Спосіб діагностики злоякісних пухлин людини

Спосіб діагностики злоякісних пухлин людини шляхом виявлення в периферичній крові аномального білка (онкобілка), який відрізняється тим, що на мазок крові, взятої з пальця руки пацієнта, 31359 Здійснення цього способу потребує нанесення трьох крапель ("крапля в краплю") різних реагентів на мазок крові (комплексон ЕДТА або ЕГТА + стандартна сироватка донора + нітрат срібла) з інтервалом 10 хвилин, що потребує хроноконтролю протягом 30 хвилин виконання цієї процедури. Протікання цієї реакції потребує стандартизованого освітлення і висихання "великої" краплі як результату злиття трьох крапель з наступним утворенням "плями", що займає 2-4 години. Таким чином, технічна процедура виконання способу займає від 2,5 до 4,5 годин. Головний недолік способу - суб'єктивна візуальна оцінка діагностичних колористичних ознак вмісту "кальцій-гістонових білкових комплексів", а саме: світло-коричневий, коричневий колір краєвої зони "плями" і зернистість темно-коричневого, буро-коричневого кольору в середній і центральній зонах "плями", оскільки всі вказані відтінки належать до однієї (жовтої) частини видимого спектра кольору при макроскопії ("ad oculus") і при мікроскопії. Діагностична ефективність способу не перевищує 90%. В основу винаходу поставлено завдання створення способу діагностики злоякісних пухлин людини, в якому шляхом виявлення в мазку крові, взятої з пальця обстежуваного, аномального білка (онкобілка) специфічного для злоякісної пухлини, забезпечується підвищення діагностичної ефективності (достовірності) способу з усуненням суб'єктивізму, спрощенням технології, що дозволяє, в кінцевому підсумку, використовувати пропонований спосіб для масових обстежень населення з метою онкоскрінінгу і для індивідуального онкомоніторингу в клініці. Поставлене завдання вирішується наступним чином: в способі діагностики злоякісних пухлин людини, заснованому на виявленні аномального білка (онкобілка), специфічного для злоякісної пухлини, згідно з виноходом, виготовляють мазок крові, узятої з пальця руки, і наносять на нього одну краплю розчину реактиву, після висихання якої порівнюють структуру "плями" зі структурою "плями-еталона", отриманого аналогічним способом на мазку крові здорової людини-донора, і при виявленні різниці діагностувати наявність в організмі людини злоякісної пухлини. Спосіб дозволяє виявити онкобілок в крові як продукт аномальної експресії злоякісних пухлинних клітин, що виробляються в процесі їх розмноження, в будь-яких органах і тканинах, уражених злоякісним пухлинним процесом. Згідно з пропонованим способом аномальний білок (онкобілок) є універсальною онкомаркерною молекулярною субстанцією, присутньою в крові при злоякісних пухлинах дізонтогенетичного походження у дітей, а також злоякісних пухлин у дорослих, незалежно від локалізації, гістогенезу (тканинного походження) - раки (епітеліальна тканина), саркоми (мезенхімальна тканина), лімфоми (лімфоїдна тканина), стадії розвитку злоякісного пухлинного процесу (І-IV), статі і віку. Таким чином, пропонований спосіб є простим і нетрудомістким в технічному виконанні, універсальним і високоспецифічним для діагностики будьяких злоякісних пухлин в організмі людини, в зв'язку з чим його можливо використовувати як при масових обстеженнях населення (онкоскрінінг), так і в онкологічній клініці для індивідуального динамічного контролю за ефективністю протипухлинного лікування (онкомоніторинг). У відповідності до пропонованого способу доцільно, щоб концентрація водяного розчину адсорбенту варіювала в межах 0,5-1%. При використанні концентрації адсорбенту менше 0,5%, мікроскопічне дослідження мазку крові не дозволяє виявити у онкохворих ділянки (локуси) виборочного (селективного) зв'язку з аномальним білком (онкобілком), а при використанні концентрації більш 1% утворюються тотальні осади (преципітати) адсорбенту, що робить його непридатним для дослідження. Спосіб здійснюється наступним чином: на мазку крові (2-3 краплі), взятої з пальця руки пацієнта і рівномірно розподіленої по предметному склу, наноситься у вигляді однієї краплі 0,1 мл 0,7% водяного розчину тонкодисперсного адсорбенту (емпірична формула C15H13 О3N3, м.в.=283 г), яка спочатку знаходилась в "рідинній" фазі (1-1,5 год.), після чого висихає ("тверда" фаза) з утворенням "плями", після чого придатна для мікроскопічного діагностичного дослідження. Результат оцінюють за структурними відмінностями при мікроскопії "плями" на мазку крові хворого злоякісною пухлиною і "плями-еталона" на мазку крові здорової людини (донора) у відповідності до наступних діагностичних критеріїв (ознак). Нормальна структура "плями-еталона" має два варіанта мікроскопічної будови: наявність концентричних темних і світлих ліній, що чергуються між собою (фіг. 1), або при відсутності таких ліній має місце наявність гомогенної (однорідної) дрібнозернистої маси (фіг. 2). Якщо зображення вказаних варіантів будови "плями" на мазку крові обстежуємого пацієнта співпадає з "плямоюеталоном", то це свідчить про відсутність в організмі обстежуємого злоякісної пухлини. Структура "плями" у хворого злоякісною пухлиною має два варіанти мікроскопічної будови: на світлому фоні гомогенної (однорідної) дрібнозернистої маси хаотично розташовані темні круглясті дрібні гранули, що відповідають локусам вибіркового зв'язування адсорбенту з аномальним онкобілком (фіг. 3) або на світлому фоні гомогенної (однорідної) дрібнозернистої маси переважно по периферії "плями" розташовуються темні аморфні макромолекулярні конгломерати, оточені інтенсивно темним дрібнозернистим прецитатом (осадом) у вигляді "німба" ("ореола") (фіг. 4). Приклад 1 На мазок крові пацієнта Г. зі скаргами на постійні головні болі, запаморочення нанесена 1 крапля 0,5% водяного розчину адсорбенту, яка після експозиції в "рідинній" фазі (1 год.), шляхом природного висихання при кімнатній температурі (20°С) перейшла в "тверду" фазу з утворенням "сухої" плями придатної для мікроскопічного дослідження. Результат: наявність в "плямі" концентричних ліній темного і світлого кольору, що чергуються між собою. Висновок: відсутність в організмі пацієнта злоякісної пухлини. Правильний результат підтверджено комплексним діагностичним обстеженням за допомогою комп'ютерної томографії та ядерно 2 31359 Результат: на світлому фоні гомогенної (однорідної) зернистості хаотично розташовані темні округлі дрібні гранули. Висновок: наявність в організмі злоякісної пухлини, правильний результат в подальшому підтверджено морфологічним дослідженням оперативно видаленої нирки - злоякісна нефробластома (пухлина Вільмса). Приклад 6 На мазок крові пацієнтки К. зі скаргами на біль в боку, порушенні менструального циклу, нанесена 1 крапля 0,8% водяного розчину адсорбенту, яка після експозиції в "рідинній" фазі (1 год. 15 хв.), шляхом природного висихання при кімнатній температурі (19°С) перейшла в "тверду" фазу з утворенням "сухої" плями, придатної для мікроскопічного дослідження. Результат: на світлому фоні гомогенної (однорідної) зернистості в периферичній зоні "плями" розташовані округлі темні аморфні конгломерати, оточені інтенсивно темними преципітатами (осадом) у вигляді "німба" ("ореола"). Висновок: наявність в організмі злоякісної пухлини. Правильний результат в подальшому підтверджено морфологічним дослідженням оперативно видаленого яєчника - злоякісна дисгермінома. Приклад 7 На мазок крові пацієнта М. зі скаргами на тривалий запор, нанесена 1 крапля 0,9% водяного розчину адсорбенту, яка після експозиції в "рідинній" фазі (1 год. 5 хв.), шляхом природного висихання при кімнатній температурі (18°С) перейшла в "тверду" фазу з утворенням "сухої" плями, придатної для мікроскопічного дослідження. Результат: на світлому фоні гомогенної (однорідної) зернистості хаотично розташовані темні округлі дрібні гранули. Висновок: наявність в організмі злоякісної пухлини. Правильний результат в подальшому підтверджено морфологічним дослідженням оперативно видаленої пухлини сигмоподібної кишки аденокарцинома. Приклад 8 На мазок крові пацієнтки Т. зі скаргами на кровоточиву "родимку", нанесена 1 крапля 1% водяного розчину адсорбенту, яка після експозиції в "рідинній" фазі (1 год. 30 хв.) шляхом природного висихання при кімнатній температурі (21°С) перейшла в "тверду" фазу з утворенням "сухої" плями, придатної для мікроскопічного дослідження. Результат: на світлому фоні гомогенної (однорідної) зернистості хаотично розташовані темні округлі дрібні гранули. Висновок: наявність в організмі злоякісної пухлини. Правильний результат в подальшому підтверджено морфологічним дослідженням оперативно видаленої "родимки" - злоякісна меланома. Оцінка діагностичної ефективності пропонованого способу проводилась відповідно до рекомендацій Міжнародної Академії пухлинних маркерів і Міжнародного Товариства розвитку онкології в біології та медицині. Діагностична чутливість (ДЧ) - здатність методу діагностувати злоякісну пухлину у хворої людини, тобто давати істиннопозитивний результат (наявність злоякісної пухлини). магнітного резонансу головного мозку, що свідчать про відсутність злоякісного пухлинного новоутворення. Приклад 2 На мазок крові пацієнта А. зі скаргами на щільне затвердіння в правій молочній залозі нанесена 1 крапля 1% водяного розчину адсорбенту, яка після експозиції в "рідинній" фазі (1,5 год.), шляхом природного висихання при кімнатній температурі (18°С) перейшла в "тверду" фазу з утворенням "сухої" плями, придатної для мікроскопічного дослідження. Результат: наявність в "плямі" гомогенної (однорідної) зернистості при відсутності концентричних темних та світлих ліній. Висновок: відсутність в організмі пацієнтки злоякісної пухлини. Правильний результат підтверджено оглядом лікаря-мамолога і мамографією, а також цитологічним дослідженням пункційної біопсії - фіброаденома (доброякісна пухлина). Приклад 3 На мазок крові пацієнта К. зі скаргами на припухлість шиї в надключичній області, шкіряну сверблячку, пітливість нанесена 1 крапля 0,7% водяного розчину адсорбенту, яка після експозиції в "рідинній" фазі (1 год. 20 хв.), шляхом природного висихання при кімнатній температурі (21°С) перейшла в "тверду" фазу з утворенням "сухої" плями, придатної для мікроскопічного дослідження. Результат: на світлому фоні гомогенної (однорідної) зернистості наявність хаотично розташованих темних округлих дрібних гранул. Висновок: наявність в організмі злоякісної пухлини. Правильний результат в подальшому підтверджено біопсією надключичного лімфовузла, морфологічний діагноз - лімфобластна лімфосаркома. Приклад 4 На мазок крові пацієнта Л. зі скаргами на болі в епігастральній області шлунка (раніше видалена ракова пухлина шлунка) нанесена 1 крапля 0,8% водяного розчину адсорбенту, яка після експозиції в "рідинній" фазі (1 год.), шляхом природного висихання при кімнатній температурі (20°С) перейшла в "тверду" фазу з утворенням "сухої" плями, придатної для мікроскопічного дослідження. Результат: на світлому фоні гомогенної (однорідної) зернистості в периферичній зоні "плями" розташовуються темні аморфні конгломерати, оточені інтенсивно-темними преципітатами (осадом) у вигляді "німба" ("ореола"). Висновок: наявність в організмі злоякісної пухлини. Правильний результат в подальшому підтверджено біопсією кукси шлунка, морфологічний діагноз - аденокарцинома. Таким чином, має місце рецидив пухлинної хвороби. Приклад 5 На мазок крові дитини Щ. зі скаргами на тупу, розлиту біль в поперековій області, нанесена 1 крапля 0,6% водяного розчину адсорбенту, яка після експозиції в "рідинній" фазі (1 год. 10 хв.), шляхом природного висихання при кімнатній температурі (19°С) перейшла в "тверду" фазу з утворенням "сухої" плями, придатної для мікроскопічного дослідження. 3 31359 Зведені результати діагностичної специфічності способу при обстеженні практично здорових осіб (донорів) представлені в табл. 1. Зведені результати діагностичної ефективності способу як інтегративного показника діагностичної специфічності і чутливості представлені в табл. 2. Діагностична специфічність (ДС) - здатність методу давати у здорової людини істиннонегативний результат (відсутність злоякісної пухлини). Діагностична ефективність (ДЕ) - здатність методу правильно виявляти хворих злоякісними утвореннями і здорових осіб. ІП ІН ДЧ = ´ 100%; ДС = ´ 100%; ІП + ЛН ІН + ЛП ІП + ІН ДЕ = ´ 100 % ІП + ЛП + ІН + ЛН де: ІП - істиннопозитивний результат, ІН - істиннонегативний результат, ЛП - ложнопозитивний результат (гіпердіагностика); ЛН - ложнонегативний результат (гіподіагностика). Джерела інформації В.П. Короткоручко Осадочная реакция на рак при диагностике опухолевой болезни. - К.: Наукова думка. - 1967. – 77 с. Е.И. Суслов, К.А. Галахин, В.А. Владимиров Способ диагностики злокачественных опухолей человека. - Патент России. - RU № 2077051 С1, 1992. – 12 с. (прототип). I. Struve Tumour Diseases - A Clinical Guide Tumour Markers. - Germany, Abbott, 1993. – 68 p. Таблиця 1 Результати обстеження осіб (донорів) за допомогою способу за винаходом Кількість обстежених осіб, (а. ч.) 100 Число істиннонегативних результатів, (а. ч.) 98 Число ложнопозитивних результатів, (а. ч.) 2 Діагностична специфічність, (%) 98 Таблиця 2 Результати обстеження онкологічних хворих за допомогою способу за винаходом Локалізація злоякісної пухлини Кількість пацієнтів, (а. ч.) Головний мозок Щитоподібна залоза Легені Шлунок Товста кишка Пряма кишка Передміхурова залоза Молочна залоза Матка Яєчники Кістки М'які тканини (шкіра, м'язова сполучна, жирова тканина, судини) Лімфатична тканина Всього 30 40 5 12 10 11 5 30 15 13 10 Число ложноЧисло істиннегативних нопозитивних результатів, (а. ч.) результатів, (а. ч.) 26 4 35 5 5 немає 9 3 8 2 10 1 5 немає 27 3 14 1 12 1 9 1 Діагностична чутливість, (%) 86,6 87,5 100,0 75,0 80,5 90,5 100,0 90,0 93,3 92,3 90,0 20 18 2 90,0 32 233 30 208 2 25 93,7 90,5 4 31359 Мікроскопічне зображення ознак норми і злоякісної онкології на мазках крові обстежуємих осіб за допомогою способу за винаходом Мікрофото. Зб. ´ 32 (лупа) "Пляма-еталон", норма. Чергування концентричних чорно-білих ліній. Мікрофото. Зб. ´ 32 (лупа) "Пляма-еталон", норма. Гомогенна (однорідна) зернистість. Фіг. 1 Фіг. 2 Мікрофото. Зб. ´ 32 (лупа) "Онкопляма", злоякісна онкологія. Темні, дрібні, округлі гранули. Мікрофото. Зб. ´ 32 (лупа) "Онкопляма", злоякісна онкологія. Темні преципітатти у вигляді "німба" ("ореола"). Фіг. 3 Фіг. 4 5 31359 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 35 прим. Зам._______ __________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 __________________________________________________________ 6