Спосіб підвищення протипухлинної активності цисплатину

Реферат: Спосіб підвищення протипухлинної активності цисплатину, в якому використовується нанокомпозит "цисплатин-магнітна рідина" у концентрації за цисплатином, що відповідає дозам вільного препарату згідно з стандартними схемами хіміотерапії. UA 80767 U (12) UA 80767 U UA 80767 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель, що заявляється, належить до медико-біологічних наук, а саме до експериментальної онкології, може бути використана для підвищення протипухлинної активності групи платиновмісних препаратів. Значна побічна дія цитостатиків у процесі хіміотерапії є однією з найбільш важливих проблем сучасної онкології. Тому актуальною є розробка нових підходів для посилення протипухлинного ефекту препаратів без підвищення їх дози. Одним з перспективних напрямків розв'язання цієї проблеми може бути використання останніх досягнень нанотехнологій. На сьогодні відомо ряд методичних підходів щодо посилення протипухлинного ефекту платиновмісних препаратів, зокрема цисплатину (цис-діамінодихлороплатина): використання ліпосомної форми препарату [1], його кон'югація з полімерними наночастинками [2, 3] або трансферином [4], але всі вони не дозволяють досягти вибірковості накопичення цитостатику у пухлинних клітинах. Відомий, вибраний як найближчий аналог корисної моделі, що заявляється, спосіб посилення протипухлинного ефекту цисплатину in vitro шляхом його кон'югації з поліетиленгліколем та левуліновою кислотою [5]. Позитивним у даному способі є те, що використання кон'югатів цисплатину з поліетиленгліколем та левуліновою кислотою дозволяє посилити протипухлинний ефект цисплатину без підвищення його концентрації за рахунок використання полімерних носіїв. Основним недоліком найближчого аналогу є те, що використання у складі кон'югатів поліетиленгліколю і левулінової кислоти не дозволяє цисплатину вибірково накопичуватись у пухлинних клітинах, а також не дає можливості проконтролювати входження препарату в пухлинну клітину. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб підвищення протипухлинного ефекту цисплатину, в якому для підсилення терапевтичного ефекту було б застосовано агент, що не має істотного токсичного впливу на здорові клітини організму, має підвищену біологічну доступність порівняно зі звичайним цисплатином, так що ефект посилення терапевтичної активності протипухлинних лікарських препаратів був би більшим, ніж при застосуванні звичайного цисплатину. Поставлена задача вирішується тим, що платиновмісний препарат застосовують у вигляді нанокомпозиту "цисплатин-магнітна рідина" у концентрації за цисплатином, відповідній дозам вільного препарату згідно з стандартними схемами хіміотерапії. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак способу, що заявляється, та технічним результатом корисної моделі наступний. Нанокомпозит "цисплатин-магнітна рідина" складається зі стабілізованих олеатом натрію наночастинок Fe3O4 розміром 10-12 нм (концентрація Fe3O4 3 мг /мл), кон'югованих з цисплатином (концентрація цисплатину 350 мкг/мл) [6]. Оцінку цитотоксичного та протипухлинного ефектів даного нанокомпозиту здійснюють відповідно за показниками співвідношення живих та загиблих клітин в системі in vitro та за показником маси пухлини в системі in vivo. Для візуалізації його надходження до клітини використовують метод світлової мікроскопії (як найбільш поширений і доступний у рутинній клінічній лабораторній практиці) завдяки специфічного забарвлення наночастинок заліза (модифікована методика забарвлення за Ліллі [7]). Схема застосування способу, що заявляється 1. У поживне середовище, в якому культивуються клітини, нанокомпозит "цисплатинмагнітна рідина" додають у концентрації (за цисплатином), яка відповідає ІС 50 (концентрація препарату, що призводить до загибелі 50 % клітин) вільної форми препарату. Через 48 год. інкубації цитотоксичний ефект нанокомпозиту оцінюють спектрофотометрично з використанням диметилтриетилтетразолію броміду (МТТ-тест). Крім того, виготовляють цитологічні препарати, які фарбують за модифікованою методикою Ліллі для виявлення за допомогою світлової мікроскопії наночастинок магнітної рідини, які надійшли до клітини. 2. В умовах in vivo нанокомпозит "цисплатин-магнітна рідина" вводять тваринам внутрішньовенно 4 рази через одну добу у розрахунку (за цисплатином) 1,2 мг цисплатину/кг маси тварини на одне введення. Через 24 години після останнього введення у тварин оперативним шляхом вилучають пухлину, визначають її масу і розраховують відсоток гальмування росту шляхом порівняння з пухлинами тварин контрольної групи. Після цього готують гістологічні препарати, які фарбують за модифікованою методикою Ліллі для подальшої оцінки за допомогою світлової мікроскопії. Для визначення побічного ефекту (нефро- та гепатотоксичність) аналіз сироватки крові тварин проводять на біохімічному аналізаторі: визначають рівень сечовини, рівень креатиніну, рівень загального білірубіну (ЗБ), активність аланінамінотрансферази (АЛТ), 1 UA 80767 U 5 аспартатамінотрансферази (ACT), лужної фосфатази (ЛФ), гамма-глютамілтранспептидази (ГГТ). Приклади практичного застосування способу in vitro та in vivo Приклад 1. Дослідження протипухлинної активності нанокомпозиту "цисплатин-магнітна рідина" in vitro на клітинах раку молочної залози людини лінії MCF-7. Доза IC50 для цисплатину для цих клітин складала 2 мкг/мл. Результати досліджень наведені в таблиці 1. Таблиця 1 Цитотоксична активність цисплатину та нанокомпозиту "цисплатин-магнітна рідина" щодо клітин раку молочної залози людини лінії MCF-7 Показник 15 Нанокомпозит "цисплатин-магнітна рідина" Відсоток мертвих клітин при дії препаратів в концентрації 2 мкг/мл за цисплатином (МТТтест), % 10 Цисплатин 50,3±1,8 68,2±2,0 Як видно з даних таблиці 1, при застосуванні нанокомпозиту "цисплатин-магнітна рідина" цитотоксична активність щодо злоякісних клітин вища порівняно зі звичайним цисплатинам (р