Біологічно активний препарат гепатон

Біологічно активний препарат, що містить гепатопротекторний компонент рослинного походження силімарин, який відрізняється тим, що 3 тваринництва та птахівництва постає питання профілактики захворювань порушення обміну речовин, зокрема, печінки. У гуманітарній та ветеринарній медицині широко застосовуються препарати гепатопротектори, для профілактики та лікування захворювань печінки. Відомий препарат Ессенціалє. Містить ессенціальні, тобто незамінні фосфоліпіди, переважно фосфати-дилхоліни (субстанція EPL) і вітаміни з антигіпоксантними (тіамін, рибофлавін, піридоксин, нікотинамід) і антиоксидантними (токоферол, ціанкоболамін) властивостями. Фосфоліпіди є основним компонентом стінки клітин печінки, нормалізують метаболізм ліпідів, білків і дезінтокаційну функцію печінки, відновлюють та зберігають клітинну структуру печінки і фосфоліпідозалежні ензиматичні системи. Застосовується індивідуально. Недоліком застосування цього препарату у промисловому тваринництві та птахівництві є його висока вартість та неможливість застосування груповим способом. Відомий препарат Гептрал (адеметіонін). Препарат особливо ефективний при внутрішньо печінковому холістазі і при поєднанні депресивних розладів ЦНС з патологією печінки. Гептрал попереджує екзогенні і ендогенні гепатотоксичні ефекти, сприяє підтримці в'язкості клітинних мембран, що є необхідним для нормальної діяльності мембранозв'язуючих ферментів. Недоліком застосування Гептралу у промисловому тваринництві та птахівництві є його висока вартість для застосуванні у промисловому тваринництві та птахівництві, та неможливість застосування груповим способом. Відомі препарати гепатопротектори на основі силімарину (Карсіл, Екстракт розторопші, Легалон), які широко використовуються у гуманній медицині. Застосування цих препаратів у промисловому тваринництві та птахівництві стримується нерозчинністю силімарину у воді, і в результаті неможливістю застосування їх груповим способом. Найбільш близьким по суті до препарату, який заявляється, є препарат Карсіл (прототип). Карсіл - гепатопротекторний засіб рослинного походження, який отримують з рослини Silybum marianum (Cardui mariae fructus). Дія препарату Карсіл обумовлена властивостями силімарину, який є сумішшю різноманітних флавоноїдів, найбільш активним з яких є силібінін. Активний компонент препарату силімарин стабілізує мембрани гепатоцитів (клітини печінки), покращує обмін речовин в них, стимулює синтез РНК, протеїнів, глікопротеїнів і глікогену в гепатоцитах. При дії токсичних речовин препарат Карсіл проявляє гепатопротекторну дію. Відомо, що силімарин індукує багато обмінних відновлювальних процесів у клітині, є сильним антиоксидантом, збільшує активність печінкових клітин (гепатоцити) після резекції печінки. Також недоліком застосування препаратів на основі силімарину в промисловому тваринництві та птахівництві є його нерозчинність у воді, що унеможливлює застосування препаратів на його основі груповим способом з водою в технологіях птахофабрик та тваринницьких підприємств. 67115 4 В основу корисної моделі поставлено задачу розробити новий, біологічно активний препарат на основі силімарину, який дозволив би розширити спектр гепатопротекторних препаратів для промислового тваринництва та птахівництва. Поставлена задача вирішується шляхом введення до складу препарату, що заявляється, компонентів, які посилюють дію силімарину (аскорбінова кислота) та комплекс компонентів розчинників (пропіленгліколь, ПЕО-400, тулоза), які дозволяють розчинити силімарин, без зниження його активності, і застосовувати його груповим способом шляхом випоювання. Новий біологічно активний препарат Гепатон містить силімарин, аскорбінову кислоту, комплекс компонентів розчинників (1,2-пропіленгліколь, ПЕО-400, тулоза), при такому співвідношенні, г: силімарин аскорбінова кислота ПЕО-400 1,2 -пропіленгліколь тулоза 10 20 100 300 3. При проведенні патентно-інформаційного пошуку заявником знайдено технічні рішення - препарати гепатопротектори (Карсіл, Екстракт розторопші, Легалон), у яких є спільні суттєві ознаки із заявленим рішенням (до складу входить силімарин - суміш флавоноїдів). Однак, даних суттєвих ознак недостатньо для одержання очікуваного технічного результату. Заявлений новий біологічно активний препарат Гепатон додатково містить аскорбінову кислоту, яка посилює дію силімарину та комплекс компонентів розчинників, який дозволяє розчинити силімарин і застосовувати новий препарат груповим методом для промислового тваринництва та птахівництва. Заявлений новий біологічно активний препарат Гепатон містить відомі речовини, які, у кількісному та якісному складі, дозволяють застосовувати його як гепатопротектор груповим методом у промисловому тваринництві та птахівництві. Силімарин - гепатопротектор рослинного походження, є сумішшю різних флавоноїдів, найбільш активним з яких є силібінін; стимулює клітинний метаболізм, активізує синтез білків і фосфоліпідів в гепатоцитах, перешкоджає руйнуванню клітинних мембран, що запобігає втраті компонентів клітини і проникненню токсинів у клітини печінки. Аскорбінова кислота (вітамін С) - органічна сполука, яка необхідна для нормальної функції багатьох процесів організму тварин, приймає участь в регуляції окисно-відновних процесів, вуглеводного та білкового обмінів, активізує естеразу печінки, прискорює згортання крові, проникність капілярів, регенерацію тканин, утворення стероїдних гормонів; знижує рівень холестерину і кальцію у крові, відкладення ліпідів і кальцію в органах; активізує ферменти шлунка і кишечнику, гормони; має антигеморагічну дію, перешкоджає розвитку інфекційних захворювань в організмі, забезпечує протизапальний вплив іонізованого кальцію, акти 5 67115 візує фагоцитоз, покращує діяльність адренергічної інервації. Проведені нами дослідження довели, що при поєднанні силімарину і аскорбінової кислоти їх інтегральний фармакологічний ефект значно вищий, ніж при застосуванні кожного компонента окремо. Комплекс аскорбінової кислоти і силімарину стабілізує мембрани гепатоцитів, покращує обмін речовин у них, стимулює синтез РНК, протеїнів, глікопротеїнів і при впливі різних токсичних речовин виявляє гепатопротекторну дію. 1,2-Пропіленгліколь (пропандіол) - відома речовина, яка широко застосовується у багатьох галузях, у фармацевтичній промисловості використовується як розчинник природних і синтетичних речовин при виготовленні лікарських препаратів, мазей, кремів. ПЕО-400 - поліетиленоксид, є продуктом полімеризації окису етилену, біологічно безпечний, малотоксичний, має високу осмотичну активність, утворює комплексні сполуки з водою, виконує в організмі роль провідника лікарських речовин до тканин. Широко використовується у медичній та ветеринарній практиці. Тулоза (лактулоза) - дисахарид, пребіотик, який синтезують із лактози молочнокислих продуктів, покращує метаболітичні процеси і функціональну активність травного каналу (у т.ч. у печінці), регулює мікробний склад товстої кишки. При застосуванні гепатопротекторів внутрішня ефективність їх невисока через порушення процесів всмоктування у травному каналі. Тулоза, як активний коректор метаболізму кишечнику, при одночасному застосуванні з гепатопротекторами сприяє їх всмоктуванню у травному каналі. Комплекс компонентів розчинників (1,2пропіленгліколь, ПЕО-400, тулоза) забезпечує розчинність силімарину у воді і тривале збереження його високої активності. Ефективність запропонованого нового біологічно активного препарату Гепатон підтверджується прикладами проведених досліджень. 6 Приклад 1. Порівняльна ефективність гепатопротекторної і антиоксидантної дії препаратів Гепатон та Карсіл. З метою вивчення порівняльної ефективності препаратів Гепатон та Карсіл дослідження проводили на щурах. Для моделювання захворювання гепатиту щурам внутрішньочеревно вводили чотирихлористий вуглець (ССl4) у дозі 0,4 мл/кг маси тіла два рази на добу. Для вивчення гепатопротекторної і антиоксидантної дії препаратів Гепатон та Карсіл ці препарати вводили піддослідним тваринам два рази на добу внутрішньочеревно протягом семи діб (у перші чотири доби разом із ССl4 і ще три доби після). Для проведення досліду були сформовані 5 груп щурів по 12 тварин у кожній. Перша група (Ігрупа) була контрольною, тваринам цієї групи вводили внутрішньочеревно фізіологічний розчин; другій групі (II-група) вводили внутрішньочеревно чотирихлористий вуглець протягом семи діб. Третій групі (III-група) вводили ССl4 протягом чотирьох діб і Гепатон (4+3 доби) у дозі 10 мг/кг маси тіла. Четвертій (IV-rpyna) вводили ССl4 протягом чотирьох діб і Гепатон (4+3 доби) у дозі 20 мг/кг маси тіла. П'ятій групі (V-гpyпa) вводили ССl4 і Карсіл (4+3 доби) у дозі 20 мг/кг маси тіла. У тварин першої групи не спостерігалося ніяких змін загального стану, тварини протягом досліду мали приріст маси тіла. У піддослідних тварин другої групи, яким вводили лише ССl4, розвивались гіподинамія, загальмованість, скуйовдженість шерсті, тварини приймали неохайний вигляд. Також інтоксикація щурів ССl4 призводила до втрати маси тіла. У піддослідних тварин третьої, четвертої та п'ятої груп, які одночасно отримували ССl4 та гепатопротектори (Гепатон та Карсіл) загальний стан був кращий ніж у тварин другої групи і вони не втрачали масу тіла. Результати динаміки маси тіл піддослідних тварин, які отримували лише ССl4 та одночасно з ССl4 гепатопротектори (Гепатон та Карсіл) наведені у таблиці 1. Таблиця 1 Динаміка зміни маси тіла піддослідних щурів при введенні чотирихлористого вуглецю та гепатопротекторів Групи тварин Маса тіла щурів до початку досліду, г Маса тіла щурів після досліду, г І- група, фізіологіII-група, ССl4 чний розчин (конn=12 троль) n=12 III-група, ГепаIV-rpyna, Гепатон V-rpyna, Карсіл тон (10 мг/кг (20 мг/кг м.т.) + (20 мг/кг м.т.) + м.т.) + СС14, ССl4, n=12 ССl4, п=12 n=12 166,4±2,3 147,6±2,5 155,4±3,3 148,6±3,5 162,0±3,8 169,4±3,1 142,3 ± 2,1 158,8±3,6 152,0±2,9 164,8±4,5. Гепатопротекторну та антиоксидантну дії нового біологічно активного препарату Гепатон та відомого препарату Карсіл (прототип) при отруєнні піддослідних щурів чотирихлористим вуглецем оцінювали за такими показниками: загальна оксидантна активність (ЗОА, %), загальна антиоксидантна активність (ЗАА, %), світлосума (S), антиоксидантна активність (S/STmax, умовні од.), загальний білок (г/л), білірубін загальний (кмоль/л), холестерин (ммоль/л), аланінамінотрансфераза (АЛТ, МЕ/л), аспартатамінотрансфераза (ACT, МЕ/л), ACT/АЛТ відношення аспартатамінотрансферази та аланінімінотрансферази), тривалість гексанового сну (хв.). Антитоксичну функцію печінки оцінювали за тривалістю гексанового сну, який відображає стан 7 мікросомальної ферментативної системи, яка метаболізує ксенобіотики. Гексенал (2 % водний розчин) вводили тваринам з токсичною патологією печінки внутрішньочеревно у дозі 80 мг/кг маси тіла [2]. Терапевтичну ефективність гепатопротекторів оцінювали за їх дією на морфологічні і біохімічні показники печінки і сироватки крові піддослідних тварин. 67115 8 Щурів декапітували під ефірним наркозом, проводили патологоанатомічний розтин і гістологічні дослідження. У таблиці 2 наведені результати впливу гепатопротекторних препаратів Гепатон та Карсіл на біохімічні показники крові щурів при отруєнні чотирихлористим вуглецем. Таблиця 2 Вплив нового Біологічно активного препарату Гепатон та препарату Карсіл на рівень вільнорадикального окислення та біохімічні показники крові щурів при отруєнні чотири хлористим вуглецем Досліджувані Групи ідослідних тварин III-група, ГепаІ- група, фізіологіIV-rpyna, Гепатон V-rpyna, Карсіл II-група, ССl4 тон (10мг/кг показники чний розчин (конт(20 мг/кг м.т.) + (20 мг/кг м.т.) + n=12 м.т.) + ССl4, роль) n=12 ССl4, n=12 ССl4, n=12 n=12 Загальна оксидантна 5,44±1,2 9,13±1,4* 7,50±1,4* 6,95±1,7 8,08±1,8 активність, ЗО А, % Загальна антиоксидантна активність, ЗАА, 11,96±0,4 10,2±0,9 10,9±0,8 13,6±0,6 11±0,5 % Світлосума, S 12,95±0,4 11,39±0,5 12,61±0,7 13,20±0,67 12,43±0,56 Антиоксидантна активність, S/STmax умов7,66±0,85 7,32±0,6 8,2±0,6 8,47±0,25 8,04±0,5 них од. Загальний білок, г/л 50,7±3,04 43,1±1,4 46,6±0,95 49,7±1,13 45,9±1,65 Білірубін загальний, 2,4±0,24 6,9±0,54 3,3±0,21 2,8±0,31 3,5±0,31 мкмоль/л Холестерин, ммоль/л 0,87±0,5 1,50±0,5 1,12±0,2 0,95±0,4 0,89±0,3 Аланінамінотрансфераза, АЛТ, 88,6±14,0 188,4±12,3 153,2±19,2 86,3±9,4 155,3±17,5 МЕ/л Аспартатамінотрансфераза, ACT, 240,4±12,1 414,2±22,3 341,7±21,5 239,1±13,4 361,6±16,7 МЕ/л АСТ/АЛТ 2,7 2,20 2,23 2,8 2,24 Тривалість гексенало41,2±3,1 88,3±1,3 56,2±1,8 52,2±1,0 59,2±1,3 вого сну, хв ' Примітка: * - відмінність достовірно (р < 0,05): групи, де застосовували CCl4, -порівняно з контрольною і тією ж групою відносно до досліджуваних препаратів (n -кількість тварин). Результати досліджень наведені у таблиці 2 свідчать, що застосування чотирихлористого вуглецю викликає підвищення рівня вільних радикалів (ЗОА) у плазмі крові. Концентрація ЗОА у IIIгрупі при дозі Гепатону 10 мг/кг м.т. була нижчою в 1,1 рази, у IV-групі при дозі Гепатону 20 мг/кг м.т. нижчою у 1,3 рази порівняно із II-групою щурів, яким вводили чотирихлористий вуглець. При введенні Карсілу у дозі 20 мг/кг м.т. концентрація ЗОА знижувалась у 1,13 рази. Концентрація загальної антиоксидантної активності (ЗАА) у III-групі при дозі Гепатону 10 мг/кг м.т. була вищою в 1,1 рази, у IV-групі при дозі Гепатону 20 мг/кг м.т. -у 1,3 рази порівняно із IIгрупою щурів (ССl4). При введенні Карсілу у дозі 20 мг/кг м.т. концентрація ЗАА була вищою у 1,1 рази порівняно з II-групою щурів (ССl4). У III-групі тварин при дозі Гепатону 10 мг/кг м.т. світлосума (S) і антиоксидантна активність (S/STmax) підвищувалися у 1,1 рази, у IV-групі при дозі Гепатону 20 мг/кг м.т. показник S підвищувалась у 1,4 рази, а показник S/STmax у 1,13 рази порівняно з II-групою щурів (ССl4). При введенні Карсілу у дозі 20 мг/кг м.т. (V-група) показники S та S/STmax підвищувалися у 1,1 рази порівняно із Пгрупою щурів (ССl4). Антиоксидантна активність Гепатону відповідає його гепатопротекторним властивостям, про що свідчать показники біохімічних досліджень. У крові тварин II-групи (ССl4) активність ACT, АЛТ зросла у 2,1 рази, рівень холестерину підвищився у 1,7 рази, вміст загального білірубіну збільшився у 2,9 рази порівняно з показниками контрольної групи тварин (І-група). Відношення ACT/АЛТ зменшилось до 2,20, а у тварин контрольної групи (Ігрупа) воно складало 2,71. Концентрація загального білка знизилась на 15 %. 9 67115 У тварин IV-групи при дозі Гепатону 20 мг/кг м.т. активність ACT зменшилась у 1,7 рази, АЛТ у 2,2 рази. Знизився вміст загального білірубіну у 1,8 рази, холестерину у 1,6 рази, а вміст білку у крові збільшився до 12 %. Відношення ACT/АЛТ підвищилось до 2,3 (у II-групі тварин (ССl4) складало 2,2). Тривалість гексанового сну в II-групі щурів при ССl4-гепатиті збільшилась приблизно у 2 рази, до 88,3±1,3 хв, у контрольній групі (І-група) становила- 41,2±3,1 хв. При введенні Гепатону цей функціональний показник діяльності систем біотрансформації ксенобіотика у печінці нормалізувався до 58,2±1,8 хв. при дозуванні 10 мг/кг м.т. (III-група) та до 63,2±1,0 хв. при дозі 20 мг/кг м.т. (IV-гpyпa). Карсіл у дозі 20 мг/кг м.т. (V-група) знижував тривалість гексанового сну до 59,2±1,3 хв. При гістологічних дослідженнях паренхіми печінки тварин, які отримували чотири хлористий вуглець (II-група) спостерігали такі порушення: порушення балочної будови, виражену жирову дистрофію гепатоцитів як у центрі так і на периферії печінкових доль, ділянки вогнищевого некрозу гепатоцитів. У тварин III-ої, IV-ої та V-ої груп, які отримували препарати Гепатон та Карсіл ознаки проліферативного гепатиту були виражені менше порівняно з тваринами II-ої групи (ССl4). Також у паренхімі печінки тварин цих груп були ознаки регенерації печінки. Таким чином, порівняльна оцінка ефективності Гепатону і Карсілу при токсичному гепатиті у щурів 10 доводить, що обидва препарати знижують токсичний ефект чотирихлористого вуглецю і сприяють відновленню пораженої паренхіми печінки, при цьому Гепатон має більш високу фармакологічну активність ніж Карсіл, також має більший ефект нормалізації метаболізму гепатоцитів, антитоксичну і антиоксидантну дії. Приклад 2. Вивчення терапевтичної ефективноті препарату Гепатон на поголів'ї свиней З метою вивчення терапевтичної ефективності нового біологічно активного препарату Гепатон проводилися виробничі випробування в умовах свинокомплексу поголів'ям до 70 тис. Були відібрані 2 групи свиноматок і поросят із вираженим гепатодепресивним синдромом. У кожній групі було по 30 свиноматок і по 320 поросят після опоросу, з клінічними ознаками токсикозів і патологією печінки за результатами біохімічних досліджень сироватки крові. Усім свиноматкам і поросятам (починаючи з 10-го дня життя) першої групи, випоювали новий біологічно активний препарат Гепатон з розрахунку 1 л препарату/1000 л води (1 мл на 10кг) маси тіла протягом 5 діб. Свиноматкам і поросятам другої групи застосовували стандартні схеми обробок: ін'єкційно вводили тетравіт у дозах по 5 мл на гол. свиноматкам та по 1 мл на гол. поросятам. Облік результатів проводили на 30-й день досліду. Результати досліджень наведені у таблицях 3 та 4. Таблиця 3 Вплив Гепатону на клінічний стан свиноматок та поросят при вираженій патології печінки Групи тварин І-група, (контроль) + стандартні II -група, + Гепатон (1мл на схеми обробок (тетравіт) 1кг маси тіла) Кількість тварин у групі: свиноматки, поросята Переведено у групу дорощування, гол/% Падіж, гол Причини падежу: асфіксія гастроентерит загальна інтоксикація Вимушено забиті, гол Середньодобовий приріст, г Збереженість молодняку, % При застосуванні препарату Гепатон, який випоювався з водою з розрахунку 1 л/ 1000 л води (1 мл /10 кг) маси тіла покращувався показник збереженості молодняку (96,7 % проти 94,2 у контролі), збільшувався середньодобовий приріст молодняку (208,6 г проти 181,1 г у контролі). Таким 30 30 320 308/93,3 320 314/95,1 19 11 5 7 7 3 181,1 94,2 6 5 4 208,6 96,7. чином новий біологічно активний препарат Гепатон є ефективним гепатопротектором. У таблиці 4 наведені результати показників крові внаслідок використання нового біологічно активного препарату Гепатон при вираженій патології печінки. 11 67115 12 Таблиця 4 Вплив Гепатону на показники крові свиноматок и поросят при вираженій патології печінки Показники Супоросні свиноматки (11 діб до опоросу) Термін проведення досліджень, дні (після відлучення поросят) 30 II-група, +Гепатон (1мл/10кг маси тіла) І-група, контроль свиноматки поросята Загальний білок, 81,2+1,4168,5±1,09 60,9±1,35 г/л Сечовина, мМ\л 6,8±0,91 8,8+3,11 9,4±0,7+62 % Аспартатаміно305,8±0,60+10 % 352,2±2,75+17 % трансфераза, ACT, 333,6±0,45+20 % от нормы от нормы МЕ/л Аланінаміно278,0±0,44+10 % трансфераза, АЛТ, 194,6±0,75 119,5+0,65 от нормы МЕ/л ЛФ, нМ/сл Лужна 333,6±0,75+36,4 % 314,1±5,75+28,4 % 550±0,75 фосфотаза от нормы от нормы Коэф Де Риттисс 1,57+4,8 % от но1,17 2,7+80 % нормы АСТ/АЛТ рмы Отримані результати досліджень свідчать, що Біологічно активний препарат Гепатон, до складу якого входять силімарин - гепатопротектор рослинного походження, аскорбінова кислота, яка посилює дію силімарину та комплекс компонентів розчинників (пропіленгліколь, ПЕО-400, тулоза), є Комп’ютерна верстка І. Скворцова свиноматки поросята 73,6±2,75 70,0±2,47 5,3+0,68 9,0+0,25 221,2±1,4 191,8±0,65 196,1±0,61 143,4±0,25 102,1±0,45 333,6±14,3 1,1 2,7. ефективним гепатопротектором, його можна застосовувати для профілактики та лікування захворювань пов'язаних з функціональними порушеннями печінки. Препарат розчинний у воді і може застосовуватися у промисловому тваринництві та птахівництві. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601