстежень. Помірна гідропі чна дистро фія гепаперенесли ХВГС, на відміну від ХВГВ у всі х спото ци ті в (1-2 ба ли ) вия вле на у бі ль шості дослістереженнях зустрічався, переважно, фіброз у джуваних біопсій у хворих, які перенесли вірусний 7 22383 8 портальних трактах. ХВГС ві др із ня вся н ай ХВГ експресують Fas-L та через систему Fas/ бі ль ш ви раж ен им і ро зп о всюджен им ск ле ро Fas-L сприяють виникненню апоптоза в гепатоз ом я к пор та льний трак ті в, так і сеп т (п орцита х. Fas(Apo-1/CD95) є мембранним рецептота льно-цен тральни х, пор тально -портальних). ром та відноситься до суперсімейства TNF- a . Ці зміни з'являлися раніше ніж при перенесеному При ХВГС та ХВГВ імуногістохімічне дослі дження ХВГВ (при ХВГС - через 1-2 доби , при ХВГВ - 2р ецеп торі в Fas(Apo -1 /CD95 ) вия ви ло ви сок у 3 роки). Встано влено , що колаген І тип у локаліек спре сі ю останнього в цитоплазмі гепатоцитів та зується в п ухкій сполучній тканині і утворює тив меншому ступені в мембранах. Позитивна експові періодичні фібрили. У біоптата х печінки з пресія цього рецептора була виявлена у всіх спомаркерами ХВГС колаген III типу був представстереженнях, переважно у при портальній зоні, лений тонкими фібрилами 10-15нм. Важливим є яка приймає участь в регенерації та мітозі клітин. той факт, що так звані щільні колагени (колагени І Осо бли во висока експресія спо стері га лася в типу) були виявлені не тільки в портальних тракзона х вир азно ї лімфоци тарної інфільтрації, яка та х, що характерно для нормальної печінки, а й у була розта шована в портальних трактах та біля проторі Дісе (у нормі не визначається), а також у ни х. Слі д ві дміти ти , що експресія рецептор ів стінці центральної вени, що вказує на перевагу Fas(Apo -l/C D95) була більш виразною в цитопроцесів біосинтезу колаген у. Це можна розціплазмі лімфоцитів, які оточували гепатоцити і чітнювати як початкову фаз у фі броз у. При цьом у, ко визначалася в інфільтратах, серед Fasколаген ІV тип у, майже у всі х спостереженнях позитивних гепатоцитів. Такі зміни виявлені в спорозта шовується пере важно ди фузно , не виразстереженнях з високим ступенем ІГА (3 бали). ними вогни щами - експре сія (0-1 бали) у цитоДослідження рецепторів Fas(Apo-1/CD95) в порівплазмі і мембранах гепатоцитів. В усі х спостереняльному аспекті виявило, що при ХВГС експресія женнях у ді тей , які перене сли ХВГ С, рецепторів в мембранах та цитоплазмі гепатоцифункціона льний стан пе чінки по р ушено . Виявтів була більш виразною. Розповсюдженість реаклений у досліджуваних біоптатах печінки ГІС, а ції в деяких випадках становила 70-80%. При також „капіляризація" син усо їді в, п оси лен а акцьому, при ХВГВ поля експресії Fas(Apo-l/CD95) ти ва ція і про лі ферація син усо їдальн и х к лі тин були „плямисті", чи вона була відсутня. Паралевказують на наявність незбалансованого фіброльно с дослідженнями рівня експресії та розпогенеза. На початковій стаді ї це й п ро це с може всюдженості рецепторів Fas(Apo-1/CD95) було бути з во ро тнім . Пр о веден і к лі нік опроведено дослідження рівня експресії прозапам ор фо ло гі чні зіставлення показали, що чіткого льного цитокіну TNF, який утворюють активовані взаємозв'язку між ними в обстежених дітей не макрофаги при персистенції вірусу. Позитивна сп осте рі га єть ся , н ез важа ючи н а ак ти ва цію експресія TNF, спостерігалася у ти х же зонах, що і сп олучн о ї тк ан ин и . Відкладання фіброзної ткарецепторів Fas(Apo-1/CD95), але переважно винини по ходу синусоїдів. Однак, виявлено зміни являлася в ци топлазмі гепа тоци ті в. Бі ль ш випростору Дісе, а саме, відкладання колагена І та III р азн а , нер і вном ірн а експре сія TN F в цитоплатипів, яке призводить до роз ши ре нн я син усо їзмі гепатоцитів спостерігалася при ХВГС. При да ль но го пр о сто р у, на я вн і сть ск лер оз у сті нХВГС відмічалися також поодинокі гепатоцити з к и центральни х ве н, знай шло своє ві дображендуже виразною експресією прозапального цитокіня в діа гносто вани х нами п о р уше ння х ну TNF. При ХВГВ, експресія прозапального цитомікро цирк уля тор но го р усла і ре гі онарн о ї геокіну TNF була менш ви разно ю і спостері га лася в динаміки . Характерно, що зазначені судинні погр упа х клі тин . В о бо х випа дка х експр есія часрушення були більш значними в дітей, які переті ше спостері га лася біля пор та льни х трак ті в. несли гострий вір усний гепа тит С . В частині Ультра стр уктурно в гепа тоци та х при ХВГС відспостережень (45%) при ХВГС виявлені зміни мічаються як зміни ядра, ци топлазми так і плацентральної і портальної вен, які проявлялися в змолеми. В ядрах гепатоцитів спостерігаються потовщенні та склерозі стінки, наявності лімфоцизміни у вигляді набрякання з різким чи помірним тів в ендотелії, лімфоїдної ін фі льтраці ї в стінці збільшенням ядерця, наявність двох ядер, збільміж ен до те лієм та баз ально ю мембр аною , шення р озмі р у я др а , з бі ль шен ня п л о щі ко нто бто відмічався пор тальний і цен тра льний веде нсо ва но го хр ом а ти н у, яки й розташований нозний ендотелі їт. Також, слід відмітити зміни переважно біля кариолеми. Наявність ущільнення, жовчни х канальців, які здебільшо го спостері гаелектронна щільність ядра , то бто пікноз йо го, лися при ХВГС більш ніж у 80% спостережень. можна віднести до поча тко ви х ознак прояву Слід, також, зазначити, що отримані результати апоптоза. Результати проведеного дослідження про особливості склерогенезу печінки у дітей з ХГ біопсій печінки при ХВГС та ХВГВ довели, що узгоджуються з дослідженнями особливостей мероль апоптоза в патології печінки при хронічному таболізму сполучної тканини в даній групі хвори х. вірусному гепатиті неоднозначна і дужеважлива. Підтвердженням ушкодження гепатоцитів шляЗ одного боку - елімінація гепатоци ті в з персисхом апоптозу та апонекрозу отримані в результаті тенцією вір усу, а з др уго го - наявні сть апоптоза дослідження Fas(Apo-1/CD95) - рецепторів, які не тільки в гепатоцитах, а і в лімфоїдни х ін фільтпередають зовнішні сигнали, що викликають апопратах (лімфоцита х) призводить до послаблення тоз, до клітини та проз апа льно го ци ток іна TN F. місцевого імунітету і хронізації процесу. Особливо Встано влено , що ге па то ци ти людини експреважливим є той факт, що загибель більшої частисують білок Fas, причом у рівень експресії цього ни гепатоцитів шля хом апоптоза може призвести білка збільшується при ХВГ. Виявлено, що вн утдо непоправної втрати їх функції, деструкції та рішньо печінкові інфільтрати Т-лімфоцитів при процесам склерозу та цирозу. Слід відмітити, що 9 22383 10 їх розмі щенням і зменшенням кількості, ущільнаявність виразної експресії TNF- a , описаної в ненням ядерної мембрани у вигляді обідка з аггепатоцита х, підтверджує дані досліджень, які регацією в ньому хроматину. Порушенням струквказували на те, що TNF- a змінює функціональтури хроматину. Гістологічний індекс апонекрозу ний стан клітини - проліферація, диференціюстановив 25,00%. При імуногісто хімічному дослівання, активація чи ви хід в апоптоз, некроз чи дженні ступінь експресії Fas(Apo-1/CD95) був диапонекроз. Важливим також є той факт, що капіфузним та станови в 2-3 бали, антиапоптотичного ляризація синусоїдів і поява колагена у просторі протеїн у bcl-2 був невиразним - 1 бал, проапоптоДисе веде до вн утр і шньо пе чі нко во го шун тутичного протешу р53 -2 бали, фактору некрозу ван ня кро ві і є важли вим фак то ром прогресупухлин TNF- a -2-3 бали та інтенсивність реакції вання хронічного вірусного гепатиту. на колагени І, III та ІV тип у була від слабкої до Спосіб виконується таким чином. На гістологіпомірної (1-2 бали). Прогнозується хронізація вічних препаратах виго товлених загальногістологірусного гепатита С. чним методом (забарвлення гематоксилінеозином Приклад №2. Дитина з хронічним вірусним гета пікрофуксином по Ван-Гізон) визначають стан патитом В, 6 років. При о ці н ці ста н у ге п а то гепатоцитів, синусо їдальни х клі тин , виявляють ци ті в ви я в ле н о с те а то з та лі п і дн у ди с клітини з ознаками апоптозу та апонекрозу, витр о фі ю 1 (30% гепатоци тів); збільшення значають гістологічний індекс склерозу. На блоках розмірів ядер - 3 (100% гепатоцитів); „капіляризадля електронно -мікро скопі чно го до слідження ція синусоїдів - 1-2 (30-50% гепатоцитів); проліфевия вляють осо бливості ультрастр уктури клітин рація жовчних протоків - 1 бали (більш ніж 30%). при апоптозі та апоневрозі. На імуногістохімічних Гістологічний індекс склерозу становив 1 -2 . п репа ра та х визн а ча ють рі ве нь ек спр есі ї р еОці н к а ста н у си н усо їда ль н и х к лі ти н (з і цеп торі в Fas(Apo -1 /CD9 5), фак тор а некроза р ча с ти х ретикулоендотеліоцитів) виявила актип ухлин TN F- a проап оп то ти чно го п ро те шу р53 , вацію їх - 1 бал, тобто у 30% клітин. Клітини з ознаа н тиап оп то ти чно го про те їн у Всl-2 , ін декс ап оками апоптозу (тільця Каунсільмена) складали п то за та ап онекро за , інтенсивність реакції на 30% (1 бал), апоптозний індекс станови в 12 ,7%. колагени І, III, та ІV типів. Отримані результати При електронномікроскопічном у дослідженні порівнюють з клінічними даними, даними вірусовиявлено ядра з конденсацією хроматину у вилогічних досліджень і морфологічними та імуногісгляді на півкільця у внутрішньої поверхні мемтохімічними показниками групи контролю і прибран, при цьому, органели місцями утворювали ймають рішення про наявність маркерів агрегати, що характерно для морфологічних хронізації вір усни х гепати тів В та С у дітей. ознак апоптозу. Були виявлені гепатоцити з ознаСуть способу прогноз ування хронізації вір уками апонекрозу, які на електронномікроскопічносних гепа титі в В та С у дітей відображено у таких му рівні ви р ажа ли ся у слі дуючом у: і н тен си фі прикладах: к аці єю м ем бра нн и х стр ук тур (осміофілія), Приклад №1 Дитина з хронічним вірусним геушкодженням клітинних органел, розширенням патитом С, 8 років. При оцінці стану гепатоцитів мембран гранулярної та гранулярної ендоплазмавиявлено стеатоз та ліпідну дистрофію 2-3 (50тичної сітки (активація її метаболічної функції), 100% гепатоциті в); збільшення розмірів ядер - 2ушкодженням мітохондрій у вигляді набухання чи 3 (50-100% гепатоци тів); „к апі ляр изац ія син усоущільнення ма трик су, н ері вномі рним їх розм іїді в - 2-3 (50 -10 0% гепа то ци ті в); про лі фера ція ще нн ям і змен шенням кі лько сті , ущі льне нням жовчних протоків - 3 бали (більш ніж 50%). Гістоя де рн о ї м ембран и у ви гля ді о бі дка з а гре галогічний індекс склерозу стано ви в - 1-2. Оцінка ці єю в нь ом у хрома тин у. П ор уше нням стр укстан у син усо їдальни х клі тин (з ірчасти х ретикутури хрома ти н у. Гісто ло гі чний ін декс апонекролоендотеліоцитів) виявила активацію їх - 2 бали. зу становив 10,0%. При імуногістохімічному Клітини з ознаками апоптозу (тільця Ка унсільмедослідженні ступінь ек спр е сі ї Fas(Ap o -1 /C D9 5) на) складали 50% (3 бали), апоптозний індекс був ди фуз н им та стан о ви в 1 -2 ба ли , антиапостано ви в 62 ,8%. При елек тронномікроскопічноптотичного протеїну bcl-2 був невиразним - 1 бал, му до слідженні виявлено я дра з ко нден са ці єю проапоптотичного пр о те шу р 5 3 - 1 ба л, фак хр ом а тин у у ви гля ді на п і вкі льця у вн утр і то р у н ек ро з у п ухли н TN F- a -1 -2 ба ли та шн ьо ї поверхні мембран, при цьому, органели інтенсивність реакції на колагени І - 0 балів, III -1 місцями утворювали агрега ти, що характерно для бал, та ІУ типу-1 бал. Прогнозується хронізація морфологічних ознак апоптозу. вірусного гепатита В. Були виявлені гепатоци ти з ознаками апонеТак им чи ном , запр опо но ва ний спо сі б до крозу, які на е ле к тр о н н о м і к р о ск о п і чн о м у з воли ть п ро гн оз ува ти хронізацію вір усни х гер і вн і ви р а ж а ли ся у с лі д ую чо м у: інтенсифіпатиті в С та В у ді тей і істотно поліпши ти якість кацією мембранних структур (осміофілія), ушконадання медичної допомоги дітям, які хворіють на дженням клітинних о р га н е л , р о з ш и р е н н я м вірусні гепатити. м е м бр а н гр а н уля р н о ї та гр а н уля р н о ї ендоплазматично ї сі тки (ак ти вація її ме таболі чної функції), ушкодженням мітохондрій у вигляді набухання чи ущільнення матриксу, нерівномірним Комп’ютерна верстка І.Скворцова Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601