Фармацевтична композиція, яка містить цинк-гіалуронановий комплекс, призначена для лікування розсіяного склерозу

1. Застосування цинк-гіалуронанового комплексу для виробництва лікарського засобу, призначеного для лікування розсіяного склерозу. C2 2 UA 1 3 83516 4 ланок, що повторюються, дисахариду Nможе бути пов'язана з деякими фізіологічними ацетилглкжозамінглюкуронової кислоти, які відпопроцесами. Прикладами таких макромолекул мовідають формулі (І). жуть слугувати протеоглікани (аггрекан, версикан, бревікан та ін.), що перебувають у позаклітинному матриксі, головна функція яких полягає у заповненні простору між клітинами та полегшенні транспорту речовин. Макромолекули, що взаємодіють з НА, можуть являти собою внутрішньоклітинні трансмембранні білки (CD44, RHAMM), а також рецепторні білки, присутні у цитоплазмі (C1q , Р-32, TSG-6 та ін.). НА, який міститься у вказаних вище білках, відіграє важливу роль у деяких процесах керування на клітинному рівні або рівні організму. Розмір молекули та концентрація НА у водноУ НА моносахариди зв'язані за типом b(1®3), му розчині, якщо торкатися фізичних властивостоді як дисахаридні ланки зв'язані за типом тей, мають значний вплив на його біологічну дію. b(1®4), у результаті чого утворюється лінійний Так, залежно від розміру молекули НА може мати полісахарид зі зв'язками, що чергуються, b(1®3) і як позитивний, так і негативний вплив на один і той самий клітинний процес. Аналогічна зміна ефекту b(1®4). спостерігалася при зміні концентрації НА у розчині. У живих організмах НА зустрічається у вигляді По-видимому, бажаний оптимальний ефект може солі, катіоном якої звичайно слугує натрій, який має молекулярну масу в інтервалі від 10-20кДа бути досягн уто при одночасному врахуванні обох параметрів [Е.А. Balazs, The Chemistry, Biology and (кілодальтонів) до декількох тисяч кДа. Наявність Medical Applications of Hialuronan and its Derivatives карбоксильної групи у глюкуроновому фрагменті (ed. T.C. Laurent) pp.185-204. Portland Press, НА, карбонільних та аміногруп у N-ацетильному London (1998)]. фрагменті глюкозаміну, а також присутність гідроксильних груп сприяє утворенню декількох воднеОскільки НА бере участь у згаданих вище фізіологічних процесах, він може бути успішно викових містків. Внаслідок наявності внутрішньомолеристаний у деяких галузях терапії (загоєння ран, кулярних водневих зв'язків і водневих містків, лікування хронічних запалень, очна хірургія). утворених у результаті взаємодії між НА і водою, Галузь використання НА у лікуванні людей, присутньою у біологічних системах, НА має складну тримірну структур у [C.L. Hew et al., Eur. J. окрім вказаних вище застосувань, може бути розширена хімічною модифікацією структури. У цьому Biochem, 203, 33-42 (1992); Q. Liu et al., J. Am. відношенні спостерігаються дві основні тенденції. Chem. Soc 118, 12276-12286, (1996)]. Внаслідок Відповідно до однієї з них, між двома віддаленими виключної здатності НА до зв'язування води навіть положеннями у молекулі НА встановлюються між відносно розведені водні розчини НА мають високу в'язкість. Реологічні властивості водних розчимолекулярні зв'язки із використанням аліфатичної сполуки (звичайно дигідразиду), що призводять до нів НА дуже залежать від розміру молекули; наформування гідрогелю. Утворення поперечних приклад, 1% водний розчин НА з розміром зв'язків викликає підвищення в'язкопружності хімімолекул 1000кДа має в'язкість 3000мПа, тоді як за такої самої концентрації НА з розміром молекули чно модифікованого НА, що призводить до підви4000кДа розчин має в'язкість 400000мПа [Н.В. Wik щення опірності процесам деградації, які протікають в організмі. Це йде на користь пацієнтам при and О. Wik: Rheology of Hialuronan, The Chemistry, лікуванні ревматоїдного артриту, спрямованому на Biology and Medical Applications of Hialuronan and відновлення синовіальної рідини, або при післяits Derivatives (ed. T.C. Laurent) pp.25-32. Portland Press, London, (1988)]. Таким чином, в'язкість і операційному утворенні спайок. Згідно з іншою розмір молекули є двома найважливішими фізичважливою стратегією активні агенти, які важко абсорбуються або повинні спеціально доставлятись ними характеристиками НА. до місця дії, хімічно зв'язують з НА (наприклад, Як основний компонент позаклітинної матриці таксол, пілокарпін, інсулін). У цих випадках НА НА присутній в усі х частинах організму. Деякі органи і тканини (сполучні тканини, шкіра, синовіальвикликає поліпшене усмоктування активних агенна рідина, склоподібне тіло ока і стінки кровоностів, зв'язаних з НА, та сприяє конкретній доставці матеріалу до мішені, відповідно. них судин) містять підвищені кількості НА. Комплекси НА з цинком і кобальтом описані у Впродовж тривалого часу передбачали, що біоло[ЕР 413016 (Burger et al., 1989)] і один з таких комгічна роль НА є похідною його фізичних властивостей. Так, наприклад через свою реологічну приплексів, цинк-НА, використовують як активний роду НА може забезпечувати захист суглобів. агент у сполуках для лікування ран. Подальші дослідження активного агента показали, що у присуЗавдяки виключній здатності зв'язувати воду НА тності цинку можуть бути розширені можливості може регулювати водний баланс, впливаючи на терапевтичного застосування, оскільки цинковий осмотичний тиск і здійснюючи супротив руху рідини. Крім цього, НА відіграє важливу роль у заповкомплекс виявляє нові або більш виражені ефекти ненні інтерстиціальної тканини та захищає клітини порівняно із сіллю натрій-НА (J. Illes et al., Acta Pharm. Hung. 72, 15-24 (2002)). Серед іншого такі від різних фізичних впливів. Нещодавно проведені ефекти становлять підвищену антиоксидантну дослідження показали, що взаємодія між НА і деактивність комплексу цинк-НА (Gy. Т. Balogh et al., якими макромолекулами, присутніми в організмі, 5 83516 6 Arch. Biochem. Biophys. 410, 76-82, (2003)); інгібуні ефекти. У разі застосування композицій, які місвальна дія на ферменти, що пошкоджують тканини тять інтерферон бета-1, можуть виявлятися симп(матричні металопротеїнази, особливо ММР-9), які томи, схожі на захворювання на грип, шкірні виробляються у більшій кількості інвазивними кліреакції та локальні болі як наслідок підшкірного тинами, в той час як сіль натрій-НА не має такого введення, крім цього можуть виявлятися порушенефекту [WO 00/53194, Illes et al. 1999]. Гастрозахиня формули крові, підвищений рівень ферментів сна дія (при лікуванні язви дванадцятипалої кишпечінки та зміни особистості (Eber et al., Lancet ки) комплексу цинк-НА описана в опублікованій 352, 1498-1504, (1998); Jacobs et al., Mult. Scler. 1, міжнародній заявці [WO 98/48815], протимікробний 118-135, (1995)). У разі співполімеру-1 найхаракефект активного агента цинк-НА описаний в опубтерніші побічні ефекти знову являють собою шкірні лікованій міжнародній заявці [WO 98/10773]. реакції і місцевий біль, які виявляються як насліРозсіяний склероз (MS) є хронічним аутоімундок підшкірного введення медикаменту, крім цього ним захворюванням центральної нервової системоже спостерігатись почервоніння обличчя, стисми. Таке захворювання вперше виявляється у віці кування грудної клітини, прискорене серцебиття та 15-40 років, причому жінки хворіють удвічі часті ше утруднене дихання (Johnson et al., Neurology 45, (Duquete et all., Can. J. Neurol. Sci. 19, 466-71 1268-1276, (1995); Bornstein et al., N. Engl. J. Med. (1992)). Захворювання має складну і в деяких від317, 408-414 (1987)). Хоча ці лікарські засоби біношеннях неясну патологію. Хоча є точні докази льшою або меншою мірою зменшують запальні генетичної сприйнятливості та порушення імунопроцеси, що протікають у CNS (при первинній фологічних процесів, роль фактору навколишнього рмі захворювання), вони не мають впливу на розсередовища (наприклад, деякі вірусні інфекції) виток хвороби (Clegg, Health Technol. Assess. 4(9) залишається неясною (Stipindonk et al., J. (200)). Neuroimmunol. 105, 46-57, (2000)). Клінічні форми Єдиною адекватною та широко використовухвороби можуть сильно відрізнятись, у більшості ваною доступною моделлю доклінічних дослівипадків захворювання відноситься до рецедивноджень розсіяного склерозу є експериментальний ремісійного типу. MS, нейродегенеративне захвоаутоімунний енцефаломієліт (ЕАЕ) (Mokhatarian et рювання, яке виявляється у порушеннях сенсорal., Nature 309, 356-358, (1984); Raine et al., Lab. них і локомоторних органів, а також вегетативної Invest, 31, 369-380, (1974)), запальне захворюваннервової системи, розвивається повільно, підриня центральної нервової системи, яке передають ває розумові та емоційні здатності і в кінцевому CD4+ Т-лімфоцити. Хоча клінічна складність модерахунку призводить до важкої інвалідності. Гістолі є помірною порівняно із досліджуваним захвопатологія спочатку показує вогнища запалення рюванням, її використання є неминучим при процентральної нервової системи, пізніше виявляведенні досліджень, спрямованих на лікування ються симптоми димієлінізації та погіршення аксоMS. Доклінічні випробовування співполімеру-1 ну (Ewing et al., Immunol. Cell Biol. 76, 47-54, (Сорахоnе) та інтерферону бета-1 вже схвалені (1998)). Тривалі клінічні симптоми викликає деградля лікування людей, як і випробування нових лідація мієлінової оболонки та погіршення стану карських засобів, що перебувають у процесі розолігодендроциту, що призводить до численного робки, які проводили/проводять із використанням пошкодження нервів (Fu et al., Brain 121, 103-113, такої моделі (Popovic et al., Ann. Neurol. 51, 215(1998)). Згідно із сучасним станом медичної науки 223. (2001); Stanislaus et al., Neurosci. Lett. 333, MS є невиліковним захворюванням. У звичайній 167-170, (2002)). З декількох моделей ЕАЕ хронічмедичній практиці використовують неспецифічні ний рецедивно-ремісійний тип (CR ЕАЕ) визнаний імуносупресорні речовини (кортикостероїди, цитонайбільш придатним як для тестування демієліністатичні агенти) або більш специфічні сполуки, які зації, ознаки MS, так і для досліджування імунолозмінюють перебіг хвороби (бета-інтерферони, ацегічних процесів. У тому, що стосується клінічного тат глатирамеру). Однак, застосовність вказаних перебігу захворювання, CR ЕАЕ є найбільш порівфармацевтичних речовин обмежена низькою ефенюваним із MS (Wekerle et al., Ann. Neurol. 36, 47ктивністю та серйозними побічними ефектами. 50, (1994)). З цієї причини в експериментах, проДо цього часу на ринку є одинадцять ліків, які ведених авторами винаходу, досліджували CR здатні змінювати перебіг хвороби, і проведені кліЕАЕ, викликаний дією мієлінолігодендроцитглікопнічні випробування із використанням 24 композиротеїну (MOG) на мишей (Amor et al., J. Immunol. цій. Дві найбільш прогресивні композиції, тобто 153, 4349-4356, (1994)). В середині 1960p. дію наСорахоnе (співполімер-1 або ацетат глатирамеру) трієвої солі гіалуронану досліджувала група Руі Rebif або Avonex (інтерферон бета 1-а), а також мунських вчених на ЕАЕ моделі. Вони виявили, що інтерферон бета-1b, корисні лише для однієї форвнутрішньом'язове введення Na-HA не інгібує, а у ми (так звана доброякісна, або рецедивнодеяких випадках сприяє розвиткові ЕАЕ у кроликів ремісійна форма) захворювання - інші форми хво(Szabo et al., (1966) Patol. Fi ziol. Eksp. Ter. 10(5), роби являють собою первинну або вторинну про41-44; Miskolczy et al., (1965) Stud. Cercet. Neurol. гресуючу форму, а також злоякісний MS – (Otten et 10(5), 493-497). Дослідження ЕАЕ моделі, провеal., Comparison of drug treatments for multiple дені із внутрішньоочеревинним або пероральним sclerosis. Ottawa: Canadian Coordinating Office for введенням різних цинкових солей (Schiffer et al., Health Technology Assesment, (1998); Health (1996) J. Trace Elem. Exp. Med. 9(1), 1-9.; Penkova Technol. Assess. 2(4) (1998)), і вони здатні знижуand Hidalgo (2000) Glia 32(3), 247-263), також не вати частоту рецидивів лише на 20-30% (Khan et мали успіху. al., CNS Drug 16(8), 563-578, (2002)). Крім цього, В опублікованій міжнародній патентній заявці обидві композиції виявляють деякі небажані побіч[WO 97/11710] описані тести із впливу на імуноло 7 83516 8 гічні процеси; у вказаних випробуваннях викорис800-1200кДа, і фармацевтично прийнятний носій товували Na-гіалуронат, гіалуронову кислоту та їх і/або добавку. кон'югат з різною молекулярною масою. Зокрема, Інша мета винаходу полягає у способі одерпроводили дослідження проліферації мишачих Тжання фармацевтичної композиції, який вміщує в клітин, а також залежності ефекту інгібування реасебе утворення суміші, що містить цинккції трансплантат проти хазяїна, в яких використогіалуронановий комплекс як активний компонент у вували трансплантат серцевої м'язової тканини, суміші з носієм і/або добавкою, яку традиційно взятий у донора іншого різновиду мишей. Хоча в використовують у медичній практиці, для одерописі була відзначена можливість використання жання композицій. Краща фармацевтична компогіалуронової кислоти та Na-гіалуронату у лікуванні зиція являє собою розчин, бажано розчин для ін'єрозсіяного склерозу, немає експериментальних кцій або вливань. даних, що підтверджують цю гіпотезу. Автори виЩе одна мета винаходу полягає у використаннаходу також провели випробування асоціату, ні цинк-гіалуронанового комплексу для одержання одержаного з гіалуронової кислоти та натрію (Naмедикаменту, призначеного для лікування розсіягіалуронан), з метою перевірки наведеного вище ного склерозу. положення, однак, як показано у таблиці 4 цієї заЧергова мета винаходу полягає у способі лікуявки, будь-якого впливу на ЕАЕ модель, специфівання розсіяного склерозу, згідно з яким терапевчну для MS, виявлено не було. тично ефективну кількість цинк-гіалуронанового Оскільки, з одного боку, відомі лікарські засоби комплексу або композиції, яка містить такий коммають шкідливі побічні ефекти, a Na-HA сіль не плекс, застосовує пацієнт, який потребує лікуванмає ефективності, а, з іншого боку, Zn-HA комня. Лікування може здійснюватись, наприклад, плекс дав результати, що подають надію у різних шляхом внутрішньовенного застосування із викогалузях терапії, мета цього винаходу полягала у ристанням цинк-гіалуронанового комплексу з мовипробуванні Zn-HA комплексу в лікуванні MS при лекулярною масою 800-1200кДа. використанні найбільш порівнюваної ЕАЕ тваринВ експериментах, проведених авторами винаної моделі. ходу, різні дози Zn-HA комплексів різної молекуляСуть винаходу рної маси застосовували підшкірно (s.c.) на ЕАЕ Автори винаходу несподівано виявили, що, моделі і тварин тестували на наявність інгібуваль2+ хоча Na-HA і Zn окремо виявились неефективного ефекту через 5-22 дні після індукування ЕАЕ. ними, різні дози Zn-HA з різними молекулярними Досліджували Zn-HA комплекси з чотирма різними масами інгібували ЕАЕ, індукований у модельних середніми молекулярними масами (10, 50, 200 і тварин. В оптимальних умовах було досягнуто 800-1200кДа (остання доза нижче позначена як значного ефекту. HMW)) у трьох різних дозуваннях (1, 10 і 50мг/кг) з Відповідно, винахід відноситься до фармацевметою визначення, яка молекулярна маса і яке тичної композиції для лікування розсіяного склеродозування Zn-HA забезпечують оптимальний зу, яка містить як активний інгредієнт цинкефект на вибраному типі ЕАЕ моделі. Одержані гіалуронановий комплекс, переважно цинкрезультати подані нижче у таблиці 1. гіалуронановий комплекс з молекулярною масою Таблиця 1 ZN-HA комплекси з різною MW 10кДа Zn-HA 50кДа Zn-HA 200кДа Zn-HA HMW Zn-HA Результати випробування при використанні 3-х різних доз 1мг/кг 10мг/кі 50мг/кг Інгібування % № тесту Інгібування % № тесту Інгібування % № тесту 3 6 3 -4,2±12,5 32,8±11,7 43,8±23,9 12,7 2 6 33,2 1 34,8±16,6 3 6 3 -2,2±53,2 25,2±11,3 24,2±21,9 24,5 2 9 32,9 1 41,3±7,1 З урахуванням ступеню інгібування та стандартного відхилення від середнього значення найбільш ефективним є HMW Zn-HA комплекс при дозі 10мг/кг (% інгібування 41,3±7,1). Після цього проводили дослідження можливого ефекту HMW Zn-H A (10мг/кг у 200мкл фізіологічного розчину, підшкірно) на час появи клінічних симптомів. Тести проводили на групах мишей (n=6-10 мишей у групі) із використанням таких двох типів лікування: (і) профілактичне лікування, при якому застосування препарату проводять у період з 5 по 22 день після інокулювання MOG, або в одиничному випадку в період з 9-10 дня по 28 день після інокулювання (цей випадок позначений у таблицях 2 і 3 символом #); та (іі) терапевтичне лікування, при якому Zn-HA застосовують у період з 13 по 28 день після індукування ЕАЕ (позначено у таблицях 2 і 3 символом *). З метою вияснення ефективності проводили 9 незалежних тестів, результати яких подані у таблицях 2 і 3. Миші щоденно одержували підшкірну ін'єкцію 10мг/кг HMW Zn-H A, а клінічні дані одержували у період з 10 по 28 день і з 5 по 22 день, відповідно, після індукування ЕАЕ. Результати розраховували із середніх щоденних клінічних даних з одержанням підсумкових клінічних показників (ASC). 9 83516 10 Таблиця 2 Серійний № експерименту n 1* 2 3# 4 Контроль 10 8 10 7 5 6 7 8 9 7 9 6 9 9 Час проявлення хвороби, який обчислюється Захворюваність (%) з дня зараження Лікування Контроль Лікування Контроль Лікування 7 13 20 100,0 85,7 10 11 10 100,0 40,0 8 11 13 70,0 75,0 7 13 13 85,7 71,4 8 8 6 10 15 11 15 17 15 13 15 16 17 16 16 85,7 100,0 83,3 90,0 77,7 37,5 75,0 50,0 90,0 93,6 ACS (10-28) Контроль Лікування 24,2 12,6 23,7 10,4 21,8 14,9 26,6 18,3 ACS (5-22) 15,2 2,6 19,4 10,7 12,0 6,8 20,2 18,9 18,4 13,3 Таблиця 3 ASC Час проявлення хвороби, обчислюваний з дня зараження Захворюваність (%) Введена речовина Носій (n=75) (СередHMW Zn-HA (n=79) Інгібування, % нє±стандартне відхи- (Середнє±стандартне лення) відхилення) 41,3* 20,2±21,5 12,1±1,7 13,1±0,5 14,9±0,9 88,0±3,5 68,6±7,0 22,1# n=число тварин, що беруть участь в експерименті носій: фізіологічний розчин Із результатів, поданих у таблицях 2 і 3, випливає, що при підшкірному введенні 10мг/кг HMW Zn-HA досягається значне інгібування тяжкості клінічних симптомів індукованої ЕАЕ (41,3±7,1% інгібування та ASC, що дорівнює 12,1. були одержані при р