Спосіб одержання поліклональних антитіл та спосіб одержання моноклональних антитіл, які специфічно зв’язуються з поліпептидом, фосфорилованим до визначеної амінокислоти

1.Спосіб одержання поліклональних антитіл, які специфічно зв'язуються з поліпептидом, фосфорилованим до визначеної амінокислоти, який включає:

a) створення композиції, що містить поліпептид, який містить фосфопептидний імітатор  (mimetic) фосфорилованого залишку амінокислоти, в фізіологічно прийнятному носії, причому згаданий імітатор містить місток (зв’язувальну групу), що не гідролізується, між атомом вуглецю й фосфатною групою,

b) імунізацію тварини композицією стадії а);

c) збір і підготовку сироватки чи асцитної рідини, що містить антитіла, від імунізованої тварини стадії b);

d) перевірку на наявність антитіл, специфічних до фосфорилованого поліпептиду.

2.Спосіб за п.1, у якому одержують поліклональні антитіла, які специфічно зв’язуються з поліпептидом, фосфорилованим до визначеної амінокислоти, в залежності від амінокислотних послідовностей, що фланкують фосфориловану амінокислоту.

3.Спосіб за п.1, у якому одержують поліклональні антитіла, які специфічно зв’язуються з поліпептидом, фосфорилованим до визначеної амінокислоти, незалежно від амінокислотних послідовностей, що фланкують фосфориловану амінокислоту.

4.Спосіб за п.1, який додатково включає подальше збагачення антитілами, специфічними до фосфорилованого поліпептиду, шляхом афінного очищення.

5.Спосіб за п.1, який додатково включає подальше збагачення антитілами, специфічними до фосфорилованого поліпептиду, шляхом очищення від супутніх антитіл, що виявляють небажану активність зв'язування.

6.Спосіб за п.1, у якому тварину додатково імунізують природним фосфопептидним кон'югатом (складною фосфопептидною сполукою), в який як  бустер (активатор) включена придатна амінокислотна послідовність.

7.Спосіб за п.1, у якому поліпептид стадії а) необов'язково модифікують перед імунізацією стадії b) .

8.Спосіб за п.7, у якому модифікацію здійснюють зв'язуванням поліпептиду з білком-носієм, вибраним із групи, що містить гемоціанін KLH (keyhole limpet hemocyanin), бичачий серологічний білок (BSA), яєчний альбумін й очищену білкову похідну туберкуліну (PPD), використовуючи будь-який біфункціональний реагент.

9.Спосіб за п.1, у якому специфічну амінокислоту вибирають із групи, що містить серин, треонін і тирозин.

10.Спосіб за п.1, у якому місток (зв'язувальна група), яка не гідролізується, включає групу CF2.

11.Спосіб за п.10, у якому імітатором фосфосерину є F2Pab.

12.Спосіб за п 10, у якому імітатором фосфотирозину є F2Pmp.

13.Спосіб за п.10, у якому імітатором фосфотреоніну є F2Pmb.

14.Спосіб за п.1, у якому поліпептид стадії а) отриманий з р53.

15.Спосіб за п.14, у якому поліпептид є таким, як зазначено в SEQ ID NO: 1.

16.Спосіб за п.14, у якому поліпептид вибирають із групи, що складається з SEQ ID NOS: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, і 10.

17.Спосіб одержання моноклональних антитіл, які специфічно зв'язуються з поліпептидом, що фосфорилований до залишку визначеної амінокислоти, який включає:

a) створення композиції, що містить поліпептид, який містить фосфопептидний імітатор визначеної фосфорилованої амінокислоти у фізіологічно прийнятному носії, причому згаданий імітатор містить місток (зв’язувальну групу), який не гідролізується, між атомом вуглецю й фосфатною групою;

b) імунізацію тварини композицією стадії а);

c) одержання В-клітин від тварини стадії b);

d) одержання гібридом злиттям В-клітин від стадії с) із клітинами мієломи;

e) добір гібридом стадії d) для продукування антитіл, специфічних до фосфорилованого поліпептиду; і

f) відділення й розмноження гібридом, ідентифікованих на стадії е).

18.Спосіб за п.17, у якому  одержують моноклональні антитіла, які специфічно зв’язуються з поліпептидом, фосфорилованим до визначеної амінокислоти, в залежності від амінокислотних послідовностей, що фланкують фосфориловану амінокислоту.

19.Спосіб за п.17, у якому одержують моноклональні антитіла, які специфічно зв’язуються з поліпептидом, фосфорилованим до визначеної амінокислоти, незалежно від амінокислотних послідовностей, що фланкують фосфориловану амінокислоту.

20.Спосіб за п.17, у якому тварину додатково імунізують природним фосфопептидним кон'югатом (складною фосфопептидною сполукою), в який як  бустер (активатор) включена придатна амінокислотна послідовність.

21.Спосіб за п.17, у якому поліпептид стадії а) модифікують до імунізації на стадії b).

22.Спосіб за п.21, у якому модифікацію здійснюють зв'язуванням поліпептиду з білком-носієм, вибраним із групи, що містить гемоціанін KLH (keyhole limpet hemocyanin), бичачий серологічний білок (BSA), яєчний альбумін й очищену білкову похідну туберкуліну (PPD), використовуючи будь-який біфункціональний реагент.

23.Спосіб за п.17, у якому визначений залишок амінокислоти вибирають із групи, що містить серин, треонін і тирозин.

24.Спосіб за п.17, у якому місток (зв'язувальна група), що не гідролізується, включає групу CF2.

25.Спосіб за п.24, у якому імітатором фосфосерину є F2Pab.

26.Спосіб за п.24, у якому імітатором фосфотирозину є F2Pmp.

27.Спосіб за п.24, у якому імітатором фосфотреоніну є F2Pmb.

28.Спосіб за п.17, у якому поліпептид стадії а) отриманий з р53.

29.Спосіб за п.28, у якому поліпептид є таким, як зазначено в SEQ ID NO: 1.

30.Спосіб за п.28, у якому поліпептид вибирають із групи, що складається з SEQ ID NOS: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, і 10.