Вакцина проти мікоплазми та вірусу prrs

1. Застосування імуногенної дози імуногенного матеріалу Mycoplasma hyopneumoniae та імуногенної дози живого атенуйованого вірусу PRRS для виробництва вакцини для комбінованого введення вакцини проти Mycoplasma hyopneumoniae та вакцини проти PRRSV свиням, яких первинно вакцинували вакциною проти Mycoplasma hyopneumoniae. 2. Застосування за п.1, яке відрізняється тим, що згаданий імуногенний матеріал Mycoplasma 2 (19) 1 3 Цей винахід відноситься до застосування імуногенної дози імуногенного матеріалу Mycoplasma hyopneumoniae та імуногенної дози живого атенуйованого вірусу PRRS для виробництва вакцини, а також до вакцинного набору, який включає таку вакцину. Мікоплазмова пневмонія свиней, що спричиняється бактеріальним патогеном Mycoplasma hyopneumoniae є поширеною хронічною респіраторною хворобою свиней. Особливо молоді поросята є уразливими до цієї несмертельної хвороби. Ензоотична пневмонія - це хронічна хвороба, наслідком якої є погане засвоєння їжі та затримка розвитку. Хвороба є надзвичайно заразною, та її передача звичайно відбувається через безпосередній контакт з інфікованими виділеннями з респіраторних шляхів, наприклад, у формі інфікованих крапель після кашлю та чхання. Найбільш проблематичним наслідком цієї хвороби є те, що вона робить тварин схильними до усіх видів вторинних інфекцій респіраторної системи. Підраховано, що, наприклад, у США 99% усіх свиноферм є інфікованими. Щорічні збитки становлять від 100 до 300 мільйонів доларів. Іншою респіраторною хворобою у свиней, з якою дуже часто стикаються, є хвороба, яка є широко відомою як репродуктивний респіраторний синдром свиней (PRRS) та як епідемічний респіраторний синдром та аборт свиней (PEARS). У наш час цю хворобу в усьому світі називають PRRS. Патологія не обмежується тільки респіраторною хворобою, але також вона спричиняє аборт. Інші симптоми, які звичайно або час від часу спостерігають під час хвороби, - це: погане споживання їжі, анорексія, синюшність кінцівок та особливо вух. Зараз відомо, що агент, який викликає хворобу, є дрібним оболонковим РНК-вірусом. У фермерських свиней-самок PRRS спричиняє пропасницю, депресію та зниження апетиту у свиноматок та молодих свиней. Внаслідок цього наступають репродуктивні проблеми, які шкідливо впливають перш за все на самок на пізніх термінах вагітності. У молодих свиней PRRS здебільшого шкідливо впливає на респіраторну систему. Спостерігається аномально швидке дихання або "колотіння". Часто буде спостерігатися, що суворість проблем, спричинених іншими бактеріальними та вірусними патогенами, буде підсилюватися, наслідком чого стануть збитки від смертності та затрати на лікування. Наслідком цього можуть стати погані пологи у свиней, у яких період вагітності подовжується на декілька тижнів. Окрім хвороб, що спричиняються Mycoplasma hyopneumoniae та вірусом PRRS та які часто спостерігаються у свиней, у наш час суттєвий, з економічного точки зору, респіраторний розлад у свиней спостерігаються все більш і більш часто. Цей розлад характеризується повільним зростанням, зниженою ефективністю харчування, млявістю, анорексією, пропасницею, кашлем та задишкою. Зараз цей розлад є загально відомим як комплекс респіраторної хвороби свиней (PRDC), та два найбільш поширені патогени, виділені зі свиней, що 93901 4 страждають на PRDC, - це Mycoplasma hyopneumoniae та вірус PRRS. Безсумнівно, що хвороба спричиняється якоюсь комбінованою дією цих двох патогенів. Свинарство отримує прибутки від доступних у наш час вакцин проти інфекції Mycoplasma hyopneumoniae та інфекції вірусу PRRS. Та оскільки молоді поросята є особливо уразливими до інфекції Mycoplasma hyopneumoniae та інфекції вірусу PRRS, здається найбільш ефективним буде вчасно та одночасно вакцинувати поросят проти обох хвороб на ранньому етапі життя. Проте, з часом стало очевидним, що це не є виходом з положення. Зараз встановлений той факт, що ефективність вакцин проти Mycoplasma hyopneumoniae суттєво знижується, якщо свині стають або інфікованими, або вакцинованими вірусом PRRS. Цей ефект спостерігається, якщо інфікування або вакцинація вірусом PRRS відбувається під час вакцинації або протягом 1-2 тижнів після вакцинації вакциною Mycoplasma hyopneumoniae. Навіть невірулентні вакцинні штами вірусу PRRS демонструють цей ефект (Pig International 30: 9-12 (2000), Thacker, E. L. et al., J. Clin. Microbiol. 37: 620-627 (1999), Thacker, E. L. et al, Vaccine 18: 1244-1252 (2000)). Крім того, продемонстрували, що PRRSінфекція спричиняє дуже швидкий початок патологічної дії інфекції Mycoplasma hyopneumoniae. Більш того, інфекція Mycoplasma hyopneumoniae збільшує тривалість та суворість вірусних інфекцій взагалі, таких як PRRS (Thacker, EX. et al., Vaccine 18: 1244-1252 (2000)) та грип свиней (Thacker, E.L. et al., J. Cl. Microbiol. 39: 2525-2530 (2001)). Це є додатковою причиною для вакцинації проти вірусних інфекцій, таких як PRRS та грип свиней, якомога швидше після народження, проте за будь-яких умов перед ураженням Mycoplasma hyopneumoniae. Отже, згідно з вищезгаданими причинами найбільш переважно спочатку вакцинувати вакциною PRRS-вірусу замість того, щоб одночасно застосовувати як вакцинацію проти PRRS-вірусу, так і вакцинацію проти Mycoplasma hyopneumoniae. Наслідком цього, однак, є необхідність зачекати, доки штам вакцини живого атенуйованого вірусу PRRS не зникне з організму. Це означає, що слід перечекати принаймні два-три тижні, а переважно довше, перед тим, як першу (первинну) вакцину проти Mycoplasma hyopneumoniae можна буде безпечно вводити, та навіть чотири тижні, а переважно довше, перед тим, як здійснювати повторну вакцинацію (бустерну вакцинацію) вакциною проти Mycoplasma hyopneumoniae. Іншим наслідком цього буде те, що поросята будуть залишатися незахищеними від інфекції Mycoplasma hyopneumoniae протягом принаймні чотирьох тижнів після PRRSвакцинації. Проте, у наш час досі не існує способів подолати ці небажані наслідки. Метою цього винаходу є вирішення проблеми, яку згадано вище. Зараз несподівано визначили, що коли поросят спочатку вакцинувати Mycoplasma 5 hyopneumoniae, а потім повторно вакцинувати одночасно як Mycoplasma hyopneumoniae, так і живим атенуйованим вірусом PRRS, у них швидко розвивається відмінний захист від інфекції як вірусу PRRS, так і Mycoplasma hyopneumoniae, та більш несподіваним було те, що у них не спостерігаються суттєві шкідливі реакції. Цей новий підхід має сильну перевагу порівняно із сучасним переважним способом, яка полягає у тому, що протягом дуже короткого проміжку часу після народження поросят можна повністю захистити як проти інфекції Mycoplasma hyopneumoniae, так і проти інфекції PRRS. Безсумнівно, якщо імуногенну дозу імуногенного матеріалу Mycoplasma hyopneumoniae та імуногенну дозу живого атенуйованого вірусу PRRS вводити комбінованим способом свиням, які були первинно вакциновані вакциною Mycoplasma hyopneumoniae, то відомі проблеми можна подолати. Цей імуногенний матеріал Mycoplasma hyopneumoniae може, наприклад, бути бактерином або він може бути імуногенною субодиницею. Він може однаковою мірою бути живим рекомбінантним векторним вірусом або бактеріальним вектором, який не походить з Mycoplasma hyopneumoniae та який є спроможним експресувати генетичний матеріал, що кодує імуногенну субодиницю Mycoplasma hyopneumoniae. Імуногенною дозою у галузі називають кількість імуногенного матеріалу, яка є, можливо у комбінації з ад'ювантом, достатньою, щоб викликати імунну реакцію у тварині-мішені. Отже, перший варіант здійснення цього винаходу стосується застосування імуногенної дози імуногенного матеріалу Mycoplasma hyopneumoniae та імуногенної дози живого атенуйованого вірусу PRRS для виробництва вакцини для використання у комбінованому введенні вакцини Mycoplasma hyopneumoniae та вакцини вірусу PRRS свиням, яких первинно вакцинували проти Mycoplasma hyopneumoniae. З економічної точки зору бактерини Mycoplasma hyopneumoniae є ефективними, їх легко виготовляти, вони є безпечними та недорогими. Тому більшість комерційно доступних вакцин Mycoplasma hyopneumoniae засновуються на бактеринах. Отже, переважна форма цього варіанта здійснення стосується застосування імуногенної дози бактерину Mycoplasma hyopneumoniae та імуногенної дози живого атенуйованого вірусу PRRS для виробництва вакцини для використання у комбінованому введенні вакцини Mycoplasma hyopneumoniae та вакцини вірусу PRRS свиням, яких первинно вакцинували проти Mycoplasma hyopneumoniae. Вираз "бактерин" відноситься у цій галузі до інактивованих бактерій. Таку інактивацію можна, наприклад, здійснити шляхом хімічної обробки, такої як, наприклад обробка формаліном, теплової обробки, обробки у французькому пресі (French Press) та радіацією. Живий атенуйований вірус PRRS - це вірус PRRS, який є непатогенним для тварини-мішені 93901 6 або який демонструє суттєве зниження вірулентності порівняно з вірусом природного типу. Імуногенний матеріал Mycoplasma hyopneumoniae та живий атенуйований вірус PRRS для застосування під час комбінованого введення необов'язково слід вводити у змішаній формі, тобто змішаними разом, хоча таке введення є переважним. Причина цього полягає у тому, що спосіб введення кожного з активних компонентів може різнитися залежно, наприклад, від фармацевтичної форми компонентів, мешкання свиней та управління фермами. Імуногенний матеріал Mycoplasma hyopneumoniae (також називається компонент Mycoplasma hyopneumoniae) можна, наприклад, вводити перорально, інтраназально або шляхом ін'єкції. Живий атенуйований вірус PRRS (також називається компонент PRRSV) можна, наприклад з метою ефективності, вводити інтрадермально та необов'язково шляхом внутрішньом'язової ін'єкції. Отже, залежно, наприклад, від умов на фермі або від інструкцій виробника вакцини, буде краще, коли шляхи введення компонентів Mycoplasma hyopneumoniae та PRRSV вакцини будуть різними. Очевидно, що у таких випадках введення компонентів Mycoplasma hyopneumoniae та PRRSV обов'язково здійснюють з незначними проміжками часу. Переваг цього винаходу можна, отже, все ще досягти, якщо компоненти Mycoplasma hyopneumoniae та PRRSV вакцини для використання під час комбінованого введення вводяться з відносно незначними інтервалами часу, наприклад, менш ніж 24 години, переважно менш ніж 8 годин. З практичної точки зору інтервал на практиці буде становити переважно навіть менший інтервал часу: менш ніж 4 години, менш ніж 2 години, менш ніж одна година, менш ніж 30 хвилин, менш ніж 15 хвилин, менш ніж 10 хвилин, менш ніж 5 хвилин або менш ніж 2 хвилини - у такому порядку переваги. Отже, вважають, що комбіноване введення це введення компонентів Mycoplasma hyopneumoniae та PRRSV з відносно незначним інтервалом часу у менш ніж 24 години, менш ніж 8 годин, менш ніж 4 години, менш ніж 2 години, менш ніж одна година, менш ніж 30 хвилин, менш ніж 15 хвилин, менш ніж 10 хвилин, менш ніж 5 хвилин або менш ніж 2 хвилини - у такому порядку переваги. Переважний варіант здійснення винаходу стосується застосування імуногенної дози імуногенного матеріалу Mycoplasma hyopneumoniae та імуногенної дози живого атенуйованого вірусу PRRS для виробництва вакцини для використання у комбінованому введенні вакцини Mycoplasma hyopneumoniae та вакцини PRRSV свиням, яких первинно вакцинували проти Mycoplasma hyopneumoniae, де вакцина для використання під час комбінованого введення містить компонент PRRSV та компонент Mycoplasma hyopneumoniae у змішаній формі. Між європейськими та північноамериканськими штамами вірусу PRRS було знайдено суттєву різницю як в антигенній, так і в генотипній організації. Характеристики європейських штамів вірусу PRRS та те, як вони відрізняються від північноа 7 мериканських штамів, є добре відомими у галузі. Різницю між європейськими та північноамериканськими штамами вірусу PRRS було, наприклад, описано у Meng, X.-J. et al, Arch. Virol. 140: 745-755 (1995), в Suarez, P. et al., Virus Research 42: 159165 (1996) та у Allende, R. et al., J. Gen Virol. 80: 307-315 (1999). За останні роки стало очевидним, що перехресний імунітет між європейськими та північноамериканськими штамами вірусу PRRS є незначним або навіть не існує. Отже, інша переважна форма здійснення цього винаходу відноситься до застосування імуногенної дози імуногенного матеріалу Mycoplasma hyopneumoniae та імуногенної дози живого атенуйованого вірусу PRRS для виробництва вакцини для використання у комбінованому введенні вакцини проти Mycoplasma hyopneumoniae та вакцини проти PRRSV свиням, яких первинно вакцинували проти Mycoplasma hyopneumoniae, де живий атенуйований вірус PRRS є європейським штамом Це є особливо переважним для здійснення контролю та зменшення випадків комплексу респіраторної хвороби свиней у Європі. В іншій переважній формі здійснення цього винаходу під час виробництва вакцини для використання у комбінованому введенні вакцини проти Mycoplasma hyopneumoniae та вакцини проти PRRSV додаються один або більше антигенів, що походять з інших патогенних організмів або вірусів свиней, або додається генетична інформація, що кодує такі антигени. Такі організми та віруси переважно вибирають з групи вірусу псевдосказу, вірусу грипу свиней, парвовірусу свиней, вірусу заразного гастроентериту, ротавірусу, Escherichia coli, Erysipelo rhusiopathiae, Lawsonia intracellularis, Bordetella bronchiseptica, Salmonella cholerasuis, Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Brachyspira hyodysenteriae та Actinobacillus pleuropneumoniae. Безумовно, що по суті бактерії та віруси з цієї групи можна також додати до вакцини проти Mycoplasma hyopneumoniae, що застосовується для первинної вакцинації, за умови, що вони шкідливо не впливають на корисні ефекти застосування згідно з цим винаходом. Інший варіант здійснення цього винаходу стосується вакцинного набору, який містить вакцину для використання у комбінованому введенні у формі, де компонент Mycoplasma hyopneumoniae знаходиться в одному контейнері, переважно у вигляді суспензії, а компонент PRRSV знаходиться у другому контейнері, переважно у сухій замороженій формі. Перевага такого набору полягає у наступному: компонент Mycoplasma hyopneumoniae можна відсмоктати з першого контейнера за допомогою голки шприца, а потім додати до другого контейнера, щоб розчинити сухий заморожений компонент PRRSV. Тоді ця суміш буде готовою для комбінованого введення. Альтернативно, вакцинний набір містить вакцину для використання у комбінованому введенні, де компонент PRRSV та компонент Mycoplasma hyopneumoniae знаходяться в одному контейнері. Такийконтейнер може, наприклад, бути вакцин 93901 8 ною пляшечкою. Якщо згадані компоненти знаходяться в одному й тому ж контейнері, вони необов'язково є вже змішаними. Вони можуть, наприклад, бути відокремленими бар'єром, наприклад мембраною, перед введенням. У момент введення голка шприца для введення може проткнути мембрану, після чого компоненти змішаються. їх можна потім застосовувати як суміш для наповнення шприца та вводити як суміш. Компоненти можуть також мати форму відокремлених сухих заморожених брикетів або сухих заморожених мас в одній і тій самій пляшечці. Внаслідок додавання розріджувача компоненти змішаються перед введенням. Отже, інша форма цього варіанту здійснення винаходу відноситься до вакцинного набору, який містить вакцину для використання у комбінованому введенні імуногенного матеріалу Mycoplasma hyopneumoniae та живого атенуйованого вірусу PRRS згідно з винаходом, де компонент Mycoplasma hyopneumoniae та компонент PRRSV знаходяться в одному єдиному контейнері. Свині, яких первинно вакцинували проти Mycoplasma hyopneumoniae, - це свині, яких вакцинували вакциною Mycoplasma hyopneumoniae до початку комбінованого введення вакцини Mycoplasma hyopneumoniae та PRRSV. Внаслідок первинної вакцинації свиней утворюється первинна імунна реакція проти Mycoplasma hyopneumoniae. Розвиток такої імунної реакції потребує деякого часу. Проте, що стосується вакцини для використання у комбінованому введенні Mycoplasma hyopneumoniae та вірусу PRRS, для того, щоб досягти ефективності, повинна бути присутньою адекватна первинна реакція на Mycoplasma hyopneumoniae. Отже, переважно, вакцину для використання у комбінованому введенні Mycoplasma hyopneumoniae та вірусу PRRS слід вводити на сьомий день або після більшої кількості днів після первинної вакцинації цієї свині. Комбіноване введення вакцини Mycoplasma hyopneumoniae та PRRSV буде переважно здійснюватися в межах 35 днів після первинної вакцинації, більш переважно в межах 14-35 днів після первинної вакцинації: наскільки довго вакцина для використання у комбінованому введенні Mycoplasma hyopneumoniae (бустерна вакцинація) та вірусу PRRS не вводиться, настільки довго свині не є повністю захищеними від інфекції Mycoplasma hyopneumoniae та від інфекції вірусу PRRS. Отже, переважно, введення вакцини для використання у комбінованому введенні здійснюють між 7 та 35 днями після первинної вакцинації Mycoplasma hyopneumoniae, більш переважно між 14 та 35 днями, навіть більш переважно між 21 та 28 днями після первинної вакцинації Mycoplasma hyopneumoniae. Безумовно, що для первинної вакцинації свиней, яких слід вакцинувати, набагато придатними є вакцини Mycoplasma hyopneumoniae. Вакцини мікоплазмів було описано у, наприклад, міжнародній заявці WO 91/18627, патенті США US 5,338,543 та європейському патенті ЕР 550.477. 9 Такі вакцини, головним чином бактерини, можна також легко отримати від різних комерційних виробників. Прикладами комерційно доступних вакцин Mycoplasma hyopneumoniae є Porcilis® M Hyo, ProSystem® M (Porcilis® M) (Intervet Int. B.V.), ProSystem® BPM, (Porcilis® BPM) (Intervet Int. B.V.), RespiSure® (Pfizer), Stellamune® (Pfizer), Suvaxyne® M.hyo (Fort Dodge), Hyoresp® (Merial) та M+Pac® (Schering-Plough). Так само це підходить для компонента Mycoplasma hyopneumoniae, що застосовується для виробництва вакцини для використання у комбінованому введенні згідно з цим винаходом. Можна легко застосовувати вакцини мікоплазмів, як описано у міжнародній заявці WO 91/18627, патенті США US 5,338,543 та європейському патенті ЕР 550.477. По суті, комерційно доступні вакцини мікоплазмів, такі як описано вище, є також придатними. Стосовно компонента PRRSV вакцини для застосування у виробництві вакцини для використання у комбінованому введенні згідно з цим винаходом, можна легко застосовувати вакцини живого атенуйованого вірусу PRRS, як описано у, наприклад, європейських патентах ЕР 676.467, ЕР 835.930, патентах США US 5,510,258 та US 5,587,164. По суті, можна також ефективно застосовувати комерційно доступні вакцини PRRS, такі, які можна отримати від, наприклад, Intervet Int. B.V., наприклад Porcilis® PRRS. Отже, фахівець у галузі не буде мати жодних проблем при виборі компонента Mycoplasma hyopneumoniae та компонента живого атенуйованого вірусу PRRS, які є основними компонентами, необхідними для виробництва вакцини для використання у комбінованому введенні згідно з винаходом, і також не буде мати жодних проблем при виборі вакцини Mycoplasma hyopneumoniae для первинної вакцинації. Фахівець буде знати, як вводити вакцини. Як дози, так і способи введення вакцини Mycoplasma hyopneumoniae та вакцини живого атенуйованого вірусу PRRS очевидним чином слідують з інструкцій, що надаються виробником у випадку, коли застосовуються компоненти комерційно доступної вакцини, або, у випадку, коли застосовується некомерційна вакцина, з опису способів у, наприклад, будь-яких патентах, згаданих вище. Тільки заради прикладу: якщо фахівець вибирає Porcilis® M Нуо як вакцину Mycoplasma hyopneumoniae та Porcilis® PRRS як вакцину PRRS, то первинну вакцинацію у дозі 2 мл переважно здійснювати у віці 5-9 днів, а введення вакцини для використання у комбінованому введенні вакцини Mycoplasma hyopneumoniae та вакцини живого атенуйованого вірусу PRRS згідно з винаходом переважно здійснювати у віці 23-30 днів Інший варіант здійснення цього винаходу, отже, стосується способу вакцинації свиней проти інфекції вірусу PRRS та Mycoplasma 93901 10 hyopneumoniae, при цьому спосіб включає етапи проведення першої (первинної) вакцинації вакциною Mycoplasma hyopneumoniae, а потім комбінованої вакцинації імуногенним матеріалом Mycoplasma hyopneumoniae та живим атенуйованим вірусом PRRS. Комбінована вакцинація, таким чином, функціонує стосовно імуногенного матеріалу Mycoplasma hyopneumoniae як повторна (бустерна) вакцинація. Корисний ефект вакцини для використання у комбінованому введенні вакцини Mycoplasma hyopneumoniae та PRRSV свиням, яких первинно вакцинували Mycoplasma hyopneumoniae, ілюструється (проте не обмежується) Прикладами, наведеними нижче. Приклади Приклад 1 Ефективність одночасного застосування бактерину М hyopneumoniae (Porcilis® M Нуо) та модифікованої вакцини живого вірусу PRRS (Porcilis® PRRS) протестували під час експерименту з вакцинацією-провокацією вільних від специфічного патогену (SPF) поросят згідно з наступною схемою експерименту: Група 1 2 3 4 5 6 Перша вакциКільнація у віці 1 кість тижня 12 M.hyo 12 M.hyo 12 7 М. hyo 6 6 Друга вакцинація у віці 4 тижнів М. hyo+PRRS М. hyo М. hyo+PRRS PRRS Провокація M. hyopneumoniae у віці 6 тижнів PRRSV у віці 8 тижнів Вакцину Mycoplasma hyopneumoniae ввели внутрішньом'язово у дозі 2мл та ліофілізований вакцинний штам PRRS також ввели внутрішньом'язово у дозі 2мл після розведення у розріджувачі (Diluvac Forte, Intervet Int. B.V., Wim de Korverstraat 35, Boxmeer, Нідерланди) (група 5) або у вакцині Mycoplasma hyopneumoniae (групи 1 та 4). Під час експерименту декілька поросят померли з причин, не пов'язаних з вакцинацією або інфекцієюпровокацією. Провокацію Mycoplasma hyopneumoniae здійснювали шляхом внутрішньотрахеальної інокуляції поросят 10 ' CCU культури польового ізоляту Mycoplasma hyopneumoniae низького переносу у два наступні дні. Через три тижні після провокації зробили розтин тіла свиней та підрахували консолідовані ураження легенів згідно з Goodwin & Whittlestone (British Vet. Journ. 129: 456-464 (1973)). Зменшення Mycoplasma hyopneumoniaeспеіщфічяях легеневих уражень було статистично суттєвим як для групи 1, так і для групи 2 порівняно з контрольними тваринами. Різниця між групами 1 та 2 не була статистично суттєвою (р=0,83, Mann-Whitney U-тест). 11 Група Кількість 1 2 3 12 11 11 93901 Перша вакцинація у віці 1 тижня М. hyo М. hyo 12 Друга вакцинація у віці 4 тижнів М. hyo+PRRS M.hyo Показник уражень М. hyopneumoniae * а 3,7 а 5,9 b 13,4 * позначає максимальний показник уражень, що становить 55 групи з різними надрядковими індексами є суттєво різними тест). (р