Застосування есцину для лікування хвороби, походження якої опосередковане або викликане активованими гранулоцитами

1. Застосування есцину для виготовлення фармацевтичного препарату для лікування хвороби, причому походження хвороби опосередковане або викликане активованими гранулоцитами. 2. Застосування за п. 1, яке відрізняється тим, що есцин є бета-есцином. 3. Застосування за п. 1 або п. 2, яке відрізняється тим, що гранулоцити є гіперактивованими. 4. Застосування за будь-яким з пп. 1-3, яке відрізняється тим, що хвороба є алергією або вторинною хворобою алергії. 5. Застосування за будь-яким з пп. 1-4, яке відрізняється тим, що хвороба є алергією типу І або C2 2 (19) 1 3 клітини, природні кілерні клітини), мієлоїдні клітини (моноцити, макрофаги) і гранулоцити (еозинофіли, нейтрофіли і базофіли). Мастоцити тісно зв'язані з базофілами і часто вважаються типом гранулоциту, що знаходиться в тканинах. Отже, далі гранулоцити визначені як еозинофіли, нейтрофіли, базофіли та мастоцити. Гранулоцити є частиною уродженої імунної відповіді, неспецифічної реакції на патогени, такі як бактерії. Це також відображено фактом, що ліпополісахаридна (LPS, компонент бактеріальної клітинної стінки) активація гранулоцитів приводить до чітко вираженого вивільнення цитокинів, таких як фактор некрозу пухлини альфа (TNF-альфа). Активація гранулоцитів або з Ig(алергія типу І), або з Ig комплексами (алергія типу III) приводить до сильної та швидкої реакції на нешкідливі в інших випадках агенти (пилок, їжа, реакції на власні структури і тканини як при аутоімунних хворобах). Мастоцити та базофіли є клітинною основою для алергій типу І (IgEопосередкованих алергій через FcRI), нейтрофіли залучені в алергії типу III (реакції, опосередковані імунним комплексом, через FcRIII), включаючи аутоімунні хвороби, такі як псоріаз, артрит, імунну тромбоцитопенію (ІТР), аутоімунну гемолітичну анемію (AHA) і системний червоний вовчак (SLE), і сприяють іншим аутоімунним хворобам, таким як ревматоїдний артрит (RA), тип І діабету і розсіяний склероз. Алергії обох типів можуть призвести до симптомів, настільки ж м'яким як ринорея, і до серйозних хронічних хвороб, а також до загрозливого життю анафілактичного шоку або септичного шоку. Алергії типу І звичайно лікують кортикостероїдами (кортизон), антигістамінами, епінефрином, теофіліном або стабілізаторами мастоїдитів. Ці сполуки блокують дію алергійних посередників, запобігаючи активації клітин і процесам дегрануляції. Ці лікарські засоби допомагають полегшувати симптоми алергії, але відіграють невелику роль у пом'якшенні хронічного порушення. Усі ці терапевтичні класи мають значні побічні ефекти особливо після тривалого застосування. Випадки алергій зараз збільшуються в західній півкулі з близько 20% ураженої популяції. Огляд і рекомендація для лікування алергійного риніту опубліковані Британським національним рецептурним центром: MeRe Bulletin Volume 9, Number 3, 1998. Інша форма лікування алергій включає внутрішньовенну ін'єкцію моноклональних анти-Ig антитіл. Гіпосенсибілізація є формою імунотерапії, при якій пацієнта поступово вакцинують проти прогресивно великих доз розглянутого алергену. Це може або знизити серйозність, або усунути гіперчутливість у цілому. Це обумовлено прогресивним відхиленням продукування Ig, на відміну від надмірного продукування Ig, відзначеному у випадках гіперчутливості типу І. Алергійні хвороби типу III звичайно лікують стероїдами, нестероїдними протизапальними лікарськими засобами, метотрексатом та TNF-альфа блокатором (рецепторні аналоги або антитіла). Деякі аутоімунні хвороби, такі як псоріаз або хвороби, що викликають утворення пухирців, додатково ускладнюються вторинними інфекціями шкіри. На відміну від гострих ушкоджень шкіри, де 94954 4 звичайно застосовуються антибіотики, вторинні інфекції, що є результатом хронічного порушення, такі як псоріаз, часто залишаються не вилікуваними. Як наслідок, запальний процес збільшується, і хвороба прогресує. Для обох типів гіперчутливості, однак, усе ще існує істотна потреба в медикаментах, оскільки багато які з цих речовин не задовольняють хронічне застосування, або лікування виявляється занадто дорогим для широкого застосування (біологічні речовини). Псоріаз або ревматоїдний артрит належить до найбільш загальних аутоімунних хвороб з 1 -2% ураженої популяції. Sirtori (Pharmacological Research 44 (3) (2001): 183-193) розкриває протизапальний ефект аесцину, що здійснюється зниженням проникності судин, що може знизити щільність лейкоцитів в ураженій тканині. Matsuda et al. (Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 7 (13) (1997): 1611-1616) - згадують протизапальний ефект виділених есцинових сполук з каштана кінського, який заснований на звуженні судин, вимірюваний за допомогою протинабрякового ефекту при набряку, індукованому карагеніном, у щурів. Dattner (Dermatologic Therapy 16 (2003): 106113) обговорює каштан кінський в ' галузі медицини на основі лікарських трав із протизапальним і захищаючим судини ефектом. Есцину приписується активність інгібування еластази. Метою даного винаходу є забезпечення нових ліків, що ефективні проти різноманітних імунологічних хвороб, заснованих на гіпервідповіді гранулоцитів. Даний винахід передбачає застосування есцину для виготовлення фармацевтичного препарату (або медикаменту) для лікування хвороб, опосередкованих або викликаних активованими гранулоцитами, переважно алергія типу І або типу III або септичний шок. Лейкоцити, такі як гранулоцити, відіграють роль майже у всіх хворобах, оскільки є захисною системою організму. Деякі симптоми будь-якої хвороби можуть бути пов'язані з прямими ефекторними функціями гранулоцитів. Вираз "хвороби, викликані або опосередковані гранулоцитами" варто розуміти в контексті походження хвороби, а не тільки симптомів хвороби. Хвороби, що будуть лікувати фармацевтичним препаратом, отже, пов'язані з відхиленою або надмірною функцією гранулоцитів. Алергії викликані контактом з алергеном (зовнішнім або внутрішнім), що сприяє надмірній реакції гранулоцитів, яку можна розглядати як причину хвороби, оскільки алерген сам по собі був би безпечний. Отже, даний винахід стосується застосування есцину для виготовлення фармацевтичного препарату для лікування хвороби, причому походження хвороби опосередковане або викликане активованими гранулоцитами. Також передбачається есцин для лікування (або запобігання, профілактичного лікування) хвороб, опосередкованих або викликаних активованими гранулоцитами, або для лікування (або запобігання) хвороби, причому походження хвороби опосередковане або викликане активованими гранулоцитами. У конкретних варіантах здійснення це 5 не поширюється на лікування запалення або набряку. Запобігання не слід інтерпретувати як абсолютний успіх у тому сенсі, що у пацієнта ніколи не може розвитися супутня хвороба, а зниження шансу розвитку хвороби при профілактичному лікуванні. У конкретних варіантах здійснення гранулоцити гіперактивовані. Така надмірна активація може призвести до серйозних системних несприятливих ефектів, подібним до синдромів шоку, наприклад, алергійний шок. Гранулоцити, як визначено тут, переважно незалежно вибрані з будь-якого з еозинофілів, нейтрофілів, базофілів і мастоцитів. В окремому аспекті даний винахід розкриває лікування алергії типу І або типу III, аутоімунних хвороб або септичного шоку з фармацевтичним препаратом, що включає есцин. Есцин, також названий аесцином, являє собою суміш тритерпенових сапонінів, екстраговану з насіння каштана. Він є компонентом декількох фармацевтичних препаратів на ринку (в Австрії: репарил від Madaus, опіно від Wabosan, венозин від Astellas і деякі інші). Часто продукти містять додаткові фармацевтично активні сполуки, такі як сіль діетиламонію і саліцилової кислоти, буфенін і ефірні олії. Його первинним показанням є венозна недостатність, заснована на інгібіторному потенціалі есцину на ліпосомальні білки і згодом на зниження проникності капілярів. Протизапальні, протинабрякові і венотонічні властивості екстрактів кінського каштана (НСЕ) або екстрактів насіння кінського каштана (HCSE), стандартизовані до есцину, ретельно досліджували на предклінічних моделях CVI (хронічна венозна недостатність) і на хворих пацієнтах. Усебічний короткий огляд сучасної інформації з есцину, а також хімічних структур есцину, підготовлений Sirtori, Pharmacological Research, Vol. 44 (3) 2001:183-193; огляд включає великі дані по механізму дії та хімічним властивостям лікарського засобу. Відповідно до цього документа бета-есцин є активним компонентом суміші і є присутнім у молекулярній формі в основних доступних фармацевтичних продуктах. Бета-есцин переважно знаходиться у формі есцину за даним винаходом. Крім того, продукти, що містять есцин, ліцензовані проти травматичних ушкоджень, набряку (включаючи набряк головного мозку), гематом, синців, розтягання, тендосиновіту і болю хребта. Есцин також відомий як протизапальна речовина, і, головним чином, через інгібування набряку. Інгібування запальної відповіді на клітинному рівні поки не було описано. Детальний огляд застосування есцину та екстрактів каштана кінського можна знайти у Tiffany at al., Journal of Herbal Pharmacotherapy, Vol. 2(1) 2002:71-85. Крім того, протинабряковий механізм β-есцину усе щеневідомий, особливо на молекулярному рівні. Незважаючи на деякі припущення про механізм дії цієї молекули, існує очевидна потреба подальшого дослідження. Останнім часом досліджені ефекти β-есцину на експресію ядерного фактора-В (NF-Β) і фактор некрозу пухлини-α (TNF-альфа) після травматичного ушкодження головного мозку у щурів (Xiao et al., J Zhejiang Univ SCI 2005 6B(I):28 28-32). Ав 94954 6 тори знайшли значне зниження рівня експресії NFΒ у тканині після травматичного ушкодження головного мозку у щурів, що підтверджує їх заяву про те, що есцин можна застосовувати пацієнтам із травматичним ушкодженням головного мозку. Знайшли, що есцин може інгібувати NF-Β, безпосередньо активатор прозапального TNF-альфа. Відповідно до інших джерел есцин має прозапальні ефекти. Наприклад, його застосовують як допоміжний засіб у декількох фармацевтичних препаратах (патенти США №№ 7049063, 7033827, 6943236, 6894146, 6858204, 6800746, 6759515, 6630305, 6509448, 6504010). Допоміжний засіб є агентом, що, оскільки сам по собі не має будьякого специфічного антигенного ефекту, може стимулювати імунну систему, підсилюючи відповідь на вакцину. Таким чином, за певних умов есцин також можна застосовувати як імуностимулятор. Замість лікування симптомів алергії (тобто лікування набрякового утворення або свербежу), було виявлено, що алергію можна лікувати есцином на рівні до стимуляції імунної системи. У мастоцитів комплекси Ig/антиген провокували б TNFальфа вивільнення. Активація мастоцитів (і вивільнення TNF-альфа) також інгібувалася есцином у мастоцитів, що не залежать від шляху NF-Β. Лікування з есцином приводить до селективного протиалергійного ефекту іншого шляху. Тут уперше було показано, що есцин можна успішно застосовувати при лікуванні алергійних хвороб і більш широко як інгібітор активованих гранулоцитів, представлений за допомогою шокової реакції, індукованої LPS. Есцин, наприклад, здатний зменшити алергійну реакцію з наступним стимулом комплексу імуноглобуліну Ε (Ig) і відповідного антигену in vitro. Есцин інгібує у залежності від дози LPS-опосередковане вивільнення TNFальфа в первинній крові людини. Крім того, есцин різко знижує ефект імунологічного шоку у моделі in vivo і ефективно застосовується для лікування постійної алергійної реакції у пацієнта, що страждає від пігментної кропивниці. Лімфоцити, як представлено лінією Т-клітин людини Jurkat, або мієлоїдні клітини, як представлено лінією моноцитних клітин мишей DC 18, не інгібувалися есцином після стимуляції (вивільнення або IL-2, або TNFальфа, відповідно). Усупереч попереднім припущенням (Xiao et al., вище) молекулярних цілей есцину, протиалергійний ефект есцину не залежить від NF-Β. За даним винаходом виявили, що есцин мав протиалергійний ефект на мастоцити, незалежні від NF-В шляху (CFTL12). За переважним варіантом здійснення фармацевтичний препарат, застосовуваний за даним винаходом, містить есцин як єдиний компонент, що інгібує гранулоцити, переважно як єдиний фармацевтично активний агент. Переважно алергійна хвороба є хронічною хворобою або небажаною гіперреакцією гранулоцитів. Продукти, що містять есцин, існують на ринку багато років і мають чудовий профіль безпеки. Отже, застосування есцину або окремо, або в комбінації з іншими лікарськими засобами є при 7 вабливим вибором для пацієнтів із хронічною хворобою. В окремому варіанті здійснення алергійна хвороба являє собою алергію типу І або III, переважно опосередковану мієлоїдними клітинами або гранулоцитами або небажаною реакцією гранулоцитів. У наступних варіантах здійснення медикамент переважно застосовують для лікування алергійної хвороби, вибраної з будь-якої з алергійного риніту, пігментної кропивниці, атопічного дерматиту, алергійної астми, харчової алергії, алергійного кон'юнктивіту, алергії шлунково-кишкового або сечостатевого тракту та алергії вух. Крім того, медикамент переважно застосовують для лікування алергійних хвороб типу III або інших аутоімунних порушень, таких як псоріаз, артрит, імунна тромбоцитопенія (ІТР), аутоімунна гемолітична анемія (AHA) і системний червоний вовчак (SLE), ревматоїдний артрит (RA), тип І діабету і розсіяний склероз. У наступних варіантах здійснення медикамент переважно застосовують для лікування шкірних хвороб з посиленою активацією гранулоцитів, також включаючи хвороби, ускладнені вторинними бактеріальними інфекціями. Фармацевтичний препарат переважно має форму препарату для місцевого застосування або застосування через слизову, переважно лосьйони для шкіри, креми, порошки, спреї або розчини для полоскання. Есциновий препарат особливо прийнятний для місцевого застосування для лікування шкірних або слизуватих симптомів хвороби, опосередкованої гранулоцитом, таких як запалення, а також можливо для системного, наприклад, парентерального або орального (також для специфічного лікування слизової). В іншому варіанті здійснення препарат має форму для орального прийому, переважно у формі пастилок, таблеток, гумок, коржів, порошків або питних розчинів. Системний розподіл есцину особливо переважний у випадках із системною активацією гранулоцитів, таких як анафілактичний шок або септичний шок. Препарат може також включати фармацевтичні носії, наповнювачі, переважно полімерні наповнювачі, або допоміжні речовини. Вираження "носій" означає розріджувач, наприклад, воду, сольовий розчин, наповнювач, або середовище, у якому композицію можна вводити. Для твердої або рідкої композиції носії або допоміжні речовини у фармацевтичній композиції можуть включати SіO2, ТіО2, зв'язувальну речовину, таку як мікрокристалічна целюлоза, полівінілпіролідон (полівідон або повідон), трагакантову камедь, желатин, крохмаль, лактозу або лактози моногідрат, альгінову кислота, кукурудзяний крохмаль і подібне; речовину, що змазує, або сурфактант, такий як магнію стеарат або натрію лаурилсульфат; глідант, такий як колоїдний діоксид кремнію; підсолоджувач, такий як сахароза або сахарин. Переважно препарат включає буфери або агенти, що регулюють рН, наприклад, вибрані з лимонної кислоти, оцтової кислоти, фумарової кислоти, хлороводневої кислоти, яблучної кислоти, азотної кислоти, фосфорної кислоти, пропіонової кислоти, сірчаної кислоти, виннокам'яної кислоти, або їх комбінацій. Есцин також можна 94954 8 застосовувати у формі фармацевтично прийнятної солі, наприклад, натрієвої солі. Інші фармацевтично прийнятні солі включають, серед інших, солі калію, літію та амонію. Переважно наповнювачами є полімери, особливо целюлоза та похідні целюлози. Переважно дози есцину складають від 0,01 мг на кг пацієнта до 500 мг/кг, переважно від 0,1 мг/кг до 100 мг/кг, найбільш переважно від 1 мг/кг до 40 мг/кг. Даний винахід також передбачає застосування фармацевтичних препаратів. Введення препарату не обмежено введеннями під час алергійних реакцій, а може також застосовуватися перед або після реакції, наприклад для профілактичного лікування, тобто лікування перед очікуваною зустріччю з алергеном для зниження сили реакції. Даний винахід додатково проілюстрований наступними фігурами і прикладами без обмеження. Фігури Фіг. 1: Інгібування продукування TNF-альфа стимульованих LPS клітин крові людини. Кров людини інкубували з зазначеними концентраціями есцину. Клітини стимулювали 100 нг/мл LPS (Sigma), і визначали TNF-альфа у супернатанті за допомогою комерційного набору ELISA (ВenderMed-Systems) після 18 годин стимулу. Вісь χ дає концентрації есцину в мкг/мл, вісь у дає концентрації TNF-альфа в пг/мл. Фіг. 2: Інгібування продукування TNF-альфа зі стимульованих Ig/антигеном мастоцитів. CFTL12 мастоцити інкубували при концентраціях від 3,1 мкМ до 0,03 мкМ β-есцину та 0,3 мкМ дексаметазону, відповідно. Через 60 хвилин клітини стимулювали комплексом Ig/антигену. Клітини інкубували при 37°С протягом 6 годин, і TNF-альфа у супернатанті визначали комерційним ELISA TNFальфа миші (Вender-Med-Systems). Планки похибок показують стандартне відхилення між 4 незалежними лунками. 1, дексаметазон; 2, нестимульована; 3, Ig/антиген стимульована; 4, 3,1 мкМ есцин; 5, 1 мкМ есцин; 6, 0,31 мкМ есцин; 7, 0,1 мкМ есцин; 8, 0,031 мкМ есцин; 1 і 4-8 стимульовані Ig/антигеном; вісь у дає концентрацію TNFальфа в пг/мл. Фіг. 3: Мишей Balb/c (n=8) обробили 15 мг/кг ліпополісахариду (Sigma). Мишам одночасно ввели одну дозу 15 мг/кг β-есцину. Через 1 годину після обробки мишей умертвили та одержали сироватку. Рівні TNF-альфа визначали за допомогою комерційного набору ELISA (Bender-Med-Systems). Вісь у відображує кількість TNF-альфа в сироватці мишей у нг/мл. Стовпчик 1 показує мишей, оброблених середовищем, а стовпчик 2 показує результати мишей, оброблених есцином. Фіг. 4: Оцінка симптомів пацієнта з пігментною кропивницею: у 49 річного пацієнта з пігментною кропивницею обробили ушкоджені ділянки обох ніг гелем, що містить 1,5% есцину. Оцінку симптомів для кожної ділянки записали і задокументували цифровою фотографією. Лікування лівої ноги почали у точці 0. Ромби показують оцінку лівої ноги. Через раптово швидку відповідь лівої ноги лікування правої ноги почали через одну годину (квадратики). Невелика ділянка шкіри залишилася 9 необробленою (трикутники). Вісь x дає точки часу після початку лікування в годинах. Приклади Приклад 1: Активність есцину проти вивільнення TNF-альфа, індукованого LPS TNF-альфа - медіатор, що є центральним у запальному процесі, як спостерігалося під час інфекцій та аутоімунних хвороб. Він вивільняється білими кров'яними клітинами, ендотелієм і деякими іншими тканинами в ході ушкодження, наприклад, інфекцією, а також під час алергійної реакції. Його вивільнення стимульоване деякими іншими медіаторами, такими як інтерлейкін 1 і бактеріальний ендотоксин. Аналізи, засновані на клітинах, з використанням клітин первинної крові людини, стимульованих ліпополісахаридом, показали, що есцин у залежності від дози інгібує вивільнення TNF-альфа (Фіг. 1). Приклад 2: Запобігання есцином вивільнення TNF-альфа з алергійних стимульованих мастоцитів Мишачі мастоцити, стимульовані будь-яким з Ig і відповідного антигену, відповідали продукуванням декількох медіаторів, включаючи TNFальфа, що служить індикатором для ідентифікації протиалергійних речовин. Застосування есцину знижує вивільнення цього медіатора в залежності від дози. Інгібування продукування TNF-альфа, щонайменше, на 50% спостерігалося при концентраціях 0,31 мкМ. При концентрації 30 нМ інгібуючий ефект був значним. Цей результат показує, що хоча інгібуючий ефект не був настільки ж ефективним, як спостерігалося для контрольного кортикостероїда дексаметазону, есцин має могутні протиалергічні властивості (Фіг. 2). Приклад 3: Активність есцину на тваринній моделі in vivo, що імітує ефект імунологічного шоку 94954 10 TNF-індукція у мишей введенням ліпополісахариду є загальновизнаною моделлю для швидких імунологічних реакцій і моделлю для септичного шоку. Як показано на фігурі 3, обробка мишей 15 мг/кг есцину знижує рівень TNF-альфа до 30%. Приклад 4: Лікування пацієнта з пігментною кропивницею з алергійною шкірною реакцією Пацієнтці поставили діагноз пігментної кропивниці, хвороби, що характеризується неспецифічними алергійними реакціями, викликаними надреакцією мастоцитів. Історія хвороби 49 річної пацієнтки включала алергійні реакції, головним чином шкіри, а в деяких випадках системні прояви, що лікували антигістамінами та кортикостероїдами. До лікування сильна алергійна реакція постійно спостерігалася на великих ділянках шкіри ніг і рук. Пацієнтка скаржилася на свербіж і біль шкіри. Було чітке помітне запалення шкіри. Використовували наступну оцінку для виміру серйозності симптомів: 5 = різко виражена реакція, включаючи почервоніння шкіри, свербіж і біль, частково спостерігалися відкриті рані, 4 = зменшення почервоніння, немає свербежу, і біль легкий, рані закрилися, 3 = почервоніння усе ще помітне, відсутність болю, 2 = колір шкіри порівнюється з неушкодженими ділянками, симптоми помірні, 1 = ушкоджені ділянки не відрізнялися від здорових ділянок, рані гояться, 0 = неушкоджена здорова шкіра. Обидві ноги пацієнтки лікували гелем, що містить 1,5% есцину і деякі наповнювачі сполуки. Оцінку симптомів для кожної ділянки записали і задокументували цифровою фотографією (Фіг. 4). Лікування лівої ноги почали в точці 0. Через несподівану і швидку відповідь пацієнтки призначили лікування другої ноги, що почали через одну годину. Знову відповідь була дуже ефективною. Ушкоджені ділянки шкіри лівої руки служили контролем. 11 94954 12 13 Комп’ютерна верстка Л. Купенко 94954 Підписне 14 Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601