Вакцина проти лептоспірозу тварин полівалентна (варіант bovis)

Реферат: Вакцина проти лептоспірозу тварин полівалентна (варіант bovis) містить суспензію клітин штамів Leptospira interrogans серогруп Grippotyphosa (штам ВГНКИ-1), Icterohaеmorrhagiae (штам ВГНКИ-2), Tarassovi (штам ВГНКИ-4), Hebdomadis (штам Kabura), Sejroe (штам 493 Poland та Hardjoprajtno), інактиватор, сорбент та ад’ювант поліетиленгліколь і воду. Додатково містить антигени вказаних штамів лептоспір, як інактиватор використовують формалін, а як сорбент та ад’ювант - поліетиленгліколь. UA 73324 U (12) UA 73324 U UA 73324 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, біотехнології, імунології, і виробництва біологічних препаратів. Найбільш близьким технічним рішенням до корисної моделі є полівалентна вакцина ВГНКИ проти лептоспірозу тварин [1], другий варіант, яка містить антигени лептоспір серогруп Pomona, Тarassovi, Grippotyphosa, Sejroe (серовар hardjo), консервант, ад'ювант і воду. Штами лептоспір культивують в сироватковому середовищі, інактивують, розділяють на дві частини, додають до одної частини 3 % трихлороцтової кислоти, витримують протягом трьох годин до випадання осаду білка, видаляють 60 % надосадової рідини, нейтралізують кислоту аміаком, з'єднують дві частини культури лептоспір та додають гідроксал в кількості 30 %. Вакцину застосовують одноразово внутрішньом'язово в наступних дозах: великій рогатій 3 3 худобі віком від 2 до 12 місяців - 4 см , від 1 до 2 років - 8 см , дорослим тваринам старше 2 3 3 3 років - 10 см ; дрібній рогатій худобі віком до 6 місяців - 2 см , від 6 до 12 місяців - 2,5 см та 3 дорослим тваринам - 5 см ; поросятам у віці 1-3 місяців вакцину вводять двократно в дозі 2-3 3 3 3 см з інтервалом 10-15 діб, від 3 до 10 місяців - 6 см , хрякам та свиноматкам - 10 см . Препарат має суттєві недоліки: - препарат призначений для профілактики лептоспірозу великої рогатої худоби але при його виготовленні не враховані зміни етіологічної структури, які відбулись в останній час, а саме - на даний час домінуючими серогрупами лептоспір, котрі викликають захворювання на лептоспіроз у великої рогатої худоби на території України є: Tarassovi, Grippotyphosa, Sejroe, Hebdomadis га Іcterohaemorrhagiae [2-6]; - низька ефективність вакцини тому, що в своєму складі вона містить лише серовар hardjo, внаслідок чого вона не завжди захищає тварин від кон'юнктивального чи польового зараження [7-8]; - мала концентрація лептоспір при вирощуванні обумовлює необхідність вводити вказаний 3 препарат тваринам в великих дозах (до 10 см ); - розфасовка, пакування, транспортування та інші виробничі процеси значно ускладнюються через великий об'єм вакцини; - обробка бактеріальних клітин сильними хімічними реактивами (трихлорцтова концентрована кислота та аміак) відбивається на якості вакцини. Відома вакцина моновалентна проти лептоспірозу тварин [9]. Суттєвим недоліком даної вакцини є те, що в умовах України перебіг лептоспірозу в господарствах не рідко ускладнюється одночасним циркулюванням декількох серогруп лептоспір. В таких випадках виникає необхідність здійснювати дворазові та триразові (в залежності від кількості циркулюючих серогруп даного збудника) щеплення проти лептоспірозу, що призводить до збільшення часу та затрат на введення препарату. В основу корисної моделі поставлена задача: - створення інактивованої концентрованої полівалентної вакцини проти лептоспірозу великої рогатої худоби, яка б відповідала етіологічній структурі лептоспірозу (даного виду тварин), яка склалась в останній час; - підвищення антигенної і імуногенної активності вакцини та зменшення імуногенної дози даного імунобіологічного препарату за рахунок удосконалення - технології його виготовлення. Поставлена задача вирішується тим, що полягає в: підвищенні імуногенної активності та розширенні антигенного спектра полівалентної вакцини, а також зменшенні імунізуючої дози вакцини за рахунок її концентрування. 1. Поставлена задача вирішується наступним шляхом: - беруть штами лептоспір, селекціоновані за ознаками максимальної імуногенної та антигенної активності, які належать до п'яти серологічних груп: ВГНКИ-1 (серогрупа Grippotyphosa), ВГНКИ-2 (серогрупа Icterohaemorrhagiae), ВГНКИ-4 (серогрупа Tarassovi), Kabura (серогрупа Hebdomadis), 493 Poland (серогрупа Sejroe), Hardjoprajtno (серогрупа Sejroe). Дані штами були відібрані, враховуючи зміни етіологічної структури, які відбулись в останній час; - вирощують штами на середовищі Кортгофа з додаванням 10 % овечої сироватки крові при 27-28°С у темному приміщенні. Для виготовлення вакцин застосовують культури із 3 накопиченням не менше 75 мільйонів лептоспір в одному см , тобто не менше 60 у полі зору мікроскопа; - кожен штам лептоспір культивують окремо, потім їх зливають в одну ємність та проводять інактивування; - інактивацію бактерій проводять розчином формаліну, його додають до культури у кількості 0,25 % до об'єму вакцини. Консервовану культуру витримують при 27-28 °C 12 год., після чого проводять мікроскопію культури в темному полі мікроскопа; 1 UA 73324 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 - з метою концентрування вакцини, суміш культур лептоспір осаджують додаванням розчину поліетиленгліколю (ПЕГ) 10-12 %, до об'єму препарату, попередньо приготувавши стерильний маточний розчин ПЕГ - 70 %-ий. Після цього вакцину енергійно змішують мішалкою 10-15 хвилин; - отриману суміш витримують 7-1 0 діб при температурі 2-5°С, для випадання осаду, надосадову рідину декантують в кількості 50 % від загальної кількості суміші; - потім суміш енергійно перемішують та проводять розфасовку препарату по флаконам при постійній роботі механічної мішалки. Вакцину виготовлену даним способом контролюють на стерильність, нешкідливість та імуногенну активність; - імуногенну активність отриманої вакцини проти лептоспірозу тварин в порівнянні з відомою вакциною прототипом перевіряють на лабораторних тваринах. З цією метою кролям масою 33,5 кг одноразово внутрішньовенно вводять попередньо відтитровану кількість лептоспір (40-50 млн. мікробних клітин). Через 25 днів у вакцинованих кролів відбирають кров і досліджують у РМА з гомологічними лептоспірами. Результати наведені в таблиці 1. 2. Вакцина проти лептоспірозу тварин полівалентна (варіант bovis) включає корпускулярні антигени відселекціонованих, інактивованих штамів лептоспір: - Leptospira interrogans штам ВГНКИ-1, серовар grippotyphosa (серогрупа Grippotyphosa); - Leptospira interrogans штам ВГНКИ-2, серовар icterohaemorrhagiae (серогрупа Icterohaemorrhagiae); - Leptospira interrogans штам ВГНКИ-4, серовар tarassovi (серогрупа Tarassovi); - Leptospira interrogans штам Kabura, серовар kabura (серогрупа Hebdomadis); - Leptospira interrogans штам 493 Poland, серовар polonica (серогрупа Sejroe); - Leptospira interrogans штам Hardjoprajtno, серовар hardjo (серогрупа Sejroe), які задепоновані в Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів 28.11.2005, реєстраційні номери надані депозитарієм 338, 354, 359, 336, 357, 356 відповідно. Інактивуюча речовина формалін, сорбент і ад'ювант поліетиленгліколь. В вакцині містяться антигени вказаних серогруп лептоспір при наступному співвідношенні: ВГНКИ-1-20 %; ВГНКИ-2-20 %; ВГНКИ-4-20 %; Kabura-20 %; 493 Poland-10 %; Hardjoprajtno-10 %. 3. Вакцина проти лептоспірозу тварин полівалентна (варіант bovis) призначена для профілактичного щеплення тварин, з метою запобігання захворювання на лептоспіроз та абортів, що пов'язані з даним захворюванням. Вакцину застосовують переважно для великої рогатої худоби та тварин, в яких діагностуються відповідні серогрупи лептоспір, що виявлені у тварин цього господарства або цієї місцевості. Даний iмyнoбioлогічний препарат застосовують у неблагополучних щодо лептоспірозу господарствах або загрозливій зоні. Вакцину вводять внутрішньом'язово з дотриманням правил асептики у дозах відповідно до віку тварин. Щеплюють тварин одноразово, а ревакцинацію здійснюють через 6 місяців одноразовим щепленням (табл. 2). Напружений імунітет у щеплених тварин з'являється через 2-3 тижні після введення препарату і триває протягом 6-ти місяців. Вираженість та тривалість імунітету залежить від фізіологічного стану щеплених тварин. В організмі щеплених тварин відбувається імунологічна перебудова, про що свідчать показники гуморального імунітету. Так, титри специфічних протилептоспірозних аглютинінів достовірно зростають після щеплення і досягають максимальних показників на 21-30 добу після вакцинації (таблиця 3). Полівалентна вакцина проти лептоспірозу тварин (варіант вovis) характеризується високою імуногенною активністю, тобто являється ефективним засобом профілактики лептоспірозу великої рогатої худоби. Даний препарат необхідний для проведення раціональної та успішної боротьби з лептоспірозною інфекцією, а також для забезпечення епізоотичного благополуччя щодо лептоспірозу серед поголів'я великої рогатої худоби на території України. Запропонована вакцина найбільш відповідає вимогам сьогоденності тому, що до її складу входять найбільш поширені серогрупи лептоспір, які реєструються в останній час серед поголів'я великої рогатої худоби на території України. Вакцина має наступні переваги перед аналогами: - містить антигени штамів лептоспір, які циркулюють на території України; 2 UA 73324 U 5 10 15 20 25 30 - зменшена імуногенна доза вакцини за рахунок удосконалення технології її виготовлення, а саме концентрування препарату; - значно полегшені такі виробничі процеси як розфасовка, пакування, транспортування за рахунок зменшення об'єму вакцини. Джерела інформації: 1. Патент № 828459. СРСР. Поливалентная вакцина ВГНКИ против лептоспироза животных и способ еѐ получения и использования / Ю. А. Малахов, Л. П. Самохвалов, А. И. Шуплико, В. С. Соловьѐва, Р. М. Алехин, В. С. Панов, Г. Ф. Денисенко, А. М. Косиков, И. Г. Серѐгин, И. А. Логинов, В. В. Шорохов, А. Н. Панин, И. М. Иванова и Г. Л. Соболева // Заяв. 02.01.79; Опубл. 23.01.83, Бюл.№3. 2. Піотрович В. А. Особливості етіологічної структури лептоспірозу великої рогатої худоби в Україні / В. А. Піотрович, О. О. Кучерявенко, Я. В. Мужицький // Ветеринарна медицина: Міжвід. темат. наук. зб. - Харків, 2006. - № 86.-0.285-289. 3. Бублій О. Ф. Серологічна діагностика та вакцинопрофілактика лептоспірозу великої рогатої худоби в господарстві "Христинівське" / Олександр Бублій // Ветеринарна медицина.2000. -№ 7. - С. 12-13. 4. Федотов В. С. Епізоотична ситуація щодо лептоспірозу в Житомирській області / Валерій Федотов, Анатолій Галайба // Ветеринарна медицина.-2000. - № 7. - С. 18-19. 5. Валовенко А. Г. Деякі eпiдeмioлогiчнi та епізоотологічні аспекти лептоспірозу в Чернігівській області /А. Г. Валовенко, Л. І. Місенко, А. І. Хондога [та ін.] // Інфекційні хвороби.2005. - № 2. - С. 99-100. 6. Качур В. Епізоотологічний моніторинг лептоспірозу сільськогосподарських тварин у Вінницькій області / Володимир Качур // Ветеринарна медицина України.-2007. - № 7. - С. 14-16. 7. Воlіn С. А. Effect of vaccination with a pentavalent leptospiral vaccine containing Leptospira interrogans serovars hardjo-bovis on type hardjobovis infection of cattle / C. A. Bolin, R. L. Zuerner, G. Trueba // Am. J. Vet. Res. - І989. - Vol. 50. - P. 2004-2008. 8. European Pharmacopoeia draft monograph; Bovine Leptospirosis vaccine (inactivated); PA/PH/Exp. T. 28. - Vol. 15.-2001. P. 1028-1032. 9. Вакцини проти лептоспірозу тварин моновалентні: ТУ У 24.4.05510830.665-2002, чинна від 22.08.2002. термін дії до 22.08.2007. - Київ, 2002.-16 с. Таблиця 1 Титри антитіл кролів у відповідь на застосування вакцини № кроля 1 2 3 4 5 Mm Sejroe (polonica) 1:1600 1:800 1:1600 1:800 1:800 1:1120  161 Hebdomadis 1:1600 1:1600 1:1600 1:800 1:800 1:1280  161 Sejroe (hardjo) 1:200 1:400 1:400 1:200 1:400 1:320  40 Tarassovi 1:400 1:800 1:1600 1:800 1:1600 1:1040  187 Icterohaemorrhagiae 1:800 1:800 1:800 1:800 1:800 1:800  0 Grippotyphosa 1:400 1:800 1:400 1:800 1:800 1:640  80 Таблиця 2 3 Вид та вік тварин 1 велика і мала рогата худоба, верблюди, коні, віслюки, мули з 2-3 місячного віку до року велика і мала рогата худоба, верблюди, коні, віслюки, мули старше 1 року й дорослим свині з 2-3 місячного віку до року свині старше 1 року й дорослим собаки, лисиці, песці з 2-3 місячного віку до 6 місяців собаки, лисиці, песці старше 6-ти місяців і дорослих норки з 2-3 місячного віку і старше 3 Дози, см вакцинація ревакцинація 2 3 3,0 3,0 5,0 5,0 3,0 5,0 1,0 2,0 1,0 3,0 5,0 2,0 2,0 1,0 UA 73324 U Таблиця 3 Динаміка титрів антитіл в сироватці крові великої рогатої худоби у відповідь на введення "Вакцини проти лептоспірозу тварин полівалентної (варіант bovis)", M±m, n=12 1:4,2±3,2 1:29,2±12,2 1:0 21 доба після вакцинації 366,7±69,7 291,7±45,3 433,3±51,1 30 діб після вакцинації 275±43,5 383,3±63,9 300±41,8 60 діб після вакцинації 166,7±37,1 141,7±24,4 266,7±46,4 180 діб після вакцинації 66,7±13,9 35,4±9,0 77,1±20,3 1:0 583,3±90,6 483,3±66,1 200±27,9 91,7±18,0 1:16,7±10,4 1:4,2±3,2 1:9,1±4,8 200,0±27,9 150±20,9 1:337,5±72,2 133,3±23,2 416,7±53,4 1:331,9±40,1 79,2±14,2 66,7±9,3 1:153,5±24,1 43,7±10,0 45,8±5,8 1:60,1±7,7 Серогрупа До щеплення Sejroe (polonica) Sejroe (hardjo) Hebdomadis Icterohaemorrhagiae Grippotyphosa Tarassovi Середній титр ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Вакцина проти лептоспірозу тварин полівалентна (варіант bovis), що містить суспензію клітин штамів Leptospira interrogans серогруп Grippotyphosa (штам ВГНКИ-1), Icterohaеmorrhagiae (штам ВГНКИ-2), Tarassovi (штам ВГНКИ-4), Hebdomadis (штам Kabura), Sejroe (штам 493 Poland та Hardjoprajtno), інактиватор, сорбент та ад’ювант поліетиленгліколь і воду, яка відрізняється тим, що з метою підвищення антигенної і імуногенної активності та розширення імуногенного спектра вакцини, вона містить антигени вказаних штамів лептоспір при наступному співвідношенні, %: ВГНКИ-1 20 ВГНКИ-2 20 ВГНКИ-4 20 Kabura 20 493 Poland 10, як інактиватор використовують формалін, а як сорбент та ад’ювант - поліетиленгліколь. Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4