Сполука, що містить модифікований олігонуклеотид, комплементарна mir-21

Реферат: Винахід належить до сполуки, що містить модифікований олігонуклеотид, яка комплементарна miR-21, модифікованого олігонуклеотиду та фармацевтичної композиції, що його містить. Винахід також належить до способу зменшення експресії колагену в клітині та способу лікування захворювання, асоційованого з miR-21, за допомогою даного олігонуклеотиду. UA 115652 C2 (12) UA 115652 C2 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Дана заявка заявляє перевагу пріоритету за попередніми заявками на патент США № 61/478767, поданої 25 квітня 2011 року, і № 61/565779, поданої 1 грудня 2011 року, які включені в дану заявку посиланням у повному обсязі для будь-яких цілей. ГАЛУЗЬ ДАНОГО ВИНАХОДУ У даному документі забезпечені способи та композиції для модуляції активності miR-21. ОПИС ВІДОМОГО РІВНЯ ТЕХНІКИ МікроРНК (microRNA), також відомі як “зрілі мікроРНК”, є невеликими (що мають довжину приблизно 18-24 нуклеотидів) молекулами некодуючих РНК, закодованими в геномах рослин та тварин. У деяких випадках висококонсервативні мікроРНК, що ендогенно експресуються, регулюють експресію генів шляхом зв'язування з 3'-нетрансльованими ділянками (3'-UTR) конкретних мРНК. Більше 1000 різних мікроРНК виявили в рослинах та тваринах. Певні зрілі мікроРНК, вочевидь, походять з довгих ендогенних первинних транскриптів мікроРНК (також відомих як при-мікроРНК, при-mir, при-miR або при-пре-мікроРНК), які часто мають довжину в кілька сотень нуклеотидів (Lee, et al., EMBO J., 2002, 21(17), 4663-4670). Функціональні аналізи мікроРНК виявили, що ці невеликі некодуючі РНК сприяють різноманітним фізіологічним процесам у тварин, включаючи контроль тривалості розвитку, органогенез, диференціювання, патернінг, ембріогенез, контроль росту та запрограмовану загибель клітин. Приклади конкретних процесів, у яких беруть участь мікроРНК, включають диференціювання стовбурових клітин, нейрогенез, ангіогенез, гемопоез та екзоцитоз (огляд наведений в Alvarez-Garcia and Miska, Development, 2005, 132, 4653-4662). КОРОТКИЙ ОПИС ДАНОГО ВИНАХОДУ У даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21, і де модифікований олігонуклеотид має нуклеозидний патерн, описаний у даному документі. У даному документі забезпечені способи інгібування активності miR-21, що включають приведення клітини в контакт зі сполукою, описаною у даному документі. У конкретних варіантах здійснення клітина перебуває в умовах in vivo. У конкретних варіантах здійснення клітина перебуває в умовах in vitro. У даному документі забезпечені способи лікування захворювання, асоційованого з miR-21, що включають уведення суб'єктові, що має захворювання, асоційоване з miR-21, сполуки, описаної в даному документі. У конкретних варіантах здійснення тварина є людиною. Сполуки, описані в даному документі, забезпечені для застосування в терапії. У даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, який складається з 8-22 зв'язаних нуклеозидів, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), і де модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 суміжних нуклеозидів наступного нуклеозидного патерну I в орієнтації 5’3’: B Q Q B Q Q Q B Q Z (R)X-N -N -N -N -(N -N -N -N )3-N -N , де кожний R незалежно являє собою небіциклічний нуклеозид; X дорівнює від 1 до 4; кожний B Q N незалежно являє собою біциклічний нуклеозид; кожний N незалежно являє собою Z небіциклічний нуклеозид; і кожний N незалежно являє собою модифікований нуклеозид. У даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, який складається з 8-19 зв'язаних нуклеозидів, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), і де модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 суміжних нуклеозидів наступного нуклеозидного патерну II в орієнтації 5’-3’: M B Q Q B Q Q Q B Q Z N -N -N -N -N -(N -N -N -N )3-N -N , M B де N незалежно являє собою модифікований небіциклічний нуклеозид; кожний N Q незалежно являє собою біциклічний нуклеозид; кожний N незалежно являє собою Z небіциклічний нуклеозид; і N незалежно являє собою модифікований нуклеозид. У даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, який складається з 8-19 зв'язаних нуклеозидів, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), і де модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 суміжних нуклеозидів наступного нуклеозидного патерну III в орієнтації 5’-3’: B Q Q B Q Q Q B Y Z (R)X-N -N -N -N -(N -N -N -N )3-N -N , B де кожний R являє собою небіциклічний нуклеозид; X дорівнює від 1 до 4; кожний N являє Q Y собою біциклічний нуклеозид; кожний N являє собою небіциклічний нуклеозид; N являє собою Z модифікований нуклеозид або немодифікований нуклеозид; і кожний N являє собою модифікований нуклеозид. 1 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, який складається з 8-19 зв'язаних нуклеозидів, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), і де модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 суміжних нуклеозидів наступного нуклеозидного патерну IV в орієнтації 5’-3’: M B Q Q B Q Q Q B Y Z N -N -N -N -N -(N -N -N -N )3-N -N , M B де N являє собою модифікований небіциклічний нуклеозид; кожний N являє собою Q Y біциклічний нуклеозид; кожний N являє собою небіциклічний нуклеозид; N являє собою Z модифікований нуклеозид або немодифікований нуклеозид; і N являє собою модифікований нуклеозид. У даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, який складається з 8-19 зв'язаних нуклеозидів, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), і де модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 суміжних нуклеозидів наступного нуклеозидного патерну V в орієнтації 5’-3’: M B Q Q B B Z N -N -(N -N -N -N )4-N , M B де N являє собою модифікований небіциклічний нуклеозид; кожний N являє собою Q Z біциклічний нуклеозид; кожний N являє собою небіциклічний нуклеозид; і N являє собою модифікований нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I або III X дорівнює 1, X дорівнює 2, X дорівнює 3 або X дорівнює 4. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 9, щонайменше 10, щонайменше 11, щонайменше 12, щонайменше 13, щонайменше 14, щонайменше 15, щонайменше 16, щонайменше 17, щонайменше 18, щонайменше 19, щонайменше 20, щонайменше 21 або 22 суміжні нуклеозиди патерну I, II, III, IV або V. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, модифікований олігонуклеотид складається з 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 або 22 зв'язаних нуклеозидів нуклеозидного патерну I, II, III, IV або V. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду щонайменше на 90% комплементарна, щонайменше на 95% комплементарна або на 100% комплементарна нуклеотидній послідовності miR-21 (SEQ ID NO:1). У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, нуклеїнова основа в положенні 1 miR-21 спарена з першою нуклеїновою основою на 3’-кінці модифікованого олігонуклеотиду. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний біциклічний нуклеозид незалежно обраний з LNA-нуклеозиду, cEt-нуклеозиду та ENAнуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, щонайменше два небіциклічні нуклеозиди містять цукрові фрагменти, що відрізняються один від одного. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний небіциклічний нуклеозид має той же тип цукрового фрагмента. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний біциклічний нуклеозид являє собою cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення cEt-нуклеозид являє собою S-cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення cEt-нуклеозид являє собою R-cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний біциклічний нуклеозид являє собою LNA-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний небіциклічний нуклеозид незалежно обраний з β-D-дезоксирибонуклеозиду, β-Dрибонуклеозиду, 2’-O-метилнуклеозиду, 2’-O-метоксіетилнуклеозиду та 2’-фторнуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний небіциклічний нуклеозид незалежно обраний з β-D-дезоксирибонуклеозиду та 2’-Oметоксіетилнуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний небіциклічний нуклеозид являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний небіциклічний нуклеозид являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний біциклічний нуклеозид містить неметильовану нуклеїнову основу. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, не 2 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 більше двох небіциклічних нуклеозидів являють собою 2’-O-метоксіетилнуклеозиди. У таких певних варіантах здійснення кожний інший небіциклічний нуклеозид являє собою β-Dдезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, самий крайній з 5’-кінця та самий крайній з 3’-кінця небіциклічні нуклеозиди являють собою 2’-Oметоксіетилнуклеозиди, і кожний інший небіциклічний нуклеозид являє собою β-Dдезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, два небіциклічні нуклеозиди являють собою 2’-MOE-нуклеозиди, і кожний інший небіциклічний нуклеозид являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I або III кожний нуклеозид R являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I або III три нуклеозиди R являють собою 2’-O-метоксіетилнуклеозиди, і один нуклеозид R являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених в даному документі, щонайменше один міжнуклеозидний зв’язок є модифікованим міжнуклеозидним зв'язком. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний міжнуклеозидний зв’язок являє собою модифікований міжнуклеозидний зв'язок. У конкретних варіантах здійснення модифікований міжнуклеозидний зв’язок являє собою фосфотіоатний міжнуклеозидний зв'язок. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, щонайменше один нуклеозид містить модифіковану нуклеїнову основу. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, щонайменше один цитозин являє собою 5-метилцитозин. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, кожний цитозин являє собою 5-метилцитозин. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, цитозин у положенні два модифікованого олігонуклеотиду являє собою 5-метилцитозин. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I R складається із чотирьох R1 R2 R3 R4 R1 зв'язаних нуклеозидів N -N -N -N , де N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид, і кожний R2 R3 R4 B з N -N -N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; Q Z кожний N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-Oметоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I кожний R B являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; X дорівнює 1; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; Q Z кожний N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-Oметоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I кожний R B являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; X дорівнює 1; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; Q Z кожний N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; і N являє собою 2’-Oметоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I кожний R B являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; X дорівнює 1; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; Q Z кожний N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; і N являє собою S-cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I кожний R являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; X дорівнює 1; кожний N являє собою LNA-нуклеозид; кожний N являє Z собою β-D-дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I кожний R являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; X дорівнює 1; кожний N являє собою LNA-нуклеозид; кожний N являє Z собою β-D-дезоксирибонуклеозид; і N являє собою LNA-нуклеозид. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну II N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою β-DZ дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах M B здійснення нуклеозидного патерну II N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; кожний N Q Z являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; і N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I M B Q N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N Z являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; кожний N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; і N M являє собою S-cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну II N B Q являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою LNA-нуклеозид; кожний N Z являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У M конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну II N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою LNA-нуклеозид; кожний N являє собою β-DZ дезоксирибонуклеозид; і N являє собою LNA-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III кожний R являє собою 2’-O 3 UA 115652 C2 B 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Q метоксіетилнуклеозид; X дорівнює 1; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє Y Z собою β-D-дезоксирибонуклеозид; N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III кожний B R являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; X дорівнює 1; кожний N являє собою S-cEtQ Y нуклеозид; кожний N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; N являє собою β-DZ дезоксирибонуклеозид; і N являє собою S-cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III кожний R являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; X дорівнює 1; B Q Y кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; N Z являє собою S-cEt-нуклеозид; і N являє собою S-cEt-нуклеозид. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну IV N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою β-DY Z дезоксирибонуклеозид; N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; N являє собою 2’-OM метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну IV N являє B Q собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє Y Z собою β-D-дезоксирибонуклеозид; N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; і N являє собою M S-cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну IV N являє собою B Q 2’-O-метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою βY Z D-дезоксирибонуклеозид; N являє собою S-cEt-нуклеозид; і N являє собою S-cEt-нуклеозид. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну V N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою β-DZ дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, модифікований олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. У конкретних варіантах здійснення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, модифікований олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:4, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. У даному документі забезпечені способи інгібування активності miR-21, що включають приведення клітини в контакт зі сполукою, забезпеченою у даному документі. У конкретних варіантах здійснення клітина перебуває в умовах in vivo. У конкретних варіантах здійснення клітина перебуває в умовах in vitro. У конкретних варіантах здійснення клітина являє собою фібробласт, клітину, що характеризується гіперпроліферацією, кератиноцит або клітину, що перебуває під дією гіпоксії. У конкретних варіантах здійснення фібробласт являє собою фібробласт, що характеризується гіперпроліферацією. У даному документі забезпечені способи зменшення експресії колагену в клітині, що включають приведення клітини в контакт зі сполукою, забезпеченою у даному документі. У даному документі забезпечені способи лікування, попередження або відстрочки початку захворювання, асоційованого з miR-21, що включають уведення суб'єктові, який має таке захворювання, будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі. У конкретних варіантах здійснення захворюванням є фіброз. У конкретних варіантах здійснення фіброз є фіброзом нирок, фіброзом легенів, фіброзом печінки, фіброзом серця, фіброзом шкіри, віковим фіброзом, фіброзом селезінки, склеродермією або посттрансплантаційним фіброзом. У конкретних варіантах здійснення фіброз є фіброзом нирок та присутній у суб'єкта, що має захворювання, обране з гломерулосклерозу, тубулоінтерстиціального фіброзу, IgA-нефропатії, інтерстиціального фіброзу/тубулярної атрофії; хронічного ураження нирок, ушкодження нефронів, гломерулонефриту, цукрового діабету, ідіопатичного фокально-сегментарного гломерулосклерозу, мембранозної нефропатії, колапсуючої гломерулопатії, хронічної рецидивної інфекції нирок та термінальної стадії ниркової недостатності. У конкретних варіантах здійснення фіброз нирок виникає в результаті гострої або повторної травми нирки. У конкретних варіантах здійснення фіброз є фіброзом печінки та присутній у суб'єкта, що має захворювання, обране із хронічного ушкодження печінки, інфекційного гепатиту, неалкогольного стеатогепатиту та цирозу. У конкретних варіантах здійснення фіброз легенів є ідіопатичним фіброзом легенів, або суб'єкт має хронічне обструктивне захворювання легенів. У конкретних варіантах здійснення захворювання є запальним захворюванням. В даному документі забезпечені способи стимулювання загоєння ран у суб'єкта, які включають введення суб'єктові, що має гостру або хронічну рану, будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі. У конкретних варіантах здійснення хронічна рана є гострою або хронічною післяопераційною раною, проникаючою раною, авульсійним ушкодженням, переломом, різаним ушкодженням, опіковим ураженням, рваною раною, укушеною раною, 4 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 артеріальною виразкою, венозною виразкою, пролежнем або діабетичною виразкою. У конкретних варіантах здійснення сполуку місцево вводять у рану. У даному документі забезпечені способи лікування фібропроліферативного порушення у суб'єкта, які включають уведення суб'єктові будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі. Будь-який зі способів, забезпечених у даному документі, може включати вибір суб'єкта, що має підвищену експресію miR-21 в одній або декількох тканинах. У конкретних варіантах здійснення введення суб'єктові будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, знижує експресію колагену. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт потребує поліпшеної функції органа, де функція органа обрана з функції серця, функції легенів, функції печінки та функції нирок. У конкретних варіантах здійснення введення будь-якої зі сполук, забезпечених у даному документі, поліпшує функцію органа у суб'єкта, де функція органа обрана з функції серця, функції легенів, функції печінки та функції нирок. Будь-який зі способів, забезпечених у даному документі, включає оцінювання функції нирок у суб'єкта, що може включати вимір рівня азоту сечовини в крові суб'єкта; вимір рівня креатиніну в крові суб'єкта; вимір у суб'єкта кліренсу креатиніну; вимір у суб'єкта ступеня протеїнурії; вимір у суб'єкта співвідношення альбумін:Cr; та/або вимір у суб'єкта кількості виділюваної сечі. Будь-який зі способів, забезпечених у даному документі, може включати оцінювання у суб’єкта функції печінки, що може включати вимір у крові суб'єкта рівнів аланінамінотрансферази; вимір у крові суб'єкта рівнів аспартатамінотрансферази; вимір у крові суб'єкта рівнів білірубіну; вимір у крові суб'єкта рівнів альбуміну; вимір у суб'єкта протромбінового часу; вимір у суб'єкта ступеня асциту; та/або вимір у суб'єкта ступеня енцефалопатії. Будь-який зі способів, забезпечених у даному документі, може включати оцінювання у суб'єкта функції легенів, що може включати вимір у суб'єкта життєвої ємності легенів; вимір у суб'єкта форсованої життєвої ємності легенів; вимір у суб'єкта об'єму форсованого видиху за одну секунду; вимір у суб'єкта максимальної об'ємної швидкості видиху; вимір у суб'єкта швидкості форсованого видиху; вимір у суб'єкта максимальної довільної вентиляції; визначення у суб’єкта співвідношення об'єму форсованого видиху за одну секунду та форсованої життєвої ємності; вимір у суб'єкта співвідношення вентиляція/перфузія; вимір у суб'єкта вимивання азоту; та/або вимір абсолютного об'єму повітря в одному або декількох легенях суб'єкта. Будь-який зі способів, забезпечених у даному документі, може включати оцінювання у суб’єкта функції серця, що може включати вимір у суб'єкта хвилинного об'єму серця; вимір у суб'єкта ударного об'єму серця; вимір у суб'єкта середньої швидкості систолічного викиду; вимір у суб'єкта систолічного тиску крові; вимір у суб'єкта фракції викиду лівого шлуночка; визначення у суб’єкта ударного індексу; визначення у суб’єкта серцевого індексу; вимір у суб'єкта процентного зниження фракції викиду лівого шлуночка; вимір у суб'єкта середньої швидкості циркулярного вкорочення волокон міокарда; вимір у суб'єкта характеру швидкості припливу крові в лівий шлуночок; вимір у суб'єкта характеру швидкості потоку крові через легеневі вени та/або вимір максимальної швидкості раннього діастолічного руху фіброзного кільця мітрального клапана суб'єкта. Будь-який зі способів, забезпечених у даному документі, може включати введення суб'єктові щонайменше одного терапевтичного засобу, обраного із протизапального засобу, імуносупресивного засобу, протидіабетичного засобу, дигоксину, вазодилататору, інгібіторів ангіотензин-II-перетворюючого ферменту (ACE), блокаторів рецепторів ангіотензину II (ARB), блокатора кальцієвих каналів, динітрату ізосорбіду, гідралазину, нітрату, гідралазину, бетаблокатора, натрійуретичних пептидів, гепариноїду та інгібітора фактора росту сполучної тканини. У конкретних варіантах здійснення протизапальний засіб являє собою нестероїдний протизапальний засіб, де нестероїдний протизапальний засіб необов'язково обраний з ібупрофену, інгібітора COX-1 та інгібітора COX-2. У конкретних варіантах здійснення імуносупресивний засіб обраний з кортикостероїду, циклофосфаміду та мікофенолату мофетилу. У конкретних варіантах здійснення протизапальний засіб являє собою кортикостероїд, де кортикостероїд необов'язково являє собою преднізон. У конкретних варіантах здійснення інгібітори ангіотензин-II-перетворюючого ферменту (ACE) обрані з каптоприлу, еналаприлу, лізиноприлу, беназеприлу, хінаприлу, фозиноприлу та раміприлу. У конкретних варіантах здійснення блокатори рецепторів ангіотензину II (ARB) обрані з кандесартану, ірбесартану, олмесартану, лозартану, валсартану, телмісартану та епросартану. У конкретних варіантах здійснення захворювання являє собою рак. У конкретних варіантах здійснення рак є раком печінки, раком молочної залози, раком сечового міхура, раком 5 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 передміхурової залози, раком товстої кишки, раком легенів, раком мозку, раком крові та кровотворної системи, раком підшлункової залози, раком голови та шиї, раком язика, раком шлунка, раком шкіри або раком щитовидної залози. У конкретних варіантах здійснення рак печінки є гепатоклітинною карциномою. У конкретних варіантах здійснення рак мозку є мультиформною гліобластомою. У конкретних варіантах здійснення рак крові та кровотворної системи є гострим мієлогенним лейкозом, гострим лімфоцитарним лейкозом, гострим моноцитарним лейкозом, множинною мієломою, хронічним лімфоцитарним лейкозом, хронічним мієлоїдним лейкозом, лімфомою Ходжкіна або неходжкінською лімфомою. У конкретних варіантах здійснення способи, забезпечені в даному документі, включають застосування стосовно суб'єкта щонайменше однієї додаткової протиракової терапії. У конкретних варіантах здійснення протиракова терапія являє собою застосування засобу, що викликає ушкодження ДНК, інгібітора проліферації, антифолату, інгібітора рецепторів факторів росту, антиангіогенного засобу, інгібітора рецепторних тирозинкіназ, інгібітора кіназ, інгібітора факторів росту, цитотоксичного засобу, променеву терапію або хірургічне видалення пухлини. У конкретних варіантах здійснення засіб, що викликає ушкодження ДНК, являє собою 1,3-біс(2хлоретил)-1-нітрозосечовину, бусульфан, карбоплатин, кармустин, хлорамбуцил, цисплатин, циклофосфамід, дакарбазин, даунорубіцин, доксорубіцин, епірубіцин, етопозид, ідарубіцин, іфосфамід, іринотекан, ломустин, мехлоретамін, мельфалан, мітоміцин C, мітоксантрон, оксаліплатин, темозоломід або топотекан. У конкретних варіантах здійснення антифолат являє собою метотрексат, аміноптерин, тимідилатсинтазу, серингідроксиметилтрансферазу, фолілполіглутамілсинтетазу, g-глутамілгідролазу, гліцинамідрибонуклеотидтрансформілазу, лейковорин, аміноімідазолкарбоксамідрибонуклеотидтрансформілазу, 5-фторурацил або переносник фолату. У конкретних варіантах здійснення інгібітор рецепторів факторів росту являє собою ерлотиніб або гефітиніб. У конкретних варіантах здійснення інгібітор ангіогенезу являє собою бевацизумаб, талідомід, карбоксіамідотриазол, TNP-470, CM101, IFN-α, тромбоцитарний фактор-4, сурамін, SU5416, тромбоспондин, антагоніст VEGFR, інгібіторний фактор ангіогенезу, одержуваний із хрящової тканини, інгібітор матриксних металопротеїназ, ангіостатин, ендостатин, 2-метоксіестрадіол, текогалан, тетратіомолібдат, пролактин або ліномід. У конкретних варіантах здійснення інгібітор кіназ являє собою бевацизумаб, BIBW 2992, цетуксимаб, іматиніб, трастузумаб, гефітиніб, ранібізумаб, пегаптаніб, сорафеніб, дазатиніб, сунітиніб, ерлотиніб, нілотиніб, лапатиніб, панітумумаб, вандетаніб, E7080, пазопаніб, мубритиніб або фостаматиніб. У конкретних варіантах здійснення введення суб'єктові, що має рак, приводить у результаті до зменшення розміру пухлин та/або числа пухлин. У конкретних варіантах здійснення введеннясуб'єктові, що має рак, попереджає або затримує збільшення розміру пухлин та/або числа пухлин. У конкретних варіантах здійснення введення суб'єктові, що має рак, попереджає або сповільнює метастатичне прогресування. У конкретних варіантах здійснення введення суб'єктові, що має рак, збільшує час загального виживання та/або виживання без прогресування у суб’єкта. У конкретних варіантах здійснення способи, забезпечені в даному документі, включають вибір суб'єкта з підвищеним рівнем сироваткового альфа-фетопротеїну та/або підвищеним рівнем сироваткового дез-гама-карбоксипротромбіну. У конкретних варіантах здійснення способи, забезпечені в даному документі, включають зниження рівня сироваткового альфа-фетопротеїну та/або сироваткового дез-гама-карбоксипротромбіну. У конкретних варіантах здійснення способи, забезпечені в даному документі, включають вибір тварини з аномальною функцією печінки. У будь-якому зі способів, забезпечених у даному документі, суб'єкт є людиною. У будь-якому зі способів, забезпечених у даному документі, сполука представлена у вигляді фармацевтичної композиції. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в терапії. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в лікуванні фіброзу. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в стимулюванні загоєння ран. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в лікуванні раку. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в попередженні та/або відстрочці початку метастазування. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в лікуванні захворювання серця. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в одержанні лікарського препарату. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в одержанні лікарського препарату для 6 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 лікування фіброзу. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в одержанні лікарського препарату для стимулювання загоєння ран. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в одержанні лікарського препарату для лікування раку. Будь-яка зі сполук, забезпечених у даному документі, може бути призначена для застосування в одержанні лікарського препарату для попередження та/або відстрочки початку метастазування. КОРОТКИЙ ОПИС ФІГУР На фігурі 1 показане співвідношення альбуміну та креатиніну в сечі (ACR, мкг Alb/мг Cr) у моделі ішемії-реперфузії/нефректомії (IR/Nx) на мишах, яким уводили сполуки на основі антиmiR21, як описано в прикладі 5. На фігурі 2 показана експресія (A) колагену 1A1 і (B) колагену 3A1 в нирках у моделі UUO на мишах, яким уводили сполуки на основі анти-miR21, як описано в прикладі 6. ДОКЛАДНИЙ ОПИС Якщо не зазначене інше, усі технічні та наукові терміни, використані в даному документі, мають те саме значення, яке звичайно розуміє фахівець у галузі, до якої відноситься даний винахід. Якщо не приводяться конкретні визначення, номенклатура, використовувана стосовно аналітичної хімії, синтетичної органічної хімії та медичної та фармацевтичної хімії та їх способи і методики, описані у даному документі, добре відомі та широко застосовуються в даній галузі техніки. У випадку якщо в даному документі є кілька визначень термінів, перевагу мають такі з даного розділу. Для хімічного синтезу, хімічного аналізу, одержання, складання та доставки фармацевтичних препаратів і лікування суб'єктів можна застосовувати стандартні методики. Такі конкретні методики та способи можна знайти, наприклад, в “Carbohydrate Modifications in Antisense Research” за редакцією Sangvi та Cook, American Chemical Society, Washington D.C., 1994; та в "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, Pa., 18-е видання, 1990; і які включені в даний документ посиланням для будь-яких цілей. У припустимих випадках усі патенти, заявки на патенти, опубліковані заявки та публікації, послідовності з GENBANK, веб-сайти та інші опубліковані матеріали, на які посилаються по всьому повному розкриттю в даному документі, якщо не зазначене інше, включені посиланням у повному обсязі. Якщо посилання робиться на URL або інший подібний ідентифікатор або адресу, то розуміють, що такі ідентифікатори можуть змінюватися, і конкретна інформація в інтернеті може змінюватися, але шляхом пошуку в інтернеті можна знайти еквівалентну інформацію. Посилання на неї свідчать про доступність та публічне поширення такої інформації. Перед тим, як будуть розкриті та описані дані композиції та способи, слід розуміти, що термінологія, використана в даному документі, служить тільки для цілей опису конкретних варіантів здійснення та не призначена бути обмежуючою. Слід зазначити, що використані в описі та прикладеній формулі винаходу форми однини включають посилання на множину, якщо з контексту явно не випливає інше. Визначення “Фіброз” означає утворення або розвиток надлишкової фіброзної сполучної тканини в органі або тканині. У конкретних варіантах здійснення фіброз має місце як репаративний або реактивний процес. У конкретних варіантах здійснення фіброз має місце у відповідь на ушкодження або ураження. Вираз “фіброз” слід розуміти як утворення або розвиток надлишкової фіброзної сполучної тканини в органі або тканині в якості репаративного або реактивного процесу, на відміну від утворення фіброзної тканини як нормальної складової органа або тканини. “Суб'єкт, що імовірно має” означає суб'єкта, у якого проявляються один або декілька клінічних індикаторів захворювання. “Суб'єкт, що імовірно має фіброз” означає суб'єкта, у якого проявляються один або декілька клінічних індикаторів фіброзу. “Фібробласт” означає клітину, яка дає початок утворенню сполучної тканини. “Фібропроліферативне порушення” означає порушення, що характеризується надлишковою проліферацією та/або активацією фібробластів. “Рак печінки” означає злоякісну пухлину печінки, або первинний рак, або метастазуючий рак. У конкретних варіантах здійснення рак печінки включає без обмежень рак, що походить від гепатоцитів, такий як, наприклад, види гепатоми та гепатоклітинної карциноми; фіброламелярна карцинома; і види холангіокарциноми (або рака жовчних проток). “Метастазування” означає процес, завдяки якому рак поширюється з місця, де він уперше виник як первинна пухлина, в інші місця локалізації в організмі. Метастатичне прогресування первинної пухлини відображається в декількох стадіях, включаючи відокремлення від сусідніх клітин первинної пухлини, виживання в кровообігу та ріст у місці вторинної локалізації. 7 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 “Загальний час виживання” означає період часу, протягом якого суб'єкт залишається в живих після діагностування або лікування захворювання. У конкретних варіантах здійснення захворювання являє собою рак. У деяких варіантах здійснення загальний час виживання являє собою виживання після діагностування. У деяких варіантах здійснення час загального виживання являє собою виживання після початку лікування. “Виживання без прогресування” означає період часу, протягом якого суб'єкт, що має захворювання, залишається в живих без погіршення перебігу захворювання. У конкретних варіантах здійснення виживання без прогресування визначають шляхом визначення стадії захворювання або проведення його кількісної оцінки. У конкретних варіантах здійснення виживання без прогресування у суб’єкта, що має рак печінки, визначають шляхом оцінювання розміру пухлин, числа пухлин та/або метастазування. “Анти-miR” означає олігонуклеотид з нуклеотидною послідовністю, комплементарною мікроРНК. У конкретних варіантах здійснення анти-miR являє собою модифікований олігонуклеотид. “Анти-miR-X”, де “miR-X” позначає конкретну мікроРНК, означає олігонуклеотид з нуклеотидною послідовністю, комплементарною miR-X. У конкретних варіантах здійснення антиmiR-X повністю комплементарна miR-X. У конкретних варіантах здійснення анти-miR-X щонайменше на 80%, щонайменше на 85%, щонайменше на 90% або щонайменше на 95% є комплементарною miR-X. У конкретних варіантах здійснення анти-miR-X являє собою модифікований олігонуклеотид. “miR-21” означає зрілу мікроРНК із нуклеотидною послідовністю, UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA (SEQ ID NO:1). “Послідовність miR-21 зі структурою типу стебло-петля” означає послідовність зі структурою типу стебло-петля з нуклеотидною послідовністю, UGUCGGGUAGCUUAUCAGACUGAUGUUGACUGUUGAAUCUCAUGGCAACACCAGUCGAUGGG CUGUCUGACA (SEQ ID NO:2). “Цільова нуклеїнова кислота” означає нуклеїнову кислоту, з якою призначено гібридизувати олігомерну сполуку. “Націлювання” означає процес конструювання та вибору нуклеотидної послідовності, яка буде гібридизуватися з цільовою нуклеїновою кислотою. “Націлений на” означає наявність нуклеотидної послідовності, яка дозволить здійснювати гібридизацію з цільовою нуклеїновою кислотою. “Захоплення мішені” означає взаємодію олігонуклеотиду з мікроРНК, якій він комплементарний, таким чином, що змінюється активність, експресія або рівень мікроРНК. У конкретних варіантах здійснення захоплення мішені означає взаємодію анти-miR з мікроРНК, якій вона комплементарна, таким чином, що інгібується активність мікроРНК. “Модуляція" означає відхилення функції, кількості або активності. У конкретних варіантах здійснення модуляція означає збільшення функції, кількості або активності. У конкретних варіантах здійснення модуляція означає зменшення функції, кількості або активності. “Експресія” означає будь-які функції та етапи, завдяки яким інформація, яка кодується геном, перетворюється в структури, що присутні та функціонують в клітині. “5’-кінцевий цільовий сайт” означає нуклеїнову основу цільової нуклеїнової кислоти, комплементарну самій крайній з 3’-кінця нуклеїновій основі конкретного олігонуклеотиду. “3’-кінцевий цільовий сайт” означає нуклеїнову основу цільової нуклеїнової кислоти, комплементарну самій крайній з 5’-кінця нуклеїновій основі конкретного олігонуклеотиду. “Ділянка” означає частину із зв'язаних нуклеозидів у нуклеїновій кислоті. У конкретних варіантах здійснення олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність, комплементарну ділянці цільової нуклеїнової кислоти. Наприклад, у конкретних подібних варіантах здійснення олігонуклеотид комплементарний ділянці послідовності мікроРНК зі структурою типу стеблопетля. У конкретних подібних варіантах здійснення олігонуклеотид повністю комплементарний ділянці послідовності мікроРНК зі структурою типу стебло-петля. “Сегмент” означає меншу частину або субфрагмент ділянки. “Нуклеотидна послідовність” означає порядок суміжних нуклеїнових основ в олігомерній сполуці або нуклеїновій кислоті, як правило, перелічених в орієнтації 5’-3’, незалежно від будьякої модифікації цукрів, зв'язків та/або нуклеїнових основ. “Суміжні нуклеїнові основи” означають нуклеїнові основи, що безпосередньо прилягають одна до одної в нуклеїновій кислоті. “Комплементарність нуклеїнових основ” означає здатність двох нуклеїнових основ до нековалентного спарювання за допомогою утворення водневих зв'язків. “Комплементарний” означає, що одна нуклеїнова кислота здатна гібридизуватися з іншою 8 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 нуклеїновою кислотою або олігонуклеотидом. У конкретних варіантах здійснення комплементарний відноситься до олігонуклеотиду, здатного гібридизуватися із цільовою нуклеїновою кислотою. “Повністю комплементарний” означає, що кожна нуклеїнова основа олігонуклеотиду здатна утворювати пару з нуклеїновою основою в кожному відповідному положенні в цільовій нуклеїновій кислоті. У конкретних варіантах здійснення олігонуклеотид повністю комплементарний мікроРНК, тобто кожна нуклеїнова основа олігонуклеотиду комплементарна нуклеїновій основі у відповідному положенні в мікроРНК. У конкретних варіантах здійснення олігонуклеотид, де кожна нуклеїнова основа має комплементарність стосовно нуклеїнової основи в ділянці послідовності мікроРНК зі структурою типу стебло-петля, повністю комплементарний послідовності мікроРНК зі структурою типу стебло-петля. “Процентна комплементарність” означає процентну частку нуклеїнових основ олігонуклеотиду, комплементарних частині цільової нуклеїнової кислоти, що має таку ж довжину. Процентну комплементарність обчислюють шляхом ділення числа нуклеїнових основ олігонуклеотиду, комплементарних нуклеїновим основам у відповідних положеннях у цільовий нуклеїновій кислоті, на загальне число нуклеїнових основ в олігонуклеотиді. “Процентна ідентичність” означає число нуклеїнових основ у першій нуклеїновій кислоті, ідентичних нуклеїновим основам у відповідних положеннях у другій нуклеїновій кислоті, поділене на загальне число нуклеїнових основ у першій нуклеїновій кислоті. У конкретних варіантах здійснення перша нуклеїнова кислота являє собою мікроРНК, і друга нуклеїнова кислота являє собою мікроРНК. У конкретних варіантах здійснення перша нуклеїнова кислота являє собою олігонуклеотид, і друга нуклеїнова кислота являє собою олігонуклеотид. “Гібридизувати” означає гібридизацію комплементарних нуклеїнових кислот, що відбувається в результаті комплементарності нуклеїнових основ. “Незбіжність” означає нуклеїнову основу першої нуклеїнової кислоти, нездатну утворювати пару з нуклеїновою основою у відповідному положенні другої нуклеїнової кислоти. “Ідентична” стосовнонуклеотидних послідовностей означає наявність такої ж самої нуклеотидної послідовності незалежно від модифікацій цукрів, зв'язків та/або нуклеїнових основ і незалежно від метильованого стану будь-яких присутніх піримідинів. “МікроРНК” означає ендогенну некодуючу РНК, що має довжину від 18 до 25 нуклеїнових основ, яка є продуктом розщеплення пре-мікроРНК за допомогою ферменту Dicer. Приклади зрілих мікроРНК знаходяться у базі даних мікроРНК, відомій як miRBase (http://microrna.sanger.ac.uk/). У конкретних варіантах здійснення мікроРНК скорочують як “мікроРНК” або “miR”. “Пре-мікроРНК” або “пре-miR” означає некодуючу РНК, що має шпилькову структуру, яка є продуктом розщеплення при-miR за допомогою рибонуклеази, специфічної до дволанцюгових РНК, відомої як Drosha. “Послідовність зі структурою типу стебло-петля” означає РНК, що має шпилькову структуру і містить послідовність зрілої мікроРНК. Послідовності пре-мікроРНК і послідовності зі структурами типу стебло-петля можуть перекриватися. Приклади послідовностей зі структурами типу стебло-петля знаходяться у базі даних мікроРНК, відомій як miRBase (http://microrna.sanger.ac.uk/). “При-мікроРНК” або “при-miR” означає некодуючу РНК, що має шпилькову структуру, яка є субстратом для рибонуклеази Drosha, специфичної до дволанцюгових РНК. “Попередник мікроРНК” означає транскрипт, що походить від геномної ДНК та містить некодуючу структуровану РНК, яка містить одну або декілька послідовностей мікроРНК. Наприклад, у конкретних варіантах здійснення попередник мікроРНК являє собою премікроРНК. У конкретних варіантах здійснення попередник мікроРНК являє собою при-мікроРНК. “МікроРНК-регульований транскрипт” означає транскрипт, регульований за допомогою мікроРНК. “Моноцистронний транскрипт” означає попередник мікроРНК, що містить одну послідовність мікроРНК. “Поліцистронний транскрипт” означає попередник мікроРНК, що містить дві або більше послідовностей мікроРНК. “Послідовність затравки” означає нуклеотидну послідовність, що містить від 6 до 8 суміжних нуклеїнових основ з нуклеїнових основ 1-9 5’-кінця послідовності зрілої мікроРНК. “Відповідна послідовності затравки” означає нуклеотидну послідовність, комплементарну послідовності затравки, та що має таку ж саму довжину, як послідовність затравки. “Олігомерна сполука” означає сполуку, що містить декілька зв'язаних мономерних субодиниць. Олігомерні сполуки включають олігонуклеотиди. 9 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 “Олігонуклеотид” означає сполуку, що містить декілька зв'язаних нуклеозидів, кожний з яких може бути модифікованим або немодифікованим незалежно один від одного. “Міжнуклеозидний зв’язок, що зустрічається в природі” означає 3’-5’-фосфодіефірний зв'язок між нуклеозидами. “Природний цукор” означає цукор, що виявляють в ДНК (2’-H) або РНК (2’-OH). “Міжнуклеозидний зв’язок” означає ковалентний зв'язок між суміжними нуклеозидами. “Зв'язані нуклеозиди” означають нуклеозиди, з'єднані за допомогою ковалентного зв'язку. “Нуклеїнова основа” означає гетероциклічний фрагмент, здатний до нековалентного спарювання з іншою нуклеїновою основою. “Нуклеозид” означає нуклеїнову основу, зв'язану із цукровим фрагментом. “Нуклеотид” означає нуклеозид, що має фосфатну групу, ковалентно зв'язану із цукровою частиною нуклеозиду. “Сполука, що містить модифікований олігонуклеотид, який складається з” ряду зв'язаних нуклеозидів, означає сполуку, що включає модифікований олігонуклеотид, який має встановлене число зв'язаних нуклеозидів. Таким чином, сполука може включати додаткові замісники або кон’югати. Якщо не зазначено інше, сполука не включає будь-яких додаткових нуклеозидів окрім таких олігонуклеотиду. “Сполука, що містить модифікований олігонуклеотид, який складається з” ряду зв'язаних нуклеозидів, означає сполуку, що включає модифікований олігонуклеотид, який має встановлене число зв'язаних нуклеозидів. Таким чином, сполука може включати додаткові замісники або кон’югати. Якщо не зазначено інше, сполука не включає будь-яких додаткових нуклеозидів окрім таких модифікованого олігонуклеотиду. “Модифікований олігонуклеотид” означає олігонуклеотид, що має одну або декілька модифікацій у відношенні кінця, цукру, нуклеїнової основи та/або міжнуклеозидного зв'язку, що зустрічаються в природі. Модифікований олігонуклеотид може містити немодифіковані нуклеозиди. “Одноланцюговий модифікований олігонуклеотид” означає модифікований олігонуклеотид, що не гібридизується з комплементарним ланцюгом. “Модифікований нуклеозид” означає нуклеозид, що має будь-яку зміну в порівнянні з нуклеозидом, що зустрічається в природі. Модифікований нуклеозид може мати модифікований цукор і немодифіковану нуклеїнову основу. Модифікований нуклеозид може мати модифікований цукор і модифіковану нуклеїнову основу. Модифікований нуклеозид може мати природний цукор і модифіковану нуклеїнову основу. У конкретних варіантах здійснення модифікований нуклеозид являє собою біциклічний нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення модифікований нуклеозид являє собою небіциклічний нуклеозид. “Модифікований міжнуклеозидний зв’язок” означає будь-яку зміну в порівнянні з міжнуклеозидним зв'язком, що зустрічається в природі. “Фосфотіоатний міжнуклеозидний зв’язок” означає зв'язок між нуклеозидами, де один з немісткових атомів є атомом сірки. “Модифікований цукровий фрагмент” означає заміщення та/або будь-яку зміну в порівнянні із природним цукром. “Немодифікована нуклеїнова основа" означає гетероциклічні основи РНК або ДНК, що зустрічаються в природі, пуринові основи аденін (A) та гуанін (G) і піримідинові основи тимін (T), цитозин (C) (включаючи 5-метилцитозин) та урацил (U). “5-метилцитозин” означає цитозин, що містить метильну групу, приєднану до 5-положення. “Неметильований цитозин” означає цитозин, що не має метильної групи, приєднаної до 5положення. “Модифікована нуклеїнова основа” означає будь-яку нуклеїнову основу, що не є немодифікованою нуклеїновою основою. “Фуранозил” означає структуру, яка містить 5-членне кільце, що складається з чотирьох атомів вуглецю та одного атома кисню. “Фуранозил, що зустрічається в природі ” означає рибофуранозил, виявлений в РНК, що зустрічається в природі, або дезоксирибофуранозил, виявлений в ДНК, що зустрічається в природі. “Цукровий фрагмент” означає фуранозил, що зустрічається в природі, або модифікований цукровий фрагмент. “Модифікований цукровий фрагмент” означає заміщений цукровий фрагмент або замінник цукру. “Заміщений цукровий фрагмент” означає фуранозил, який не є фуранозилом, що зустрічаються в природі. Заміщені цукрові фрагменти включають без обмежень цукрові 10 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 фрагменти, які містять модифікації в 2’-положенні, 5’-положенні та/або 4’-положенні фуранозилу, що зустрічається в природі. Певні заміщені цукрові фрагменти є біциклічними цукровими фрагментами. “Замінник цукру” означає структуру, яка не містить фуранозил і здатна заміняти фуранозил нуклеозиду, що зустрічається в природі, таким чином, щоб отриманий у результаті нуклеозид був здатний (1) включатися до складу олігонуклеотиду та (2) гібридизуватися з комплементарним нуклеозидом. Такі структури включають відносно прості зміни фуранозилу, такі як кільця, що містять різне число атомів (наприклад, 4-, 6- або 7-членні кільця); заміну кисню фуранозилу атомом, що не є киснем (наприклад, вуглецем, сіркою або азотом); або як зміну числа атомів, так і заміну кисню. Такі структури також можуть містити заміщення, що відповідають таким, описаним стосовно заміщених цукрових фрагментів (наприклад, 6-членні карбоциклічні біциклічні замінники цукру, які необов'язково містять додаткові замісники). Замінники цукру також включають більш складні заміни цукру (наприклад, некільцеві системи пептидної нуклеїнової кислоти). Замінники цукру включають без обмеження морфоліно, циклогексеніли та циклогексити. “2’-O-метиловий цукор” або “2’-OMe-цукор” означає цукор, що має O-метилову модифікацію в 2’-положенні. “2’-O-метоксіетиловий цукор” або “2’-MOE-цукор” означає цукор, що має O-метоксіетилову модифікацію в 2’-положенні. “2’-O-фтор” або “2’-F” означає цукор, що має фтормодифікацію в 2’-положенні. “Біциклічний цукровий фрагмент” означає модифікований цукровий фрагмент, що містить 47-членне кільце (включаючи без обмежень фуранозил), яке містить місток, що з'єднує два атоми 4-7-членного кільця з утворенням другого кільця, що дає в результаті біциклічну структуру. У конкретних варіантах здійснення 4-7-членне кільце є кільцем цукру. У конкретних варіантах здійснення 4-7-членне кільце являє собою фуранозил. У таких конкретних варіантах здійснення місток з'єднує 2’-вуглець і 4’-вуглець фуранозилу. “Цукровий фрагмент закритої нуклеїнової кислоти (LNA)” означає заміщений цукровий фрагмент, що містить місток (CH2)-O між 4’ і 2’ атомами кільця фуранози. “Цукровий фрагмент ENA” означає заміщений цукровий фрагмент, що містить місток (CH 2)2О між 4’ і 2’ атомами кільця фуранози. “Цукровий фрагмент із закріпленим етилом (cEt)” означає заміщений цукровий фрагмент, який містить місток CH(CH3)-O між 4’ і 2’ атомами кільця фуранози. У конкретних варіантах здійснення місток CH(CH3)-O закріплений в S-орієнтації. У конкретних варіантах здійснення (CH2)2-О закріплений в R-орієнтації. “S-cEt-цукровий фрагмент” означає заміщений цукровий фрагмент, що містить Sзакріплений місток CH(CH3)-O між 4’ і 2’ атомами кільця фуранози. “R-cEt-цукровий фрагмент” означає заміщений цукровий фрагмент, що містить Rзакріплений місток CH(CH3)-O між 4’ і 2’ атомами кільця фуранози. “2’-O-метилнуклеозид” означає 2’-модифікований нуклеозид, що має 2’-O-метилову модифікацію цукру. “2’-O-метоксіетилнуклеозид” означає 2’-модифікований нуклеозид, що має 2’-Oметоксіетилову модифікацію цукру. 2’-O-метоксіетилнуклеозид може містити модифіковану або немодифіковану нуклеїнову основу. “2’-фторнуклеозид” означає 2’-модифікований нуклеозид, що має 2’-фтормодифікацію цукру. 2’-фторнуклеозид може містити модифіковану або немодифіковану нуклеїнову основу. “Біциклічний нуклеозид” означає 2’-модифікований нуклеозид, що має біциклічний цукровий фрагмент. Біциклічний нуклеозид може мати модифіковану або немодифіковану нуклеїнову основу. “cEt-нуклеозид” означає нуклеозид, що містить cEt-цукровий фрагмент. cEt-нуклеозид може містити модифіковану або немодифіковану нуклеїнову основу. “S-cEt-нуклеозид” означає нуклеозид, що містить S-cEt-цукровий фрагмент. “R-cEt-нуклеозид” означає нуклеозид, що містить R-cEt-цукровий фрагмент. “Небіциклічний нуклеозид” означає нуклеозид, що має цукор, відмінний від біциклічного цукру. У конкретних варіантах здійснення небіциклічний нуклеозид містить цукор, що зустрічається в природі. У конкретних варіантах здійснення небіциклічний нуклеозид містить модифікований цукор. У конкретних варіантах здійснення небіциклічний нуклеозид являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення небіциклічний нуклеозид являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. “β-D-дезоксирибонуклеозид” означає ДНК-нуклеозид, що зустрічається в природі. β-Dдезоксирибонуклеозид може містити модифіковану або немодифіковану нуклеїнову основу. 11 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 “β-D-рибонуклеозид” означає РНК-нуклеозид, що зустрічається в природі. β-Dрибонуклеозид може містити модифіковану або немодифіковану нуклеїнову основу. “LNA-нуклеозид” означає нуклеозид, що містить цукровий фрагмент LNA. “ENA-нуклеозид” означає нуклеозид, що містить цукровий фрагмент ENA. “Мотив” означає патерн модифікованих та/або немодифікованих нуклеїнових основ, цукрів та/або міжнуклеозидних зв'язків в олігонуклеотиді. У конкретних варіантах здійснення мотив являє собою нуклеозидний патерн. “Нуклеозидний патерн” означає патерн модифікацій нуклеозидів у модифікованому олігонуклеотиді або його ділянці. Нуклеозидний патерн являє собою мотив, що описує розташування модифікацій нуклеозидів в олігонуклеотиді. “Повністю модифікований олігонуклеотид” означає, що кожна нуклеїнова основа, кожний цукор та/або кожний міжнуклеозидний зв’язок модифіковані. “Одноманітно модифікований олігонуклеотид” означає, що кожна нуклеїнова основа, кожний цукор та/або кожний міжнуклеозидний зв’язок має одну й ту ж саму модифікацію в усьому модифікованому олігонуклеотиді. “Стабілізуюча модифікація” означає модифікацію нуклеозиду, що забезпечує підвищену стабільність модифікованого олігонуклеотиду в присутності нуклеаз у порівнянні з такою, забезпеченою 2’-дезоксинуклеозидами, зв'язаними фосфодіефірними міжнуклеозидними зв'язками. Наприклад, у конкретних варіантах здійснення стабілізуюча модифікація являє собою стабілізуючу модифікацію нуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення стабілізуюча модифікація являє собою модифікацію міжнуклеозидного зв'язку. “Стабілізуючий нуклеозид” означає нуклеозид, модифікований для забезпечення підвищеної стабільності олігонуклеотиду стосовно впливу нуклеази в порівнянні з такою, забезпеченою 2’дезоксинуклеозидом. В одному з варіантів здійснення стабілізуючий нуклеозид являє собою 2’модифікований нуклеозид. “Стабілізуючий міжнуклеозидний зв’язок" означає міжнуклеозидний зв'язок, що забезпечує поліпшену стабільність олігонуклеотиду стосовно впливу нуклеази в порівнянні з такою, забезпеченою фосфодіефірним міжнуклеозидним зв'язком. В одному з варіантів здійснення стабілізуючий міжнуклеозидний зв’язок являє собою фосфотіоатний міжнуклеозидний зв'язок. “Суб'єкт” означає людину або тварину, відмінну від людини, обрану для лікування або терапії. “Суб'єкт, що потребує цього” означає стан, при якому суб'єкта ідентифікують як такого, який потребує терапії або лікування. “Суб'єкт, що імовірно має” означає суб'єкта, у якого проявляється один або кілька клінічних індикаторів захворювання. “Введення” означає надання суб'єктові фармацевтичного засобу або композиції та включає без обмежень уведення медичним працівником і самостійне введення. “Парентеральне введення” означає введення за допомогою ін'єкції або інфузії. Парентеральне введення включає без обмежень підшкірне введення, внутрішньовенне введення або внутрішньом'язове введення. “Підшкірне введення” означає введення безпосередньо під шкіру. “Внутрішньовенне введення” означає введення у вену. “Внутрішньосерцеве введення” означає введення в серце. У конкретних варіантах здійснення внутрішньосерцеве введення відбувається за допомогою катетера. У конкретних варіантах здійснення внутрішньосерцеве введення відбувається за допомогою операції на відкритому серці. “Легеневе введення” означає введення в легені. “Що вводяться одночасно” відноситься до спільного введення двох засобів будь-яким способом, при якому фармакологічні ефекти обох проявляються в пацієнта в один і той же час. При одночасному введенні не потрібно, щоб обидва засоби вводили в одній фармацевтичній композиції, в одній і тій же лікарській формі або одним і тим же шляхом уведення. Не потрібно, щоб ефекти обох засобів проявлялися в той самий час. Потрібно тільки, щоб ефекти перекривалися протягом певного періоду часу, і не потрібно, щоб вони були однакової протяжності в часі. “Тривалість” означає період часу, протягом якого триває активність або подія. У конкретних варіантах здійснення тривалість лікування являє собою період часу, протягом якого вводять дози фармацевтичного засобу або фармацевтичної композиції. “Терапія” означає спосіб лікування захворювання. У конкретних варіантах здійснення терапія включає без обмежень хіміотерапію, променеву терапію або введення фармацевтичного засобу. 12 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 “Лікування” означає застосування однієї або декількох конкретних процедур, застосовуваних для лікування або полегшення перебігу захворювання. У конкретних варіантах здійснення конкретна процедура являє собою введення одного або декількох фармацевтичних засобів. “Полегшення перебігу” означає зменшення тяжкості щонайменше одного індикатору стану або захворювання. У конкретних варіантах здійснення полегшення перебігу включає відстрочку або вповільнення прогресування одного або декількох індикаторів стану або захворювання. Тяжкість індикаторів може визначатися за допомогою суб'єктивних або об'єктивних заходів, відомих фахівцям у даній галузі. “З підвищеним ризиком розвитку” означає статус, при якому суб'єкт схильний до розвитку стану або захворювання. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт з підвищеним ризиком розвитку стану або захворювання проявляє один або кілька симптомів стану або захворювання, але не проявляє достатнього числа симптомів, щоб у нього можна було діагностувати стан або захворювання. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт з підвищеним ризиком розвитку стану або захворювання проявляє один або кілька симптомів стану або захворювання, але меншою мірою, ніж потрібно для діагностування стану або захворювання. “Попередити початок” означає попередити розвиток стану або захворювання у суб'єкта з підвищеним ризиком розвитку захворювання або стану. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт з підвищеним ризиком розвитку захворювання або стану одержує лікування, подібне лікуванню, одержуваному суб'єктом, у якого вже є захворювання або стан. “Відстрочити початок” означає відстрочити розвиток стану або захворювання у суб'єкта з підвищеним ризиком розвитку захворювання або стану. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт з підвищеним ризиком розвитку захворювання або стану одержує лікування, подібне лікуванню, одержуваному суб'єктом, у якого вже є захворювання або стан. “Терапевтичний засіб” означає фармацевтичний засіб, застосовуваний для лікування, полегшення перебігу або попередження захворювання. “Доза” означає встановлену кількість фармацевтичного засобу, передбаченого в одному введенні. У конкретних варіантах здійснення дозу можна вводити у двох або більше болюсах, таблетках або ін'єкціях. Наприклад, у конкретних варіантах здійснення, де необхідне підшкірне введення, для необхідної дози потрібен об'єм, який нелегко надати за допомогою однієї ін'єкції. У таких варіантах здійснення можна застосовувати дві або більше ін'єкцій для досягнення необхідної дози. У конкретних варіантах здійснення дозу можна вводити у двох або більше ін'єкціях для того, щоб звести в індивіда до мінімуму реакцію в місці ін'єкції. У конкретних варіантах здійснення дозу вводять за допомогою повільної інфузії. “Одиниця дозування” означає форму, у якій забезпечений фармацевтичний засіб. У конкретних варіантах здійснення одиниця дозування являє собою флакон, що містить ліофілізований олігонуклеотид. У конкретних варіантах здійснення одиниця дозування являє собою флакон, що містить відновлений олігонуклеотид. “Терапевтично ефективна кількість” відноситься до кількості фармацевтичного засобу, що забезпечує терапевтичну користь тварині. “Фармацевтична композиція” означає суміш речовин, придатну для введення індивідові, що включає фармацевтичний засіб. Наприклад, фармацевтична композиція може містити стерильний водний розчин. “Фармацевтичний засіб” означає речовину, що забезпечує терапевтичний ефект при введенні суб'єктові. “Активний фармацевтичний інгредієнт” означає речовину у фармацевтичній композиції, що забезпечує необхідний ефект. “Поліпшена функція органа” означає зміну функції органа убік нормального діапазону значень. У конкретних варіантах здійснення функцію органа визначають шляхом виміру рівня молекул, що виявляються в крові суб'єкта. Наприклад, у конкретних варіантах здійснення поліпшену функцію печінки визначають за зменшенням в крові рівнів печінкової трансамінази. “Прийнятний профіль безпеки” означає картину побічних ефектів, що перебуває в клінічно прийнятних межах. “Побічний ефект” означає фізіологічну відповідь, пов'язану з лікуванням, відмінну від необхідних ефектів. У конкретних варіантах здійснення побічні ефекти включають без обмежень реакції в місці ін'єкції, аномалії функціональних проб печінки, аномалії ниркової функції, гепатотоксичність, нефротоксичність, аномалії центральної нервової системи та види міопатії. Такі побічні ефекти можна виявити прямо або опосередковано. Наприклад, підвищені рівні амінотрансферази в сироватці можуть вказувати на гепатотоксичність або аномалію функції печінки. Наприклад, підвищений рівень білірубіну може вказувати на гепатотоксичність або аномалію функції печінки. 13 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 “Реакція в місці ін'єкції” означає запалення або аномальне почервоніння шкіри в місці ін'єкції в індивіда. “Дотримання суб'єктом схеми лікування” означає дотримання суб'єктом вказівок щодо рекомендованої або призначеної терапії. “Додержуватися припису” означає дотримання суб'єктом вказівок щодо рекомендованої терапії. “Рекомендована терапія” означає лікування, рекомендоване медичним працівником для лікування, полегшення перебігу, відстрочки або попередження захворювання. Огляд miR-21 є мікроРНК, що убіквітарно експресується, пов'язаною з різноманітними клітинними процесами, включаючи диференціювання клітин, проліферацію, апоптоз і відновлення матриксу. Крім того, miR-21 асоційована з декількома захворюваннями. При раку часто підвищується рівень регуляції miR-21, а інгібування miR-21 показало зменшення росту пухлини в декількох моделях раку на тваринах. Інгібування miR-21 у моделі гіпертрофії серця на тваринах показало роль miR-21 у захворюванні серця. Роль у фіброзі була показана в моделях фіброзу серця, фіброзу нирок та фіброзу легенів на тваринах. Вивчення інгібування miR-21 у моделі на тканинних експлантатах проілюструвало, що інгібування miR-21 стимулює загоєння ран. Інгібітори miR-21 як такі застосовні в різноманітних науково-дослідних і клінічних умовах. Щоб ідентифікувати сильні інгібітори miR-21, була створена велика кількість сполук на основі анти-miR-21. Сполуки варіювали за довжиною, а також за числом, розміщенням та ідентичністю біциклічних нуклеозидів і небіциклічних нуклеозидів. Вихідну серію сполук тестували в in vitro аналізі із застосуванням люциферази, у якому ідентифікували підгрупу сполук як активні сполуки, що є активними сполуками in vitro. Ці активні сполуки in vitro потім тестували в in vivo аналізах, щоб ідентифікувати ті сполуки, які є сильними інгібіторами miR-21 in vivo. З початкових in vitro та in vivo етапів скринінгу вибирали певні сполуки як основу для створення додаткових сполук. Експериментально спостережувані кореляції між структурою та активністю (як in vitro, так і in vivo) застосовували для інформаційного забезпечення створення цих додаткових сполук, з додатковими змінами довжини, і відбору, і розташування біциклічних і небіциклічних нуклеозидів. Скринінгові аналізи in vitro та in vivo потім повторили для цих додаткових сполук. Певні сполуки також тестували на інші властивості, наприклад, чутливості до активності екзонуклеаз. Спостерігали, що найбільш активні in vitro сполуки, що є найбільш активними in vitro, не обов'язково були найбільш активними in vivo сполуками, що є найбільш активними in vivo, і, додатково, що деякі помірно активні in vitro сполуки, що є помірно активними in vitro, були високоактивними сполуками in vivo. Серед 178 сполук, підданих скринінгу in vitro у ході цього способу, 60 ідентифікували як активні в аналізі із застосуванням люциферази. Серед цих 60 активних in vitro сполук ідентифікували підгрупу активних in vivo. У ході цього повторюваного способу створення та скринінгу сполук спостерігали, що сполуки, які мають конкретні патерни модифікацій біциклічних і небіциклічних нуклеозидів, були сильними інгібіторами miR-21 in vivo. Ці сполуки як такі застосовні для модуляції клітинних процесів, що стимулюються активністю miR-21. Додатково, такі сполуки застосовні для лікування, попередження та/або відстрочки початку захворювань, асоційованих з miR-21. Такі захворювання можуть характеризуватися аномально високою експресією miR-21 у порівнянні зі зразками, що не мають захворювання. Такі захворювання включають без обмежень фіброз, гостре ураження нирок, гіпертрофію серця, інфаркт міокарда та рак. Додатково, композиції та способи, забезпечені в даному документі, можна застосовувати для стимулювання загоєння ран. Певні модифіковані олігонуклеотиди, націлені на miR-21 У даному документі забезпечені модифіковані олігонуклеотиди, що мають певні патерни біциклічних і небіциклічних нуклеозидів. Модифіковані олігонуклеотиди з патернами, ідентифікованими в даному документі, є ефективними інгібіторами активності miR-21. Кожний з нуклеозидних патернів, проілюстрованих у даному документі, показаний в орієнтації 5’-3’. У конкретних варіантах здійснення в даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, який складається з 8-22 зв'язаних нуклеозидів, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду, комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), і де модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 суміжних нуклеозидів наступного нуклеозидного патерну I в орієнтації 5’-3’: B Q Q B Q Q Q B Q Z (R)X-N -N -N -N -(N -N -N -N )3-N -N , де кожний R являє собою небіциклічний нуклеозид; X дорівнює від 1 до 4; B кожний N являє собою біциклічний нуклеозид; 14 UA 115652 C2 Q 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 кожний N являє собою небіциклічний нуклеозид; і Z кожний N являє собою модифікований нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I X дорівнює 1. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну II X дорівнює 2. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I X дорівнює 3. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I X дорівнює 4. У конкретних варіантах здійснення в даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, який складається з 8-19 зв'язаних нуклеозидів, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), і де модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 суміжних нуклеозидів наступного нуклеозидного патерну II в орієнтації 5’-3’: M B Q Q B Q Q Q B Q Z N -N -N -N -N -(N -N -N -N )3-N -N , M де N являє собою модифікований небіциклічний нуклеозид нуклеозидом; B кожний N являє собою біциклічний нуклеозид; Q кожний N являє собою небіциклічний нуклеозид; і Z N являє собою модифікований нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення в даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, який складається з 8-22 зв'язаних нуклеозидів, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), і де модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 суміжних нуклеозидів наступного нуклеозидного патерну III в орієнтації 5’-3’: B Q Q B Q Q Q B Y Z (R)X-N -N -N -N -(N -N -N -N )3-N -N , де кожний R являє собою небіциклічний нуклеозид; X дорівнює від 1 до 4; B кожний N являє собою біциклічний нуклеозид; Q кожний N являє собою небіциклічний нуклеозид; Y N являє собою модифікований нуклеозид або немодифікований нуклеозид; і Z кожний N являє собою модифікований нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III X дорівнює 1. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I X дорівнює 2. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III X дорівнює 3. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III X дорівнює 4. У конкретних варіантах здійснення в даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, який складається з 8-19 зв'язаних нуклеозидів, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), і де модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 суміжних нуклеозидів наступного нуклеозидного патерну IV в орієнтації 5’-3’: M B Q Q B Q Q Q B Y Z N -N -N -N -N -(N -N -N -N )3-N -N , M де N являє собою модифікований небіциклічний нуклеозид нуклеозидом; B кожний N являє собою біциклічний нуклеозид; Q кожний N являє собою небіциклічний нуклеозид; Y N являє собою модифікований нуклеозид або немодифікований нуклеозид; і Z N являє собою модифікований нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення в даному документі забезпечені сполуки, що містять модифікований олігонуклеотид, який складається з 8-19 зв'язаних нуклеозидів, де нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1), і де модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 суміжних нуклеозидів наступного нуклеозидного патерну V в орієнтації 5’-3’: M B Q Q B B Z N -N -(N -N -N -N )4-N , M де N являє собою модифікований небіциклічний нуклеозид нуклеозидом; B кожний N являє собою біциклічний нуклеозид; Q кожний N являє собою небіциклічний нуклеозид; і Z N являє собою модифікований нуклеозид. Наступні варіанти здійснення застосовують до будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, включаючи нуклеозидні патерни I-V. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 9, щонайменше 10, щонайменше 11, щонайменше 12, щонайменше 13, щонайменше 14, щонайменше 15, щонайменше 16, щонайменше 17, щонайменше 18, щонайменше 19, щонайменше 20, щонайменше 21 або 22 суміжних нуклеозидів нуклеозидного патерну, описаного в даному документі. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному 15 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 документі, нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду щонайменше на 90% комплементарна miR-21 (SEQ ID NO:1). У конкретних варіантах здійснення нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду щонайменше на 95% комплементарна (SEQ ID NO:1). У конкретних варіантах здійснення нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду на 100% комплементарна (SEQ ID NO:1). У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, нуклеотидна послідовність модифікованого олігонуклеотиду комплементарна miR-21, так що положення 1 мікроРНК спарене з 3’-кінцевою нуклеїновою основою олігонуклеотиду. Наприклад: Слід розуміти, що в SEQ ID NO:3 і SEQ ID NO:4 кожний “T” у послідовності може незалежно являти собою або нуклеїнову основу “T”, або нуклеїнову основу “U”, і що сполука, яка має послідовність SEQ ID NO:3 або SEQ ID NO:4, може містити всі T, усі U або будь-яку комбінацію U і T. Таким чином, присутність “T” у різних положеннях в SEQ ID NO:3 і SEQ ID NO:4 у всьому даному розкритті та у супровідному переліку послідовностей не є обмежуючою стосовно того, представляє собою конкретна нуклеїнова основа “T” або “U”. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, кожний біциклічний нуклеозид незалежно обраний з LNA-нуклеозиду, cEt-нуклеозиду та ENA-нуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення цукрові фрагменти щонайменше двох біциклічних нуклеозидів відрізняються один від одного. У конкретних варіантах здійснення всі біциклічні нуклеозиди мають однакові цукрові фрагменти. У конкретних варіантах здійснення кожний біциклічний нуклеозид являє собою cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення кожний біциклічний нуклеозид являє собою LNA-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, cEt-нуклеозид являє собою S-cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, cEt-нуклеозид являє собою R-cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, кожний небіциклічний нуклеозид незалежно обраний з β-D-дезоксирибонуклеозиду, β-D-рибонуклеозиду, 2’-O-метилнуклеозиду, 2’-O-метоксіетилнуклеозиду та 2’-фторнуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, кожний небіциклічний нуклеозид незалежно обраний з β-D-дезоксирибонуклеозиду та 2’-O-метоксіетилнуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, щонайменше два небіциклічних нуклеозиди містять цукрові фрагменти, що відрізняються один від одного, і незалежно обрані з β-D-дезоксирибонуклеозиду, β-Dрибонуклеозиду, 2’-O-метилнуклеозиду, 2’-O-метоксіетилнуклеозиду та 2’-фторнуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, щонайменше два небіциклічних нуклеозиди містять цукрові фрагменти, що відрізняються один від одного, і незалежно обрані з β-D-дезоксирибонуклеозиду та 2’-Oметоксіетилнуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, кожний небіциклічний нуклеозид має один і той самий тип цукрового фрагмента та обраний з β-D-дезоксирибонуклеозиду, β-D-рибонуклеозиду, 2’-O-метилнуклеозиду, 2’-Oметоксіетилнуклеозиду та 2’-фторнуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, кожний небіциклічний нуклеозид являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення кожний небіциклічний нуклеозид являє собою 2’-Oметилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, не більше 3 небіциклічних нуклеозидів являють собою 2’-O-метоксіетилнуклеозиди. У 16 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 конкретних варіантах здійснення не більше 2 небіциклічних нуклеозидів являють собою 2’-Oметоксіетилнуклеозиди. У конкретних варіантах здійснення не більше 1 небіциклічного нуклеозиду являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, один небіциклічний нуклеозид являє собою 2’-MOE-нуклеозид, і кожний інший небіциклічний нуклеозид являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення два небіциклічних нуклеозиди являють собою 2’-O-метоксіетилнуклеозиди, і кожний інший небіциклічний нуклеозид являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення три небіциклічних нуклеозиди являють собою 2’-O-метоксіетилнуклеозиди, і кожний інший небіциклічний нуклеозид являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, самий крайній з 5’-кінця небіциклічний нуклеозид і самий крайній з 3’-кінця небіциклічний нуклеозид являють собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид, і кожний інший небіциклічний нуклеозид являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення будь-якого нуклеозидного патерну I, де X дорівнює 4, кожний нуклеозид R являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I, де X дорівнює 4, два нуклеозиди R являють собою β-Dдезоксирибонуклеозиди, і два нуклеозиди R являють собою 2’-O-метоксіетилнуклеозиди. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I, де X дорівнює 4, три нуклеозиди R являють собою β-D-дезоксирибонуклеозиди, і один нуклеозид R являє собою 2’-Oметоксіетилнуклеозид. R1 R2 R3 R4 У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I R являє собою N -N -N -N , R1 R2 R3 де N являє собою 2’-MOE-нуклеозид, N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид, N являє R4 собою β-D-дезоксирибонуклеозид, і N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I R складається з чотирьох R1 R2 R3 R4 R1 зв'язаних нуклеозидів N -N -N -N , де N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид, і кожний R2 R3 R4 B з N -N -N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; Q Z кожний N являє собою β-D-дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-Oметоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:4, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I X дорівнює 1, і кожний B нуклеозид R являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; Q Z кожний N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; і N являє собою 2’-Oметоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну I X дорівнює 4, і кожний B нуклеозид R являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; Q Z кожний N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид; і N являє собою 2’-Oметоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:4, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну II N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою β-DZ дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну II N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою β-DZ дезоксирибонуклеозид; і N являє собою S-cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну II N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою LNA-нуклеозид; кожний N являє собою β-DZ дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну II N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою LNA-нуклеозид; кожний N являє собою β-D 17 UA 115652 C2 Z 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 дезоксирибонуклеозид; і N являє собою LNA-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III R являє собою модифікований небіциклічний нуклеозид нуклеозидом; і x дорівнює 1. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III R являє собою модифікований небіциклічний нуклеозид нуклеозидом; Q x дорівнює 1; і кожний N являє собою немодифікований нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III R являє собою модифікований небіциклічний нуклеозид Q B нуклеозидом; x дорівнює 1; кожний N являє собою немодифікований нуклеозид; кожний N Y незалежно обраний з S-cEt-нуклеозиду та LNA-нуклеозиду; і N обраний з β-Dдезоксирибонуклеозиду, 2’-O-метоксіетилнуклеозиду, S-cEt-нуклеозиду та LNA-нуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III R являє собою модифікований Q небіциклічний нуклеозид нуклеозидом; x дорівнює 1; і кожний N являє собою β-Dдезоксирибонуклеозид. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III R являє Q собою модифікований небіциклічний нуклеозид нуклеозидом; x дорівнює 1; кожний N являє B собою β-D-дезоксирибонуклеозид; кожний N незалежно обраний з S-cEt-нуклеозиду та LNAY нуклеозиду; і N обраний з β-D-дезоксирибонуклеозиду, 2’-O-метоксіетилнуклеозиду, S-cEtнуклеозиду та LNA-нуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III R Q являє собою модифікований небіциклічний нуклеозид нуклеозидом; x дорівнює 1; кожний N B Y являє собою немодифікований нуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; і N обраний з β-D-дезоксирибонуклеозиду, 2’-O-метоксіетилнуклеозиду та S-cEt-нуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну III R являє собою модифікований Q небіциклічний нуклеозид нуклеозидом; x дорівнює 1; кожний N являє собою β-DB Y дезоксирибонуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; і N обраний з β-Dдезоксирибонуклеозиду, 2’-O-метоксіетилнуклеозиду та S-cEt-нуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид патерну III має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну IV N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N обраний з S-cEt-нуклеозиду та LNA-нуклеозиду; кожний N Y обраний з β-D-дезоксирибонуклеозиду та 2’-O-метоксіетилнуклеозиду; N обраний з 2’-OZ метоксіетилнуклеозиду, S-cEt-нуклеозиду, LNA-нуклеозиду та β-D-дезоксирибонуклеозиду; і N обраний з 2’-O-метоксіетилнуклеозиду, LNA-нуклеозиду та S-cEt-нуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид патерну IV має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну IV N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N обраний з β-DY дезоксирибонуклеозиду та 2’-O-метоксіетилнуклеозиду; N обраний з 2’-OZ метоксіетилнуклеозиду, S-cEt-нуклеозиду та β-D-дезоксирибонуклеозиду; і N обраний з 2’-Oметоксіетилнуклеозиду і S-cEt-нуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид патерну IV має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну IV N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою β-DY Z дезоксирибонуклеозид; N являє собою S-cEt-нуклеозид; і N являє собою S-cEt-нуклеозид. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид патерну IV має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну V N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N обраний з S-cEt-нуклеозиду та LNA-нуклеозиду; кожний N Z обраний з β-D-дезоксирибонуклеозиду та 2’-O-метоксіетилнуклеозиду; та N обраний з 2’-Oметоксіетилнуклеозиду, LNA-нуклеозиду та S-cEt-нуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид патерну V має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну V N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою β-DZ дезоксирибонуклеозид; і N обраний з 2’-O-метоксіетилнуклеозиду та S-cEt-нуклеозиду. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид патерну V має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO: 3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. M У конкретних варіантах здійснення нуклеозидного патерну V N являє собою 2’-OB Q метоксіетилнуклеозид; кожний N являє собою S-cEt-нуклеозид; кожний N являє собою β-DZ дезоксирибонуклеозид; і N являє собою 2’-O-метоксіетилнуклеозид. У конкретних варіантах 18 UA 115652 C2 5 10 здійснення модифікований олігонуклеотид патерну V має нуклеотидну послідовність SEQ ID NO:3, де кожний T у послідовності незалежно обраний з T і U. У конкретних варіантах здійснення сполука, забезпечена в даному документі, має нуклеотидну послідовність і модифікації, як показано в таблиці 1. Модифікації нуклеозидів позначаються наступним чином: нуклеозиди, за якими не йде нижній індекс, означають β-Dдезоксирибонуклеозиди; нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “E”, означають 2’-MOEнуклеозиди; нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “L”, являють собою LNA-нуклеозиди; нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “S”, означають S-cEt-нуклеозиди. Кожний міжнуклеозидний зв’язок являє собою фосфотіоатний міжнуклеозидний зв'язок. Верхній індекс “Me” означає 5-метильну групу при основі нуклеозиду. Таблиця 1 Сполуки на основі анти-miR-21 № сполуки 25068 25070 25072 25082 25922 25923 25924 25114 25115 25221 25220 15 20 25 30 35 40 Послідовність та хімізм (5’-3’) Me TE CEAEAECSAETECSAEGETECSTEGEAEUSAEAEGECSTEAE AECSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAE AECSAETECSAEGETECSTEGEAEUSAEAEGECSTEAE Me TE CAACSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAE Me Me Me Me AE CSAT CSAGT CSTGATSAAG CSTAE AECSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAS Me Me Me Me AE CSAT CSAGT CSTGATSAAG CSTAS Me Me Me Me AE CLAT CLAGT CLTGATLAAG CLTAE Me Me Me Me AE CLAT CLAGT CLTGATLAAG CLTAL AECSATCSAGTCSTGAUSAAGCSUsAS AECSATCSASGTCSUSGAUSASAGCSUsAE SEQ ID NO 4 3 3 4 3 3 3 3 3 3 3 У конкретних варіантах здійснення будь-якого з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, модифікований олігонуклеотид складається з 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 або 22 зв'язаних нуклеозидів. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 зв'язаних нуклеозидів нуклеозидного патерну, зазначених у нуклеозидному патерні I. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 зв'язаних нуклеозидів нуклеозидного патерну, зазначених у нуклеозидному патерні II. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 зв'язаних нуклеозидів нуклеозидного патерну, зазначених у нуклеозидному патерні III. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 зв'язаних нуклеозидів нуклеозидного патерну, зазначених у нуклеозидному патерні IV. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид містить щонайменше 8 зв'язаних нуклеозидів нуклеозидного патерну, зазначених у нуклеозидному патерні V. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид з будь-яким з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі, містить щонайменше один модифікований міжнуклеозидний зв'язок. У конкретних варіантах здійснення кожний міжнуклеозидний зв’язок являє собою модифікований міжнуклеозидний зв'язок. У конкретних варіантах здійснення модифікований міжнуклеозидний зв’язок являє собою фосфотіоатний міжнуклеозидний зв'язок. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид має нуклеотидну послідовність, де щонайменше одна нуклеїнова основа являє собою цитозин. У конкретних варіантах здійснення щонайменше один цитозин являє собою 5-метилцитозин. У конкретних варіантах здійснення кожний цитозин являє собою 5-метилцитозин. У конкретних варіантах здійснення щонайменше один нуклеозид містить модифіковану нуклеїнову основу. Модифіковані олігонуклеотиди можуть зазнавати розщеплення екзонуклеазами та/або ендонуклеазами в різних положеннях по всій довжині модифікованого олігонуклеотиду. Продукти такого ферментативного розщеплення можуть зберігати інгібуючу активність щодо miR-21, і як такі вважаються активними метаболітами. Продукт метаболізму модифікованого олігонуклеотиду як такий можна застосовувати в способах, описаних у даному документі. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид, націлений на miR-21, має M нуклеозидний патерн, обраний з таблиці 2A, де N являє собою модифікований небіциклічний 19 UA 115652 C2 B Q нуклеозид нуклеозидом; кожний N являє собою біциклічний нуклеозид; кожний N являє собою Z небіциклічний нуклеозид; і N являє собою модифікований нуклеозид. Таблиця 2A Продукти метаболізму нуклеозидного патерну II 5’ M N M N M N 5 N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N N B N B N B N Q Q Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N 3’ Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Q У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид, націлений на miR-21, має M нуклеозидний патерн, обраний з таблиці 2B, де N являє собою модифікований небіциклічний B Q нуклеозид нуклеозидом; кожний N являє собою біциклічний нуклеозид; кожний N являє собою Y небіциклічний нуклеозид; N являє собою модифікований нуклеозид або немодифікований Z нуклеозид; і N являє собою модифікований нуклеозид. 10 20 UA 115652 C2 Таблиця 2B Продукти метаболізму нуклеозидного патерну IV 5’ M N M N M N 5 N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N N B N B N B N Q Q Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Y N Y N Y N Y N Y N Y N Y N Y N Y N Y N Y N Y N Y N N Y N Y N Y N Y N Y N Y N Y N Y N Y N 3’ Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Y У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид, націлений на miR-21, має M нуклеозидний патерн, обраний з таблиці 2C, де N являє собою модифікований небіциклічний B Q нуклеозид нуклеозидом; кожний N являє собою біциклічний нуклеозид; кожний N являє собою Z небіциклічний нуклеозид; і N являє собою модифікований нуклеозид. 21 UA 115652 C2 Таблиця 2C Продукти метаболізму нуклеозидного патерну VII 5’ M N M N M N 5 N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N N B N B N B N Q Q Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N Q N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N B N N Y N B N B N B N B N B N B N B N B N 3’ Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N Z N B У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид, націлений на miR-21, має нуклеозидний патерн і нуклеотидну послідовність, обрані з таблиці 3A. Нуклеозиди, за якими не йде нижній індекс, означають β-D-дезоксирибонуклеозиди. Нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “E”, означають 2’-MOE-нуклеозиди. Нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “S”, означають S-cEt-нуклеозиди. Кожний міжнуклеозидний зв’язок являє собою фосфотіоатний міжнуклеозидний зв'язок. Нуклеїнові основи можуть містити або не містити метильну групу в 5’положенні. 10 22 UA 115652 C2 Таблиця 3A Продукти метаболізму сполуки № 25070 5’ N1 AE AE AE 5 N2 CS CS N3 A A A N4 T T T T N5 CS CS CS CS CS N6 A A A A A A N7 G G G G G G G N8 T T T T T T T T N9 CS CS CS CS CS CS CS CS CS N10 T T T T T T T T T T N11 G G G G G G G G G G G CS CS CS CS A A A A A A T T T T T T T T CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS A A A A A A A A A A A A G G G G G G G G G G G G G G T T T T T T T T T T T T T T T T CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G N12 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N13 US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US N14 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N15 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N16 G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G N17 CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS N18 T T T T T T T T T T T T T 3’ N19 AE AE AE AE AE AE AE AE AE AE AE AE T T T T T T T T T T У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид, націлений на miR-21, має нуклеозидний патерн і нуклеотидну послідовність, обрані з таблиці 3B. Нуклеозиди, за якими не йде нижній індекс, означають β-D-дезоксирибонуклеозиди. Нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “E”, означають 2’-MOE-нуклеозиди. Нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “S”, означають S-cEt-нуклеозиди. Кожний міжнуклеозидний зв’язок являє собою фосфотіоатний міжнуклеозидний зв'язок. Нуклеїнові основи можуть містити або не містити метильну групу в 5’положенні. 10 23 UA 115652 C2 Таблиця 3B Продукти метаболізму сполуки № 25923 5’ N1 AE AE AE 5 N2 CS CS N3 A A A N4 T T T T N5 CS CS CS CS CS N6 A A A A A A N7 G G G G G G G N8 T T T T T T T T N9 CS CS CS CS CS CS CS CS CS N10 T T T T T T T T T T N11 G G G G G G G G G G G CS CS CS CS A A A A A A T T T T T T T T CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS A A A A A A A A A A A A G G G G G G G G G G G G G G T T T T T T T T T T T T T T T T CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G N12 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N13 US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US N14 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N15 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N16 G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G N17 CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS N18 T T T T T T T T T T T T T 3’ N19 AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS T T T T T T T T T T У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид, націлений на miR-21, має нуклеозидний патерн і нуклеотидну послідовність, обрані з таблиці 3C. Нуклеозиди, за якими не йде нижній індекс, означають β-D-дезоксирибонуклеозиди. Нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “E”, означають 2’-MOE-нуклеозиди. Нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “S”, означають S-cEt-нуклеозиди. Кожний міжнуклеозидний зв’язок являє собою фосфотіоатний міжнуклеозидний зв'язок. Нуклеїнові основи можуть містити або не містити метильну групу в 5’положенні. 10 24 UA 115652 C2 Таблиця 3C Продукти метаболізму сполуки № 25221 5’ N1 AE AE AE 5 N2 CS CS N3 A A A N4 T T T T N5 CS CS CS CS CS N6 A A A A A A N7 G G G G G G G N8 T T T T T T T T N9 CS CS CS CS CS CS CS CS CS N10 T T T T T T T T T T N11 G G G G G G G G G G G CS CS CS CS A A A A A A T T T T T T T T CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS A A A A A A A A A A A A G G G G G G G G G G G G G G T T T T T T T T T T T T T T T T CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G N12 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N13 US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US N14 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N15 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N16 G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G N17 CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS N18 US US US US US US US US US US US US US 3’ N19 AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS US US US US US US US US US US У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид, націлений на miR-21, має нуклеозидний патерн і нуклеотидну послідовність, обрані з таблиці 3D. Нуклеозиди, за якими не йде нижній індекс, означають β-D-дезоксирибонуклеозиди. Нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “E”, означають 2’-MOE-нуклеозиди. Нуклеозиди, за якими йде нижній індекс “S”, означають S-cEt-нуклеозиди. Кожний міжнуклеозидний зв’язок являє собою фосфотіоатний міжнуклеозидний зв'язок. Нуклеїнові основи можуть містити або не містити метильну групу в 5’положенні. 10 25 UA 115652 C2 Таблиця 3D Продукти метаболізму сполуки № 25220 5’ N1 AE AE AE 5 10 15 20 N2 CS CS N3 A A A N4 T T T T N5 CS CS CS CS CS N6 AS AS AS AS AS AS N7 G G G G G G G N8 T T T T T T T T N9 CS CS CS CS CS CS CS CS CS N10 US US US US US US US US US US N11 G G G G G G G G G G G CS CS CS CS A A A A A A T T T T T T T T CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS G G G G G G G G G G G G G G T T T T T T T T T T T T T T T T CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G N12 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N13 US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US US N14 AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS AS N15 A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A N16 G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G N17 CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS CS N18 US US US US US US US US US US US US US 3’ N19 AE AE AE AE AE AE AE AE AE AE AE AE US US US US US US US US US US У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з більш ніж 19 зв'язаних нуклеозидів і містить нуклеозидний патерн, описаний у даному документі. Нуклеозиди, присутні на додаток до нуклеозидів, описаних нуклеозидним патерном, є або модифікованими, або немодифікованими. Наприклад, модифікований олігонуклеотид, що складається з 21 зв'язаного нуклеозиду та має нуклеотидну послідовність, комплементарну miR-21, може мати нуклеозидний патерн II довжиною 19 зв'язаних нуклеозидів. Додаткові два нуклеозиди можуть складатися з модифікованих або немодифікованих цукрових фрагментів. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 19 зв'язаних нуклеозидів і містить будь-який з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 20 зв'язаних нуклеозидів і містить будь-який з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 21 зв'язаного нуклеозиду та містить будь-який з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 22 зв'язаних нуклеозидів і містить будь-який з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 23 зв'язаних нуклеозидів і містить будь-який з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 24 зв'язаних 26 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 нуклеозидів і містить будь-який з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі. У конкретних варіантах здійснення модифікований олігонуклеотид складається з 25 зв'язаних нуклеозидів і містить будь-який з нуклеозидних патернів, описаних у даному документі. Конкретні шляхи застосування даного винаходу Модуляція активності miR-21 Сполуки, забезпечені в даному документі, є сильними та специфічними інгібіторами активності miR-21 і, таким чином, є застосовними для модулювання активності miR-21. МікроРНК зв'язуються з матричними РНК і пригнічують їхню експресію. У деяких випадках інгібування активності мікроРНК приводить до дерепресії матричної РНК, тобто експресія матричної РНК підвищується на рівні РНК та/або білка. У даному документі забезпечені способи модулювання експресії miR-21-регульованого транскрипту, що включають приведення клітини в контакт зі сполукою згідно із даним винаходом, де сполука містить модифікований олігонуклеотид з послідовністю, комплементарною miR-21. У конкретних варіантах здійснення miR-21-регульований транскрипт являє собою YOD1, та інгібування miR-21 приводить у результаті до підвищення рівня мРНК YOD1. У конкретних варіантах здійснення miR-21-регульований транскрипт являє собою PPAR-альфа, і інгібування miR-21 приводить у результаті до підвищення рівня мРНК PPAR-альфа. У конкретних варіантах здійснення miR-21-регульований транскрипт являє собою RNF167. У конкретних варіантах здійснення miR-21-регульований транскрипт являє собою SPG20. У конкретних варіантах здійснення інгібування miR-21 у печінці приводить у результаті до підвищення рівня мРНК SPG20. У конкретних варіантах здійснення після приведення клітини в контакт зі сполукою згідно з даним винаходом спостерігається щонайменше 1,5-кратне підвищення рівня мРНК miR-21регульованого транскрипту. У конкретних варіантах здійснення після приведення клітини в контакт зі сполукою згідно з даним винаходом спостерігається щонайменше 2,0-кратне підвищення рівня мРНК miR-21-регульованого транскрипту. У конкретних варіантах здійснення рівень мРНК мікроРНК-регульованого транскрипту підвищується щонайменше у 2,5 рази. У конкретних варіантах здійснення рівень мРНК мікроРНК-регульованого транскрипту підвищується щонайменше у 3,0 рази. У конкретних варіантах здійснення рівень мРНК мікроРНК-регульованого транскрипту підвищується щонайменше у 3,5 рази. У конкретних варіантах здійснення рівень мРНК мікроРНК-регульованого транскрипту підвищується щонайменше у 4,0 рази. У конкретних варіантах здійснення рівень мРНК мікроРНКрегульованого транскрипту підвищується щонайменше у 4,5 рази. У конкретних варіантах здійснення рівень мРНК мікроРНК-регульованого транскрипту підвищується щонайменше у 5,0 разів. Визначені мікроРНК, як відомо, націлені на декілька матричних РНК, у деяких випадках на кілька сотень матричних РНК. Інгібування активності однієї мікроРНК може привести до змін, які можуть бути виявлені, в експресії багатьох мішеней мікроРНК. У даному документі забезпечені способи модулювання декількох miR-21-регульованих транскриптів, що включають інгібування активності miR-21, де відбуваються великі зміни експресії генів. У конкретних варіантах здійснення після інгібування miR-21 за допомогою сполуки згідно з даним винаходом можуть спостерігатися фенотипічні зміни. Такі фенотипічні зміни можуть відбуватися зі змінами, які можуть бути виявлені, в експресії miR-21-регульованого транскрипту або без них. Фібропроліферативні порушення Нормальна фізіологічна відповідь на ушкодження або ураження органа або тканини включає відновлення ушкодженої тканини, що є фундаментальним біологічним процесом, необхідним для виживання. У ході процесу відновлення після того, як вилучені чужорідні матеріали, бактерії та ушкоджена тканина, фібробласти мігрують до місця ураження з відкладанням нового позаклітинного матриксу, який потім стає структурно організованим, як частина фази ремоделювання тканини. Фібробласти є найпоширенішими клітинами, що виявляють у сполучній тканині, і відповідають за синтез ретикуліну та інших еластичних волокон, які підтримують позаклітинний матрикс і відіграють важливу роль у нормальному загоєнні ран (Sempowski, G.D. et al., 2002. Wound Repair Regeneration. 3: 120-131). Фібробласти відповідають за відкладання колагену, необхідного для відновлення ураженої тканини та повернення до попереднього стану її структури та функції. У ході процесу загоєння ран активовані фібробласти перетворюються в міофібробласти, що є альфа-SMA+ фібробластами, які секретують колаген. На початкових стадіях процесу загоєння ран міофібробласти виробляють матриксні металопротеази, які руйнують базальну мембрану та дозволяють запальним клітинам ефективно мобілізуватися в 27 UA 115652 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 місце ураження. У ході більш пізніх стадій відновлення після ураження міофібробласти стимулюють закриття рани, процес, завдяки якому краї рани переміщаються в напрямку центру рани. Таким чином, активність фібробластів є суттєвою для нормального процесу загоєння. Фібробласти, що беруть участь у нормальному процесі відновлення після ураження, можуть походити від локальних мезенхімальних клітин, мобілізованих з кісткового мозку, або бути отриманими завдяки епітеліально-мезенхімальному переходу. Епітеліально-мезенхімальний перехід (EMT) описує ряд швидких змін клітинного фенотипу (Kalluri, R. and Neilson, E.G. 2003. J. Clin. Invest. 112: 1776-1784), під час яких нерухливі епітеліальні клітини втрачають міжклітинні контакти, здобувають мезенхімальні ознаки та проявляють міграційний фенотип. Резидентні фібробласти, фіброцити інфільтрації або перицитоподібні клітини також можуть приймати участь у процесі відновлення після ураження. При деяких обставинах процес відновлення тканини відбувається в надлишку, що призводить у результаті до надлишкового нагромадження компонентів позаклітинного матриксу (ECM) та суттєвого ремоделюванню ECM, що сприяє утворенню постійного фіброзного рубця. Утворення цієї надлишкової фіброзної сполучної тканини, тобто процес, відомий як фіброз, сприяє аномальним змінам структури тканини та перешкоджає нормальній функції органів. Фіброз може мати місце в будь-якій частині організму та може бути результатом різноманітних фізичних, метаболічних, ішемічних, інфекційних, запальних або імунологічних уражень. Хоча місця анатомічної локалізації, походження та клінічні прояви фіброзу можуть різнитися, існують важливі патологічні ознаки, загальні для всіх типів фіброзу. Незалежно від місця локалізації, у якому виник фіброз, фіброзний процес включає секрецію та активацію профібротичних цитокінів, ріст та активацію популяцій мезенхімальних клітин і синтез та організацію позаклітинного матриксу та, зрештою, призводить до руйнування нормальної тканини. Фіброз, якщо його залишити без лікування, може призвести до різноманітних станів серця, легенів, нирок, печінки, ока та шкіри, серед інших тканин. Як продемонстровано в даному документі, інгібування miR-21 у моделі фіброзу приводить до зменшеного відкладання колагену. Відповідно, у даному документі забезпечені композиції та способи лікування, попередження та/або відстрочки початку розвитку фіброзу, що включають уведення суб'єктові сполуки, яка містить модифікований олігонуклеотид, де модифікований олігонуклеотид являється комплементарним miR-21. Суб'єкт може бути з підтвердженим діагнозом “фіброз”, може бути з підвищеним ризиком розвитку фіброзу або може бути з підозрою на фіброз. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт, що має фіброз, має фіброз нирок, фіброз легенів, фіброз печінки, фіброз серця, фіброз шкіри, віковий фіброз, фіброз селезінки, склеродермію або посттрансплантаційний фіброз. Багато захворювань або аномалій нирок характеризуються наявністю фіброзу. Забезпечені в даному документі сполуки як такі застосовні для лікування, полегшення перебігу, попередження та/або відстрочки початку будь-якого захворювання нирок, що характеризується наявністю фіброзу. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт, що має фіброз, має захворювання або стан нирок. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт з підвищеним ризиком розвитку фіброзу має захворювання або стан нирок. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт з підозрою на фіброз має захворювання або стан нирок. Відповідно, у даному документі забезпечені способи лікування суб'єкта, що має фіброз, з підвищеним ризиком його розвитку або з підозрою на фіброз, де суб'єкт має захворювання або стан нирок. Захворювання або стан нирок може бути без обмеження одним або декількома з ураження нефронів, тубулоінтерстиціального фіброзу, IgA-нефропатії, інтерстиціального фіброзу/тубулярної атрофії, гломерулосклерозу, гломерулонефриту, цукрового діабету, ідіопатичного фокальносегментарного гломерулосклерозу, мембранозної нефропатії, колапсуючої гломерулопатії, хронічної рецидивної інфекції нирок, цукрового діабету, діабетичної нефропатії, хронічної рецидивної інфекції нирок, гіпертензії, системної гіпертензії, інтрагломерулярної гіпертензії або термінальної стадії ниркової недостатності. Хронічне захворювання нирок може характеризуватися наявністю фіброзу. Відповідно, у конкретних варіантах здійснення захворювання або стан нирок являє собою хронічне захворювання нирок. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт має підвищений ризик розвитку хронічного захворювання нирок. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт, що має гостре ураження нирок, має підвищений ризик розвитку фіброзу та/або хронічного захворювання нирок. Відповідно, композиції та способи, забезпечені в даному документі, можна застосовувати відносно суб'єкта, що має гостре ураження нирок, для попередження або відстрочки початку розвитку фіброзу та/або хронічного захворювання нирок. У конкретних варіантах здійснення суб'єкт, який має фіброз, має фіброз нирок, що виникає в 28