2-(2’7′-діацетоксіфлуореніліден-9′-гідразоно)-5-(п-нітробензіліден)-тіазолідон-4,що виявляє противірусну дію щодо віруса грипу а та а-2, а також віруса осповакцини

с 0 - '- •• v * ЛЛЯ СЛУЖРБНОГО ПОЛЬЗОВАНИЯ ЭКЗ Su СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИН (51) 4 C 0 7 D 2 7 7 / 5 А, А 61 К 31/425 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ Н (21) (22) 4077439/28-04 10,06о86 , (71) Львовский государственный медицинский институт (72) Л.И.Маслова, Л.И.Лозюк и БаС.Зименковский (53) 547.789.3.03 (088.8) (56) Машковский МОД„ Лекарственные с р е д с т в а о М.: Медицина, 1986, т 0 I I , с . 380, 384 о Павленко А 0 Ф о , Могцшрсий С.Д. Син- • т е з физиологически активных, веществ в ряду тиосемикарбазонов и их п р о и з в о д н ы й ХГС, 1967, № 2, с о 259-260 0 Авторское свидетельство СССР № 1279217, к л о С 07 D 277/54, 1985 (непубликуемое), (54) 2-(2',7'-ДИАЦЕТОКСИФЛУОРЕНИЛИДЕН-9'-ГИДРАЗОНО)-5-(п-НИТРОБЕНЗИЛИДЕН)-ТИАЗОЛИДОН-4, О Л Д Ю И АНТИБАА Щ Й ВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ В ОТНОШЕНИИ ВИРУСА ГРИППА А И А - 2 , А ТАКЖЕ ВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫ 5-88 (57) Изобретение относится к г е т е р о - ' циклическим соединениям, в ч а с т н о с т и к 2-(2 ,7'-диацетоксифпуоренилиден9 -гидразоно)~5-(п-нитробензилиден)т и а з о л и д о н у - 4 ( Т З ) , обладающему а н т и вирусным д е й с т в и е м в отношении в и р у са гриппа А и А - 2 , а также вируса о с повакциньь Цель и з о б р е т е н и я - расширение с п е к т р а антивирусного д е й с т в и я соединений у к а з а н н о г о к л а с с а . Получение ТЗ в е д у т и з смеси т и о с е м и к а р б а з о на 2 , 7 - д и г и д р а к с и ф я у о р е н о н а - 9 , монох л о р у к с у с н о й кислоты, п - н и т р о б є н э а л ь дегида и безводного ацетата натрия кипячением в смеси ледяной уксусной кислоты и у к с у с н о г о а н г и д р и д а 0 Выход ТЗ 79,3%, т . п л о 2О7-2О9°С. Б р у т т о ф-ла C H H ( 8 N 4 0 7 0 ТЗ по а к т и в н о с т и в отношении в и р у с а осповакцины п р е в о с ходит м е т и с а э о н в адекватных у с л о в и я х опыта и я в л я е т с я в 8 р а з менее т о к - сичным, 3 т а б л 0 1 1372889 2 Изобретение относится к новым хиден-9 1 -гидразоно)-тиазолидоном-4 мическим веществам, а именно к 2 - ( 2 ' , (соединение I I ) в качестве ближайшего структурного аналога; а также на 7 -диацетоксифлуоренилиден-9'-гидразоно)-5-(п-нитробенэилиден)-тиазолидо- _ вирусе осповакцины в сравнении с метисазоном как с этанолом сравнения ну-4, обладающему антивирусным дейи со структурным аналогом. ствием в отношении вируса гриппа А Установлено, что соединение 1 окаи А-2, а также вируса осповакцины. зывает сильное влияние на репродукУказанное свойство предполагает возможность применения этого соедине- 10 цию указанных вирусов„ Определение антигриппозной активния в качестве антивирусного средстности ІП VLVOo ва в медицине 0 Исследование вирусингибирующей Целью изобретения является расширеактивности проведено на развивающихние спектра антивирусного действия ^Ъ ся куриных эмбрионах, инфицированных производных 2-(флуоренилиден-9-гидвирусом гриппа типа А и А-2, Инфекразано)-5-тиазолидона-4 0 ционная активность вируса составляП р и м е р о Получение 2—(21»7 ла 6-7 логарифмов ЭИД—50. Соединение диацетоксифлуореиилиден-9 - г и д р а з о ї в концентрация 1/2-1/10 от максино)-5-(п-нитробеіпилиден)-тиазолидо~ 20 мально переносимых вводили в биосисна-4 (соединение 1 ) . тему через 30-60 мин после заражения Смесь 2,85 г (0,01 моль)тиосемикарвирусом в д о з а х , вызывающих 100%-ный базона 2,7-дигидроксифпуоренона-9, эффект инфицирования. Инкубацию ви1,03 г (0,011 моль) монохлоруксусрусрепродуцирующей системы проводиной кислоты в 1,51 г (0,01 моль) пнитробензальдегида, 1,00 г безводно- 25 ли при 37 °С на протяжении 48 ч 0 Опыты учитывали при соответствующих го ацетата натрия кипятят 7 ч в контролях„ 90 мл смеси ледяной уксусной кислоЭффективность антигриппозного дейты и уксусного ангидрида (в соотноствия оценивали по степени ингибиции шении 8:1)о Затем реакционную массу 30 репродукции вируса в изучаемых биофильтруют, к фильтрату прибавляют логических системах в сравнении с дистиллированную воду, осажденный активностью ремантадина„ продукт фильтруют, сушат и получают Определение антивирусной актив4,3 г (79,3%) продукта в виде с в е т ности i n vivo в отношении вируса ло-желтого кристаллического порошка, т а п л 0 207-209°С (из водного этанола) 35 гриппа типа А и А~20 Испытание защитного действия соеНайдено,%: С 5 9 , 9 2 ; Н 3,56; динения Т проведено на модели грипК 10,75; S 5,92 О позной пневмонии мышей, вызванной вирусом гриппа, адаптированным к Вычислено,%: С 5 9 , 7 8 ; Н 3,34; 40 легочной ткани мышей, в дозе 10 ЛД^,. N 10,33; S 5,91 о Соединение 1 вводили в терапевтичесМаксимумы поглощения в Уй-спектре ких концентрациях пятикратно, подкож(в э т а н о л е ) : 232-235 нм ( l g £ 4 , I l ) , но с интервалом 24 ч . 241 нм ( l g £ 4 , 1 5 ) 262 нм ( 1 Є Є 4 , 3 2 ) , О защитном эффекте свидетельствоизгиб 283-286 нм ( l g e 4 , 0 0 ) , изгиб45 вали общее состояние животных, симпто340-345 нм„ мы пневмонии и степень их выраженносИспытания соединения 1 на наличие ти, интенсивность поражения легочной противовирусной активности и опредеткани 0 ление его токсичностио Определение антивирусной активносИспытание противовирусной актив50 ти i n v i t r o в отношении вируса оспоности соединения I е вакцины. Испытания противовирусной активСоединение Т в нетоксических доности 2-(2 ,7 -диацетоксифлуоренилизах (1/2-1/10 от МЇЇК), установленных ден-9'-гидразоно)-5-(п-нитробензилипредварительно на тех же моделях, растворяли в растворителе, состоящем ден)-тиазолидона-4 (соединения J) 55 из диметилсульфоксида и полиэтиленпроведены на вирусах гриппа штамм А гликоля-400 (в соотношении 1:3). Пос(WSN) и штамм А (Англия) 42/72(H3N2) ледующие разведения детали на раствов сравнении с ремантадином как с э т а ре Хэнкса 0 В контрольный опыт в одинолом сравнения и с 2-(флуоренили 3 1372889 наковом объеме вводили растворитель^ системах i n ovo и m vivo почти Опыты проводили на перевиваемых клеттакие же, как ремантадина ( т а б л . 1) .При ках почек обезьян (клетки МА), Критетаких же инфицирующих дозах штамма риями оценки служили признаки цитоА (Англия) hi! 12 (H3N2) показатели патического действия и реакция гемадантивирусного действия соединения I сорбц-ии с 0,5%-ными эритроцитами кур „ значительно превышают показатели Положительным контролем служил метиэталона сравнения - соединения I I сазон D (табл о 2 ) о Результаты исследований свидетельОпределение токсичности химичесствуют, что соединения Г и I I оказываких соединений проведено на куриных ют выраженное влияние на репродукцию эмбриронах и на модели "Клетка~вирус", вируса гриппа A (WSN) и А (Англия) За максимально переносимую концент42/72 (H3N2) в системе i n ovo и i n рацию (МПК) исследуемых веществ приvivo. нимали их максимальное количество, Так в системе i n ovo (в случае инкоторое не вызывало дегенерации клефицирования вирусом гриппа A (WSN) ток исследуемых моделей. Рабочая 10 ЭИД-50 показатели защиты ( l o g 2 ) доза составляла 1/2-1/10 МИД. составляют для ремантадина 4 , 2 ; для Соединение Т в 8 раз менее токсичсоединения I I 1,7; для соединения 1 но, чем метисазон о 20 4 , 6 ; при увеличении дозы инфицироваОпределение величины химиотерапевния ( т о е о 100 ЭИД-50) составляют тического индекса (ХТИ) осуществлено соответственно 3,0; 2 , 1 ; 3,2, В сиспо отношению к вирусам, к которым в теме i n vivo процент выживаемости эксперименте отмечалось выраженное мышей, зараженных вирусом гриппа А 25 действие. Химиотерапевтическое дей(WSN) составлял в случае лечения р е ствие устанавливали на клетках, инмантадином 80,0; соединением I I фицированных 10 и Ї00 ТЦД-50 (спустя 3 0 , 0 ; соединением Т - 9 0 , 0 , 60 мин после адсорбции вируса на чувствительных к л е т к а х ) . Соединения В системе i n ovo (А/Англия/42 (72 H3N2), 10 ЭИД-50) показатели з а - 30 добавляли в объеме 0,2 мл в различных концентрациях с целью установить мищиты составляли для ремантадина нимальную дозу, обеспечивающую эф3,5 l o g 2 ; для соединения A 0 , 9 i o g 7 ; фект, и максимальную дозу, при котодля соединения I 5 , 5 1 o g / o рой не проявляется токсический эфПри инфицировании 100 ЭИД-50 вируфект о Получены результаты: ХТИ са эти показатели составляли соот35 Соединение Т 8 в е т с т в е н н о : 3,0; 0 , 4 ; 4 , 2 l o g 2 o / Метисазон • 5 Соединение I I 2 В системе i n vivo процент выживаТаким образом, соединение Т облаемости мышей, зараженных вирусом А (Англия) 42/72 (H3N2) составлял в 40 дает сильным антивирусным действием в отношении вируса гриппа А и А-2» случае лечения ремантадином 70,0; Особенно выражено ингибирование штамсоединением I I - 20,0, соединением Т ма А (Англия) 42/72 (H3N2), превы80,0 о шающее активность ремантадина., Соединение Т оказывает угнетающее Соединение і по активности в отдействие на репродукцию Еируса оспо-. 45 ношении вируса осповакцнны превосховакцины i n v i t r o о Испытуемое вещество дит метисазон в адекватных условиях в концентрация 25,0; 1 5 , 0 j l 0 , 0 и опыта и является в 8 раз менее токсич5,0 мкг/мл ( т о е о 1/2 - 1/8 от МПК) ным» полностью ингибирует 10 и 100 ТЦД-50 и з о б р е т е н и я вируса осповакциныо В то же время 50 Ф о р м у л а 2-(2I,7'-Диацетоксифлуореннлиденметисазон при 10 ТЦД-50 полностью Э' - г ідразоно)-5-(п-нитробензипнден)угнетает репродукцию вируса при 3,25тиазолидон-4 формулы 1,0 мкг/мл ( т . е . 1/2 - 1/6 от МПК), а при 100 ТЦД-50 лишь при концентрации 1/2-1/4 от МПК0 55 Результаты опытов представлены в табл о 1-3„ Сравнительные показатели защиты соединения J при вирусе A (WSN) в 5 6 !372889 обладающий антивирусным действием в также вируса осповакцины, отношении вируса гриппа А и А-2, а Т а б л и ц а 1 Сравнительные показатели защиты 1,11 и ремантадина при вирусе A(WSN) в системах in ovo, in vivo in ovo Вещество 10 ЭИД-50 in vivo 1олд» 100 ЭИД-50 P * P % выживаемостидостоверность p азличия • Соединение Т 486 0,001 3,2 0,001 90,0 н-ч 0,001 Соединение I I 1,7 0,5 2,1 0,1 30,0 0,1 Ремантадин 4,2 0,001 3,0 0,01 80,0 0,01 Разница логарифмов между показателями сравниваемых групп, Процент защиты (по выживаемости леченых и контрольных мышей). р -Достоверность различия между показателями групп опыта и контроля. Т а б л и ц а 2 Сравнительные показатели защиты соединений I, I I и ремантадина при вирусе А (Англия) 42/72 (H3N2) в системах in ovo, in vivo in vivo in ovo Вещество 10 ЭИД-50 log^ 100 ЭИД-50 P log* 10 Л Д и P % выжива- достоверемости мы- ность различия шей Соединение Т 5 ,5" 0 ,001 4 ,2 0,001 80,0 0,001 Соединение II 0 /5 0 ,5 0 ,4 0,5 20,0 0,5 Ремантадин 3,5 0 ,01 3,0 0,01 70,0 0,001 Разница логарифмов между показателями сравниваемых групп» Процент защиты [по выживаемости леченых и контрольных мышей), р - Достоверность различия между показателями групп опыта и контроля.» 4,4. 1372889 Т а б л и ц а 3 Ингибирующие свойства соединения Т в зависимости от условий опыта и в сравнении с соединением I I и метисаэоном на вирусе осповакцины (vaccinum v a r i o l a e siccum) Концентрация, мкг/мл Вариант (1/2-1/10 от МПД) 10 ТЦПД-50 ЦДЦ реакция гемадсорбции 100 'ГЦПД-50 % ингибирования реакция % инги гемадсорб ЦПД ШІЯ бирова ции • 3,25 100 100 100 75 1,00 75 50 0,65 50 25 25,0 100 100 15,0 100 100 10,0 100 100 5,0 100 100 3,0 75 50 15,0 100 100 7,5 60 50 4,0 30 10 1,0 Соединение II 100 1,50 Соединение Т 100 2,00 Метисазон о 0 Контроль соединения I 25,0 Контроль метисазона 3,25 Контроль вируса П р и м е ч а н и е , , ЦДЦ и реакция гемадсорбции оценены по системе 0 четырехбалльной Тираж 205 Подписное ВШИЛИ Заказ 1826/ДСП Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, А