Спосіб виділення збудників карантинних організмів з однієї ґрунтової проби

Реферат: Спосіб виявлення збудників карантинних організмів з однієї ґрунтової проби включає виділення збудників карантинних організмів над ситом з діаметром 0,2 мм. Шляхом використання додаткового сита розміщеного знизу з діаметром 0,03 мм вдається одночасно виділяти зооспорангії збудника раку та цисти і личинки фітогельмінтів. UA 69397 U (12) UA 69397 U UA 69397 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі сільського господарства та області фітопатології, а саме до методів виявлення цистоутворюючих фітонематод тазооспорангіїв раку картоплі , що містяться в ґрунті і може бути використана як експрес-метод в карантині рослин. Картопляна цистоутворююча нематода викликає захворювання картоплі - глободероз. Для картопляної нематоди характерний статевий диморфізм. Самці червоподібні, самки кулеподібні з витягнутими головками. Самки продукують овальної форми яйця, які залишаються в середині їх тіла, в личинках. Такі відмерлі самки з яйцями називають цистами. В кінці вегетаційного періоду цисти з коріння рослин відпадають в ґрунт [1]. Тіло самок довжиною 0,3-1,2 мм, ширина 0,2-0,9 мм, нерухомі [2]. Цисти круглі, легкі і тому добре спливають на поверхню води, разом із легкими частинками ґрунту. Експертиза ґрунту на зараженість картопляною цистоутворюючою нематодою може проводитися різними методами із допомогою приладів - цистовиділювачів. Відомий флотаційний метод промивки через сита за допомогою літрових стаканів, виділення цист за допомогою приладу Фенуіка, лійковий метод Кірхнера та інші [3,4]. Всі вони основані на здатності цист спливати на поверхню води. Експертиза ґрунту на зараженість раком картоплі проводиться флотацією зразка ґрунту в 48,5 % розчині натрію йодистого з послідуючим врахування їх кількості під мікроскопом. В основі всіх методів виділення фітогельмінтів лежить здатність цист спливати на поверхню води. При проведенні промивки традиційними способами суттєвими недоліками є висока трудомісткість та значні затрати водних ресурсів. Задачею корисної моделі - розробити експрес-метод швидкого та ефективного виділення цист фітогельмінтів та зооспорангіїв збудника раку картоплі із ґрунтової проби одночасно. Приклади здійснення способів Приклад 1. Апарат «РуТа» Пропонований спосіб виявлення фітогельмінтів базується на здатності цист нематод спливати на поверхню води. Ґрунтові зразки, які необхідно проаналізувати просушують при кімнатній температурі або в сушильній шафі при температурі, що не перевищує 40 °С. Із зразка для аналізу відбирають 100 г просіяного через сито із діаметром отворів 2-3 мм. Із систем водопостачання (за відсутності такої із цистерни) подаємо знизу в робочу ємність воду на 1/4 об'єму через трубку подачі води та поворотом триходового крану (в положенні подачі води) Ґрунтову наважку засипаємо в робочу ємність, злегка помішуючи скляною паличкою. Далі продовжуємо подачу води. Вода, яка через триходовий кран апарату "РуТа" подається знизу під тиском створює ефект "легкого бурління", в результаті чого ґрунт змішується. Поступово об'єм води збільшуємо, заповнюючи всю робочу ємність (v=3л). На поверхні води спливають дрібні органічні рештки та цисти, які виштовхуються водою на зливну горловину апарату. По горловині вода із цистами та іншими рештками струменем попадає на верхнє сито з діаметром отворів 0,75-1,0 мм, а з нього на нижнє сито з діаметром отворів 0,1-0,2 мм. Сита поставлені одне на друге і тримаються на кріплені, яке розмішене нижче робочої ємності на відстані зливної горловини. Переконавшись, що на поверхні води в робочій ємності вже немає решток і цист проводимо по поверхні води скляною паличкою біля стінок ємності, щоб прилиплі до стінок частинки і цисти змило на сита. Рештки і цисти затримуються на поверхні сит: великі на верхньому, а мілкі рештки і цисти на нижньому. Вода через сита просочується в умивальник (чи відро). Подачу припиняємо за допомогою повороту триходового крану. Повернувши кран в положення № 2, відпрацьована суміш по вивідній трубці виводиться в спеціальний каналізаційний стік (чи відро). Ємність ополіскуємо склянкою води, чи кількома поворотами крану подачі води із системи водопостачання. Далі знімаємо сита. Верхнє сито (0,50 мм) звільняємо від решток і промиваємо, а на нижньому (0,2 мм) змив можна розглядати через лупу. Якщо цисти необхідно виділити, то змив із сита переносимо в склянку (1 л) з водою. Сито ополіскуємо, щоб всі рештки і цисти потрапили в склянку. Відстоюємо 2-3 хв. і зливаємо 1/3 об'єму склянки на фільтр у лійці. Розглядати фільтри можна відразу, або пронумерувати і відкласти до моменту можливого аналізу на картонних підставках. Даний метод промивки з наступним виділенням цист фітогельмінтів можна спростити як в часі так і методиці проведення, якщо під час роботи між верхнім ситом з діаметром отворів 0,75-1,0 мм та нижнім з діаметром отворів 0,1-0,2 мм покласти нейлонову чи ситцеву тканину діаметр отворів якої менший за отвори нижнього сита. Тканину вкладаємо в нижнє сито типу "п'яльця". В цьому випадку змиті рештки великі за розмірами будуть затримуватися на верхньому ситі, а дрібні і цисти відразу на тканині, оскільки тканина щільна і не пропускає частинки і цисти, а вода легко просочується через неї. Після промивки ґрунтових зразків, сита роз'єднують, а тканину розглядають через лупу чи бінокуляр. Як і фільтри тканинну можна поміщати на картонні пронумеровані підставки і розглядати в 1 UA 69397 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 зручний час. В такий спосіб відбувається значна економія робочого часу. Окрім цього фактично відсутні втрати цист, які можливі при промиванні іншими способами при перенесенні змиву в склянку та на фільтр (5). Перевага промивки даним методом і втому, що важкі частинки ґрунту не підіймаються на поверхню води в результаті чого змив чистий. А при використані методу промивки через сита та флотаційний при змивах на сито чи на фільтр попадає багато частинок ґрунту і каламуті, що ускладнює підрахунок цист. Кількість цист нематод підраховують під бінокуляром (4x7) . Приклад 2. До апарату «Рута» знизу прикріплюються ряд сит, мінімальне з діаметром 0,03 мм. Після визначення цист фітогельмінтів, використану рідину зливають через трьохходовий кран на ряд сит, розміщених знизу під апаратом. Осад розділяється по ситах. Проглядаємо нижнє сито з діаметром 0,03 мм на наявність зооспорангіїв збудника раку картоплі та личинок нематод. Відпрацьовану рідину зливають у окремий карантинний водозабірник. Якщо проби ґрунту відібрано на протязі вегетаційного періоду розвитку картоплі при проведенні аналізів на виявлення картопляних нематод на ситі 0,03 мм можна виявити яйця та личинки фітомематод під бінокуляром (4x7). На ситі з діаметром 0,03 мм підраховують зооспорангії збудника раку картоплі, їх переносять на годинникове скельце шляхом змиву і підраховують під мікроскопом (8x15). Даний спосіб дозволяє провести одночасний аналіз проби ґрунту на наявність збудників грибкових та нематодних хвороб рослин картоплі та інших культур. Технічний результат, якого можна досягти при застосуванні корисної моделі полягає у виділенні збудників карантинних організмів над ситом з діаметром 0,2 мм та використання додаткового сита розміщеного знизу з діаметром 0,03 мм для одночасного виділення зооспорангіїв збудника раку та личинок фітогельмінтів, основаного на подачі води знизу через триходовий кран для повної промивки проби та змив відпрацьованої суміші через триходовий кран апарату "РуТа" на сита розміщені знизу. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак і технічним результатом полягає в тому, що для виділення цист нематод використовується спосіб, основаного на подачі води знизу через триходовий кран для повної промивки проби та змив відпрацьованої суміші через триходовий кран апарату "РуТа" на сита розміщені знизу, завдяки чому досягнуто високого критерію ефективності способу порівняно із аналогами. На фіг. 1 показана схема апарата «РуТа», де: 1 - робоча ємність, 2 - триходовий кран, 3 труба для подачі води, 4 - труба для виведення змивів, 5 - сито з діаметром отворі 1 мм, 6 - сито з діаметром отворів 0,2 мм. На фіг. 2 - схема апарату «РуТа» з набором нижніх сит, де 7 - сито з діаметром отворів 0,03 мм. Літературні джерела: 1. Положення про порядок випробування селекційного матеріалу картоплі на стійкість проти раку та золотистої картопляної цистоутворюючої нематоди. Ч. - 1999. - 14с. 2. Деккер X., Нематоды растений и борьба с ними. - М.: Колос, 1972. - 443 с. 3. Кирьянова Е. С. Методы исследования нематод сельскохозяйственных растений, почвы и насекомых. - М., Л.: АН СССР, 1963.- 33 с. 4. Деклараційний патент на корисну модель №24113 МКВ A01H 3/00,G01J 3/28 від 25.06.2007 р. Спосіб визначення стійкості картоплі до збудника раку Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. шляхом індукованої преципітації. Зеля А.Г., Костишин С.С., Мельник П.О., Сологуб О.С., А.А., Сидорчук В.І., Осипчук А.А. заявл. 06.05.2007р., опубл. 25.06.2007р. // Промислова власність, Бюл. №5. 5. Коржук Р.Д., Мацьків Т.І., Ющук Т.Д., Купчак М.Г., Сирбу Р.Д. Апарат "РуТа" для виділення цист фітогельмінтів із ґрунтових проб. Деклараційний патент на винахід по заявці № 20040504056 від 27.05.2004 р. 6. Коржук Р.Д., Мацьків Т.І., Мельник П.О., Соломійчук М.П. Спосіб виділення цист фітогельмінтів з ґрунтових проб. Деклараційний патент на винахід № 7248 15.06.05. 6. Маслов Ю.И. Статистическая обработка данных биохимических исследований //Методы биохимического анализа растений. Л., 1978. - С. 163-178. 55 2 UA 69397 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб виявлення збудників карантинних організмів з однієї ґрунтової проби, що включає виділення збудників карантинних організмів над ситом з діаметром 0,2 мм, який відрізняється тим, що шляхом використання додаткового сита розміщеного знизу з діаметром 0,03 мм вдається одночасно виділяти зооспорангії збудника раку та цисти і личинки фітогельмінтів. 3 UA 69397 U Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4