2-[5-(4-r-феніл)-4-(метатоліл)-4н-[1,2,4]триазол-3-ілсульфаніл]-n-арилацетаміди, що мають протипухлинні властивості

Реферат: 2-[5-(4-R-феніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3-ілсульфаніл]-N-арилацетаміди R2 N N N R N S O R1 CH3 де R, R1, R2=H, CH3, CH(CH3)2, OCH3, OC2H5, Cl, Br, що мають протипухлинні властивості. , ЩО UA 117496 U (12) UA 117496 U UA 117496 U Корисна модель належить до органічної, фармацевтичної хімії та медицини, а саме до одержання біологічно активних 2-[5-(4-R-феніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3-ілсульфаніл]N-арилацетамідів, що мають загальну формулу: R2 N N N N R S O R1 CH3 5 , де R, R1, R2=H, CH3, CH(CH3)2, OCH3, OC2H5, Cl, Br. 10 15 20 25 30 Зазначені сполуки проявляють протипухлинну активність і можуть бути використані при лікуванні меланоми, лейкемії, дрібноклітинного раку легенів, раку товстого кишечнику, пухлин кори головного мозку, яєчників та нирок, простати та раку молочної залози. Проблема захворюваності і смертності від злоякісних новоутворень - одна з актуальних в сучасній медицині. В останнє десятиліття зберігаються негативні тенденції, що відображають зростання даної патології [1-3]. В Україні рак є причиною більше 15 % усіх смертей, поступаючись лише смертності від серцево-судинних захворювань, серед яких 35 % померлих від злоякісних пухлин є особами працездатного віку. Кожен четвертий чоловік і кожна шоста жінка мають імовірність захворіти на злоякісну пухлину [2]. Згідно з даними міжнародного агентства з вивчення раку, до 2020 р прогнозується підвищення захворюваності злоякісними пухлинами до 15 млн. та підвищення смертності до 9 млн. осіб на рік [3]. Широке застосування серед протибластомних засобів набули такі протипухлинні препарати, як Анастрозол, Мієлосан, Меркаптопурин, Метатрексат, Тіофосфамід, Флуороурацил, Циклофосфан тощо. Еталоном для порівняння протипухлинної активності заявлених сполук використано препарат з групи антагоністів піримідинів флуороурацил (5-флуорурацил), який порушує обмін пуринів. Він гальмує синтез ДНК та частково - РНК. Флуороурацил пригнічує ріст і розвиток пухлин, а також гемопоез. Побічними ефектами є пригнічення кровотворення (анемія, лейкопенія, тромбоцитопенія), анорексія, діарея, виразковий стоматит, дерматит, ішемія міокарда, тромбофлебіт, алопеція тощо [4]. Найближчим аналогом до корисної моделі є препарат Анастрозол (Anastrozole) [5]. Діючою речовиною Анастрозолу є ,,','-тетраметил-5-(1Н-1,2,4-триазол-1-іл-метил)-мбензендіацетонітрил: H3C N N N CH3 N CH3 H3C 35 N . Він належить до фармакологічної групи протипухлинних, гормональних засобів та антагоністів гормонів, що інгібують синтез естрогонів, тому проявляє активність проти естрогензалежних пухлин молочної залози у жінок. Анастрозол є селективним нестероїдним 1 UA 117496 U 5 10 15 інгібітором ферменту ароматази, який призводить до зниження рівня естрадіолу в периферичних тканинах. Побічними ефектами при застосуванні Анастрозолу є: остеопороз, анемія, гіпертензія, лейкопенія, тромбофлебіт, тромбоемболія, слабкість, стомлюваність, перепади настрою, депресія, болі в суглобах, набряки рук і ніг, проблеми з боку шлунково-кишкової системи, що є показаннями для відміни препарату [6]. Підвищення ефективності хіміотерапії пухлинної хвороби в першу чергу пов'язано зі створенням нових, ефективних поліфункціональних протипухлинних препаратів. В основу корисної моделі поставлена задача пошуку нових речовин, що проявляють протипухлинну активність - здатність пригнічувати ріст клітин раку, що охоплюють широкий спектр онкологічних захворювань людини. Поставлена задача вирішується тим, що синтез нових хімічних речовин - 2-[5-(4-R-феніл)-4(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3-ілсульфаніл]-N-арилацетамідів 5 a-f. Заявлені сполуки одержують з високим виходом при використанні відомих синтетичних підходів у декілька стадій (схема 1). Схема 1. Синтез 2-[5-(4-R-феніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3-ілсульфаніл]-Нарилацетамідів 5 a-f. O O N H S NH2 CH3 N N H + 1 a,b 2 N 3 a,b R2 N N CH3 S R R R H N H N N SH N N ArNHCOCH2Cl K2CO3 R N S O R1 CH3 CH3 4 a,b 20 25 30 35 40 5 a-f , де 1,4 a R=H, b R=Br. 5 a R=R2=H, R1=OC2H5; 5 b R=Br, R1=R2=H; 5 с R=Br, R1=OCH3, R2=H; 5 d R=Br, R1=OC2H5, R2=H; 5 e R=Br, R1=Cl, R2=H; 5 f R=Br, R1=H, R2=CH(CH3)2. Визначення протипухлинної дії сполук 5 a-f проводили високочутливим флюорометричним методом, кількісно оцінюючи інтенсивність кольору флуоресцентного випромінювання (барвник - сульфородамін Б) через 48 год. опромінення клітини зі сполукою, що тестується. Результат проведених досліджень виражали у відсотках росту клітин раку до контролю. Використана система відбору та вивчення сполук з потенційною протипухлинною активністю in vitro базується на визначенні відсотку росту клітин пухлини (PG) під впливом сполуки, що тестується. Приклади конкретного виконання 3-Метилфенілізотіоціанат 2 був одержаний за методом [7]. Гідразиди бензойної та 4бромбензойної кислот 1 а, b одержані за методикою [8]. Приклад 1. Синтез 5-феніл-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3-тіолу 4 а. До розчину 13.6 г (0.1 моля) гідразиду бензойної кислоти 1 а в 200 мл сухого діоксану при перемішуванні приливали 14,9 г (0.1 моля) 3-метилфенілізотіоціанату 2. Реакційну суміш перемішували 30 хвилин, потім 30 хвилин кип'ятили із зворотним холодильником, охолоджували та відфільтровували. До осаду, що утворився, приливали розчин 12 г (0.3 моля) гідроксиду натрію в 200 мл води. Реакційну суміш кип'ятили із зворотним холодильником 3 години. Після охолодження суміш підкисляли 0.1 н розчином соляної кислоти до рН=6. Осад, що утворився, промивали водою, сушили. Вихід – 22,2 г (83 %). В подальші реакції одержаний тіол 4 а вводили без додаткової ідентифікації та очищення. 1 Приклад 2. Синтез 5-(4 -бромфеніл)-4-(метафеніл)- 4H-[1,2,4]триазол-3-тіолу 4 b був одержаний аналогічно до прикладу 1 із 21,5 г (0,1 моля) гідразиду парабромбензойної кислоти 1 2 UA 117496 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 b 14,9 г (0,1 моля) 3-метилфеніл-ізотіоціанату 2. Вихід – 30,1 г (87 %). В подальші реакції одержаний тіол 4 b вводили без додаткової ідентифікації та очищення. 1 Приклад 3. Синтез 2-[5-феніл-4-(метатоліл)-4H-(1,2,4]триазол-3-ілсульфаніл)-N-(4 етоксифеніл)-ацетамід 5 а. До розчину 1.337 г. (0.005 моль) 5-феніл-4-(метатоліл)-4H[1,2,4]триазол-3-тіолу 4 а в 40 мл сухого ДМФА додавали 1.38 г (0,01 моля) карбонату калію. 1 При перемішуванні додавали 1,069 г (0,005 моль) 2-хлор-N-(4 -етоксифеніл)-ацетаміду. Реакційну суміш нагрівали при перемішуванні на киплячій водяній бані 2 години. Охолоджували і виливали в 200 мл води. Осад, що утворився, відфільтровували, промивали водою. Кристалізували із етанолу. Вихід 1,600 г (72 %), Тпл.=214-215 °C. Знайдено, %: N 12.4, 1 C25H24N4O2S. Обчислено, %: N 12,6. ЯМР Н (, м.ч.):1,21 (т, 3Н, СН3), 2,32 (с, 3Н, СН3), 3.97 (кв, 2Н, СН2), 4,11 (с, 2Н, SCH2), 6.82 та 7,46 (д-д, 4Н, С6Н4-пара), 7,14-7,41 (м, 9Н, C6H4+Ph), 10.1 (c, 1H, NH). Приклад 4. 2-[5-(4'-Бромфеніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазоло-3-їлcyльфaнiл)-Nфeнiлaцeтaмiд 5 b одержано аналогічно до прикладу 1 з 1.731 г (0.005 моль) 5-(4'-бромфеніл)-4(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3-тіолу 4 b та 0.848 г (0.005 моль) 2-хлор-N-фенілацетаміду. Вихід 1.846 г (77 %), Тпл.=223-224 °C (з етанолу). Знайдено, %: N 11.4, Вr 16.5. C25H19BrN4OS. 1 Обчислено, %: N 11.7, Вr 16.7. ЯМР Н (, м.ч.): 2.41 (с, 3Н, СН3), 4.14 (с, 2Н, SCH2), 6.96-7.42 (м, 9Н, 2Ph), 7.44 та 7.57 (д-д, 4Н, С6Н4-пара), 10.2 (c, 1H, NH). 1 2 Приклад 5. 2-[5-(4 -Бромфеніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазоло-3-їлсульфаніл)-N-(4 метоксифеніл)ацетамід 5 с одержано аналогічно до прикладу 1 з 1,731 г (0.005 моль) 5-(4'1 бромфеніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3-тіолу 4 b та 0,998 г (0.005 моль) 2-хлор-N-(4 метоксифеніл)ацетаміду. Вихід 1.732 г (68 %), Тпл.=236-237 °C (з етанолу). Знайдено, %: N 10.8, 1 Вr 15.5. C25H19BrN4OS. Обчислено, %: N 11.0, Вr 15,7. ЯМР Н (, м.ч.): 2,41 (с, 3Н, СН3), 3.75 (с, 3Н, ОСН3), 4,11 (с, 2Н, SCH2), 6,78 та 7.48 (д-д, 4Н, С6Н4-пара, J=9.00 Гц) 6.96-7,42 (м, 9Н, 2Ph), 7,23 та 7.44 (д-д, 4Н, С6H4-пара, J=8,64 Гц), 10.1 (c, 1H, NH). 1 Приклад 6. 2-[5-(4 -Бромфеніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазоло-3-їлcyльфaнiл)-N-(41 етоксіфеніл)ацетамід 5 d одержано аналогічно до прикладу 1 з 1.731 г (0.005 моль) 5-(4 бромфеніл)-4-(мета-толіл)-4H-[1,2,4]триазол-3-тіолу 4 b та 1.069 г (0.005 моль) 2-хлор-N-(4'етоксіфеніл)ацетаміду. Вихід 1.832 г (70 %) Тпл=243-244 °C (з етанолу). Знайдено, %: N, 10.5, Вr 1 15,1. C25H23BrN4O2S. Розраховано, %: N 10,7, Вr 15.3. Спектр ЯМР Н, (360 МГц, DMSO-d6, ТМС) , м.ч.: 1,37 (т, 3Н, СН3), 2,40 (с, 3Н, СН3), 3.98 (кв, 2Н, OCH2), 4,11 (с, 2Н, SCH2), 6,77 та 7.43 (дд, 4Н, С6Н4, J=9.0 Гц), 7,30 та 7,45 (д-д, 4Н, С6Н4, J=8,64 Гц), 7,14-7.41 (м, 4Н, С6Н4), 10,1 (с, 1H, NH). 1 Приклад 7. 2-[5-(4 -Бромфеніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазоло-3-їлсульфаніл)-N-(4хлорфеніл)ацетамід 5 є одержано аналогічно до прикладу 1 з 1,731 г (0,005 моль) 5-(4'1 бромфеніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3-тіолу 4 b та 1,020 г (0,005 моль) 2-хлор-N-(4 хлорфеніл)ацетаміду. Вихід 1.927 г (75 %) Тпл.=217-218 °C (з етанолу). Знайдено, %: N, 10,6. 1 C23H18ClBrN4OS. Розраховано, %: N 10,9. Спектр ЯМР Н (360 МГц, DMSO-d6, ТМС) , м.ч.: 2,42 (с, 3Н, СН3), 4.12 (с, 2Н, SCH2), 7,21 та 7,60 (д-д, 4Н, С6Н4, J=9,0 Гц), 7,31 та 744 (д-д, 4Н, С6Н4, J=8,64 Гц), 7,13-7,41 (м, 4Н, С6Н4, 10.3 (с, 1H, NH). Приклад 8. 2-[5-(4'-Бромфеніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазоло-3-їлсульфаніл)-N-ізопропілN-фенілацетамід 5 f одержано аналогічно до прикладу 1 з з 1,731 г (0,005 моль) 5-(4'бромфеніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3-тіолу 4 b та 1,059 г (0,005 моль) 2-хлор-Mізопропіл-N-фенілацет-аміду. Вихід 1,721 г (66 %) Тпл.=210-211 °C (з етанолу). Знайдено, %: N, 1 10.8, Вr 15,5. C26H25BrN4OS. Розраховано, %: N 10,7, Вr 15,3. Спектр ЯМР Н, (360 МГц, DMSOd6, ТМС) , м.ч.: 1,07 (д, 6Н, 2СН3), 2,42 (с, 3Н, СН3), 3,68 (с, 2Н, SCH2), 4,85 (м, 1Н, СН), 6,77 та 7,43 (д-д, 4Н, С6Н4, J=9,0 Гц), 7,07-7,53 (м, 13Н, ароматичні Н). Приклад 9. Для визначення протипухлинної 2-[5-(4-R-феніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол3-ілсульфаніл]-N-арилацетамідів 5 a-f дослідження проведено in vitro на 60 лініях ракових клітин (лейкемії, легень, товстого кишечнику, ЦНС, меланоми, яєчників, нирок, простати, молочної -5 залози) при дії речовини в концентрації 10 моль/л за стандартною процедурою [9] оцінки мітотичної активності нових потенційних біологічно активних сполук методом флуоресцентного зафарбування (барвник - сульфородамін Б), виконаних у Національному інституті раку США (National Cancer Institute of Health, USA) в рамках Development Therapeutic Program. Результат проведених досліджень виражали у відсотках росту клітин раку у порівнянні з контролем - 5флуорурацилом. У таблиці 1 показано ефективність досліджуваних сполук по пригніченні росту ракових клітин у порівнянні з контролем. -5 В умовах експерименту заявлені сполуки 5 a-f у концентрації 10 моль/л виявили здатність пригнічувати ріст клітин раку, що охоплює практично весь спектр онкологічних захворювань людини (табл. 1). 3 UA 117496 U Таблиця 1 Протипухлинна активність 2-[5-(4-R-феніл)-4-(метатоліл)-4Н-[1,2,4]триазол-3-ілсульфанiл]-N-5 арилацетамідів 5 a-f in vitro на лініях клітин раку при дії речовин в концентрації 10 моль/л Лінії ракових клітин CCRF-CEM HL-60(TB) K-562 лейкемія MOLT-4 RPMI-8226 SR А549/АТСС EKVX НОР-62 НОР-92 Дрібноклітинний NCI-H226 рак легенів NCI-H23 NCI-H322M NCI-H460 NCI-H522 COLO 205 НСС2998 НСТ-116 Рак товстого НСТ-15 кишечнику НТ-29 KМ12 SW-620 SF-268 SF-295 Рак головного SF-539 мозку SNB-19 SNB-75 U251 LOX IMVI MALME-3M М14 MDA-MB-435 Меланома SK-MEL-2 SK-MEL-28 SK-MEL-5 UACC-257 UACC-62 IGRОV1 OVCAR-3 OVCAR-4 Рак яєчників OVCAR-5 OVCAR-8 NCI/ADR-RES SK-OV-3 5а 101.8 104.2 89.47 90.14 77.63 54.92 22.52 -37.97 11.41 19.36 22.03 8.27 31.46 62.52 26.68 57.65 -20.57 71.93 17.95 31.18 60.13 41.03 -42.50 -22.21 -33.61 9.56 27.71 40.31 47.44 55.41 74.11 44.79 59.10 26.15 49.26 35.61 -26.53 52.05 7.62 21.63 -15.67 5b 9891 87.04 98.91 95.67 109.8 47.63 70.10 33.07 25.30 43.28 87.18 72.16 41.63 80.94 85.76 90.73 47.30 95.34 87.71 93.29 91.48 96.80 70.11 77.03 74.92 24.26 54.11 58.61 69.65 82.44 99.90 94.97 84.67 91.11 87.57 93.74 72.29 71.25 55.50 87.89 50.84 70.21 54.32 4 5с 104.1 108.5 105.6 93.61 108.2 87.40 75.64 88.63 37.80 71.27 80.07 77.36 91.19 108.3 80.00 101.4 105.5 62.45 97.73 96.18 107.3 111.6 92.34 91.73 95.08 76.67 33.39 42.89 82.17 97.41 92.95 96.01 95.97 103.8 103.9 103.7 92.44 78.39 83.70 100.8 107.9 66.47 92.42 53.62 5d 55.94 61.92 34.04 50.19 -28.26 50.21 -73.01 4.32 -65.42 -34.95 4.26 -58.25 -83.83 -20.33 -100.0 39.25 -41.24 -5.21 -51.51 26.28 -43.78 -69.86 6.59 -99.70 -90.34 -29.65 -48.53 4.01 -73.20 27.27 -14.12 -7.45 -24.13 -86.60 -54.26 -63.38 -30.65 -61.89 5е 67.25 92.24 61.63 64.31 76.00 7.58 15.83 -25.27 37.90 14.08 8.59 36.86 42.63 31.33 75.9 -11.51 72.43 54.67 71.11 73.35 53.94 -23.37 -2.41 17.95 15.89 47.87 60.84 71.50 63.28 66.92 76.74 47.97 42.98 -29.62 48.17 26.25 43.55 -20.72 5f 69.94 45.96 56.32 58.85 68.34 64.12 69.86 93.86 95.41 83.55 82.27 78.73 69.33 78.80 101.3 95.03 43.81 60.74 76.52 80.58 86.34 90.65 93.02 46.61 87.96 85.93 79.93 75.00 95.59 71.85 83.16 94.65 102.1 45.84 89.62 69.64 75.68 77.31 67.80 108.6 78.48 76.47 92.01 UA 117496 U Лінії ракових клітин 786-0 А498 ACHN САKІ-1 Рак нирок RXF393 SN12C ТK-10 UO-31 РС-3 Рак простати DU-145 MCF7 MDA-MB231/ATCC Рак молочної HS 578T залози ВТ-549 T47D MDA-MB-468 5 10 15 20 25 30 35 40 5а -48.70 -6.62 -45.06 63.72 18.90 45.14 -15.78 -21.53 72.49 44.53 54.35 5b 51.85 59.04 45.59 72.20 68.33 48.83 83.37 61.91 78.84 81.46 85.75 5с 76.62 119.1 107.3 89.26 72.04 85.06 81.08 80.09 88.92 89.25 88.28 5d -99.06 -92.22 -98.34 -52.54 -81.22 2.21 -62.46 -74.75 -42.80 7.63 -66.54 5е -1.52 -6.30 4.89 46.26 27.55 52.84 27.23 75.93 52.02 5f 90.98 77.78 90.55 57.02 89.22 76.24 95.66 67.56 44.86 94.42 69.24 32.32 55.57 54.13 -35.27 33.48 76.94 23.53 40.35 -20.07 1.27 57.50 96.76 54.03 72.48 83.86 85.71 66.10 87.29 -43.05 -78.41 -47.98 40.35 68.49 27.30 67.64 109.3 77.62 69.29 64.47 Відповідно до табл. 1, сполуки 2-[5-(4-R-феніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3ілсульфаніл]-N-арилацетамідів 5 a-f перевищують еталон на всіх лініях ракових клітин, що досліджувалися. Найбільш ефективною виявилася сполука 5 d. Вона не тільки перевищує дію препарату порівняння 5-фторурацилу по затримці росту всіх видів досліджених ракових клітин, а й знищує більшість з них. Так, сполука 5 d на 100 % знищує клітини НСТ-116 раку товстого кишечнику, на 99,70 % знищує клітини U251 раку головного мозку, на 90,34 % знищує клітини LOX IMVI меланоми, на 99,06 %, 92,22 %, 98,34 %, 81,22 % та 74,75 % знищує клітини 786-0, А498, ACHN, RXF 393 та UO-31 раку нирок відповідно. Слід відзначити, що ця сполука знищує всі досліджені клітини раку молочної залози: MCF7, MDA-MB-231/ATCC, HS 578Т, T47D та MDAMB-468 на 66,54 %, 35.27 %, 43,05 %, 78,41 % та 47,98 % відповідно. 1 2 Враховуючи, що 2-[5-(4 -бромфеніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазоло-3-їлсульфаніл-N-[-(4 етоксифеніл)ацетамід 5 d є малотоксичною сполукою - її LD50 на щурах становить >2500 мг/кг, можна достовірно вважати, що вона стане основою для створення нового ефективного протипухлинного засобу. Джерело інформації: 1. Рак в Україні. 2009-2010. Захворюваність, смертність, показники діяльності онкологічної служби // Бюл. Нац. канцер-реєстру України. - 2011. - № 12. – С. 1-7. 2. Потапов С.М. Порівняльна динаміка частоти пухлин яєчок за даними Харківського обласного клінічного центру урології та нефрології імені В.І. Шаповала за два десятиліття (19932002 pp. та 2003-2012 p.p.) // Український медичний альманах. - 2013. - Т. 16, № 4. - С 36-38. 3. Parkin D.M. Global cancer statistics I D.M. Parkin, P. Pisani, J. Ferlay II CA Cancer. J. Clin. 1999. - V. 49. - P. 33-64. 4. 5-Фторурацил. [Електронний ресурс]. - Режим доступу: https://ru.wikipedia.org/wiki/5D0 %A4 %D1%82 %D0 %BE%D1 %80%D1 %83 %D1 %80 %D0 %B0 %D1%86 %D0 %B8 %D0 %B B - Назва з екрану. 5. М. Baum, J. Cuzick, J. Forbes, J. Houghton, A. Howell (The ATAC Trialists Group): Anastrozole alone or in combination with tamoxifen versus tamoxifen alone for adjuvant treatment of postmenopausal women with early stage breast cancer. Results of the ATAC (Arimidex, Tamoxifen Alone or in Combination) trial efficacy and safety update analyses. Cancer 2003, 98. - P. 1802-1810. 6. Режим доступу: Анастрозол (Anastrozole): инструкция, применение и формула. [Електронний ресурс]. Режим доступу: http://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_2233.htm - Назва з екрану. 7. Демченко A.M., Янченко В.А., Кислый В.В., Лозинский М.О. Использование тетраметилтиурамдисульфида в синтезе азотсодержащих гетероциклических соединений. / Химия гетероциклических соединений. - 2005. - № 5. - 775-780. 8. Синтезы гетероциклических соединений. Выпуск 5. Изд-во АН АрмССР, Ереван, 1960, стр. 11. 9. Beverly A. Teicher, Paul A. Andrews. Anticancer drug development guide: preclinical screening, clinical. - Medical. - 2004. - V. 1. - 450 p. 5 UA 117496 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 2-[5-(4-R-феніл)-4-(метатоліл)-4H-[1,2,4]триазол-3-ілсульфаніл]-N-арилацетаміди 5 R2 N N N R N S O R1 CH3 , де R, R1, R2=H, CH3, CH(CH3)2, OCH3, OC2H5, Cl, Br, що мають протипухлинні властивості. 10 Комп’ютерна верстка М. Мацело Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 6