Спосіб оцінки патоморфологічного стану фіброеластозу ендокарда

Реферат: Спосіб оцінки патоморфологічного стану фіброеластозу ендокарда включає фіксування у 10 % нейтральному формаліні цілого серця, проведення по спиртах наростаючої концентрації, виготовлення парафінових блоків та серійних поперечних зрізів у горизонтальній площині, товщиною 5 мкм. Здійснюють фарбування за методом MSB в модифікації Зербіно-Лукасевич, занурюють на 5 хвилин в Гемалаун Майєра. Фарбують зрізи в розчині Марциуса жовтого або оранжевого Ж протягом двох хвилин з подальшим промиванням водою. Занурюють зрізи на 7 хвилин у 1 % розчин кислотно-червоного 2 С в 2,5 % водному розчині оцтової кислоти, обробляють 1 % водним розчином фосфорвольфрамової кислоти протягом 5 хвилин та промивають водою. Занурюють на 1 хвилину в 0,5 % розчин водного блакитного в 1 % водному розчині оцтової кислоти та промивають водою. Потім зневоднюють препарат в спиртах та освітлюють в ксилолі із поміщенням в бальзам. UA 118108 U (12) UA 118108 U UA 118108 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, зокрема до патологічної анатомії, кардіології та кардіохірургії, може бути використаний для визначення патоморфологічних особливостей фіброзованого ендокарда при кардіопатології, а саме при синдромі лівобічної гіпоплазії серця (СЛГС) у плодів та новонароджених під час гістологічного дослідження за характером забарвлення фіброзованого шару ендокарда. Під синдромом лівобічної гіпоплазії серця (СЛГС) за МКХ-10 розуміють групу аномалій розвитку серця, що включає атрезію, або виражену гіпоплазію гирла, або клапана аорти з гіпоплазією висхідної частини аорти та дефектом розвитку лівого шлуночка (ЛШ) (із стенозом або атрезією мітрального клапана) [Бураковский В.И., Бухарин В.Α., Подзолков В.П. и др. Врожденные пороки сердца. Сердечно-сосудистая хирургия. Под ред. В.И. Бураковского, Л.А. Бокерия. - М.: Медицина, 1989; 345-382]. За останніми даними по якісних (форма та особливості порожнини, наявність фіброеластозу) та кількісних показниках (товщина шарів) були виявлені наступні типи будови ЛШ: "щілиноподібно-гіпопластичний", "щілиноподібно-гіпертрофічний", "циліндричний", "лакунарний" та "лакунарно-циліндричний" [Zakharova V. Hypoplastic left heart syndrome: Structural changes of the left ventricular myocardium. /V. Zakharova, T. Savchuk, O. Rudenko. //Virchows Arch. - 463. - № 2013. - C. 198.; Савчук Т.В. Синдром лівобічної гіпоплазії серця: залежність шлуночково-перегородкового кута від структури лівого шлуночка /Т.В. Савчук, O.I. Азаров, В.Μ. Жежера //Серце і судини. - 2016. - № 1. – С. 30-34]. Типи будови ЛШ при СЛГС "циліндричний", "лакунарний" та "лакунарно-циліндричний" завжди супроводжувалися фіброеластозом ендокарда незалежно від терміну гестації, від терміну гестації залежала товщина цього шару. Відомим способом оцінки фіброеластозного ендокарда є оглядовий спосіб, що виконується на розтинах [Пальцев Μ.Α., Коваленко В.Л, Аничков Н.М. Руководство по биопсийносекционному курсу. //Учебное пособие, 2002], який передбачає макроскопічне та мікроскопічне дослідження ендокарда. Однак, недоліком способу є те, що спосіб виявляв лише наявність фіброеластозу. Мікроскопічне дослідження при забарвленні гематоксилін-еозином дозволяло спостерігати фіброзований шар ендокарда та виміряти його товщину без виявлення у ньому структурних змін. Технічним завданням корисної моделі є розробка способу визначення патоморфологічних особливостей фіброзованого ендокарда, який би дозволяв відзначати фіброзований шар ендокарда та виміряти його товщину із виявленням у ньому структурних змін. Спосіб здійснюють наступним чином. Ціле серце плода або новонародженого фіксували у 10 % нейтральному формаліні. Здійснювали проведення по спиртах наростаючої концентрації та заливку у парафін. Виготовляли парафінові блоки. З парафінових блоків на мікротомі виготовляли зрізи товщиною 5 мкм, зрізи фарбували за методом MSB в модифікації ЗербіноЛукасевич (ОГК, що використовується зазвичай для визначення ступеня зрілості фібрину), також деякі автори при застосуванні даної методики відмічали відмінності у забарвленні кардіоміоцитів [Патент України на корисну модель 48119, МПК (2009) А 61 В 17/00. Спосіб діагностики морфофункціонального стану кардіоміоцитів на основі вивчення біоптатів та некроптатів міокарда. Захарова В.П. (UA); Руденко К.В. (UA); Лазоришинець В.В. (UA); Левчишина О.В., (UA); Руденко О.В. (UA); заявник і патентоутримувач Державна установа "Національний інститут серцево-судинної хірургії ім. М.М. Амосова Національної академії медичних наук України" (UA). - № u200908910; заявл. 26.08.2009, опубл. 10.03.2009. Бюл. № 5]. Для фарбування за методом MSB в модифікації Зербіно-Лукасевич зрізи занурювали на 5 хвилин в Гемалаун Майера, промивали під проточною водою та залишали в ній до набуття препаратами синього кольору. Фарбували зрізи в розчині Марциуса жовтого або оранжевого Ж протягом двох хвилин з подальшим промиванням водою. Далі занурювали зрізи на сім хвилин у 1 % розчин кислотно-червоного 2 С в 2,5 % водному розчині оцтової кислоти. Обробляли 1 % водним розчином фосфорвольфрамової кислоти протягом п'яти хвилин та промивали водою. Занурювали препарати на 1 хвилину в 0,5 % розчин водного блакитного в 1 % водному розчині оцтової кислоти і промивали водою. Зневодили препарати в спиртах, освітлити в ксилолі з поміщенням в бальзам. При забарвленні ОГК фіброзований ендокард плодів з "циліндричним" типом ЛШ при СЛГС був яскраво-червоного кольору з багаточисленими клітинними елементами (фібробласти, міофібробласти) (фіг. 1). Тоді як у новонароджених у серцях цього ж типу цей шар виглядав переважно блакитним з поодинокими волокнами червоного кольору (фіг. 2, 3). У такий же колір методом ОГК забарвлювалася нормальна зріла фіброзна тканина. При цьому змінювалася також структура фіброзованого ендокарда у новонароджених порівняно з плодами 20 тижнів гестації. У плодів волокна були короткі, мали зв'язок з багаточисленими клітинними елементами 1 UA 118108 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 (фібробласти, міофібробласти), були переважно хаотично розташовані, деяка циркулярна упорядкованість спостерігалася лише на внутрішньому шарі безпосередньо під ендотелієм. У новонароджених цієї групи фіброзна тканина ендокарда більш компактна, з грубими звивистими волокнами (фіг. 4), які орієнтовані циркулярно за периметром порожнини ЛШ, з невеликою кількістю клітин. Лише в окремих полях зору у цих препаратах зустрічалися невпорядковано розташовані волокна. Це свідчить про те, що фіброзна тканина, яка формувала патологічно потовщений ендокард хворих з СЛГС, у процесі розвитку плода набувала поступового "дозрівання" (згрубіння). У порівнянні сердець "циліндричного" типу у серцях "лакунарноциліндричного" типу у плодів 20-21 тижнів гестації структура ендокарда відрізнялася більшою впорядкованістю колагенових волокон, забарвлюванням у блакитний колір, як у новонароджених, але він був меншої товщини, ніж у останніх (Фіг. 5). Тобто сполучна тканина фіброзованого ендокарда плодів "лакунарно-циліндричного" типу була більш "дозріла" ніж у плодів з "циліндричним" типом будови лівого шлуночка. Фіброзований ендокард 20 тижневого плоду "лакунарно-циліндричного" типу ЛШ більш згрубілий, ніж фіброзований шар ендокарда такого ж терміну гестації "циліндричного", що пов'язано з більш раннім виникненням фіброеластозу при "лакунарному" та "лакунарноциліндричному" типах. Тобто, фіброеластоз "фіксував" патоморфологічну картину тієї стадії ембріогенезу на який виникав, саме тому при "лакунарному" типі запобігав подальшим процесам ущільнення компактного міокарда, тому цей тип будови лівого шлуночка при СЛГС нагадував некомпактний міокард. Таким чином, забарвлення ОГК дозволило виявити ембріологічні складові формування СЛГС. Колір забарвлення фіброзованого ендокарда та структурні зміни у ньому, що виявилися за допомогою фарбування методом MSB в модифікації Зербіно-Лукасевич, дозволили встановити певну залежність у патоморфологічному процесі формування СЛГС: при появі фіброеластозу до ущільнення міокарда виникав "лакунарний" тип ЛШ, під час процесу ущільнення – тип "лакунарно-циліндричний", та після ущільнення міокарда – "циліндричний" тип будови ЛШ. Мінімальні зміни у фіброзованому шарі ендокарда плодів "циліндричного" типу можливо мають найбільшу перспективу щодо зворотних змін по відновленню ендокарда лівого шлуночка у плодів після застосування фетальної аортальної вальвулопластики. Завдяки застосуванню нових дій способу, умов виконання дій забезпечується повне уявлення про патоморфологічний стан фіброзованого ендокарда. Перелік фігур графічних зображень: Фіг. 1 Мікропрепарати. Фіброзований ендокард лівого шлуночка плода 20-21 тижнів гестації "циліндричного" типу при СЛГС фарбувався у яскраво червоний колір. Забарвлення ОГК, x 200. Фіг. 2. Мікропрепарат. Фрагмент поперечного зрізу серця новонародженого при "лакунарному" типі лівого шлуночка СЛГС. Міжтрабекулярні проміжки овоїдної форми, оконтуровані товстим шаром фіброзної тканини ендокарда, що фарбувався у блакитний колір. Забарвлення ОГК, x 100. Фіг. 3. Мікропрепарат. Фіброзований ендокард лівого шлуночка "циліндричного" типу при СЛГС новонародженого (фарбування у блакитний колір, поодинокі яскраво червоні волокна). Забарвлення ОГК, x 200. Фіг 4. Мікропрепарат. Згрубілі звивисті блакитні волокна фіброзованого ендокарда новонародженого з СЛГС при "лакунарному" типі. Забарвлення ОГК, x 400. Фіг. 5. Мікропрепарат серця плода 20-21 тижня гестації "лакунарно-циліндричного" типу будови ЛШ. Фіброзований ендокард - фарбування у блакитний колір. Забарвлення ОГК, x 200. Спосіб ілюструє наступний приклад його застосування. Приклад. Ціле серце плода фіксують у 10 % нейтральному формаліні. Проводять по спиртах наростаючої концентрації та заливають у парафін за загально прийнятою методикою. З парафінових блоків на мікротомі Leica SM 2000 R виготовляли серійні поздовжні зрізи товщиною 5 мкм. Зрізи фарбували методом MSB в модифікації Зербіно-Лукасевич (ОГК). Мікроскопію проводили за допомогою мікроскопа Olympus BX41 (об'єктив x 2, окуляр x 10). При мікроскопії фіброзований ендокард плодів з "циліндричним" типом ЛШ був яскравочервоного кольору з багаточисленими клітинними елементами (фібробласти, міофібробласти), тоді як у новонароджених з СЛГС у серцях цього ж типу цей шар виглядав переважно блакитним з поодинокими волокнами червоного кольору. Технічним результатом є розробка способу оцінки патоморфологічного стану фіброеластозу ендокарда, завдяки якому забезпечується повне уявлення про патоморфологічний стан фіброзованого ендокарда. 60 2 UA 118108 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб оцінки патоморфологічного стану фіброеластозу ендокарда, що включає фіксування у 10 % нейтральному формаліні цілого серця, проведення по спиртах наростаючої концентрації, виготовлення парафінових блоків та серійних поперечних зрізів у горизонтальній площині, товщиною 5 мкм, який відрізняється тим, що здійснюють фарбування за методом MSB в модифікації Зербіно-Лукасевич, занурюють на 5 хвилин в Гемалаун Майєра та фарбують зріз в розчині Марциуса жовтого або оранжевого Ж протягом двох хвилин з подальшим промиванням водою, занурюють зрізи на 7 хвилин у 1 % розчин кислотно-червоного 2 С в 2,5 % водному розчині оцтової кислоти та обробляють 1 % водним розчином фосфорвольфрамової кислоти протягом 5 хвилин та промивають водою, занурюють на 1 хвилину в 0,5 % розчин водного блакитного в 1 % водному розчині оцтової кислоти та промивають водою, зневоднюють препарат в спиртах, освітлюють в ксилолі із поміщенням в бальзам. 15 3 UA 118108 U 4 UA 118108 U Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5