Сполука, що містить модифікований олігонуклеотид, комплементарний mir-21 або її попереднику, для лікування, профілактики або діагностики фіброзу або фіброзопроліферативного захворювання

Реферат: Винахід належить до сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 1230 з'єднаних один з одним нуклеозидів, при цьому вказаний модифікований олігонуклеотид містить послідовність нуклеїнових основ, комплементарну miR-21 або її попереднику, для застосування в лікуванні, профілактиці або діагностиці фіброзу або фібропроліферативного захворювання у індивіда. UA 100727 C2 (12) UA 100727 C2 UA 100727 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД Даний винахід належить до галузі мікро-РНК (miРНК), зокрема, miR-21, і її мішеней сигнального шляху, для діагностики, профілактики і/або терапії фіброзу і інших захворювань. Крім того, даний винахід стосується композицій, способів і застосувань для лікування фіброзу. Такі способи включають модуляцію і інгібування активності miРНК у індивіда, що страждає на фіброз. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Мікро-РНК являють собою широкий клас низькомолекулярних некодуючих РНК, які контролюють різні біологічні процеси, в тому числі основні шляхи передачі сигналів, за рахунок регуляції експресії комплементарних мРНК-мішеней (Ambros, 2004). Порушення регуляції мікроРНК при різних нозологічних формах викликане змінами в геномі (Mi et al., 2007), диференціальною експресією або вірусними інфекціями, що в деяких випадках змінюють функцію мікро-РНК пухлинних супресорів або онкогенів. У даний час в цілій серії нескладних генетичних досліджень було показано, що мікро-РНК залучені до регуляції різноманітних серцевих функцій (Care et al., 2007; Yang et al., 2007). Незважаючи на те, що вказані дослідження допомагають змалювати роль мікро-РНК в серцевій фізіології, рості і морфогенезі, докладні молекулярні механізми мікро-РНК шляхів розвитку захворювань in vivo не до кінця зрозумілі. Було показано, що одноланцюгові олігонуклеотидні мікро-РНК-антагоністи можуть "вимкнути" ендогенні мікро-РНК in vitro і in vivo, викликаючи ефекти відносно мРНК-мішені, а також відносно рівнів і метаболізму білків (Kruetzfeldt et al., 2005; Esau et al., 2006). Вказані виявлення наводять на думку про можливість використання антагоністів мікро-РНК для підтвердження функції мікро-РНК in vivo і, можливо, ще більш важливо, як нової терапевтичної тактики лікування. КОРОТКИЙ ЗМІСТ ВИНАХОДУ Даний винахід стосується промоторної області мікро-РНК, застосування мікро-РНК, зокрема, miR-21, і відповідних елементів для діагностики і виробництва лікарського засобу для лікування і/або профілактики фіброзу і/або пов'язаних з фіброзом захворювань. Крім того, даний винахід стосується різних антисмислових олігонуклеотидів проти мішеней miR-21. Винахід також стосується клітинного дефіциту miR-21, дефіциту промоторної області і мішеней miR-21, а також організмів, з нокаутом miR-21. Нарешті, даний винахід стосується способів діагностики фіброзу і/або пов'язаних з фіброзом або захворювань, що мають відношення до фіброзу, і способів скринінгу фармацевтично активної сполуки для лікування фіброзу і/або пов'язаних з фіброзом захворювань. Даний винахід стосується способів лікування фіброзу, що включають введення індивіду з діагнозом фіброз або у якого підозрюють фіброз, сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів, і що має послідовність нуклеїнових основ, комплементарну miРНК. Даний винахід стосується способів, що включають ідентифікацію хворого з фіброзом або індивіда з підозрою на наявність фіброзу; і введення вказаному індивіду сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів, при цьому послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miРНК або її попереднику. Даний винахід стосується способів, що включають введення індивіду, схильному до ризику розвитку фіброзу, сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів і що мають послідовність нуклеїнових основ, комплементарну miРНК або її попередника, таким чином запобігаючи розвитку фіброзу. У деяких варіантах здійснення вказаним фіброзом є фіброз печінки. У деяких варіантах здійснення вказаним фіброзом є фіброз легень. У деяких варіантах здійснення вказаним фіброзом є фіброз шкіри. У деяких варіантах здійснення вказаним фіброзом є фіброз у людей похилого віку. У деяких варіантах здійснення вказаним фіброзом є фіброз серця. У деяких варіантах здійснення вказаним фіброзом є фіброз нирок. У деяких варіантах здійснення вказаним фіброзом є фіброз селезінки. Даний винахід стосується способів, що включають введення індивіду, що страждає на фіброз, або індивіду з підозрою на наявність фіброзу, сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів і що мають послідовність нуклеїнових основ, яка комплементарна miРНК або її попереднику, при цьому у вказаного індивіда є щонайменше одне порушення або захворювання серця. Даний винахід стосується способів, що включають ідентифікацію хворого з фіброзом або індивіда з підозрою на фіброз, де у вказаного індивіда є щонайменше одне порушення або захворювання серця; і введення вказаному індивіду сполуки, що містить модифікований 1 UA 100727 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів, при цьому послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miРНК або її попереднику. У деяких варіантах здійснення порушення або захворювання серця вибране з групи, що складається з гіпертрофії серця, гіпертензивної серцевої недостатності, діастолічної серцевої недостатності, систолічної серцевої недостатності, серцевих хвороб накопичення, кардіоміопатії, констриктивного перикардиту, хвороби коронарних артерій, гострого інфаркту міокарда, хронічного інфаркту міокарда, недостатності правих відділів серця, серцевої аритмії, пов'язаної з міокардитом, фіброзу, і порушення серцевого клапана. У деяких варіантах здійснення кардіоміопатія вибрана з групи, що складається з дилятаційної кардіоміопатії, гіпертрофічної кардіоміопатії з обструкцією, гіпертрофічної кардіоміопатії без обструкції, рестриктивної кардіоміопатії, кардіоміопатії правого шлуночка з порушенням ритму і діабетичної кардіоміопатії. У деяких варіантах здійснення порушення серцевого клапана вибрані з групи, що складається з стенозу мітрального клапана, стенозу аортального клапана, стенозу трикуспідального клапана і стенозу легеневого клапана. У деяких варіантах здійснення порушення серцевого клапана вибрані з групи, що складається з недостатності мітрального клапана, недостатності аортального клапана, недостатності трикуспідального клапана і недостатності легеневого клапана. У деяких варіантах здійснення представлені в даному описі способи додатково включають введення одного або декількох додаткових фармацевтичних засобів. У деяких варіантах здійснення вказане введення зменшує збільшення ваги серця, розширення лівого шлуночка або розлад фракції скорочення. У деяких варіантах здійснення вказане введення запобігає збільшенню ваги серця, розширенню лівого шлуночка або розладу фракції скорочення. У деяких варіантах здійснення вказане введення поліпшує серцеву функцію. У деяких варіантах здійснення вказане введення включає внутрішньовенне введення, підшкірне введення, внутрішньоартеріальне введення або внутрішньосерцеве введення. Даний винахід стосується способів лікування фіброзу, що включають введення індивіду, який страждає на фіброз або з підозрою на наявність фіброзу, сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів і що мають послідовність нуклеїнових основ, яка комплементарна miРНК або її попереднику, при цьому у вказаного індивіда є щонайменше одне захворювання або хворобливий стан печінки. Даний винахід стосується способів, що включають ідентифікацію хворого з фіброзом або індивідуума з підозрою на фіброз, причому у вказаного індивіда є щонайменше одне захворювання або хворобливий стан печінки; і введення вказаному індивіду сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів, при цьому послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miРНК або її попереднику. У деяких варіантах здійснення щонайменше одне захворювання або хворобливий стан печінки являє собою хронічне пошкодження печінки. У деяких варіантах здійснення щонайменше одне захворювання або хворобливий стан печінки являє собою вірусний інфекційний гепатит. У деяких варіантах здійснення інфекційний гепатит являє собою вірусний інфекційний гепатит C. В деяких варіантах здійснення щонайменше одне захворювання або хворобливий стан печінки являє собою неалкогольний стеатогепатит. У деяких варіантах здійснення вказане введення включає внутрішньовенне введення або підшкірне введення. У деяких варіантах здійснення щонайменше одне захворювання або хворобливий стан печінки являє собою цироз. У деяких варіантах здійснення вказане введення поліпшує функцію печінки. Даний винахід стосується способів лікування фіброзу, що включають введення індивіду, який страждає на фіброз, або з підозрою на наявність фіброзу, сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів і що мають послідовність нуклеїнових основ, комплементарну miРНК або її попереднику, при цьому у вказаного індивіда є щонайменше одне захворювання або хворобливий стан легень. Даний винахід стосується способів, що включають ідентифікацію хворого з фіброзом або індивіда з підозрою на фіброз, причому у вказаного індивіда є щонайменше одне захворювання або хворобливий стан легень; і введення вказаному індивіду сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів, причому послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miРНК або її попереднику. У деяких варіантах здійснення вказане щонайменше одне захворювання або 2 UA 100727 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 хворобливий стан легень являє собою хронічну обструктивну хворобу легень. У деяких варіантах здійснення вказане введення включає пульмональне введення. Даний винахід стосується способів лікування фіброзу, що включають введення індивіду, що страждає на фіброз, або з підозрою на наявність фіброзу, сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів і що мають послідовність нуклеїнових основ, комплементарну miРНК або її попереднику, при цьому у вказаного індивіда є щонайменше одне інше захворювання або хворобливий стан. Даний винахід стосується способів, що включають ідентифікацію хворого з фіброзом або індивіда з підозрою на фіброз, де вказаний індивід має щонайменше одне інше захворювання або хворобливий стан легень; і введення вказаному індивіду сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів, причому послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miРНК або її попереднику. У деяких варіантах здійснення вказане щонайменше одне інше захворювання або хворобливий стан являє собою легеневу гіпертензію. У деяких варіантах здійснення вказане щонайменше одне інше захворювання або стан являє собою захворювання, пов'язане з кровоносними судинами. У деяких варіантах здійснення вказане захворювання, пов'язане з кровоносними судинами, вибране з групи, що складається з артеріальної ригідності, медіасклерозу і артеріосклерозу. У деяких варіантах здійснення вказане щонайменше одне інше захворювання або хворобливий стан являє собою склероз травного каналу. У деяких варіантах здійснення вказане щонайменше одне інше захворювання або хворобливий стан являє собою склеродермію. У деяких варіантах здійснення вказане щонайменше одне інше захворювання або хворобливий стан вибраний з групи, що складається з ретроперитонеального фіброзу, проліферативного фіброзу, неопластичного фіброзу, нефрогенного системного фіброзу, ін'єкційного фіброзу, медіастинального фіброзу, мієлофіброзу, пост-вазектомічного больового синдрому, ревматоїдного артриту. У деяких варіантах здійснення вказане введення поліпшує стан при фіброзі. У деяких варіантах здійснення вказане введення сповільнює подальше прогресування фіброзу. У деяких варіантах здійснення вказане введення зупиняє подальше прогресування фіброзу. У деяких варіантах здійснення вказане введення ослабляє фіброз. У деяких варіантах здійснення вказане введення зменшує вміст колагену. Даний винахід стосується способів лікування фібропроліферативного розладу, що включають введення індивіду, який страждає фібропроліферативним розладом або з підозрою на наявність фібропроліферативного розладу, сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів, причому послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miРНК або її попереднику, таким чином здійснюючи лікування фібропроліферативного розладу. У деяких варіантах здійснення введення включає внутрішньовенне введення, підшкірне введення, пульмональне введення, внутрішньоартеріальне введення або внутрішньосерцеве введення. Даний винахід стосується способів інгібування проліферації фібробластів, що включають приведення фібробластів в контакт із сполукою, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів, де послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miРНК або її попереднику, таким чином здійснюючи інгібування проліферації фібробластів. Даний винахід стосується способів стимуляції апоптозу фібробластів, що включають приведення фібробластів в контакт із сполукою, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів, де послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miРНК або її попереднику, таким чином здійснюючи стимуляцію апоптозу фібробластів. Даний винахід стосується способів підвищення рівня білка Sprouty-1 в фібробластах, що включає приведення фібробластів в контакт із сполукою, що містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів, де послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miРНК або її попереднику, таким чином здійснюючи стимуляцію експресії білка Sprouty-1. Даний винахід стосується композицій для інгібування мікро-РНК. У деяких варіантах здійснення вказана miРНК являє собою miR-21. У деяких варіантах здійснення вказаний модифікований олігонуклеотид має послідовність нуклеїнових основ, комплементарну послідовності нуклеїнових основ, яка щонайменше на 80 % ідентична miR-21 або її попереднику. У деяких варіантах здійснення miR-21 має послідовність нуклеїнових основ, 3 UA 100727 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 представлену у вигляді SEQ ID NO: 1. У деяких варіантах здійснення попередник miR-21 має послідовність нуклеїнових основ, представлену у вигляді SEQ ID NO: 11. У деяких варіантах здійснення вказаний модифікований олігонуклеотид складається з 12-30 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 12 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 13 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 14 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 15-24 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 15 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 16 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 17 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 18 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 19 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 20 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 21 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 22 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 23 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 24 сполучених один з одним нуклеозидів. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду має не більш, ніж два, неспівпадіння з послідовністю нуклеїнових основ miR-21 або її попередником. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду має не більш, ніж одне неспівпадіння з послідовністю нуклеїнових основ miR-21 або її попередником. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду не має неспівпадінь з послідовністю нуклеїнових основ miR-21 або її попередником. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду містить щонайменше 15 суміжних нуклеїнових основ послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 12. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду містить щонайменше 16 суміжних нуклеїнових основ послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 12. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду містить щонайменше 17 суміжних нуклеїнових основ послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 12. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду містить щонайменше 18 суміжних нуклеїнових основ послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 12. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду містить щонайменше 19 суміжних нуклеїнових основ послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 12. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду містить щонайменше 20 суміжних нуклеїнових основ послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 12. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду містить щонайменше 21 суміжну нуклеїнову основу послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 12. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду містить щонайменше 22 суміжні нуклеїнових основи послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 12. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду складається з послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 12. У деяких варіантах здійснення вказана сполука містить модифікований олігонуклеотид, кон'югований з лігандом. У деяких варіантах здійснення вона має структуру (III): 1 2 3 4 (5')QxQz (Qy)nQz Qz Qz Q-L(3'), (III) в якій кожна Q незалежно являє собою 2'-O-метил-модифікований нуклеозид; х являє собою 4 UA 100727 C2 . Одне з А і В є S, тоді як інше являє собою О; у являє собою 5 10 15 20 25 30 35 . 1 2 3 4 Кожний з z , z , z і z незалежно являє собою х або у; n=6-17, L являє собою , 7 7 в якій X являє собою N(CO)R , або NR ; 1 3 9 b Кожний з R , R і R незалежно являє собою Н, OH або -CH2ОR , при умові, що щонайменше 1 3 9 1 3 9 b 7 один з R , R і R являє собою OH, і щонайменше один з R , R і R являє собою -CH2ОR ; R d с d d являє собою R або C1-C20-алкіл, заміщений NR R або NHC(О)R ; с R являє собою Н або C1-C6-алкіл; d R являє собою вуглеводний радикал; або стероїдний радикал, який необов'язково прив'язаний щонайменше до одного вуглеводного радикалу; і b R являє собою . Одне з А і В є S, тоді як інше являє собою О. d У деяких варіантах здійснення R являє собою холестерин. У деяких варіантах здійснення 1 2 3 4 кожний з z , z , z і z являє собою , де одне з А і В є S, тоді як інше являє собою О. 1 b 9 У деяких варіантах здійснення R являє собою -CH2ОR . У деяких варіантах здійснення R 1 9 являє собою OH. У деяких варіантах здійснення R і R представлені в транс-конфігураціях. У 1 3 деяких варіантах здійснення R і R представлені в транс-конфігураціях. У деяких варіантах 3 b 1 здійснення R являє собою -CH2ОR . У деяких варіантах здійснення R є OH. У деяких варіантах 1 3 3 9 здійснення R і R представлені в транс-конфігураціях. У деяких варіантах здійснення R і R 9 b представлені в транс-конфігураціях. У деяких варіантах здійснення R являє собою -CH2ОR . У 7 7 деяких варіантах здійснення X являє собою NC(О)R . У деяких варіантах здійснення R являє d собою -CH2(CH2)3CH2NHC(О)R . У деяких варіантах здійснення щонайменше один міжнуклеозидний зв'язок є модифікованим міжнуклеозидним зв'язком. У деяких варіантах здійснення кожний міжнуклеозидний зв'язок є модифікованим міжнуклеозидним зв'язком. У деяких варіантах здійснення щонайменше один міжнуклеозидний зв'язок є фосфоротіоатним міжнуклеозидним зв'язком. У деяких варіантах здійснення кожний міжнуклеозидний зв'язок є фосфоротіоатним міжнуклеозидним зв'язком. У деяких варіантах здійснення щонайменше один нуклеозид містить модифікований цукор. У деяких варіантах здійснення безліч нуклеозидів містить модифікований цукор. У деяких варіантах здійснення кожний нуклеозид містить модифікований цукор. У деяких варіантах 5 UA 100727 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 здійснення кожний нуклеозид містить 2'-O-метоксіетил-цукор. У деяких варіантах здійснення кожний з безлічі нуклеозидів містить 2'-O-метоксіетил-цукор, і кожний з безлічі нуклеозидів містить 2'-фтор-цукор. У деяких варіантах здійснення кожний модифікований цукор незалежно вибраний з 2'-O-метоксіетил-цукру, 2'-фтор-цукру, 2'-O-метил-цукру або біциклічного фрагмента цукру. У деяких варіантах здійснення щонайменше один нуклеозид містить модифіковану нуклеїнову основу. У деяких варіантах здійснення модифікована нуклеїнова основа являє собою 5-метилцитозин. У деяких варіантах здійснення щонайменше один нуклеозид містить цитозин, де вказаний цитозин є 5-метилцитозином. У деяких варіантах здійснення кожний цитозин є 5-метилцитозином. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду є щонайменше на 90 % комплементарною послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 1. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду є щонайменше на 95 % комплементарною послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 1. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду є на 100 % комплементарною послідовності SEQ ID NO: 1. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду має повнорозмірну комплементарність послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 1. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду щонайменше на 90 % комплементарна послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 11. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ модифікованого олігонуклеотиду щонайменше на 95 % комплементарна послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 11. У деяких варіантах здійснення модифікованого олігонуклеотиду на 100 % комплементарна послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 11. У деяких варіантах здійснення послідовність нуклеїнових основ miR-21 складається з послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 1. У деяких варіантах здійснення попередник послідовності нуклеїнових основ складається з послідовності нуклеїнових основ SEQ ID NO: 11. У деяких варіантах здійснення вказана сполука, що містить модифікований олігонуклеотид, отримана у вигляді фармацевтичної композиції. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид отриманий у вигляді фармацевтичної композиції. У деяких варіантах здійснення вказана сполука складається з модифікованого олігонуклеотиду. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид являє собою одноланцюговий модифікований олігонуклеотид. У деяких варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид являє собою антисмисловий олігонуклеотид. Даний винахід стосується композицій для застосування при лікуванні, профілактиці і/або поліпшенні стану при фіброзі. Крім того, даний винахід належить до сполук, що містять модифіковані олігонуклеотиди, що мають послідовність нуклеїнових основ, комплементарну miРНК, для застосування при лікуванні, профілактиці і/або поліпшенні стану при фіброзі. Даний винахід стосується антисмислових олігонуклеотидів, комплементарних miR-21, для виробництва лікарського засобу для лікування і/або запобігання фіброзу. Даний винахід стосується антисмислових олігонуклеотидів, комплементарних miR-21, для застосування при лікуванні і/або профілактиці фіброзу. Даний винахід стосується застосування miR-21 і/або антисмислового олігонуклеотиду проти miR-21 для лікування фіброзу. Даний винахід стосується застосування miR-21 і/або антисмислового олігонуклеотиду проти miR-21 для діагностики фіброзу. КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ Фіг. 1. Дизрегуляція miR-21 при кардіологічному захворюванні і предомінантна експресія в серцевих фібробластах. (a) Аналіз експресії мікро-РНК з допомогою мікрочіпів. РНК виділяли з лівого шлуночка міокарда мишачої моделі серцевої недостатності (миші β1AR-TG) на ранній (тримісячний вік), помірній (шестимісячний вік) і пізній стадіях (дванадцятимісячний вік) серцевої недостатності. Експресія представлена у вигляді кратної регуляції в порівнянні з такою у контрольних тварин дикого типу. miR-21 відмічена червоним кольором. Дані представлені на основі 3-4 незалежних гібридизацій на групу. (b) Зліва Назерн-блот-аналіз експресії miR-21 на різних стадіях серцевої недостатності у мишей β1AR-TG. Праворуч Кількісний аналіз даних з розташованої вище панелі. (с) Зліва Назерн-блот-аналіз експресії miR-21 у людини з відсутністю недостатності і з недостатністю лівого шлуночка міокарда. Праворуч Кількісний аналіз зрілої форми miR-21 у людини з відсутністю недостатності і з недостатністю лівого шлуночка міокарда. 6 UA 100727 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (d) Вгорі Неонатальні кардіоміоцити, забарвлені 4',6-діамідино-2-феніліндолом (DAPI) і антитілом проти α-актиніну, після трансфекції скрембльованої miR (контроль - пре-miR, 50 нМ, 72 год.), синтетичної miR-21 (пре-miR-21, 50 нМ, 72 год.) і інгібітором miR-21 (анти-miR-21, 50 нМ, 72 год.). Кардіоміоцити культивували в контрольованих умовах (див. Допоміжні Методи) або стимулювали FCS (5 %) протягом 48 годин. Внизу Кількісний аналіз розмірів індивідуальних кардіоміоцитів (аналіз гістограми). N>200 кардіоміоцитів було проаналізовано на групу. (е) Вгорі Отримання трансгенних мишей, що експресують miR-21 під контролем альфа-MHCпромотору. Посередині Назерн-блотинг зрілої miR-21 у мишей дикого типу (WT) і у трансгенних (TG) тварин. Внизу Поперечні зрізи ділянок серця мишей дикого типу і miR-21-трансгенних мишей, забарвлені з метою визначення загальної морфології (фарбування гематоксилінеозином) і відкладення колагену (сіріус червоний). (f) Експресія miR-21 в серцевих фібробластах і кардіоміоцитах. Аналізи Назерн-блотингу (Вгорі) і кількісна ПЛР в масштабі реального часу (Внизу). Всі відрізки, що характеризують значення погрішності, означають SEM (стандартна помилка середнього). n=3-6 для a-f. Фіг. 2. Інгібування Sprouty-1 через miR-21 приводить до дерепресії передачі сигналу ERK і підвищує здатність до виживання фібробластів. (a) Серця, отримані з організму мишей Spry1LacZ +/-, забарвлювали, використовуючи X-gal. Макроскопічний (вгорі) і мікроскопічний (внизу) аналізи виявляють детектування LacZ в серцевих фібробластах. Короткий чорний відрізок відповідає 100 мкм. Великий чорний відрізок відповідає 10 мкм. (b, с) Вгорі Детектування SPRY1, ERK1/2 і фосфо-ERK1/2 у людини з недостатністю лівого шлуночка (b) і після трансфекції кардіоміоцитів, що спільно культивуються, і фібробластів із скрембльованою мікро-РНК (негативний контроль #2 пре-miRTM, 50 нМ, 72 години), синтетичною miR-21 (пре-miR-21, 50 нМ, 72 години) або з інгібітором miR-21 (анти-miR21, 50 нМ, 72 години). Внизу Результати кількісного аналізу вестерн-блотингу. (d) Вгорі Детектування SPRY1, ERK1/2 і фосфо-ERK1/2 після siРНК-опосередкованого нокдауну SPRY1 (150 нМ, 72 години) або обробки скрембльованою siРНК (150 нМ, 72 години) кардіальних клітин, що спільно культивуються. Внизу Результати кількісного аналізу вестернблотингу. (е) Вгорі FACS-аналіз анексин V-позитивних кардіальних фібробластів після обробки скрембльованою мікро-РНК (контроль пре-miR, 100 нМ, 72 години), синтетична miR-21 (пре-miR21, 100 нМ, 72 години), обробки антагоністами miR-21 (анти-miR-21, 100 нМ, 72 години) або відповідними контролями (100 нМ, 72 години). Внизу Кількісний аналіз анексин V-позитивних клітин після відповідних обробок. (f) Вгорі Концентрація ФРФ-2 в супернатантах кардіальних фібробластах, що культивуються, після обробки скрембльованою мікро-РНК (контроль пре-miR, 100 нМ, 72 години), синтетична miR-21 (пре-miR-21, 100 нМ, 72 години) або обробки антагоністами miR-21 (анти-miR-21, 100 нМ, 72 години) або (внизу) після siРНК-опосередкованого нокдауну SPRY1 (150 нМ, 72 години) або обробки скрембльованою siРНК (150 нМ, 72 години). Всі відрізки, що характеризують значення погрішності, означають SEM. n=3-6 для a-f. Фіг.3. Терапевтичний сайленсинг miR-21 in vivo запобігає фіброзу серця і серцевій недостатності. (a) Вгорі Детектування методом флуоресцентної мікроскопії Cy3 і DAPI, забарвлених в тканині лівого шлуночка серця після ін'єкції Cy3-міченого модифікованого олігонуклеотиду через яремну вену. Контролі отримані шляхом ін'єкцій PBS. Внизу Мишам, підданим трансаортальній констрикції (TAC) або хибній операції, робили контрольні ін'єкції (PBS, 200 мкл) або ін'єкції антагоніста miРНК, antagomir-21 (200 мкл; 80 мг/кг/день), через 24 години після операції і в подальші три дні. (b) Вгорі Назерн-блот-аналіз експресії miR-21 у необроблених мишей (контроль) і мишей, оброблених antagomir-21, після TAC. Внизу Кількісний аналіз експресії кардіального miR-21. (с) Вгорі Вестерн-блот-аналіз SPRY1, ERK1/2 і фосфо-ERK1/2 у мишей після хибної операції або після TAC, оброблених або як в контролі, або оброблених antagomir-21. Експресія G-бета була наведена як контроль [генів] домашнього господарства. Внизу Кількісний аналіз результатів Вестерн-блотингу. (d) Кардіальні зрізи після фарбування сіріусом червоним, призначені для детектування міокардіального фіброзу у мишей, оброблених як в контролі, і у мишей, оброблених antagomir21. (е) Кількісний аналіз міокардіального фіброзу (зліва) і відношення ваги серця до ваги тіла (справа) у мишей, оброблених як в контролі, і у мишей, оброблених антагоністом antagomir-21. (f) Вгорі Глобальний аналіз транскриптому мишачого генома в серцевій тканині мишей після операції або хибної операції або після TAC, оброблених або як в контролі, або оброблених 7 UA 100727 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 антагоністом antagomir-21. Червоними (зеленими) блоками показана статистична значущість (р