Препарат “імосдиніт-паста” для профілактики та лікування анаеробної інфекції та спосіб його одержання

1. Препарат для профілактики та лікування анаеробної інфекції, що містить в собі кремнійорганічний сорбент з імобілізованим на ньому лікарським засобом, який відрізняється тим, що як кремнійорганічний сорбент він містить гідрогель метилкремнієвої кислоти, а як лікарський засіб нітазол та димексид, та додатково містить воду при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: Гідрогель метилкремнієвої кислоти 40,0-72,3 31728 імобілізований на ньому нітазол і додатково димексид і воду при слідуючому складі компонентів, у мас. %: ГГМКК від 40,0 до 72,3 Нітазол від 0,2 до 0,9 Димексид від 8,65 до 33,0 Вода від 14,3 до 30,8 Раніше така композиція відома не була. Композицію готують наступним чином: 1) Готують пасту гідрогелю метилкремнієвої кислоти суспендуванням його з водою за допомогою кутера (ніж-розсікач) наступного складу: ГГМКК від 60 до 80 мас. %; вода від 20 до 40 мас. %; 2) готують розчин нітазолу у димексиді концентрації від 1,0 до 5,0 мас. %; 3) змішують пасту ГГМКК з розчином нітазолу у димексиді, взятих у відповідних кількостях; 4) Витримують одержану суміш для дозрівання при температурі від 4 до 5°С в термін від 4 до 6 годин. Нижче приводяться приклади конкретного приготування Імосдиніту-пасти. Приклад 1. До 60 г ГГМКК добавляємо 40 г води і подрібнюємо суміш за допомогою кутера до отримання пасти білого кольору. До суміші, що отримали, при ретельному перемішуванні додали 50 г 1% розчину нітазолу в димексиді. Після додавання останньої порції розчину суміш перемішували до утворення однорідної субстанції на протязі 20 хвилин і залишали дозрівати при температурі 4°С у термін 5 годин. Утворюється еластичний пастоподібний продукт лимонного кольору. Отриманий препарат кількісно переносили у банку із темного скла ємністю 200 мл та щільно закупорювали поліетиленовою кришкою. Вихід препарату 150 г. Приклад 2. До 60 г ГГМКК добавляємо 40 г води і подрібнюємо суміш за допомогою кутера до отримання пасти. До суміші, що отримали, додали 30 г 1% розчину нітазолу в димексиді. Суміш ретельно перемішували і залишали дозрівати при температурі 6°С у термін 4 години. Утворюється еластичний пастоподібний продукт світло-лимонного кольору. Отриману суміш переносили в скляну банку ємністю 200 мл і щільно закупорювали поліетиленовою кришкою. Вихід препарату 130 г. Приклад 3. До 70 г ГГМКК добавляємо 30 г води і подрібнюємо суміш за допомогою кутера до отримання пасти. До суміші, що отримали, додали 20 г 4% розчину нітазолу в димексиді. Суміш ретельно перемішували і залишали дозрівати при температурі 4°С у термін 6 годин. Утворюється еластичний пастоподібний продукт лимонножовтого кольору. Отриману суміш переносили в скляну банку ємністю 200 мл і щільно закупорювали поліетиленовою кришкою. Вихід препарату 120 г. Приклад 4. До 70 г ГГМКК добавляємо 30 г води і подрібнюємо суміш за допомогою кутера до отримання пасти. До суміші, що отримали, додали 20 г 2% розчину нітазолу в димексиді. Суміш ретельно перемішували і залишали дозрівати при температурі 5°С у термін 5 годин. Утворюється еластичний пастоподібний продукт лимонного кольору. Отриману суміш переносили в скляну банку ємністю 200 мл і щільно закупорювали поліетиленовою кришкою. Вихід препарату 120 г. Приклад 5. До 70 г ГГМКК добавляємо 30 г води і подрібнюємо суміш за допомогою кутера до отримання пасти. До суміші, що отримали, додали 20 г 3% розчину нітазолу в димексиді. Суміш ретельно перемішували і залишали дозрівати при температурі 4°С у термін 5 годин. Утворюється еластичний пастоподібний продукт світло-лимонного кольору. Отриману суміш переносили в скляну банку ємністю 200 мл і щільно закупорювали поліетиленовою кришкою. Вихід препарату 120 г. Приклад 6. До 70 г ГГМКК добавляємо 30 г води і подрібнюємо суміш за допомогою кутера до отримання пасти. До суміші, що отримали, додали 10 г 5% розчину нітазолу в димексиді. Суміш ретельно перемішували і залишали дозрівати при температурі 5°С у термін 5 годин. Утворюється еластичний пастоподібний продукт жовтого кольору. Отриману суміш переносили в скляну банку ємністю 200 мл і щільно закупорювали поліетиленовою кришкою. Вихід препарату 110 г. Приклад 7. До 80 г ГГМКК добавляємо 20 г води і подрібнюємо суміш за допомогою кутера до отримання пасти. До суміші, що отримали, додали 40 г 2% розчину нітазолу в димексиді. Суміш ретельно перемішували і залишали дозрівати при температурі 4°С у термін 6 годин. Утворюється еластичний пастоподібний продукт жовтого кольору. Отриману суміш переносили в скляну банку ємністю 200 мл і щільно закупорювали поліетиленовою кришкою. Вихід препарату 140 г. Приклад 8. До 80 г ГГМКК добавляємо 20 г води і подрібнюємо суміш за допомогою кутера до отримання пасти. До суміші, що отримали, додали 20 г 3% розчину нітазолу в димексиді. Суміш ретельно перемішували і залишали дозрівати при температурі 6°С у термін 4 години. Утворюється еластичний пастоподібний продукт темнуватожовтого кольору. Отриману суміш переносили в скляну банку ємністю 200 мл і щільно закупорювали поліетиленовою кришкою. Вихід препарату 120 г. Приклад 9. До 80 г ГГМКК добавляємо 20 г води і подрібнюємо суміш за допомогою кутера до отримання пасти. До суміші, що отримали, додали 10 г 5% розчину нітазолу в димексиді. Суміш ретельно перемішували і залишали дозрівати при температурі 6°С у термін 4 години. Утворюється еластичний пастоподібний продукт темнуватожовтого кольору. Отриману суміш переносили в скляну банку ємністю 200 мл і щільно закупорювали поліетиленовою кришкою. Вихід препарату 110 г. 2 31728 Як щільне поживне середовище при двошаровій заливці чашок використовували середовище № 4 (1,5-2,0% агару на основі середовища для контролю стерильності виробництва Московського НДІ вакцин та сироваток ім. І.І. Мечникова з додаванням на 1 л середовища додатково гідролізату Хоттингера до 150 мг % амінного азоту, 5% лізованої крові, 5 мг/л геміну і 0,5 мг/л менадіону - для безспорових анаеробів; середовище Кітт-Тароцці і кровяний агар Цейсслера - для клостридій); м'ясопептонний агар - для стафілококу. При визначенні антимікробної активності препарату для верхнього шару використовували 13,5 мл розплавленого та охолодженого до 45°С середовища № 4 і 1,5 мл суспензії мікробної культури, кінцева концентрація якої після перемішування з середовищем становила від 5×107 до 2×109 мікробних клітин у 1 мл середовища. "Колодязі" діаметром 8 мм у поживному середовищі виготовлялись шляхом вирізування спеціальними тонкостінними циліндрами із нержавіючої сталі. В "колодязі" розташовували Імосдиніт-пасту у кількості від 150 до 210 мг. Через кожні 24 години Імосдиніт спеціально пристосованим шпателем переносили до свіжовиготовленого "колодязя" на стерильній основі та проводили засівання індикаторною культурою. Після відповідної інкубації робили замір зони затримки. Про пролонговану антимікробну дію препарату робили висновок на підставі вимірювання кінетики десорбції нітазолу з ГГМКК до агару. Кількість елюйованого нітазолу в мг та % при щодобовому спостереженні визначали згідно з методикою Державної фармакопеї (X видання, cтop. 947). Результати вимірювання наведено в табл. 2. З наведених даних витікає висновок, що синтезовані препарати підтримують високу протимікробну дію в середовищі відносно тест-культури СІ. perfringens практично 6 діб. Аналогічно була встановлена пролонгована дія препаратів і на інші анаеробні мікроорганізми. Так, при використанні як тест-культури В. fragilis і St. Anaerobicus спостерігалася практично аналогічна кінетика десорбції нітазолу, відповідно, 8 та 7 діб. Наведені дані показують, що композиції, які пропонуються, проявляють більш високу активність по відношенню до анаеробних мікроорганізмів, ніж окремо і в сумі нітазол і ГГМКК, а також, крім того, вони спричиняють пролонговану (від 6 до 8 діб) антимікробну дію за рахунок поступової десорбції нітазолу в мікробне середовище. У зв'язку з викладеним новий препарат Імосдиніт-паста можна використовувати для профілактики і місцевого лікування анаеробної інфекції в ранах різної природи. Автори підтвердили високий лікувальний ефект препаратів, що пропонуються, на модельних ранах у морських свинок вагою 250-300 г і кроликах породи "Шиншила" вагою 2,5-3,0 кг, які були обсіменені анаеробними бактеріями штамів В. fragilis і В. Melaninogenicus (музейний штам). Приклад 10. До 80 г ГГМКК добавляємо 20 г води і подрібнюємо суміш за допомогою кутера до отримання пасти. До суміші, що отримали, додали 30 г 4% розчину нітазолу в димексиді. Суміш ретельно перемішували і залишали дозрівати при температурі 4°С у термін 6 годин. Утворюється еластичний пастоподібний продукт темнуватожовтого кольору. Отриману суміш переносили в скляну банку ємністю 200 мл і щільно закупорювали поліетиленовою кришкою. Вихід препарату 130 г. У табл. 1 наведено дані про результати приготування препарату Імосдиніт-паста за прикладами 1-10. Нами встановлено, що для приготування препарату Імосдиніт можуть бути використані розчини нітазолу у димексиді концентрації не більше, ніж 5%, за наступних причин. По-перше, розчини більшої концентрації можна отримати лише при нагріванні вище 50°С - температурі, при якій вже можлива деактивація протимікробної дії нітазолу. По-друге, із розчинів, які мають концентрацію більше 5%, при додаванні навіть невеликої кількості води виділяються надлишки нітазолу. Розчини, які мають концентрацію до 5%, розбавляються водою і їх можна використовувати для приготування сумішей з пастою ГГМКК. Інтервал співвідношення ГГМКК:нітазол обумовлено знайденим авторами не очікуваним ефектом: у композиції, що пропонується, з'являється висока, більш, ніж у ГГМКК і нітазолу окремо і разом, протимікробна активність по відношенню до широкого спектру потогенної анаеробної мікрофлори. На фігурі показана протимікробна активність до S. aureus АТСС 25923, Е. coli 25922, СІ. perfringens № 129, тип А, B. fragilis № 323 (Вееrе), type E2 препаратів, які синтезовані за прикладами 1-10, а також ГГМКК і нітазолу окремо і разом. Експериментально встановлено, що зменшення вмісту нітазолу в композиції приводить до значного зниження її протимікробної активності, а подальше збільшення вмісту нітазолу не приводить до адекватного росту протимікробної активності препарату Імосдиніт. Антимікробний ефект композиційного препарату Імосдиніт-паста (походження абревіатури: іммобілізований на органосилоксані димексид з нітазолом) вивчали по відношенню як до клостридіальних, так і неклостридіальних мікроорганізмів. Тест культурами були: 1. СІ. perfringens № 129, type A; 2. В. fragilis № 323 (Вееrе), type E2; 3. St. Anaerobicus № 2711 (1с. 12297); 4. Fusobakterium № 22; 5. B. Melaninogenicus (музейний штам). Антимікробна дія комплексного препарату вивчалась у варіанті дифузії до агару при використанні модифікованого методу "колодязів" (Методичні рекомендації по експериментальному (доклінічному) вивченню лікарських препаратів для місцевого лікування ран, МОЗ СРСР, Фармаколопчний комітет, Москва 1989). 3 31728 Таблиця 1 Приготування суміші для отримання Імосдиніту-паста Найменування компонентів, їх кількість, параметри способу Гідрогель мег тилкремнієвої Мас. % у суміші кислоти до сушки г Вода Мас. % у суміші до сушки г Нітазол Мас. % у суміші до сушки г Димексид Мас. % у суміші до сушки Термін дозрівання, годин Температура дозрівання, °С Приклади, № 5 6 70 70 1 60 2 60 3 70 4 70 7 80 8 80 9 80 10 80 40,0 46,2 58,3 58,3 58,3 63,6 57,1 66,7 72,3 61,5 40 40 30 30 30 30 20 20 20 20 26,7 30,8 25,0 25,0 25,0 27,3 14,3 16,7 18,2 15,4 0,5 0,3 0,8 0,4 0,6 0,5 0,8 0,6 0,5 1,2 0,3 0,2 0,7 0,3 0,5 0,45 0,6 0,5 0,45 0,9 49,5 29,7 19,2 19,6 19,4 9,5 39,2 19,2 9,5 28,8 33,0 22,8 16,0 16,4 16,2 8,65 28,0 16,1 8,65 22,2 5 4 6 5 5 5 6 4 4 6 4 6 4 5 4 5 4 6 6 4 Таблиця 2 Кінетика десорбції нітазолу з ГГМКК синтезованих зразків препарату Імосдиніт-паста при використанні тест-культури Cl. Perfringens Зразок препарату Імосдиніт Маса препарату, що внесена до "колодязя", мг Вміст нітазолу, що внесено з препаратом, мг 1 200 0,600 2 210 0,420 3 195 1,365 4 205 0,615 5 190 0,950 6 195 0,878 7 190 1,140 8 195 0,975 9 200 0,900 10 150 1,350 Одиниця виміру мкг % мкг % мкг % мкг % мкг % мкг % мкг % мкг % мкг % мкг % */ Вказана кількість нітазолу, що елююється до агару щодобово. 4 Експозиція*, кількість діб 1 2 3 4 5 6 88 14,6 63 15,1 329 24,1 93 15,2 179 18,8 160 18,2 285 25,0 188 19,3 162 18,0 333 24,7 95 15,8 67 15,9 321 23,5 99 16,1 171 18,0 159 18,1 270 23,7 183 18,8 164 18,2 315 23,3 104 17,4 72 17,2 262 19,2 109 17,7 176 18,5 166 18,9 218 19,1 176 18,0 163 18,3 254 18,8 108 18,0 75 17,9 243 17,8 112 18,2 170 17,9 151 17,2 186 16,3 167 17,7 161 17,9 236 17,5 72 12,0 60 14,3 139 10,2 74 12,1 98 10,3 89 10,1 117 10,7 98 10,0 93 10,3 135 10,0 56 9,4 42 10,1 63 4,6 60 9,8 96 10,1 76 8,6 98 5,1 92 9,4 90 10,0 70 5,2 5 Фіг. Антимікробна активність до S. aureus, E. coli, Cl. perfingens та B. fragilis нітазолу і ГГМКК окремо і в сумі та препарату "Імосдиніт-паста", отриманого за прикладами 1-10 31728 31728 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 35 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 6