Застосування водорозчинного харчового фосфату для приготування інгібітора пребіотичної дії харчових протеїнів на бактеріальну мікрофлору порожнини рота м’ясоїдних домашніх тварин

1. Застосування водорозчинного харчового фосфату, вибраного з пірофосфату натрію та триполіфосфату натрію, для приготування інгібітора пребіотичної дії харчових протеїнів на бактеріаль C2 2 (19) 1 3 87505 4 для зменшення надмірного розвитку бактерійної на мікрофлору ("pro" означає "для" і "bios" означає мікрофлори порожнини рота собак і кішок до того, "життя" на відміну від "антибіотичний"). Слід відміяк вона викличе патологічні порушення. тити, що стерильна слина, що продукується слинними залозами, не змогла б стати середовищем Автором несподіваним чином було виявлено, розвитку і поширення бактерійної мікрофлори без що харчові фосфати здатні інгібувати пребіотичну присутності харчових протеїнів. дію харчових протеїнів на мікрофлору порожнини У тексті даного винаходу терміни "пребіотичрота м'ясоїдних домашніх тварин. Істотне те, що ний" або "пробіотичний" застосовуються недифетакі фосфати повинні бути водорозчинними для ренційовано для позначення дії, що сприяє росту того, щоб бути активними в слині тварин. Таким і/або метаболічній діяльності мікроорганізмів. чином, переважним представляється застосуванРеалізація заходів по гігієні порожнини рота ня пірофосфатів або поліфосфатів натрію. Ввесобак і кішок пов'язана в звичайних умовах з труддення фосфату може виготовлятися у вигляді нощами. Полоскання рота дезинфікуючими засоокремої речовини або з кормом, або з будь-яким бами, вискоблювання і чищення зубів щіткою із ветеринарним препаратом або без нього. Принайзубною пастою після їди не є прийнятою практимні, фахівець в даній галузі техніки зможе ввести кою на відміну від людини. З іншого боку, якість призначений для застосування фосфат в кількості, кормів для собак і кішок постійно підвищується, як достатній для того, щоб він виявлявся в слині в кількості щонайменше 0,50%. і частота годування, при цьому використовують як Згідно з патентом WO 93/25087 Університету корми "домашнього приготування", так і корми, що Індіани фосфати, зокрема, гексаметафосфат нає в продажу, які називаються "petfoods" (готовий трію, були вже застосовані як секвестранти і агенкорм). Корми можуть бути сухими, вологими або ти, розкладають, з метою перешкоджання утвозволоженими, основними і додатковими, що викоренню кристалів сполук кальцію, які утворюють ристовуються як ласощі. Яке б не було походжензубний камінь у домашніх тварин. Однак в попереня або форма цих продуктів, всі вони являють содньому рівні техніки не була описана інгібуюча дія бою протеїни тваринного або рослинного фосфатів відносно пребіотичної дії харчових пропоходження, необхідні, для харчування тварин, теїнів на бактерійну мікрофлору порожнини рота. але що залишаються в деякій кількості в порожниДаний винахід стосується, таким чином, споні рота тварини, сприяючи розвитку бактерійної собу інгібування пребіотичної дії харчових протеїмікрофлори. нів на бактерійну мікрофлору порожнини рота м'яЗвичайний розвиток мікробної флори може соїдних домашніх тварин, причому згаданий спосіб приводити до небажаних проявів естетичного хаполягає у введенні м'ясоїдним домашнім тваринрактеру, таких як короткочасний неприємний запах з порожнини рота, який потрібно контролювати. ним інгібітору пребіотичної дії, причому інгібітор При надмірному розвитку такої бактерійної мімістить водорозчинний харчовий фосфат. Даний спосіб інгібування не являє собою текрофлори в порожнині рота тваринни-"хазяїна" можуть виявлятися численні добре відомі тваринрапевтичний спосіб, оскільки мова йде про те, щоб никам і ветеринарам розлади, оскільки у собак і управляти звичайним розвитком бактерійної флокішок є складки на яснах, що створюють "ясенні ри. Даний спосіб інгібування може мати терапевкишені", зокрема, такі розлади як: тичну спрямованість у разі впливу на надмірний - галітоз (поганий запах з порожнини рота); - гінгівіт (запалення ясен); розвиток бактерійної флори. - парадонтит або періодонтит (запалення паЗа даним винаходом інгібітор може являти сородонту, тобто сукупності тканин, які підтримують і бою водорозчинний харчовий фосфат у вигляді прикріпляють зуби); окремої речовини або суміш водорозчинних хар- фарингіт (запалення слизової оболонки глотчових фосфатів. ки); Водорозчинні харчові фосфати добре відомі - і т. д. фахівцям в даній галузі техніки, зокрема, фосфаТакий надмірний, патологічний розвиток пов'яти, дозволені Директивою 70/524/СЕЕ, опубліковазаний з порушенням управління мікробною флоною в Journal Officie! de l'Union Europeenne рою, розвиток якої відрізняється від звичайного, 25.02.2004. що викликає просто небажані прояви естетичного Водорозчинний фосфат переважно не являє характеру. собою гексаметафосфат натрію, а вибраний переТакі порушення можна вилікувати застосуванважно з пірофосфатів і поліфосфатів. ням антимікробних агентів [Trevor Chin Quee, TriЗа переважним способом здійснення винаходу харчовий фосфат застосовують в такій кількості, anthi Roussou and E.C.S. Chan, "In vitro activity of шоб він виявлявся в слині тварин в кількості щоRodogyl against putative periodontopathic bacteria", найменше 0,5%. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol. 24, № За даним винаходом харчовий фосфат може 3, 1983, pp. 445-447; K.S. Kornman, B. Siegrist, W.A. бути введений тваринам у вигляді окремої речоSoskolne and K. Nuki, "The predominant cultivable вини або в суміші з кормом для м'ясоїдних домашsubgingival flora of beagle dogs following ligature ніх тварин. placement and metronidazole therapy", Journal of Використовують корми "домашнього приготуPeriodontal Research, Vol. 16, 1981, pp. 251-258]. вання" або сухі, вологі, зволожені корми, що вироПроте, таке лікування антимікробними агентабляються промисловим способом, додаткові корми ми часто є запізнілим, оскільки його призначають або ласощі. тільки тоді, коли порушення вже очевидні. Отже, представляється істотним знаходження засобів 5 87505 6 того, щоб було можливо одночасно вирощувати Вміст харчового фосфату в доповнюваному бактерійну аеробну мікрофлору і бактерійну анаекормі переважно перевищує або дорівнює 1% мас, переважно знаходиться в інтервалі від 1% до 2% робну мікрофлору. Така сукупність згодом буде мас. називатися "штучною слиною". Розподіляють штучну слину по пробірках з За даним винаходом інгібітор може бути додарозрахунку 20мл на пробірку. У кожну пробірку ний до корму безпосередньо перед вживанням вносять або не вносять протеїн в присутності або або бути попередньо домішаним. за відсутності фосфату, що підлягає випробуванЗа іншим способом здійснення винаходу інгібіню. Кожне випробування проводять в двох пробіртор пребіотичної дії вводять м'ясоїдним домашнім ках. тваринам з ветеринарним препаратом або без нього. Серію автоклавують при 110°С протягом 15 Наведені далі приклади, що не є вичерпними і хвилин. обмежувальними, дозволяють проілюструвати Потім кожну пробірку засівають 0,2мл посівноданий винахід. го матеріалу, описаного раніше. Серію інкубують в У всіх випробуваннях бактерійну мікрофлору шафі при 37°С без перемішування. порожнини рота відбирали, зберігали в консервуПісля закінчення 24 або 48, або 72 годин інкувальному середовищі, потім культивували в штучбації роблять підрахунок аеробної і анаеробної ній слині за наступними правилами. флори способами, описаними раніше. Відбір бактерійної мікрофлори і підготовка поЗа результат кожного випробування приймасівного матеріалу ють середнє значення підрахунків в двох пробірДвом самцям "європейської" раси кішки з маках, виражене як Log10 КУО (колонієутворювальні сою тіла приблизно 5,50кг проводять анестезію одиниці) в мл штучної слини. 0,3мл розчину медетомідину з концентрацією Дослід 1 0,085г/100мл (Domitor, ND) і 0,26мл розчину кетаУ випробуваннях вводили борошно зневоднеміну з концентрацією 10г/1000мл (Imalgene 1000, ного м'яса домашньої птиці (протеїн DSH виробND). ництва компанії Societe des Proteines Industrielles, У кожної імобілізованої таким чином тварини з 56230 Беррік, Франція, із загальним вмістом азодотриманням стерильності відбирають піпеткою товмісних речовин 70%) в штучну слину у кількості слину і проводить зіскоб з основи зубів, ясен і 0; 0,5; 1,0 і 1,5%, відповідно. ясенних кишень тупим боком стерильного скальЗ таблиці 1 видно, що за відсутності протешу пеля. ріст аеробної і анаеробної бактерійної мікрофлори Всі відібрані проби переносять і ретельно розтільки в штучній слині відсутній або дуже утрудневодять в 100мл стерильного консервувального ний. Але в присутності протеїну, навіть в такій масередовища (тіогліколеве середовище з резазурилій кількості, як 0,5%, ріст як аеробної, так і анаеном Biokar з додаванням 25% гліцерину). Консерробної мікрофлори має "вибуховий" характер при вувальне середовище, що містить відібрані проби, 24 годинах інкубації. переносять в кріопробірки (Cryobilles, ND de AES). Цей дослід ясно демонструє пребіотичну дію Потім пробірки інкубують протягом 6 годин в шафі такого харчового протеїну на бактерійну мікропри 37°С в керамічній посудині в атмосфері CO2 флору порожнини рота. перед заморожуванням для подальшого застосуДослід 2 вання. У цьому досліді досліджують інгібування преНадалі кожну пробірку розморожують при кімбіотичної дії сухого гідролізату протеїну домашньої натній температурі, потім інкубують протягом 12 птиці (протеїн МР9007 виробництва компанії Soгодин при 37°С в керамічній посудині в атмосфері ciete des Proteines Industrielles із загальним вмісСО2. Підрахунок числа аеробних і анаеробних бактом азотовмісних речовин 72,5%), введеного в терій проводять відповідно до описаних далі споштучну слину в кількості 1%, в присутності тринатсобів. Далі вміст кожної пробірки розводять стерирійфосфату в кількості 5 або 10%. льним консервувальним середовищем для З таблиці 2 видно, що пребіотична дія протеїотримання посівного матеріалу з чисельністю 5000 ну МР9007 повністю інгібується тринатрійфосфа(3,70 Log10) ревівіфікованих мікробів в 0,2мл. том, введеним в кількості 10%, як відносно аероАеробну мікрофлору культивують в триптикабної мікрофлори, так і відносно анаеробної зосоєвому середовищі (Biokar), що інкубується при мікрофлори. Інгібуюча дія тринатрійфосфату в кількості 5% 37°С протягом 48 годин, потім роблять підрахунок. при 24 годинах інкубації хоч і не виявляється поАнаеробну мікрофлору культивують в середовною, але також дуже значна. вищі Шедлера (Biokar) з додаванням 5% стерильДослід 3 ної дефібринованої баранячої крові, що інкубуєтьУ цьому досліді також випробовують тринатся при 37°С в атмосфері СО2 в керамічній посудині рійфосфат, але введений в кількості 0,5%, відноспротягом 48 годин, потім роблять підрахунок. но пребіотичної дії протеїну МР9007, введеного в Штучну лужну слину готують по таблиці 31 штучну слину в кількості 1%. З урахуванням попесторінки 244 праці Biological Handbooks - Metaboреднього досліду випробування припиняють через lism, складеної під редакцією Philip L. Altaian і 24 години інкубації. Dorothy S. Dittmer, опублікованої Federation of З таблиці 3 видно, що тринатрійфосфат, ввеAmerican Societies for Experimental Biology в 1968 дений в кількості 0,5%, зменшує також пребіотичну р. дію протеїну МР9007 як відносно аеробної мікроТака лужна слина містить L-цистеїн з розрахунку 0,5г/л для пониження її редокс-потенціалу для 7 87505 8 повністю пребіотичну дію застосованого рослиннофлори (7,75 проти 8,16 Log10), так і відносно анаего протеїну. робної мікрофлори (7,75 проти 8,54 Log10). Дослід 6 Дослід 4 У цьому випробуванні досліджували інгібуючу Випробування полягає в дослідженні інгібуюдію триполіфосфату натрію, введеного в кількості чої дії триполіфосфату натрію, введеного в кілько0; 0,5; 1; 1,5 і 2%, відносно пребіотичної дії зневості 0; 0,5; 1; 1,5 і 2%, відносно пребіотичної дії продненого гідролізату сої (Nurish 1500 IP, ND de Soтеїну МР9007, введеного в штучну слину в lea Company, із загальним вмістом азотовмісних кількості 1%. речовин 83%), введеного в штучну слину в кількоЗ таблиці 4 видно, що триполіфосфат натрію сті 0,5 і 1%. інгібує значною мірою пребіотичну дію протеїну. Це випробування проводили з мікрофлорою Дослід 5 порожнини рота, взятою у собаки. У цьому випробуванні досліджують інгібуючу Результати, представлені в таблиці 6, показудію триполіфосфату натрію, введеного в кількості 0; 0,5; 1; 1,5 і 2%, відносно пребіотичної дії зневоють, що триполіфосфат натрію інгібує пребіотичну дію гідролізату сої на аеробну і анаеробну мікродненого гідролізату сої (Nurish 1500 IP, ND de Soфлору порожнини рота собаки. Інгібуюча дія особlea Company, Із загальним вмістом азотовмісних ливо значна при введенні триполіфосфату в кільречовин 83%), введеного в штучну слину в кількокості, що дорівнює або перевищує 1%. сті 1%. З таблиці 5 видно, що триполіфосфат натрію незалежно від введеної кількості інгібує практично Таблиця 1 Пребіотична дія протеїну DSH на мікрофлору порожнини рота (КУО/мл, Log10 середнього значення у випробуванні в двох пробірках) Протеїн DSH 0% 0,5% 1,0% 1,5% Мікрофлора Аеробна Анаеробна Аеробна Анаеробна Аеробна Анаеробна Аеробна Анаеробна 0 годин 3,70 3,70 3,70 3,70 3,70 3,70 3,70 3,70 24 години