Штам бактерій azospirillum lipoferum в-37 для виробництва добрив під райграс пасовищний і стоколос безостий

Штамм бактерий Azosplrillum Mpoferum ВНИИСХМ B-37 для производства удобре ния под райграс пастбищный и кострец безостый. микробиологии и шлеет регистрационный номер 8-37. Полученный штамм Azosph Ilium Hpoferurn B-37 характеризуется следующими морфологическими и физиолого-бмохимическими признаками. На полужидкой мзлэтной среди Доберейнер бактерия о молодом возрасте (1-2 сут) имеет вид крупных (1,0-1,5 х 4,0-5,0 мкм) слегка изогнутых активных подвижных палочек. При движении формя клеток s-образнап. При старении культура утрачивает подвижность и характеризуется морфологическим разнообразием. Содержит включения поли -ft-o к с и м а с л я н о й кислоты. В возрасте 4-7 суток наблюдается агрегация клеток с последующим фрагментированием протоплазмы с образованием форм, напоминающих ЦИСТЫ, ' На полужидкой малатпои среде ДоОерейнер образует типичную плойку серовато-белого цвета, находящуюся от ее поверхности ка растении около 1-2 мм На огаризованной среде Добереймср с дрожжевым экстрактом колонии мелкие (ї-і мм в диаметре), сухие, складчатые или пор \ 5703 щинистые, как правило целиком снимаются петлей На картофельном агаре колонии значительно крупнее (в диаметре до 5 мм и более), пастовидные с перламутровым от тенком. NaCi 0,1 СаСІ2'6Н2О 0,02 0,01 FeC!3 я 0,002 Дрожжевой экстракт 1,00 5 Бромтимоловый синий Штамм 4014 растет в интервале темпе(0,5% спиртовый ратур 6-40°С, оптимальной для'культиоирораствор) 5,0 (мл) вам ия яв л яет с я те мп ер атур а 3 5° С Агар 3,0 Оптимальное значение рН - 6,8-7,0. рН 6,8-7,0 Штамм нуждается в биотине. Способен 10 Картофельная среда (г/л): использовать глюкозу в качестве единственного Картофель 200 источника углеродного питания и энергии (что Яблочная кислота 2,5 является видовым признаком). Растет и КОН 2,0 фиксирует азот о безазотпых полужидких Сахароза 2,5 средах с глюкозой, галактозой, яо- 15 лочной, Агар 20,0 янтарной, молочной и фумаровой кислотами. рН 6,5 На полужидкой малатной среде Доберейнер Штамм 4014 В-37 хранят и периодичештамм фиксирует 27,33 мкг азота на 3 мл среды ски пересевают (1 раз в 2 месяца) на картоза 23 часа (9,11 мкг азота на 1 мл среды). В фе льмом агаре и среде Доберейнер. ассоциации с растениями 20 активность Температура хранения - 4-6°С (в холодильазотфиксации значительно превышает нике). При хранении штамма под слоем миактивность контрольного варианта, Например: в нерального масла в течение 12 месяцев ассоциации с корнями райграса изменение свойств штамма не наблюдали. азотфиксирующая активность штамма соШтамм Azospirlllum lipoferum 4014 В-37 ставляет 63 мкг N/r корней/сутки; в контроле 25 идентифицирован по определителю Берги. (без инокуляции)-31,6 мкг N/r корней/сутки. В Изучение активности азотфиксации ассоциации с корнями костреца безостого штамма AzospIrMlum lipoferum 4014 в сравактивность азотфиксации достигает 107,2 мкг N нении с прототипом проводили в условиях азота на 1 г корией/сутки. В контроле (на л?"ораторных и вегетационных опытов. корнях небактериэованных растений) - ак- 30 П р и м е р 1. Среду Доберейиер (по 3 тивность азотфиксации равнялась 52,8 мкг мл в каждом сосуде) ииокулировали клеткаазота/1 г корней за сутки, Штагим не использует в качестве единственного ми штаммов A.Hpoferum 4014 и С-1/25. После 72 часов инкубации в термостате источника углерода сахарозу, мальтозу, определяли активность азотфиксации ацерамнозу, раффинозу, сорбит, дульцит, 35 тиленовым мето дом на хроматографе крахмал. Микроаэрофил при выращивании о безазотной среде, аэроб при выращивании на "Chrom-4". Повторность опыта трехкратная. Результаты определения представлены о средах, снабженных связанным азотом. На таблице 1, агаризованной среде Доберейнер штамм Активность азотфиксации чистой кульобразует розовый пигмент. Пигмент 40 не туры штамма 4014 достоверно выше активрастворим в воде и не диффундирует п среду. ности прототипа. Клетки грамотрицательные, подвижные, П р и м е р 2. Семена райграса пастбищмонотрихи па полужидкой среде Доберейного сорта "Аргона" и костреца безостого нер. Использует аммиачную форму азота, 45 сорта "Козаровичский" замачивалл отдельнитраты. Растет на МПА и МПБ. Имеет полоно в бактериальных суспензиях штаммов жительный тест Хью-Лейфсона: в анаэробных A.lipoferurn 4014 и A.lipoferum C-1 /25 в течесловиях слабое кислотообразование, ние 16 часов, Плотность бактериальных сусгазообразные продукты не образует. Катапензий составила около 11•10 клеток о 1 мл. лозо- и оксидазо - положителен. Экзополи- 50 После замачивания семена высевали о сосусахариды не синтезирует. Спор не образует. ды с 0,5 кг дерново-подзолистой почвы. В Маркерные признаки не обнаружены, опыте был предусмотрен контроль - высео семян не ииокулированных азоспириллами. Штамм A.lipoferum 4014 ВНИИСХМ ВСосуды со исходами райгррса и костреца 37 растет на средах следующего состава: 55 помещали о люминостат с освещением Среда Доберейнер (г/л): 20000 люкс в течение 16 часов ежедневно. яблочная кислота 3,6 Температуру в люминостатс поддерживали КН2Р0л 0,4 на уровне 26°С + 1°. Повториость опыта КгНРСМ 0,1 пятикратная. В каждом сосуде оставляли по MgSOr7H20 0,2 03 3 растения. Через 1 мес^ц ппрыдиозмия Какслсдуеі из таблицы 3 бактеризация растении ь сосудах определяли пзотфиксаштамг:ом 1014 достоверно повышает уроцию а петпл с немы/І методом. Результаты опжайность костреца безостого, а также соределений активности эьотфиксации в держание азота о надземной массе. ассоциации с расіслигми рдГнраса и костро- 5 Инокуляция семян ксстрецз штаммом Сцп приведены в гаІЗлпце 1. Как счед/ст из 1/25 -прототипом, -не способствует увелитаблицы, под ра.ігрзсом и кострецом в ассочению показателей. циации с азоспирилламп активность была П р и м е р 5 Полосой опыт. Семена существенно пьпие чем и контроле-, При pjftrpaca гкг.тбищнпго перед посевом отэтом, шгамм Л.ІІроГеїит 4014 обеспечивал 10 дельно обрібатьшали суспензиями клеток достоверное превышение в лзотфиксации четмрйхсутсЗчиых культур A.Iipoferum по сравнению с прототипом. штамма С-1/25 и штамма 4014. Плотность Эффективность бактеризации райграса суспензий около 11,0-109 клеток в 1 мл, и костреца испытывали и вегетационный и Семена контрольного варианта обрабатыполевых опытах на дерново-подзолистой по- 15 вали подои. Во все долинки опыта вносичос опытного хозчистоо УНИИСХМ микро-ли минеральные удобрения із дозе: Nбипогми. Сорт райграса - "Аргона", сорт IOPGOKGG. Повторность опита - четырехкостреца - "Казаровичскмп". кратная. Площадь каждой делянки 21 м2, Для получения Ос'иаормальпо'л суспенДанннг; по эффективности бактеризации зии штаммои ГОТОПИЛИ пчиателыгую среду Добзреинер (6РО гь&рл) cor. г л п которой 20 райграса в полепом опыте представлены в приведен выше, в колбы засетли штамм Как свидетельствуют полученпи'е рсбактерий и оыращиьоли н-ч качзлге при зультгіш, пргдпосеиноя инокуляция семян 180-200 об/мин и 28°С п ТСІ - ІІИСІ З суго,