Спосіб обробки насіння євгенія ямболана ламарк, спосіб приготування оксамату натрію та лікарський засіб для профілактики і лікування діабету та його ускладнень

1 Спосіб обробки насіння ЄВГЕНІЯ ЯМБОЛАНА ЛАМАРК шляхом його подрібнення та ізоляції суміші, що не містить поліфенольні та стерольні ПОХІДНІ, мацерації порошку нижчим аліфатичним спиртом у гарячому стані, фільтрації, виділення нерозчинного осаду, що не містить поліфенольні та стерольні сполуки, обробки нерозчинного осаду аміачним розчином, обробки аміачної суміші нижчим аліфатичним спиртом у гарячому стані, фільтрації, виділення нерозчинного осаду та просушки цього осаду, що являє собою суміш І 2 Спосіб обробки насіння за п 1, який відрізняється тим, що насіння ЄВГЕНІЯ ЯМБОЛАНА ЛАМАРК висушують, ретельно подрібнюють та просіюють, а отриманий порошок піддають наступній обробці а) мацерації з розмішуванням у нижчому аліфатичному спирті при температурі в інтервалі 40-70 °С, б) вакуум-фільтрацм та виділенню нерозчинного осаду, в) мацерації з розмішуванням нерозчинного осаду в нижчому аліфатичному спирті (1-4С) при температурі в інтервалі 40-70 °С, г) вакуум-фільтрацм та видаленню спиртових фаз, що містять головним чином небажані поліфеноли та стероли, д) обробці нерозчинного осаду в аміачному розчині при температурі в інтервалі 10-30 °С, є) обробці всієї вологої аміачної маси в розчині води з нижчим аліфатичним спиртом (1-4С) при температурі в інтервалі 40-70 °С, ж) фільтрації та видаленню спиртового розчину, з) промивці нерозчинного осаду нижчим аліфатичним спиртом (1-4С), фільтрації та видаленню спиртового розчину, і) виділенню нерозчинного осаду та просушці суміші І 3 Спосіб за п 2, який відрізняється тим, що на стадії а) використовують від 2 до 10 літрів нижчого аліфатичного спирту на 1 кг просіяного порошку 4 Спосіб за п 2 або 3, який відрізняється тим, що на стадії а) використовують 5 літрів етанолу МІЦНІСТЮ 93-95° по Гей-Люсаку при 60 °С протягом 1 години 5 Спосіб за будь-яким з пп 2-4, який відрізняється тим, що фільтрацію на стадіях б) та г) здійснюють під вакуумом 40 кПа 6 Спосіб за будь-яким з пп 2-5, який відрізняється тим, що на стадії в) використовують принаймні від 2 до 10 літрів нижчого аліфатичного спирту на 1 кг вихідного просіяного порошку 7 Спосіб за будь-яким з пп 2-6, який відрізняється тим, що на стадії в) використовують 4 літри етанолу МІЦНІСТЮ 93-95° по Гей-Люсаку при температурі 60 °С протягом 1 години 8 Спосіб за будь-яким з пп 2-7, який відрізняється тим, що на стадії д) на 1 кг вихідного просіяного порошку використовують 7501250 мл аміачної води 9 Спосіб за будь-яким з пп 2-8, який відрізняється тим, що на стадії д) на 1 кг вихідного просіяного порошку використовують 1 літр аміачної води, що містить 350 мл 28 %-го гідрату окису амонію, та обробку здійснюють при температурі близько 20 °С протягом 10-30 годин 10 Спосіб за будь-яким з пп 2-9, який відрізняється тим, що на стадії є) вологу аміачну масу, отриману з 1 кг вихідного просіяного порошку, розміщують в 2-10 літрах розчину води з нижчим аліфатичним спиртом 11 Спосіб за будь-яким з пп 2-10, який відрізняється тим, що на стадії є) здійснюють О о (О 60299 обробку в 5 літрах суміші етанол-вода (75/25 за об'ємом) при температурі 60 °С протягом 1 години 12 Спосіб за будь-яким з пп 2-11, який відрізняється тим, що на стадії з) промивку здійснюють 500-1500 мл нижчого аліфатичного спирту на 1 кг вихідного просіяного порошку 13 Спосіб за будь-яким з пп 2-12, який відрізняється тим, що на стадії з) промивку здійснюють 1 літром етанолу, а фільтрацію здійснюють через міткаль під вакуумом приблизно 80 кПа 14 Спосіб за будь-яким з пп 2-12, який відрізняється тим, що на стадії і) сушіння здійснюють на відкритому повітрі, в ТІНІ 15 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що суміш І піддають обробці розчином води з нижчим аліфатичним спиртом, фільтрації, частковому концентруванню фільтрату, очистці неполярними адсорбуючими смолами, частковому концентруванню, центрифугуванню, ультрафільтрації та виділенню суміші II 16 Спосіб приготування суміші II за п 15, який відрізняється тим, що суміш І, одержану згідно з п 1, піддають наступним операціям к) обробці суміші І, одержаної згідно з п 1, за допомогою розчину вода-нижчий аліфатичний спирт (1-4С) л) відстоюванню, а потім відкачці верхньої фази, яка фільтрується, утворюючи фільтрат 1, та обробці нижньої фази водою, яка також фільтрується, утворюючи фільтрат 2, потім об'єднанню фільтратів 1 і 2 та концентруванню у водній фазі, м) обробці неполярною адсорбуючою смолою та потім фільтрації, н) концентруванню фільтрату, фільтрації та потім ультрафільтрації, о) люфілізацм та виділенню екстракту II 17 Спосіб за п 16, який відрізняється тим, що на стадії к) використовують 10-25 літрів розчину воданижчий аліфатичний спирт (95 5 -90 10 за об'ємом) на 1 кг суміші І 18 Спосіб за п 16 або 17, який відрізняється тим, що на стадії к) використовують 18 літрів розчину вода-етанол (17,7 0,93 за об'ємом) 19 Спосіб за будь-яким з пп 16-18, який відрізняється тим, що на стадії л) верхню фазу фільтрують через міткаль та на 1 кг суміші І додають від 10 до 25 літрів води до нижньої фази, яку фільтрують через фритту 20 Спосіб за будь-яким з пп 16-19, який відрізняється тим, що на стадії л) концентрування здійснюють звичайно вакуумом 0,4 кПа 21 Спосіб за будь-яким з пп 15-20, який відрізняється тим, що на стадії м) використовують смолу S861 або смоли типу XAD фірми Rhom та Hass, і фільтрацію здійснюють через фриту 22 Спосіб за будь-яким з пп 16-21, який відрізняється тим, що на стадії м) концентрування здійснюють в термосифонному концентраторі при температурі 35 °С під вакуумом 0,4 кПа 23 Спосіб за будь-яким з пп 16-22, який відрізняється тим, що на стадії н) послідовно здійснюють 3 ультрафільтрації через патронний фільтр 10 кДа, 3 кДа 11 кДа 24 Спосіб приготування оксамату натрію та сполук формули Ri в якій або Ri являє собою атом водню, a R2 являє собою ланцюг формули -СН 2 -СНОН-СНОН-СН 2 ОН (А) або -СНОН-СНОН-СНОН-СНзОН (В), або Ri являє собою ланцюг формули (A), a R2 являє собою атом водню, який відрізняється тим, що суміш II, одержану згідно з п 15, піддають наступним операціям п) хроматографії суміші II, одержаної згідно з винаходом на колонці з кізельгуром, виділенню фракцій, що містять 4 продукти, та об'єднанню цих фракцій в одну фракцію, р) хроматографії раніше отриманої фракції на колонці з сефадексом для отримання оксамату натрію, сполуки формули (І), де Ri являє собою атом водню, a R2 являє собою ланцюг формули (В), і суміші сполуки формули (І), де Ri являє собою атом водню, a R2 являє собою ланцюг формули (А), та компонента формули (І), де Ri являє собою ланцюг формули (A), a R2 - атом водню, с) необов'язково, хроматографії суміші сполуки формули (І), де Ri являє собою атом водню, a R2 ланцюг формули (А), і сполуки формули (І), де Ri являє собою ланцюг формули (A), a R2 - атом водню, типу ВЕРХ (високоефективної рідинної хроматографії) 25 Спосіб за п 24, який відрізняється тим, що хроматографію на стадії п) здійснюють на колонці R C H E M ELUT фірми Prolabo, насиченій водою, а потім елюйованій послідовно гептаном, сумішшю гептан-етил ацетат (50 50 за об'ємом), сумішшю етилацетат-н-бутанол (95 5, 90 10, 80 20, 50 50, 20 80, а потім 0 100 за об'ємом) та сумішшю нбутанол-вода (98 2 та 95 5 за об'ємом) 26 Спосіб за п 25, який відрізняється тим, що хроматографію на стадії р) здійснюють сумішшю вода-етанол (50 50 за об'ємом) 27 Спосіб за п 25, який відрізняється тим, що хроматографію на стадії с) здійснюють на колонці YMC 18ODS-AQ фірми АІТ з використанням як елюента суміші води з 0,1 %-ною мурашиною кислотою 28 Лікарський засіб, який відрізняється тим, що діючим началом виступає суміш І, одержана згідно з п 1, або суміш II, одержана згідно з п 15, або оксамат натрію, або одна або декілька сполук формули 60299 одержану згідно з п 15, або оксамат натрію, або одну чи кілька сполук формули ОН ОН ОН , (I) в якій Ri являє собою атом водню, a R2 являє собою ланцюг формули -СН2-СНОН-СНОН-СН2ОН (А) або -СНОН-СНОН-СНОН-СНзОН (В), де Ri являє собою ланцюг формули (A), a R2 атом водню та один або декілька наповнювачів 29 Лікарський засіб за п 28, що містить один або кілька наповнювачів та сполуку, який відрізняється тим, що діюче начало являє собою суміш І, одержану згідно з п 1, або суміш II, Даний винахід стосується сумішей, ізольованих з насіння Евгенія Ямболана Ламарк (Eugenia Jambolana Lamarck) (родина миртових), лікарських засобів із вмістом цих сумішей або певних компонентів останніх, використання цих сумішей та їх компонентів для виготовлення протидіабетичного лікарського засобу та способу їх виготовлення Рослинний екстракт, виготовлений з насіння або кори Евгенія Ямболана Ламарк із вмістом змішаного поліфенольного та стерол ьного комплексу, описаний в патенті FR 2465484 В наш час виявлені нові суміші, що виділяють з насіння Евгенія Ямболана Ламарк, що не містять поліфенольний та стерольний комплекс, а також деякі компоненти цих сумішей, що володіють цукрознижуючими властивостями Ці суміші відрізняються тим, що вони не містять поліфенольних та стерольних похідних та виділяються шляхом подрібнення зерен Евгенія Ямболана Ламарк, мацерації порошку нижчим аліфатичним спиртом у гарячому стані, фільтрації, виділення нерозчинного осаду, що не містить поліфенольні та стирольні сполуки,обробки нерозчинного осаду аміачним розчином, обробки аміачної суміші нижчим аліфатичним спиртом у гарячому стані, фільтрації, виділення нерозчинного осаду та сушка цього осаду, що представляє собою суміш І, потім можливою обробкою суміші І розчином води з нижчим аліфатичним спиртом, фільтрації, часткового згущення фільтрата, очистки неполярними адсорбуючими смолами, часткового згущення фільтрату, очистки неполярними адсорбуючими смолами, часткового згущення, центрифугування, ультрафільтрації та виділення суміші II, З суміші П можуть бути виділені оксамат натрію та компоненти формули ОН в якій або Ri являє собою атом водню, та R2 являє собою ланцюг формули -СН2-СНОН-СНОН-СН2ОН (А) або -СНОН-СНОН-СНОН-СН2ОН (В), або Ri являє собою ланцюг формули (A), a R2 являє собою атом водню, який застосовують для профілактики і лікування діабету та його ускладнень (її, он де Ri відповідає атому водню, a R2 - ланцюгу формули -СН2-СНОН-СНОН-СН2ОН /А/, -СНОН-СНОН-СНОН-СНзОН /В/ або Ri відповідає ланцюгу формули /A/, a R2 атому водню Оксамат натрія вже описано Toussamt, Aim , 120,237 (1861) Сполуки формули (І) вже описані Kuhn et coll, ANN, 644,122-127 (1961), Tsuchida et coll, Agr Biol Chem , 39 (5), 1143-1148 (1975), Tsuchida et coll , Agr Biol chem, 40 (5), 921-925 (1976), Tsuchida et coll, Nippon Shokuhm Kogyo Gakkaishi, 37,154-161 (1990) Avalos et coll , tetrahedron, 49, 2655-2675 (1993) Даний винахід відноситься також до способу приготування суміші І з насіння Евгенія Ямболана Ламарк, що були висушені та ретельно подрібнені Порошок просіюється переважно за допомогою стандартного сита з отвірами діаметром 0,5мкм, а потім піддається слідуючій обробці а) мацерації з розмішуванням в нижчому аліфатичному спирті при температурі в інтервалі 40-70°С, б) фільтрації під вакуумом та виділенню нерозчинного осаду, в) мацерації з розмішуванням, нерозчинного осаду в нижчому аліфатичному спирті при температурі в інтервалі 40-70°С, г) фільтрації під вакуумом та видаленню спиртових фаз, що містять головним чином небажані поліфеноли та стероли, д) обробці нерозчинного осаду в аміачному розчині при температурі в інтервалі 10-30°С, є) обробці всієї вологої аміачної маси у розчині води з нижчим аліфатичним спиртом при температурі в інтервалі 40-70°С, ж) фільтрації та виділенню спиртового 60299 розчину, з) промивці нерозчинного осаду нижчим аліфатичним спиртом, фільтрації та видаленню спиртового розчину, і) виділенню нерозчинного осаду та просушці На стадії а) обробка проводиться, як правило, за допомогою 2-10 літрів нижчого аліфатичного спирту, наприклад, метанолу або етанолу, на 1кг просіяного порошку Переважно використовуються 5 літрів етанолу МІЦНІСТЮ 93-95° по Гей-Люсаку при 60° С на протязі 1 години Фільтрація на стадії г) здійснюється переважно під вакуумом 40кПа На стадії в) на 1 кг вихідного просіянного порошку використовується звичайно від 2 до 10 літрів нижчого аліфатичного спирту, наприклад, метанолу або етанолу Переважно використовується 4 літри етанолу МІЦНІСТЮ 93-95° по Гей-Люсаку при температурі 60°С на протязі 1 години Фільтрація на стадії г) здійснюється переважно під вакуумом 40кПа На стадії д) на 1 кг вихідного просіяного порошку використовується звичайно 750-1250мл водного аміачного розчину з вмістом переважно 350мл 28%-го гідрату окису амонію на ЮООмл Особливо переважно використовувати 1 літр водного аміачного розчину та діяти на протязі 1030 годин, переважно 20 годин, при температурі приблизно 20°С На стадії є) волога аміачна маса, отримана з 1 кг вихідного просіяного порошку, як правило, обробляється при розмішуванні в 2-10 літрах суміші нижчого аліфатичного спирту з водою (наприклад, метанолу або етанолу) (від 70/30 до 80/20 за об'ємом) найбільш переважно у 5 літрах суміші етанолу з водою (75/25 за об'ємом) при температурі 60°С на протязі 1 години На стадії ж) фільтрація здійснюється переважно через бавовняну тканину під вакуумом приблизно 80кПа На стадії з) промивка здійснюється, ж правило, з використанням 500-1500мл нижчого аліфатичного спирту (наприклад, метанолу або етанолу) 1 кг вихідного просіяного порошку, переважно 1 літру етанолу, а фільтрація здійснюється через бавовняну тканину під вакуумом приблизно 80кПа На стадії і) сушка здійснюється переважно на відкритому повітрі, у ТІНІ Даний винахід відноситься також до способу приготування суміші II Отримана раніше суміш І піддається слідуючим операціям к) обробка суміші І розчином води з нижчим аліфатичним спиртом, л) відстаювання, а потім відкачка верхньої фази, яка фільтрується, утворюючи фільтрат 1, та обробка нижньої фази водою та фільтрація з утворенням фільтрату 2, об'єднання фільтратів 1 та 2 та концентрація у водній фазі, м) обробка неполярною адсорбуючою смолою та фільтрація, н) згущення фільтрата, фільтрація та ультрафільтрація, 8 о) люфілізація та ІЗОЛЯЦІЯ екстракту II На стадії к) використовується звичайно від 10 до 25 літрів водного розчину нижчого аліфатичного спирту (наприклад, метанолу або етанолу) (у межах від 95/5 до 90/10 за об'ємом) на 1кг суміші І Переважно використовувати 18 літрів розчину вода-етанол (17,7-0,93 за об'ємом) На стадії л/ переважно фільтрувати верхню фазу через міткаль Доцільно додати на 1 кг суміші від 10 до 25 літрів води в нижню фазу, більш переважно додати 10 літрів, та фільтрувати через фрітту На стадії л/ концентрування (згущення) звичайно здійснюється в термосифонному концентраторі при 35°С під вакуумом 0,4кПа На стадії м/ використовується переважно смола S861 або смоли типу XAD фірми Rhom та Hass, і фільтрація здійснюється через фрітту На стадії н/ концентрування здійснюється звичайно в термосифонному концентраторі при 35°С під вакуумом 0,4кПа Також доцільно проводити послідовно 3 ультрафільтрації через патронний фільтр ЮкДа, ЗкДа та 1кДа Даний винахід відноситься також до способу приготування оксамату натрію та компонентів формули /І/ Для цього суміш піддається слідуючим операціям о/ хроматографії суміші II на колонці з кизельгуром, виділенню фракцій, що містять 4 продукта, та об'єднанню їх в одну фракцію п/ хроматографії раніше отриманої фракції на колонці з сефадексом для отримання оксамату натрію, компонента формули /І/, що відрізняється тим, що Ri відповідає атому водню, a R2 - ІНШІЙ частині ланцюгу /В/ та суміші компонента формули /І/, що відрізняється тим, що Ri відповідає атому водню, a R2 - ІНШІЙ частині ланцюгу /А/, та компонента формули /І/, що відрізняється тим, що Ri відповідає ІНШІЙ частині /A/, a R2 - атому водню, р/ можлива також ВЕЖХ - хроматографія суміші сполуки формули /І/, що відрізняється тим, что Ri відповідає атому водню, a R2 - ІНШІЙ частині ланцюгу /А/ та сполуки формули /І/, що відрізняється тим, що Ri відповідає ІНШІЙ частині /A/, a R2 - атому водню Хроматографія на стадії о/ здійснюється за допомогою органічного розчинника, наприклад, гептану, етилацетату або нижчого аліфатичного спирту Переважно використовується колонка "СНЕМ ELUT фірми Prolabo, насичена водою, а потім елюйована послідовно гептаном, сумішшю гептана з етилацетатом (50/50 за об'ємом), етилацетатом, сумішшю етилацетату з нбутанолом (95/5, 90/10, 80/20, 50/50, 20/80), нбутанолом з водою (98/2, а потім 95/5 за об'ємом) Хроматографія на стадії п/ здійснюється переважно за допомогою суміші етанол-вода (50/50 за об'ємом) Хроматографія на стадії р/ звичайно здійснюється на колонці YMC 180DS-AQ фірми АІТ з використанням в якості елюента суміші води з 0,1%-ою мурашиною кислотою Нижчі аліфатичні спирти, що згадуються в 60299 попередньому та послідуючому описі, містять переважно від 1 до 4 атомів вуглецю Предметом винаходу являються також пекарські засоби, що містять суміші І або II, або оксамат натрію, або один або декілька компонентів формули /І/ Даний винахід відноситься також до використання сумішей І и II, оксамату натрію та компонентів формули /І/ або суміші останніх у виготовленні лікарських засобів для лікування або профілактики діабету та ускладнень, пов'язаних з діабетом Винахід ілюструється слідуючими прикладами Приклад 1, Приготування суміші І Насіння ЕВГЕШЯ ЯМБОЛАНА ЛАМАРК сушиться на відкритому повітрі, у ТІНІ, а потім добре подрібнюються Отриманий таким чином порошок просіюється через сито с отвірами 0,5мкм В 5 літрах етанола МІЦНІСТЮ 93-95° по ГейЛюсаку проводиться мацерація при механічному перемішуванні 1кг просіяного порошку на протязі 1 години та температурі 60°С Після вакуумфільтрацм нерозчинний осад знову піддається мацерації в тих же умовах в 4 літрах етанола вказаної МІЦНОСТІ на протязі 1 години при 60°С Обидва етанолових екстракта, що містять, головним чином, небажаний поліфенольний та стерольний комплекс, видаляються Після повної фільтрації нерозчинний осад оброблюється в 1 літрі аміачного розчину (350мл 28%-оі ІЧЬЦОН та дистильована Ь^О в достатній КІЛЬКОСТІ Д Л Я отримання 1 літра розчину) та залишається в розчині на протязі приблизно 20 годин при температуре біля 20°С Волога аміачна маса піддається вторинній мацерації в 5 літрах суміші етанола МІЦНІСТЮ 93-95° по Гей-Люсаку з водою (75/25 за об'ємом) при механічному перемішуванні на протязі 1 години при 60°С Осад фільтрується та промивається в 1 літрі етанола вказаної МІЦНОСТІ, фільтрат та промивочна рідина видаляються Кінцевий нерозчинний осад сушиться на відкритому повітрі, в ТІНІ Таким чином, виходить суміш І в вигляді порошку, що не містить поліфенольні та стерольні ПОХІДНІ ВИХІД ІЗ подрібненого та просіяного насіння складає 80% Приклад 2 Приготування суміші II Отриманий у попередньому прикладі 1 кг суміші І перемішується на протязі 3 годин в розчині, що містить 17,7 літра води та 0,93 літра етанола Після відстаювання на протязі ночі верхня фаза відкачується (13,5 літра), а потім фільтрується через міткаль у фільтрі на 7 літрів (Schott), утворюючи фільтрат 1 (13,5 літра), а нижня фаза перемішується на протязі 1 години у 20 літрах води та фільтрується через фрітту №3, утворюючи фільтрат 2 (24 літра) Фільтрати 1 та 2 об'єднуються, а потім концентруються у водній фазе (33,5 літра) в термосифонному концентраторі (Schott) при 35°С під вакуумом 0,4кПа Концентрат перемішується на протязі 1 години з 2,5 літрами смоли S861 (Rhom та Hass), a потім фільтрується через фрітту №3 Фільтрат концентрується в термосифонному концентраторі (Schott) при 35°С під вакуумом 0,4кПа на 5,5 літра Концентрат піддається центрифугуванню в трубчатій центрифузі (центробіжна сила 62000д) 10 та фільтрується через фільтр 0,22мкм (Gelmon type suporcap 100) насосом Після 3 ПОСЛІДОВНИХ ультрафільтрацій через патронний фільтр ЮКд, ЗКд та 1Кд та люфілізацм виходить 25г суміші II у вигляді темно-бурого гігроскопічного порошку Приклад 3 Компоненти, отримані з суміші II 525мг суміші II, отримані у прикладі 2, в розчині 1,1мл фільтрованої води milh Q піддаються хроматографії на колонці R C H E M ELUT фірми PROLABO висотою 50см та діаметром 1 см, насичені фільтрованою водою тіIIі Q Елюювання ЗДІЙСНЮЄТЬСЯ гептаном у повертаючому градієнті концентрації в етилацетаті, потім в н-бутанолі, нбутанолі/соляній кислоті та у воді (фракція 1 гептан, фракція 2 гептан/етилацетат (50 50), фракції 34 етилацетат, фракції 5-6 етилацетат/нбутанол (95 5), фракції 7-8 етилацетат/н-бутанол (9010), фракції 9-10 етилацетат/н-бутанол (80 20), фракції 11-12 етилацетат/н-бутанол (50 50), фракції 13-14 етилацетат/н-бутанол (20 80), фракції 15-16 н-бутанол, фракції 17-18 нбуганол/вода (98 2), фракції 19-21 н-бутанол/вода (95 5) Збираються фракції 50 мл Фракції 19-21 об'єднуються і концентруються досуха під зниженим тиском Таким чином виходить 108мг фракції, яка хроматографується на колонці з сефадексом LH20 фірми Pharmacia (висота 100см, діаметр 1см) сумішшю метанол/вода (50 50 за об'ємом) Елюювання здійснюється тією же елюючою сумішшю, збираються фракції 1мл 1, Збираються та концентруються досуха фракції 88-91 Виходить 14,4мг продукта, який в результаті кристалізації в 0,5мл етанола 2мг 2,5ди-(тетрапдроксибутил)піразина утворює білі кристали, що відрізняються слідуючими показниками - обертаюча здатність [a] (Na 589) =-137°±2,0 (диметилсульфоксид, с=0,5), - ІЧ-спектр, отриманий на приладі Nicolet 60SX-R в розчині в КВг, основні характеристичні смуги поглинання 3 2 8 1 с м 1 (v OH зв'язані, втому числі НгО), 2972+2940+2901+2880см 1 (v СН груп СН, та СНОН), 2 7 3 3 с м 1 (v зв'язані ОН), 1635см1 (деформації ОН, в тому числіе НгО), 1 4 9 1 с м 1 (v С=С та C=N ядра піразина), 1449см 1 (v С=С и C=N ядра піразина + деформації ОН), 1 4 1 3 с м 1 1 (деформації групи ОН), 1 3 4 3 с м (v C=C та C=N ядра піразина), 1309+1290+1251+1215+1181+1161+1123см 1 (деформації ОН), 1092 см' 1 (v CO вторинних спиртів), 1048+1035 см' 1 (v CO первинних спиртів + ядро піразина), 947+899+854см (вторинні спирти), 8 7 7 с м 1 (v CN ядра піразина), 7 2 7 с м 1 (v ядро піразина + деформації ОН), 6 3 9 с м 1 (ядро піразина), 607+531 см 1 широкі (деформації ОН), 451+411см 1 (ядро піразина), - мас-спектр, отриманий на приладі Фініган TSQ46, спосіб іонізації M/z=321(MH)+, - ЯМР-спектр 1Н (800МГц, DMSO, ХІМІЧНИЙ зсув в р р т ) 3,40 та 3,61 (2mts, 2H кожний С Н 2 в 4', 4"), 3,58 (2mts, 2H кожний СН в 2',2",3',3"), 4,36 (t широти, 2Н ОН в 4',4"), 4,40 (d, J=7,2I~4, 2H ОН в 2',2") , 4,63 (d, J=4,8I~4, 2Н ОН в З',З"), 4,95 (dd, J=6,0Ta 0 , 6 Г Ц , 2Н СН в 1',1"), 5,30 (d, и=6,0Гц, 2Н ОН в1',1"), 8,61 (s, 2H, СН в З т а б ) , 11 60299 - УФ-спектр Ямакс=275нм (s=8260), 206нм (є=10220), (с=19мг/мл, вода Ямакс=276нм (s=7960) 206нм (s=9920), (с=19мг/мл, HCI 0.1N), макс 275нм (s=7690), (с=19мг/мл, КОН 0.1N), - ВЕЖХ на колонці YMC 180 DS-AQ 150х4,6мм (партія AIT/DE940377) фірми AIT, ізократичне елюювання ЬІ2О+0,1% мурашиної кислоти, витрати 1мл/хв, УФ-детекування на 270нм, час утримання 2хв 32с 2 Фракція 92 і 93 збираються та концентруються досуха Виходить 9мг фракції, яка в результаті кристалізації в 0,5мл етанола дає 1,2мг оксамата натрія, що мають ті ж показники, що і описані TOUSSAINT, Ann , 120, 237 (1861) 3 Фракція з 94 і 97 збираються та концентруються досуха Виходить 25,9мг фракції, яка після кристалізації в 0,5мл етанола дає 6,2мг суміші 2-(тетрапдроксибутил)-5-(2',3',4'трипдроксибутил)піразина та 2(тетрапдроксибутші)-6-(2',3',4'трипдроксибутил)тразина, який знову ВІДДІЛЯЄТЬСЯ ВЕЖХ на колонці YMC 180DS-AQ 150х4,6мм (партія AIT/DE940377), ізократчне елюювання ЬІ2О+0,1% мурашиної кислоти, витрати 1мл/хв, УФ-детектування на 270нм Таким чином, виходять 5,2мг 2(тетрапдроксибутшІ)-5-(2',3',4'трипдроксибутил)піразина, який відрізняється слідуючими показниками - обертаюча здатність [a] (Na 589) = 116,3°±1,7 (диметилсульфоксид, - ІЧ-спектр, отриманий на приладі Nicolet 60SX-R в розчині КВг, основні характеристичні смуги поглинання 3398см 1 (v OH зв'язані, в тому числі Н 2 О), 2951+2922+2891 C M 1 (v CH групи СНОН), 2 7 6 1 с м 1 (v ОН зв'язані), 1636см1 (деформації ОН, в тому числі Н 2 О), 1483+1463см 1 (v С=С та C-N ядра піразина), 411см 1 (деформації груп ОН), 1367+1328+1270+1227+1191см 1 деформації груп ОН), 1 0 7 1 с м 1 (v CO вторинних спиртів), 1041см 1 (v CO первинних спиртів + ядро піразина), 943+897см 1 (вторинні спирти), 869см 1 (v СН ядра піразина), 645см 1 (СН ядра піразина) 6 0 7 с м 1 широкі (деформації ОН), 446+409см (ядро піразина), - мас-спектр, отриманий на приладі Фініган TSQ46, спосіб іонізації M/z=305 (MH)+, - ЯМР-спектр 1Н (600МГц, DMSO, ХІМІЧНИЙ зсув в р р т ) 2,70 і 3,04 (2dd, J=9,0 і 15,0Гц і J=3,0 і 15,0Гц, 1Н кожний С Н 2 в 1"), між 3,30 та 3,45(mts, СН в 3",4',4"), між 3,53 та 3,65 (mts, 4H СН в 2',З', 4',4") , 3,73 (mts, 1H СН в 2"),4,37 (t ширини, 1Н ОН в 4'), 4,42 (mts, 2H ОН в 2 та 4"), 4,60 (d, и=6Гц, 1Н ОН в 2"), 4,63 (d, и=6Гц, 1Н ОН в 3') , 4,67 (d, и=6Гц, 1Н ОН в 3"), 4,92 (dd, J=6,0 и 0,6Гц, 1Н СН в Г), 5,30 (d, и=6,0Гц, 1Н ОН в Г) , 8,39 (s, 1Н, СН в 6), 8,61 (S,1H,CH вЗ), - УФ-спектру Я,макс=276нм (s=8738), (c=19 мг/мл, (s=7756), 206нм вода), Ямакс=277нм (s=7218), 208нм (s=7171), (с=19 мг/мл, HCI 0.1N), Ямакс=276нм (s=7467) (с=19мг/мл, KOH.01N), - ВЕЖХ на колонці YMC 180 DS-AQ 150х4,6мм (партія AIT/DE940377) фірми АІТ, ізократичне элюювання Н2О+0,1% мурашиної 12 кислоти Витрати 1мл/хв, УФ-детектування на 270нм, час витримування Зхв 75с та 1мг 2(тетрапдроксибутил)-6-(2,3,4трипдроксибутил)піразина, який відрізняється слідуючими показниками - ЯМР-спектр 1Н (600МГц, DMSO, ХІМІЧНИЙ зсув в ррт) 2,70 та 3,04 (2dd, J=9,0 та 15,0Гц та J = 3 , 0 T a 1 5 , 0 Г Ц , 1Н КОЖНИЙ СН2 в 1"), між 3,30 та 3,45 (mts, СН в 3",4',4"), між 3,53 та 3,65 (mts, 4H СН в 2',3',4',4"), 3,73(mts, 1H СН в 2"), 4,37 (t ширини, 1Н ОН в 4'), 4,42 (mts, 2H ОН в 2 та 4"), 4,60 (d, и=6Гц, 1Н ОН в 2"), 4,63 (d, и=6Гц, 1Н ОН в 3'), 4,67 (d, и=6Гц, 1Н ОН в 3"), 4,92 (dd, и=6,0Гц и 0,6Гц, 1Н СН в Г), 5,30 (d, 1=6,0Гц, 1Н ОН в Г), 8,31 (s, 1H, СН B 5 ) , 8 , 5 3 ( S , 1 H , СН в 3), - ВЕЖХ на колонці YMC 180 DS-AQ 150х4,6мм (партія AIT/DE940377) фірми АІТ, ізократичне елюювання Н2О+0,1% мурашиної кислоти, витрати 1мл/хв, УФ-детектування при 270нм, час утримання Зхв 61с Цукропонижуючий ефект сумішей І та II, оксамата натрія і компонентів формули /І/ визначали на мишах, у яких діабет викликали введенням стрептозоцину, та на нормальних мишах у стані післяобідньої гіперглікемії у ВІДПОВІДНОСТІ з наступною процедурою I Миші, у ЯКИХ діабет викликали введенням стрептозотоцину У білих мишей Swiss вагою 2225г діабет викликали шляхом внутрішньочеревинного введення стрептозотоцину в дозе 210 або 265мг/кг ваги миші, розведеного в цитратному буфері, в концентрації, що дозволяє кожній миші отримати 0,2мл розчину у день 1-й (Д1) Після 3-4 днів на 2-3 мишах було перевірено наявність діабета (глікемія вище 7,2ммолей/літр, тобто 130мг на 100мл) Потім глікемія була вимірена по закінченню 4 годин після прийому їжі Якщо миші стали діабетичними, їх ділять на групи по 5-7 мишей Кожна група, починаючи з Д 1 , отримує кожен день певну дозу продукта Прийом здійснюється один раз в день в певний час шляхом штубаци шлунку та супроводжується наповнювачем 0,4мл дистильованої води Утворюються дві контрольні групи - група мишей з діабетом, не охвачена курсом лікування, - трупа нормальних мишей Обидві контрольні групи отримують шляхом інтубацм шлунку одночасно з мишами, що включені в курс лікування, по 0,4мл наповнювача Лікування продовжується 4 дні На 5-ий день продукт не приймається По закінченню 4 годин після прийому їжі проводитья замір кінцевого рівня глікемії II Нормальні миші у стані післяобідньої гіперглікемії Б І Л І МИШІ SWISS вагою 22-25г приводяться в стан післяобедньої гіперглікемії у ВІДПОВІДНОСТІ ІЗ слідуючою процедурою - утримання від прийому їжі на протязі 2 годин, - надмірне харчування на протязі 1 години, - утримання від прийому їжі на протязі 2 годин По закінченню 2 останніх годин утримання проводиться замір рівню глікемії, що складає глікемію на час То Вслід за цим миші діляться на однакові групи в залежності від рівню глікемії при 13 60299 14 замірі Опробований продукт вводиться відразу ж наповнювач (0,4мл дистильованої води) По шляхом інтубацм шлунку разом з 0,4мл закінченню 1 години проводиться заміер кінцевого дистильованої води Контрольна група отримує рівню глікемії, яка вважається глікемією на час Тєо Показники глікемії мишей, шо захворіли діабегом в результаті введення стрептозетоцнну ПРОДУКТИ, мг/миші/день ГЛІКЕМІЯ НА %шпД5, БУВАмг/ЮОмл ННЯ КІЛ-ТЬ ГШКШІЯНА МИШЕЙ Ді, чг/ЮОмл 153,40+11,53 б трипдроксибутші) піразин (50 50} (0,25мг) Контрольна група s аЭ,90±13 270,50±Ь8,72 Оксамат натрію (0,5 мг) Суміш II (0,5мг) 2-(твгра: ідро ксибугал)-5-(2',3,4 гри-г І дроксибутил) шразин (0.5мг) 2( гетрапдроксибутші)~5-(2',3 ',4ітри-гщроксибутил) піразин і- 2(тетрапдрокси 11 320,93±130,30 221,66±50,17 "45'77 174,00+91,74 210,33±20,07 Показники глікемії контрольних мишей у стані післяобідньої гіперглікемії Показники глікемії контрольних миінеи } стані післяобідньої І іпері лікемп ПГОДУК1И, КІЛ-СТЬ МІ /ЧИШІ/ДЄНЬ МИПШЙ ГЛІКЕМІЯ НА ГЛІКЕМІЯ НА %ІНІ IБУВА Суміш ї(5мг) 5 129,50±29,06 Оксамат натрію 15 136,46+23,69 1О2,93±20,-Э5 -24,57 is 133,93±17,50 13б,25±16,Э2 105 ; е0±16,91 102,41±14,12 ~21'і5 -24-83 50,S0±19,55 -29,70 S7,60±14,16 -32,35 (0,5 мг) Суміш Щ0,5мі) і щроксябутил) піразин (0,5мг)2'-(тетра~ 1 0 і ідроксибугал)5 - ( 2! . З ' , 4 ' трипдрохеи 128,75*21,23 (0 5мг) 2-(гетрапдро 5 126,60±17,03 20,53 кси6утил)~5гідроксибутил) піразин і 2(тетрапдроксибутая}-6-(2',3',4'-трипдроксибутил) (0,25мг) Контрольна группа 10 137,ЭЗ±13,99 13О,5О±20,23 ~ 5 ' 3 2 15 Суміші, у ВІДПОВІДНОСТІ з винаходом, оксамат натрію та компоненти формули (І) володіють легкою токсичністю, їх DL50 перебільшує 2000мг/кг при пероральном у введенні у мишей Суміші, у ВІДПОВІДНОСТІ з винаходом, оксамат натрію та компоненти формули (І) знижають глікемію страждаючого діабетом і, таким чином, корисні для лікування діабету та ускладнень, пов'язаних з діабетом При використанні цих продуктів в монотерапм для лікування діабету не виникає риску гіпоглікемії Це ДІЙСНІ протидіабетичні засоби Мабуть, цей ефект є результатом периферичного збільшення глюкози Продукти не стимулюють значне виділення інсуліну, але для їх дії необхідно невелика КІЛЬКІСТЬ інсуліну У пісчаної криси (Psammomys obesus), яка у неволі самовільно піддається діабету, ці продукти знижають гіперглікемію, попереджують або зменшують виникнення катаракти та збільшують у певному ступені плодовитість При лікуванні людини ці продукти також корисні у профілактиці та лікуванні діабету та, зокрема, діабета II типу (MD діабет) без ацетонурм, діабета з ожирінням, діабета п'яти десятилітніх, діабета метаплеторного, діабета дорослих та діабета у легких формах Вони можуть бути використані у доповнення інсулінтерапм (через їх потенцюючу інсуліноактивность) при інсулінозалежному діабеті, коли вони дозволяють поступово зменшувати дозу інсуліну, при нестійкому діабеті, інсулінорезистентному діабеті, в доповненні к ппоглікемізуючим султфамідам, коли останні не визначають значного зниження глікемії Ці продукти можуть також бути використані при ускладненнях, пов'язаних з діабетом, наприклад, при пперліпеміях, порушеннях ЛІПІДНОГО обміну, дізліпеміях, ожирінні Рівним ЧИНОМ, ВОНИ корисні в профілактиці та лікуванні уражень атеросклерозом та їх ускладнень (коронаропатій, інфаркті міокарді, кардюміопатм, еволюції цих трьох ускладнень у напряму лівошлункової недостатності, різних артерюпатій, артеритів нижчих КІНЦІВОК З ПОЯВОЮ кульгавості та розвитком виразки та гангрени, цереброваскулярної недостатності та її ускладнень, статевої імпотенції судинного походження), діабетичної ринопатм та всіх и проявів (підвищення проникливості капілярів, розширення та тромбоз капілярів, мікроаневризми, артеріовенозний шунт, точечні та макулярні кровотечі, ексудати, макулярні набряки, прояв проліферуючої ретінопатм неосудний, рубці проліферуючого ретиніту, крововиливи в очне тільце, відшарування сітчатки), діабетичної катаракти, діабетичної невропатії в її різних формах (періферичні поліневропатм та їх прояв, наприклад, парестезії, гіперестезії та болі, мононевропатм, радікулопатм, автономні невропати, амютрофм діабетичні), проявів діабетичної стопи (виразки нижніх КІНЦІВОК та стопи), діабетичної нефропатії в двох и формах дифузній та вузловатій, атероматоза) збільшення ліпопротешів високої ЩІЛЬНОСТІ -ЛПВ, що сприяють 60299 16 елімінації холестерину, починаючи з атероматозних бляшок, зменьшення ліпопротешів низької ЩІЛЬНОСТІ -ЛНП, зниження співвідношення ЛНП/ЛВП, інгібування окислення ЛНП, зменьшення адгезивності тромбоцитів), пперліпемій та дизліпемій (пперхолестеринемій, гшертригліцеридемій, нормалізація вмісту жирних кислот, нормалізація урикемм, нормалізація апопротешів А та В), катаракти, гіпертонії та и наслідків Лікарські засоби ВІДПОВІДНО винаходу складаються із суміші, що відповідає винаходу, оксамату натрію, сполуки формули (І) або комбінації цих продуктів, у чистому виді або у композиції, в якій вона асоціюється з будь-яким іншим фармацевтичним сумісним продуктом, який може бути інертним або фізіологічне активним Лікарські засоби у ВІДПОВІДНОСТІ З винаходом можуть вводитися перорально, парентерально, ректальне або мати поверхневе застосування У вигляді твердих композицій для перорального введення можуть застосовуватися таблетки, ПІЛЮЛІ, порошки (желатинові капсули, облатки) або гранули В цих композиціях діючий початок у ВІДПОВІДНОСТІ з винаходом змішуються з одним або декількома інертними розчинниками, наприклад, крохмалом, целюлозою, сахарозою, лактозою або диоксидом кремнію, у тоці аргону Ці композиції також можуть включати, окрім розчинників, ІНШІ речовини, наприклад, одна або декілька зв'язуючих речовин, таких як стеарат магнію або тальк, барвник, сироп (драже) або лак У вигляді рідких колмпозицій для перорального введення можуть застосовуватися розчини, суспензії, емульсії, сиропи, еліксири, фармацевтичне прийнятні та ті, що містять інертні розчинники, наприклад, вода, етанол, гліцерин, олія або парафінове масло Ці композиції, крім розчинників, можуть також включати ІНШІ речовини, наприклад, змочуваючі речовини, підслащувачі, загусники, ароматизатори або стабілізатори Стерильні композиції для парентерального введення можуть бути переважно водними або неводними розчинами, суспензіями або емільсіями В якості розчинника або наповнювача можуть використовуватися вода, пропіленглжоль, поліетиленгліколь, олія, зокрема, оливкове масло, вприскувані органічні ефіри, наприклад, етилолеат, або ІНШІ прийняті органічні розчинники Ці КОМПОЗИЦІЇ можуть також містити добавки, зокрема, змачуваючі речовини, ізотонуючі, емульгуючі, диспергуючі, та стабілізуючі Стерилізація може проводитися різними способами, наприклад, асептичним фільтруванням шляхом включення в композиції стерилізуючих засобів, опроміненням або нагрівом Вони можуть бути також виготовлені у вигляді твердих стерильних композицій, які можуть бути розчинені в момент виготовлення в стерильній воді або у ІНШІЙ вприскуваній стерильній рідині Композиції для ректального ведення - це СВІЧІ або ректальні капсули, що містять, крім діючої речовини, наповнювачі типу масло какао, 60299 18 17 напівсинтетичні гліцериди або поліетиленгліколі По ВІДОМІЙ технології виготовляються таблетки Композиціями місцевого внутрішнього у дозі по 50мг діючої речовини слідуючої застосування можуть бути, наприклад, креми, композиції лосйони, очні краплі, краплі в ніс, рідина длі - Діюча речовина 50мг полоскання, аерозолі - Лактоза 104мг Дозування залежить від ефекту, що - Целюлоза 40мг передбачається, довготривалості лікуваня та - ПОЛІВІДОН Юмг способу введення, що використовується, звичайно Натрієва сіль добова доза перорально для дорослого складає карбоксиметилкрохмалю 22мг 150-бООмг, а разові дози від 50 до 200мг діючої -Тальк Юмг речовини - Стеарат магнію 2мг Як правило, лікар визначає необхідне - Колоїдний диоксид кремнію 2мг дозування в залежності від віку, ваги та інших Суміш оксиметил целюлози, факторів, що характеризують пацієнта гліцерину, окису титана (72 3,5 24,5) Слідуючі приклади ілюструють композиції в достат КІЛ-ТІ для 1 таблетки ВІДПОВІДНО винаходу в оболонці на 245мг ПРИКЛАДА ПРИКЛАД С По ВІДОМІЙ технології виготавляються Виготовлюється розчин для ІН'ЄКЦІЙ, ЩО желатинові капсули в дозі по 50мг діючої речовини МІСТИТЬ 50мг діючої речовини, слідуючої слідуючої композиції композиції - Діюча речовина 50мг - Діюча речовина 50мг - Целюлоза 18мг - Бензойна кислота 80мг - Лактоза 55мг - Бензиловий спирт 0,06мл - Колоїдний диоксид кремнію 1мг - Натрійбензоат 80мг Натрієва сіль - 95%-ий етанол 0,4мл карбоксиметилкрохмалю Юмг - Гідроксид натрію 24мг -Тальк Юмг - Пропіленгліколь 1,6мл - Стеарат магнію 1 мг - Вода (в достатній КІЛЬКОСТІ) 4МЛ ПРИКЛАД В Комп'ютерна верстка О Кураєв Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119