Спосіб лікування апластичної анемії

1. Способ лечения апластической анемии, включающий парентеральное введение нативных или криоконсервированных гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека, отличающийся тем, что больному предварительно подсаживают в подкожную жировую клетчатку кроветворную печень и/или селезенку по меньшей мере одного эмбриона человека. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что перед подсаживанием кроветворную печень и/или селезенку помещают в мешочек, изготовленный из амниотической оболочки плаценты. (19) (21) 94042152 (22) 04.04.1994 (24) 17.09.2001 (46) 17.09.2001, Бюл. № 8, 2001 р. (72) Смикодуб Олександр Іванович, Третяк Наталя Миколаївна, Новицька Алла Володимирівна, Снігирь Наталя Валентинівна (73) ЦЕНТР ЕМБРІОН АЛЬНИХ ТКАНИН "ЕМСЕЛЛ", UA (56) Грищенко В.И., Лобынцева Г.С., Вотякова И.А. и др. Гемопоэтические клетки эмбриональной печени // К.: Наук. думка, 1988. Клиническое применение криоконсервированных гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека // Методические рекомендации МЗ Украины, 1991, 9 с. Бебешко В.Г., Макарцева Т.М., Киреева С.С. Оценка клинической эффективности транспланта 41303 Способ осуществляется следующим образом. Эмбриональную печень и селезенку, извлеченную стерильно из цельного эмбриона возрастом 5-14 недель, полученного во время искусственного аборта, промывают раствором Хэнкса с антибиотиком. Из амниотической оболочки посредством кисетного шва кетгутом фopмируют мешочек размерами 3x3 см и помещают в него одну или несколько эмбриональных печеней, а также одну или несколько селезенок. Затем под местной анестезией подшивают мешочек в подкожную жировую клетчатку живота больного. Эмбриональные печень и(или) селезенка могут имплантироваться в подкожную жировую клетчатку реципиента и без мембранного покрытия. Через 7-10 дней после имплантации и заживления раны первичным натяжением вводят внутривенно или другим путем нативные или криоконсервированные гемопоэтические клетки эмбриональной печени человека, учи тывая возраст эмбриона, количество КОЕ бл., количество СД34, вид и степень выраженности клинических проявлений, а также наличие относительных противопоказаний к внутривенному введению клеток - наличие васкулитов, поражения сосудов сетчатки глаза, гипертензия малого круга кровообращения. Проводится исследование на бактериальную стерильность, наличие вирусных и паразитных инфекций (Enzygnost Anti-HIV1/-HIV2, HBsAg, AntiHBc, Anti-CMV/lgG+IgM, Anti-Rubella Virus/IgG, Varicella/Zoster, Toxoplasmosis/IgG, Toxoplasmosis/IgM). Эффект способа оценивается по: - общему анализу крови, включающему определение ретикулоцитов, тромбоцитов; - наличию в периферической крови ядерного сдвига влево; - данным миелограмм; - определению фетального гемоглобина в эритроцитах периферической крови. По данному способу пролечено 3 больных. Способ поясняется следующими примерами. Пример 1 Больная С., 1944 г. рождения, поступила в гематологическое отделение № 1 ЦРКБ № 25 г. Киева 23.03.1993 г. с диагнозом: Апластическая анемия. История болезни № 3768. Основные жалобы при поступлении: слабость, пятнисто-петехиальная сыпь на коже, десневые кровотечения, одышка при физической нагрузке. Считает себя больной с августа 1992 г. Лечилась в гинекологическом отделении с 25.11.1992 г. по 15.12.1992 г. по поводу маточного кровотечения, постгеморрагической анемии. Диагноз апластической анемии установлен в марте 1993 г. Анализы периферической крови и данные миелограмм приведены в табл. 1, 2. Больной проводилось следующее лечение: преднизолон 60 мг, лейкоген, аспаркам, поливитамины, этамзилат. В связи с отсутствием эффекта от проводимой терапии, 13.04.1993 г. проведена имплантация печени эмбриона 9 недель в амниотической оболочке в подкожную жировую клетчатку живота. Постимплантационный период прошел без осложнений. Нa 11 день отмечался подъем гемоглобина до 70 г/л. 23.04.1993 г. была проведена трансплантация гемопоэтических клеток эмбриональной печени. Возраст эмбриона - 11 недель, объем введенных клеток - 2 мл, клеточность – 50х106/мл, КОЕ бл. – 1"4 х 103/мл, СД 34–11,2 х 104/мл. Способ введения - внутривенный. Трансплантацию больная перенесла удовлетворительно. Никаких реакций в момент трансплантации не отмечалось. Синдром раннего посттрансплантационного улучшения не был выражен. Существенной динамики в показателях периферической крови в ранние сроки не было выявлено. При выписке сохранялась панцитопения, хотя общее состояние больной было относительно удовлетворительным. Больная прекратила прием преднизолона, несмотря на это, состояние больной медленно улучшалось: меньше слабость, реже возникали и быстрее проходили синяки на коже. В анализах периферической крови отмечено повышение количества гемоглобина, эритроцитов, ретикулоцитов, тромбоцитов. Клиническая и гематологическая ремиссия сохраняется на день подачи заявки. Пример 2 Больной О., 25 лет, поступил в гематологическое отделение № 1 ЦРКБ № 25 г. Киева 31.03.1993 г. с диагнозом: Апластическая анемия. Основные жалобы при поступлении: слабость, одышка при небольшой физической нагрузке, сердцебиение. Страдает апластической анемией с января 1993 г. Анализы периферической крови и данные миелограмм приведены з табл. 3, 4. Больному проводилось следующее лечение: преднизолон 60 мг, аспаркам, гемотрансфузии, анаболические гормоны. В связи с отсутствием эффекта от проводимой терапии 30.04.1993 г. проведена имплантация печени и селезенки эмбриона 7 недель в амниотической оболочке в подкожную жировую клетчатку живота. Посттрансплантационный период прошёл без осложнений. На 11 день отмечался подъем гемоглобина до 70 Г/л. 11.05.1993 г. больному внутривенно были введены гемопоэтические клетки эмбриональной печени человека. Возраст эмбриона 7 недель, объем введенных клеток 2 мл, клеточность 17,66/мл, КОЕ бл. - 2,6х103/мл, СД34–1,7 х104/мл. Посттрансплантационный период протекал без осложнений. Изменений в состоянии больного и данных периферической крови выявлено не было. В связи с этим была проведена повторная трансплантация гемопоэтических клеток эмбриональной печени. Возраст эмбриона 7 недель, объем введенных клеток - 1,8 мл, клеточность 71,0х106/мл, КОЕ бл. – 3,2х103 /мл, СД34-26 х104/мл. После 2-ой трансплантации к 4-8 неделе отмечается положительная динамика восстановления эритропоэза, мегалоцитопоэза (табл. 3, 4). Больной находится в стадии клинической и гематологической ремиссии. 2 41303 Источники информации 1. Грищенко В.И., Лобынцева Г.С., Вотякова И.А. и др. Гемопоэтические клетки эмбриональной печени. К.: «Наукова думка», 1988 г. 2. Клиническое применение криоконсервированных гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека. Методические рекомендации МОЗ Украины, 1991. 3. Бебешко В.Г., Макарцева Т.М., Киреева С.С. Оценка клинической эффективности трансплантации клеток аллогенной эмбриональной печени человека в комплексном лечении детей, больных гипопластической анемией. Гематология и переливание крови, 1984 г., вып. 19, с. 17-21. 3 Таблица 1 Показатели периферической крови больной С., 49 лет страдающей апластической анемией Имплантация ЭП 11 недель – 13.04.93 г. Трансплантация ГК ЭПЧ – 23.04.93 г. Показатели крови Дата 24.03. 93 г. 2,7 84 0,93 0,1 3,0 1,85 50 0,9 6,3 16.04. 93 г. 3 сут. 1,8 50 0,9 1 4,7 19.04. 93 г. 6 сут. 1,72 50 0,9 23.04. 93 г. 10 сут. 2,3 70 0,9 26.04. 93 г. 3 сут. 2,46 72 0,9 5,1 20.04. 93 г. 7 сут. 1,74 52 0,9 4 6,5 04.05. 93 г. 11 сут. 1,96 64 0,9 4,65 29.04. 93 г. 6 сут. 2,30 70 0,9 5 4,55 6,0 1 2 1 1 1 1 2 1 1 2 1 1 1 1 47 42 9 35,0 39 1 48 41 8 18,0 40 2 50 41 6 16,0 37 1 52 42 4 8,0 40 1 48 46 4 6,6 30 1 49 43 6 4,0 32 3 52 40 3 4,0 37 4 49 42 4 6,0 30 6 44 45 4 34,0 25 4 43 47 4 90,0 25 6 52 40 1 70,0 45 1 48 49 1 110,0 25 1 78 15 2 120,0 26 4% 8% 1% 15.06. 93 г. 53 сут. 2,6 70 0,9 15 3,0 19.07. 93 г. 81 сут. 3,3 96 1,0 6,05 28.05. 93 г. 35 сут. 2,2 80 1,0 12 3,0 3,7 07.10. 93 г. 162 сут. 3,8 110 0,8 6 3,6 7% 41303 4 Эритроциты, Т/л Гемоглобин, Г/л Цвет. показатель Ретикулоциты, % Лейкоциты, Г/л Базофилы, % Эозинофилы, % Миелоциты, % Метамиелоциты, % Палочкоядерные, % Сегментоядерные, % Лимфоциты, % Моноциты, % Тромбоциты, % СОЭ, мм/ч Эритроциты, содержащие фетальный гемоглобин 06.04. 93 г. Таблица 2 Показатели костного мозга больной С., страдающей апластической анемией Дата 24.03.1993 г. 10.07.1993 г. 0 9250 5 13 11 6 7 13 1 3 23 1 30 20000 2,0 3,0 12,0 6,0 17 15 3 3 7,0 1 4 7 16 2,3:1 0,7 5 8,0 18,0 2,2:1 0,6 41303 5 Показатели Количество мегакариоцитов в 1 мм 3 Миелокариоциты Бласты Промиелоциты нейтрофильные Миелоциты нейтрофильные Метамиелоциты нейтрофильные Палочкоядерные нейтрофильные Сегментоядерные нейтрофильные Эозинофилы Моноциты Лимфоциты Плазм. клетки Нормоциты: базофильные полихроматофильные оксифильные Лейко-эритроид. отношение К/м индекс нейтрофилов Таблица 3 Показатели периферической крови больного О., 25 лет, страдающего апластической анемией Имплантация ЭП 7 недель – 30.04.1993 г. І трансплантация ГК ЭПЧ – 11.05.1993 г. ІІ трансплантация ГК ЭПЧ – 02.06.1993 г. " - абсолютное количество клеток в мазке. 15.05. 17.05. 21.05. 24.05. 01.06. 04.06. 07.06. 09.06. 13.06. 15.06. 02.07. 04.08. 02.09. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. 4-е 6-е 11-е 14-е 21-е 2-е 5-е 7-е 11-е 13-е 30-е 60-е 90-е 11.10. 93 г. 120-е 2,24 1,8 1,98 1,63 2,2 2,15 2,2 2,1 2,3 1,8 2,3 2,38 2,3 3,0 70 60 60 50 62 62 62 62 62 65 60 70 80 82 0,9 0,9 0,9 0,9 0,85 0,85 0,85 0,85 0,9 0,9 0,9 0,9 0,9 0,9 3 4 2,15 2,9 4 3,1 2,05 2,85 12 5,35 11 9 4,3 4,0 3,5 3,8 4,0 3,5 4,0 3,8 41303 6 Дата (сутки) 27.04. 04.05. 06.05. 11.05. 12.05. 93 г. 93 г. 93 г. 93 г. Показатели 93 г. 4-е 6-е 11-е 1-е крови Эритроциты, 1,82 1,7 1,8 2,38 2,7 Т/л Гемоглобин, Г/л 54 50 50 70 78 Цвет. показа0,9 0,9 0,9 0,9 0,87 тель Ретикулоциты, 1 4 % Лейкоциты, Г/л 4,5 3,5 2,95 4,2 2,4 Базофилы, % Эозинофилы, % 1 Миелоциты, % Метамиелоциты, % Палочкоядер5 10 10 7 5 ные, % Сегментоядер51 45 34 43 45 ные, % Лимфоциты, % 38 39 35 46 32 Моноциты, % 6 6 4 4 6 Тромбоциты, % 14 18 18 8 14 СОЭ, мм/ч 40 50 40 50 30 Эритроциты, содержащие 1% фетальный гемоглобин Нормобласты 2:100 Плазматические клетки, % 1 4,5 1 7 5 1'' 1'' 2 5 4 1 2 3 4 2 20 48 40 39 10'' 11'' 50 45 50 54 50 48 53 55 68,5 6,5 20 50 46 4 10 40 47 6 6 38 50 6 8 54 28'' 10'' 4 72 31'' 4'' 8 61 62 6 10 50 46 4 12 50 40 6 14 48 40 5 18 40 42 6 20 40 41 8 14 30 39 4 30 30 35 8 45 30 1% 0 3% 1:100 1 2 8% 6% 41303 Таблица 4 Показатели миелограмм больного О., страдающего апластической анемией Дата 15.09.1993 г. 10 10000 2 2,0 8,0 5,0 15,0 25,0 3,0 1 4 11 1 2 13 5,2:1 0,2 0,9 Миелокариоциты в 1 мм 3 Бласты, % Промиелоциты нейтрофильные, % Миелоциты нейтрофильные, % Метамиелоциты нейтрофильные, % Палочкоядерные нейтрофильные, % Сегментоядерные нейтрофильные, % Эозинофильные, % базофильные, % Моноциты, % Лимфоциты Нормоциты базофильные, % полихроматофильные, % оксифильные, % Лейко-эритроидное отношение К/м индекс нейтрофилов Индекс созревания эритробластов 16.04.1993 г. Клеточность к.м. значительно снижена к.м. мало 3 1 6 3 13 25 2 1 7 23 Показатели Количество мегакариоцитов в 1 мм 3 2 7 15 3,2:1 0,6 0,8 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ __________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 __________________________________________________________ 7