Комбінована педіатрична вакцина, спосіб одночасної комбінованої вакцинації

1. Комбинированная педиатрическая вакцина на основе смеси дифтерийного, столбнячного, коклюшного антигенов и капсульного полисахаридного антигена Haemophilus influenzae типа b в фармацевтически приемлемом водном носителе, отличающаяся тем, что она содержит конъюгат капсульного полисахаридного антигена Haemophilus influenzae типа b с белком CRMi97, при этом разовая иммунизирующая доза включает 7,5 единиц флокуляции дифтерийного антигена, 5 единиц флокуляции столбнячного антигена, 16 PU коклюшного антигена, а также конъюгат 10 мкг фрагментов капсульного полисахаридного антигена Haemophilus influenzae типа b с 25 мкг белка CRM197 2. Комбинированная вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве дифтерийного и столбнячного антигена, она содержит соответствующие анатоксины, а в качестве коклюшного антигена инактивированные клетки Bordetella pertusis. 3. Комбинированная вакцина по п.2, отличающаяся тем, что она содержит дифтерийный и столбнячный анатоксины, адсорбированные на фосфате алюминия, а инактивированные клетки Bordetella pertusis в виде суспензии с первичным кислым фосфатом калия, вторичным кислым фосфатом натрия,и хлоридом натрия. 4. Способ одновременной комбинированной вакцинации, предусматривающий введение комбинированной вакцины, отличающийся тем, что вводят вакцину по п.1. 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что вводят вакцину по п.2. 6. Способ по п.4, отличающийся тем, что вводят вакцину по п.З. 7. Способ по п.4, отличающийся тем, что вакцину вводят внутримышечно. СМ О ю Изобретение относится к комбинированно педиатрической вакцине, включающей дифтерийный антиген, столбнячный антиген и конъюгат фрагментов капсульного полисахаридного антигена Haemophilus influenzae типа в (Hib) и дифтерийного протеина CRMi97 (CRM 197) в одной иммунизирующей дозе. Эта комбинированная вакцина проявляет улучшенную иммуногенность у младенцев для каждого из четырех вакцинных компонентов по сравнению с ДСК (DTP) и Haemophilus influenzae типа в конюгатной ( Hib конъюгатная) вакцинами, применяемыми одновременно, но раздельно. Изобретение также относится к способам одновременной комбинированной вакцинации и усиления иммуногенности каждого вакцинного компонента в комбинированной вакцине. Комбинированные вакцины дают много преимуществ, и их применение в основном поощря ется. Оптимальным возрастом для вакцинации против многих заболеваний является период младенчества и раннего детства. Обычно поэтому во время этого периода назначаются многочисленные прививки в течение короткого отрезка времени. Одновременное введение может снизить затраты, связанные с введением вакцины, увеличить темпы вакцинации и дать возможность ранней и широкоохватной иммунизации детей. Примерами вакцинных комбинаций, используемых для вакцинации детей являются дифтерийный и столбнячный анатоксины с убитыми целыми клетками Bordetella pertussis (DTP) или с бесклеточными коклюшными антигенами; комбинация живых вакцин кори, эпидемического парпотита и краснухи (ММР); трех полиомиелитных серотипов, или живых (пероральная полиомиелитная вакцина) или инактивированных (ІРУ); и ком СМ 27754 бинация DTP-IPV. В настоящее время практика иммунизации в США требует вакцинации младенцев раннего возраста, начиная с двухмесячного возраста, как (1) дифтерийным и столбнячным анатоксином и коклюшной (DTP) вакциной, так и (2) вакциной конъюгата Haemophilus influenzae типа b. Двумя такими коммерчески доступными вакйцинами являются Tri Immunol B (Lederle Laboratories) HlbbTITER R (Praxis Biologies, Inc). Обе эти вакцины рекомендованы для введения в двух-, четырех- и шестимесячном возрасте, с активной иммунизирующей дозой в 15-18 месяцев. Дополнительная доза DTP рекомендуется в 4-6-летнем возрасте. Обе эти вакцины, вводимые раздельно, обеспечили заметный успех в снижении частоты заболеваемости в Соединенных Штатах, В то же время было бы желательно объединить в одну вакцину DTP и конъюгат Haemophilus influenzae типа b, чтобы снизить число иммунизации, которые должен получить ребенок, причем такая комбинация должна иметь приемлемые показатели безвредности и защитной иммуногенности, которые не должны быть меньше, чем у вакцин, вводимых отдельно. Было обнаружено, что комбинированная педиатрическая вакцина, содержащая в одной иммунизирующей дозе композицию из дифтерийного антигена, столбнячного антигена, коклюшного антигена и конъюгат фрагментов капсульных полисахаридов Haemophilus influenzae типа b и протеина CRM 1 7 в фармацевтически приемлемом Э водном носителе проявляет повышенную иммуногенность у детей для каждого из четырех компонентов вакцины. В частности, комбинированная вакцина настоящего изобретения содержит стерильную смесь дифтерийного анатоксина, адсорбированного фосфатом алюминия, столбнячного анатоксина, адсорбированного фосфатом алюминия, инактивироваиного Bordetella pertussis и конъюгат фрагментов капсульных полисахаридов Haemophilus influenzae типа b и белка CRM 1 7 в 9 фармацевтически приемлемом носителе. После встряхивания композиция комбинированной вакцины настоящего изобретения является гомогенной белой суспензией. Кроме того, вакцинные компоненты стабильны и совместимы, и не проявляют взаимной подавляющей активности между компонентами. Также были найдены способы для одновременно комбинированной вакцинации младенцев и для повышения иммуногенности полисахарида Haemophilus influenzae типа b дифтерийного антигена, столбнячного антигена и коклюшного антигена, как компонентов вакцины. Эти способы включают создание единственной иммунизирующей дозы с дифтерийным антигеном, столбнячным антигеном, коклюшным антигеном и конъюгатом фрагментов капсульных полисахаридов Haemophilus influenzae типа b и белка CRM 197, и инъекцию этой единственной дозы людям, особенно детям. Описание предпочтительных примеров осуществления. Композиция комбинированной педиатрической вакцины настоящего изобретения содержит дифтерийный, столбнячный и коклюшный антигены, смешанные с конъюгатом фрагментов капсульных полисахаридов Haemophilus influenzae типа b, ковалентно связанных с CRM 197 При предпочтительном осуществлении дифтерийный антиген является дифтерийным анатоксином, адсорбированным фосфатом алюминия, и столбнячный антиген является столбнячным анатоксином, адсорбированным фосфатом алюминия. Эти анатоксины могут быть получены хорошо известными в данной области способами. Дифтерийный анатоксин и столбнячный анатоксин получают из Согуnebacterium diphterial и Clostridium tetani соответственно, которые выращиваются в среде по методу Mueller and Miller, Ummunol, 1941, 40:21-32 и I. Immunol, 1947, 56:143-147 и детоксифицируют с помощью формальдегида. Анатоксины очищаются по методу спиртового фракционирования Pillemer., i.tmmunol, 1946, 54: 213-224 и разводятся водным раствором, содержащим одноосновной фосфат натрия, двухосновной фосфат натрия, глицин и тимерозол (ртутное производное) в качестве консерванта. Коклюшный антиген является предпочтителдьно препаратом целых инактивированных клеток одного штамма или комбинации штаммов Bordetella pertussis. Инактиворованный препарат целых коклюшных клеток получают путем выращивания Bordetella pertussis фазы 1 в модифицированном бульоне Cohen-Wheeler, содержащем кислотный шдролизат казеина. Bordetella pertussis инактивируется тимеросалом, отделяется и затем суспендируется фосфат натрия, хлорид натрия, хлорид натрия и тимеросал (ртутное производное) в качестве консерванта. Компоненты DTP могут быть представлены в виде смеси. Например, коммерчески доступный препарат DTP, такой как поставляемый Lederle Laboratories под названием Tri-lmmunol R может быть использован для композиции комбинированной вакцины настоящего изобретения. Конъюгатный компонент Hib комбинированной вакцины настоящего изобретения содержит фрагменты бактериального капсульного полисахарида Haemophilus influenzae типа Ь, ковалентно связанные с белком CRM 197. Фрагменты получают путем постепенного расщепления очищенного капсульного полисахарида, выделенного из Haemophilus influenzae типа b, выращенной в химически определенной среде. Белок CRM 197 является нетоксичным вариантом дифтерийного токсина, выделенного из культур С. diphteriae штамма С? (бета 197) выращенных в среде на основе казам иноки слот и дрожжевого экстракта. Фрагменты Haemophilus influenzae типа b соединяли с белком CRM197 путем ковалентного связывания. Особенно предпочтителен способ ковалентного связывания сахарида с белком - восстановительное аминирование. Получение конъюгатов Haemophilus influenzae типа b и CRM 197 путем восстановительного аминирования описано в патентах США 4 673 574, 4 761 283 и 4 902 506. Конъюгат очищают путем диафильтрации, чтобы удалить непрореагировавший белок или полисахаридные фрагменты и реагенты, и стерилизуют фильтрованием. Коммерчески доступный конъюгат Haemophilus influenzae типа b такой как поставляемый Praxis Biologics Inc. под названием HibTITER может быть использован для композиции комбинированной 27754 вакцины настоящего изобретения. Композиция комбинированной вакцины настоящего изобретения получается путем добавления концентрата конъюгата Haemophilus influenrae типа b к препарату DTP, когда вакцина DTP разбавляется доведением до окончательного объема. Окончательная иммунизирующая доза поэтому остается в объеме 0,5 мл. Каждая единичная доза в 0,5 мл комбинированной вакцины составляется так, что она содержит минимум 7,5 Lf дифтерийного анатоксина, 5 Lf столбнячного анатоксина (оба анатоксина индуцируют образование не менее, чем 2 единиц анатоксина на мл при определении эффективности на морских свинках), Юмкг очищенного сахарида Haemophilus influenrae типа b и примерно 25 мкг белка CRM 197 Каждая доза вакцины составляется так, чтобы содержать менее 16 OPU инактивированных коклюшных клеток Общая иммунизирующая доза (первые три вводимые дозы по 0,5 мл) для людей содержит по оценке 12 единиц коклюшной вакцины с оценкой в 4 защитных единицы на одну человеческую дозу. Каждый компонент вакцины - дифтерийный анатоксин, столбнячный анатоксин, коклюшный и конъюгат Haemophilus influenrae типа b - удовлетворяет стандартам необходимой активности. В качестве консерванта добавляется тимеросал (ртутное производное) к комбинированной вакцине до конечной концентрации 1.10000. Содержание алюминия в дозе окончательного продукта не превышает 0,85 мг на 0,5 мл дозу по результатам определения. Остаточное содержание свободного формальдегида по результатам исследования