Спосіб оцінки ступеня негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на імунну систему поросят

Реферат: Спосіб оцінки ступеня негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на імунну систему поросят базується на аналізі даних клітинної ланки імунітету за кількістю лімфоцитів. Додатково визначають бактерицидну та лізоцимну активність сироватки крові та циркулюючі імунні комплекси і за комплексною картиною показників клітинної та гуморальної ланок імунної системи судять про ступінь негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на організм свиней. UA 109249 U (12) UA 109249 U UA 109249 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема ветеринарної паразитології, а саме до способів оцінки негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на імунну систему поросят. Заявлений спосіб може бути використаний у господарствах із різними формами власності, що вирощують і утримують свиней та у яких виявили протозоозну та нематодозну інвазії. Відомі способи оцінки негативного впливу протозоозної та нематодозної інвазії на окремі органи і системи організму тварин, що базуються на оцінці змін у функціонуванні процесів травлення (Инвазионные энтероколиты поросят и разработка мер борьбы с ними. - В кн.: Тез. докл. 5-й науч. конф. Украинского респуб. об-ва паразитологов / Иванова П.С., Новикова Р.Ф., Майоров В.А. и др. - Киев, 1967. - С. 70-272; Дзержинский В.А. Ассоциативные инвазии свиней // Ветеринария. - 1984. - № 11. - С. 43-44; Жумакаева А.Н., Абуладзе К.И., Павлова Н.В. Ассоциативные паразитарные болезни свиней // Ветеринария. - 1986. - № 7. - С. 53-54.). Недоліками даних способів є те, що за їх допомогою можна діагностувати негативний вплив протозоозної та нематодозної інвазії на організм поросят тільки при важкому ступені ураження. Відомі також гематологічні способи виявлення негативного впливу протозоозної та нематодозної інвазії на тваринний організм (Довгій Ю.Ю. Зміни ферментного складу крові при нематодозах свиней / Ю.Ю. Довгій, Д.В. Фещенко, А.О. Павліщева // Мат. Міжнар. студ. конф. фту вет. мед. ЛНУВМ та БТ ім. С.З. Гжицького. - 2008. - Ч. II. -С. 41-42; Фещенко Д.В. Особливості епізоотології, патогенезу та терапії змішаної нематодозної інвазії свиней / Д.В. Фещенко // Ветеринарна медицина України. - 2008. - № 4. - С. 18-20; Березовський А.В. Основні паразитози свиней, особливості хіміотерапії та профілактики / А.В. Березовський // Вет. медицина: Міжвід. темат. наук. зб. - Харків: 2006. - Вип. 86. - С. 40-48). Способи включають оцінку реактивності організму при змішаних інвазіях у свиней шляхом визначення деяких гематологічних та біохімічних показників у крові тварин (кількість гемоглобіну, еритроцитів, лейкоцитів, загальний білок, ензими). Ці способи включають комплексний підхід до оцінки патології різних ступенів важкості. Зазначені показники гематологічних та біохімічних досліджень не дозволяють оцінити ступінь впливу змішаної протозоозної, нематодозної інвазії на імунну систему поросят. Найбільш близьким по суті до способу, що заявляється, є спосіб (Стибель В.В. Гельмінтози свиней: навч. посіб. - Львів: Сполом, 2004. - 160 с.) визначення клітинної ланки імунітету за кількістю лімфоцитів за нематодозної інвазії у свиней. Спосіб полягає у визначенні в крові свиней за нематодозної інвазії загальної кількості лімфоцитів та за рівнем даного показника оцінюють стан клітинної ланки імунної системи свиней за нематодозної інвазії. При цьому: - тварини, у яких кількість лімфоцитів знаходиться в межах 40-50 %, вважають клінічно здоровими; - тварини, у яких кількість лімфоцитів знаходиться в межах 39-30 %, вважають частково ураженими впливом нематодозної інвазії, які потребують корекції імунної системи, застосуванням природних або синтетичних імуностимуляторів, вітамінів; - тварини, у яких кількість лімфоцитів є меншою 24 %, вважають ураженими впливом високого рівня нематодозною інвазією із явищами незворотного порушення обміну речовин, що підлягають вибраковці. Заявлений спосіб і найближчий аналог мають спільні суттєві ознаки, а саме базується на аналізі даних клітинної ланки імунітету за кількістю лімфоцитів. Недоліком даного способу є недостатня його точність, оскільки він не повністю відображає стан імунної системи крові свиней, тому що за даним показником важко судити про стан імунної системи організму за нематодозної інвазії. Заявлений нами спосіб усуває недоліки і повністю відображає стан імунної системи крові свиней і забезпечує об'єктивну оцінку негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на імунну систему свиней. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити ефективний і об'єктивний спосіб виявлення і оцінки ступеня негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на імунну систему поросят, зручний і доступний у застосуванні, економічно вигідний для господарств, у яких він застосовується. Технічний результат досягають тим, що для оцінки стану імунної системи на основі аналізу даних клітинної ланки імунітету за кількістю лімфоцитів, додатково визначають бактерицидну та лізоцимну активність сироватки крові та циркулюючі імунні комплекси і за комплексною картиною показників клітинної та гуморальної ланок імунної системи судять про ступінь негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на організм свиней, при цьому: 1 UA 109249 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 - тварини, у яких кількість лімфоцитів знаходиться в межах 40-50 %, бактерицидна активність сироватки крові - в межах 35-60 %, лізоцимна активність сироватки крові - в межах 55-65 %, рівень циркулюючих імунних комплексів - в межах 67-91 мМоль/л, вважають клінічно здоровими; - тварини, у яких кількість лімфоцитів знаходиться в межах 39-30 %, бактерицидна активність сироватки крові - в межах 34-25 %, лізоцимна активність сироватки крові - в межах 54-45 %, рівень циркулюючих імунних комплексів - в межах 92-120 мМоль/л, вважають частково ураженими впливом протозоозної або нематодозної інвазії, які потребують корекції імунної системи, застосуванням природних або синтетичних імуностимуляторів, вітамінів; - тварини, у яких кількість лімфоцитів є меншою 24 %, бактерицидна активність сироватки крові є меншою 21 %, лізоцимна активність сироватки крові - меншою 39,5 %, рівень циркулюючих імунних комплексів є більшим за 125 мМоль/л, вважають ураженими впливом змішаної протозоозної та нематодозної інвазії із явищами незворотного порушення обміну речовин, що підлягають вибраковці. Шлунково-кишкові захворювання поросят мають широке розповсюдження і становлять епізоотологічну проблему номер один для даного виду тварин. У кожному свиногосподарстві ця патологія зумовлюється різноманітними патогенами, які найчастіше представлені асоціаціями умовно-патогенних бактерій, гельмінтів, найпростіших. Нематодози серед гельмінтозних інвазій тварин займають одне із провідних місць. Залежно від циклу розвитку нематод поділяють на гео- і біогельмінтів. Найбільше ветеринарне значення мають дев'ять підрядів круглих гельмінтів: Oxyurata, Ascaridata, Strongylata, Trichurata, Spirurata, Rhabditata, Dioctophymata, Filariata, Camallanata. За патогенної дії асоціацій умовно патогенних бактерій в організмі поросят відбувається розвиток олігоцитемії, гіпохромемії, нейтрофільного лейкоцитозу з простим зрушенням регенераторного ядра вліво і зростання ШОЕ. Зазначені зміни свідчать про розвиток в організмі хворих тварин запального процесу, гіпофункції кісткового мозку, які відбувається внаслідок патогенної дії збудників захворювань. Виникнення протозойних хвороб залежить насамперед від патогенності та вірулентності збудників. Патогенність одноклітинного організму до тварин є видовою ознакою. Деякі найпростіші проявляють патогенність лише щодо одного виду тварин (наприклад, збудник парувальної хвороби - до коней), інші - до багатьох видів (токсоплазма). Кожний патогенний паразит характеризується певною вірулентністю. Остання може змінюватися під впливом фізичних або біологічних факторів. Наприклад, має значення вид переносника збудника хвороби, вік тварини. Вірулентність одноклітинних організмів різнобічна. Вона проявляється у різних формах впливу паразитів на уражений ними організм (механічний, антигенний, а також токсичний). Антигенна дія найпростіших характеризується появою в крові уражених тварин відповідних імунних глобулінів. При вивченні патогенезу протозоозної та нематодозної інвазії у поросят доцільним є дослідження імунної системи, оскільки вона одна з перших реагує на надходження токсичних речовин. До того ж за сукупною оцінкою показників імунної системи організму поросят можна розробити оптимальну схему лікування поросят за протозоозної та нематодозної інвазії. Відомо, що гуморальна ланка імунітету забезпечується специфічними макромолекулами, які функціонують у внутрішніх рідинах організму тварин. У плазмі крові містяться спеціальні білки, які здатні знешкоджувати мікроорганізми та отруйні продукти їх життєдіяльності. Функція імунної системи полягає у розпізнаванні генетично чужорідних антигенів та специфічному реагуванні на них. Основна її мета нейтралізація та руйнування тих антигенів, які стимулюють імунну відповідь. Клітинний імунітет - протиінфекційний захист, який здійснюється за допомогою спеціальних клітин, які знаходяться в організмі. Клітинний імунітет являє собою тип імунної відповіді організму, при якому відсутня участь системи комплементу і антитіл. Завдання клітинного імунітету - знищення мутованих і клітин, що стали чужорідними. Його забезпечують різні типи лімфоцитів і насамперед клітини-кілери. Ці клітини утворюються внаслідок диференціювання лімфоцитів клітинними антигенами. Вони справляють цитотоксичний вплив на чужорідні клітини. У цьому процесі беруть участь й інші різновиди лімфоцитів-хелпери й супресори, а також макрофаги й утворені ними антитіла місцевої дії. Отже, зазначений нами спосіб забезпечує більш точну оцінку ступеня негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на імунну систему свиней. При проведенні патентно-інформаційного пошуку авторами і заявником виявлено технічне рішення (Стибель В.В. Гельмінтози свиней: навч. посіб. - Львів: Сполом, 2004. - 160 с.), що містить найбільшу кількість суттєвих ознак, спільних із заявленим способом: спосіб базується на 2 UA 109249 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 аналізі даних клітинної ланки імунітету за кількістю лімфоцитів. Але наявність зазначених спільних із прототипом ознак недостатня для одержання технічного результату, який забезпечує заявлений спосіб. Технічних рішень, які б за сукупністю ознак повністю б співпадали із заявленим, не виявлено. Це дозволяє зробити висновок про відповідність заявленого технічного рішення критерію корисної моделі "новизна". В патентній і науково-технічній літературі не знайдено технічних рішень, в яких були б описані відомості про ознаки, що відрізняють заявлений спосіб від прототипу і забезпечують досягнення технічного результату тим, що додатково визначають бактерицидну та лізоцимну активність сироватки крові та циркулюючі імунні комплекси і за комплексною картиною показників клітинної та гуморальної ланок імунної системи судять про ступінь негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на організм свиней, при цьому: - тварини, у яких кількість лімфоцитів знаходиться в межах 40-50 %, бактерицидна активність сироватки крові - в межах 35-60 %, лізоцимна активність сироватки крові - в межах 55-65 %, рівень циркулюючих імунних комплексів - в межах 67-91 мМоль/л, вважають клінічно здоровими; - тварини, у яких кількість лімфоцитів знаходиться в межах 39-30 %, бактерицидна активність сироватки крові - в межах 34-25 %, лізоцимна активність сироватки крові - в межах 54-45 %, рівень циркулюючих імунних комплексів - в межах 92-120 мМоль/л, вважають частково ураженими впливом протозоозної або нематодозної інвазії, які потребують корекції імунної системи, застосуванням природних або синтетичних імуностимуляторів, вітамінів; - тварини, у яких кількість лімфоцитів є меншою 24 %, бактерицидна активність сироватки крові є меншою 21 %, лізоцимна активність сироватки крові - меншою 39,5 %, рівень циркулюючих імунних комплексів є більшим за 125 мМоль/л, вважають ураженими впливом змішаної протозоозної та нематодозної інвазії із явищами незворотного порушення обміну речовин, що підлягають вибраковці. Отже, заявлене технічне рішення не випливає явним чином з рівня техніки, що дозволяє зробити висновок про його відповідність критерію винаходу (корисної моделі) - "винахідницький рівень". Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема ветеринарної паразитології, а саме до способів оцінки ступеню негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на імунну систему поросят. Заявлений спосіб може бути використаний у господарствах із різними формами власності, що вирощують і утримують свиней, у яких виявили протозоозну та нематодозну інвазії, а тому заявлений спосіб відповідає критерію корисної моделі "промислова придатність". Отже, заявлене технічне рішення є новим, має винахідницький рівень, промислово придатне, тобто відповідає всім умовам патентоспроможності корисної моделі відповідно до статті 7 розділу II "Закону України про охорону прав на винаходи і корисні моделі" № 1771-IIІ, 2000. Заявлений спосіб здійснюють наступним чином: У тваринницьких господарствах, де було виявлено протозоозну та нематодозну інвазії для оцінки ступеня негативного впливу протозоозної та нематодозної інвазії на організм свиней відбирають кров. Аналіз одержаних результатів здійснюють наступним чином: - тварини, у яких кількість лімфоцитів знаходиться в межах 40-50 %, бактерицидна активність сироватки крові - в межах 35-60 %, лізоцимна активність сироватки крові - в межах 55-65 %, рівень циркулюючих імунних комплексів - в межах 67-91 мМоль/л, вважають клінічно здоровими; - тварини, у яких кількість лімфоцитів знаходиться в межах 39-30 %, бактерицидна активність сироватки крові - в межах 34-25 %, лізоцимна активність сироватки крові - в межах 54-45 %, рівень циркулюючих імунних комплексів - в межах 92-120 мМоль/л, вважають частково ураженими впливом протозоозної або нематодозної інвазії, які потребують корекції імунної системи, застосуванням природних або синтетичних імуностимуляторів, вітамінів; - тварини, у яких кількість лімфоцитів є меншою 24 %, бактерицидна активність сироватки крові є меншою 21 %, лізоцимна активність сироватки крові - меншою 39,5 %, рівень циркулюючих імунних комплексів є більшим за 125 мМоль/л, вважають ураженими впливом змішаної протозоозної та нематодозної інвазії із явищами незворотного порушення обміну речовин, що підлягають вибраковці. 3 UA 109249 U 5 10 15 20 25 Ефективність заявленого способу та його переваги перед прототипом підтверджені прикладом конкретного виконання. Досліди були проведені у ФГ "Богданович КБО" Кам'янка-Бузького району Львівської області. Для дослідження використовували спонтанно інвазованих асоціацією кишкових паразитів поросят великої білої породи віком 2-4 місяці. Відбір проб калу для лабораторного дослідження здійснювали індивідуально із прямої кишки. Виявлення яєць гельмінтів проводили копроскопічним методом Г.А. Котельникова і В.М. Хренова (1981) за збільшення мікроскопа  120. Ідентифікацію яєць гельмінтів до виду здійснювали за допомогою атласу диференційної діагностики гельмінтозів. Трофозоїти балантидій визначали шляхом мікроскопії нативного мазка, виготовленого з свіжовиділеного та зафіксованого у 10-відсотковому розчині формаліну калу. Методом послідовних промивань виявляли цисти балантидій. Ідентифікацію кокцидій свиней здійснювали за визначником Є.М. Хейсіна та Т.В. Арнастаускене. При цьому враховували форму, колір, довжину та ширину ооцист, наявність та відсутність мікропіле, полярної гранули, залишкового тіла в ооцисті і спороцисті, а також термін споруляції. Інтенсивність інвазії гельмінтами та найпростішими визначали методом McMaster, при цьому кількість ооцист балантидій в 1 г калу була 683,9±53,9, еймерій+ізоспор - 597,1±54,2, яєць аскарисів - 570,1±17,1, трихурусів - 138,0±15,4 та езофагостом - 177,6±9,5 екземплярів. Дослідна 1 - поросята були уражені протозоонозною інвазією; Дослідна 2 - поросята були уражені нематодозною інвазією; Дослідна 3 - поросята були уражені змішаною протозоозною та нематодозною інвазією; Контрольна група - здорові поросята. Бактерицидну активність сироватки крові визначали за методом О.В. Смирнової, Т.А. Кузьміної, лізоцимну активність сироватки крові (ЛАСК) - фотоелектроколориметричним методом. Рівень циркулюючих імунних комплексів визначали за методом Гриневича і Альферова. Основні показники клітинного імунітету у поросят як дослідних, так і контрольної груп подані у таблицях 1 і 2. Таблиця 1 Показники імунної системи організму поросят контрольної групи, г/л Показники Контроль 43,0±1,0 57,5±0,8 38,4±0,5 78,34,3 Лімфоцити ЛАСК, % БАСК, % ЦІК, мМоль/л 30 35 40 45 При цьому за прототипом у тварин всіх груп визначали кількість лімфоцитів. Так, у тварин контрольної групи кількість лімфоцитів була в межах 43,0±1,0 %. За протозоозної та нематодозної інвазії у свиней кількість лімфоцитів почала знижуватись, а саме за протозоозної інвазії кількість лімфоцитів коливалася у межах 35,1±1,0 %, за нематодозної інвазії - у межах 30,1±1,1 %, за змішаної інвазії-у межах 24,0±0,9 %. На підставі даних кількості лімфоцитів важко робити висновок про ступінь негативного впливу протозоозної та нематодозної інвазії на імунну систему організму свиней. При додатковому визначенні бактерицидної (БАСК) та лізоцимної активності сироватки крові (ЛАСК), циркулюючих імунних комплексів (ЦІК), ступінь негативного впливу протозоозної та нематодозної інвазії на організм свиней проявляється більш повно. Так у тварин контрольної групи показники імунної системи у сироватці крові знаходилися в таких межах: БАСК 38,4±0,5 %, ЛАСК - 57,5±0,8 %, ЦІК - 78,3±4,3 мМоль/л. Згідно даних таблиці у дослідних тварин за протозоозної та нематодозної інвазії, показники імунної системи організму свиней мали певні відхилення. Так, при змішаній протозоозній та нематодозній інвазії лізоцимна та бактерицидна активність сироватки крові знижувалась, а рівень циркулюючих імунних комплексів зростав. У тварин за протозоозної інвазії, показники імунної системи крові знаходилися у таких межах: бактерицидна активність сироватки крові 31,2±0,7 %, лізоцимна активність сироватки крові 51,2±0,5 %, рівень циркулюючих імунних комплексів 99,5±4,3 мМоль/л. 4 UA 109249 U Таблиця 2 Показники імунної системи організму поросят за змішаної протозоозної та нематодозної інвазії Показники Лімфоцити, % ЛАСК, % БАСК, % ЦІК, мМоль/л 5 10 15 20 Протозоозна 35,1±1,0 51,2±0,5 31,2±0,7 99,5±4,3 Вид інвазії Нематодозна 30,1±1,1 47,5±0,7 28,3±0,5 115,7±4,3 Змішана 24,0±0,9 39,5±0,8 21,4±0,5 125,3±4,3 У тварин за нематодозної інвазії, показники імунної системи крові знаходилися у таких межах: бактерицидна активність сироватки крові 28,3±0,5 %, лізоцимна активність сироватки крові 47,5±0,7 %, рівень циркулюючих імунних комплексів 115,7±4,3 мМоль/л. У тварин за змішаної протозоозної та нематодозної інвазії, показники імунної системи крові знаходилися у таких межах: бактерицидна активність сироватки крові 21,4±0,5 %, лізоцимна активність сироватки крові 39,5±0,8 %, рівень циркулюючих імунних комплексів 125,3±4,3 мМоль/л. Таким чином за рівнем показників імунної системи: бактерицидної та лізоцимної активності сироватки крові, циркулюючих імунних комплексів, можна вважати, що тварини які були уражені протозоозною або нематодозною інвазією, у яких кількість лімфоцитів в межах 39-30 %, бактерицидна активність сироватки крові - в межах 34-25 %, лізоцимна активність сироватки крові - в межах 54-45 %, рівень циркулюючих імунних комплексів - в межах 92-120 мМоль/л, вважають частково ураженими впливом протозоозної або нематодозної інвазії, які потребують корекції імунної системи, застосуванням природних або синтетичних імуностимуляторів, вітамінів. А тварини, які уражені змішаною протозоозною або нематодозною інвазією, це тварини, у яких кількість лімфоцитів є меншою 24 %, бактерицидна активність сироватки крові є меншою 21 %, лізоцимна активність сироватки крові - меншою 39,5 %, рівень циркулюючих імунних комплексів є більшим за 125 мМоль/л вважають ураженими впливом змішаної протозоозної та нематодозної інвазії із явищами незворотного порушення обміну речовин, що підлягають вибраковці. Отже, заявлене нами спосіб є точним і об'єктивним і дозволяє виявити ступінь негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на імунну систему поросят. 25 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 35 40 45 Спосіб оцінки ступеня негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на імунну систему поросят, який базується на аналізі даних клітинної ланки імунітету за кількістю лімфоцитів, який відрізняється тим, що додатково визначають бактерицидну та лізоцимну активність сироватки крові та циркулюючі імунні комплекси і за комплексною картиною показників клітинної та гуморальної ланок імунної системи судять про ступінь негативного впливу змішаної протозоозної та нематодозної інвазії на організм свиней, при цьому: - тварини, у яких кількість лімфоцитів знаходиться в межах 40-50 %, бактерицидна активність сироватки крові - в межах 35-60 %, лізоцимна активність сироватки крові - в межах 55-65 %, рівень циркулюючих імунних комплексів - в межах 67-91 мМоль/л, вважають клінічно здоровими; - тварини, у яких кількість лімфоцитів знаходиться в межах 39-30 %, бактерицидна активність сироватки крові - в межах 34-25 %, лізоцимна активність сироватки крові - в межах 54-45 %, рівень циркулюючих імунних комплексів - в межах 92-120 мМоль/л, вважають частково ураженими впливом протозоозної або нематодозної інвазії, які потребують корекції імунної системи, застосуванням природних або синтетичних імуностимуляторів, вітамінів; - тварини, у яких кількість лімфоцитів є меншою 24 %, бактерицидна активність сироватки крові є меншою 21 %, лізоцимна активність сироватки крові - меншою 39,5 %, рівень циркулюючих імунних комплексів є більшим за 125 мМоль/л, вважають ураженими впливом змішаної протозоозної та нематодозної інвазії із явищами незворотного порушення обміну речовин, що підлягають вибраковці. 5 UA 109249 U Комп’ютерна верстка О. Рябко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 6