2-[5-(2-ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4-феніл-4н-[1,2,4]триазол-3-іл-сульфаніл]-1-арилетанони, що мають протипухлинні властивості

Реферат: 2-[5-(2-Ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4-феніл-4H-[1,2,4]триазол-3-іл-сульфаніл]-1арилетанони R N N N S O O , де R=OCF2, Сl, що мають протипухлинну активність. UA 116901 U (12) UA 116901 U UA 116901 U Корисна модель належить до органічної та фармацевтичної хімії та медицини, а саме до одержання біологічно активних похідних 5-(2-ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4-феніл-4H[1,2,4]триазолів загальної формули: R N N S N O O 5 10 15 20 , де R=ОСР2, Сl, що проявляє протипухлинну активність та може бути використана при лікуванні пухлини молочної залози та лейкемії. На сьогодні для лікування пухлинної хвороби та досягнення паліативного ефекту, що призводить до зменшення пухлини і відповідно до клінічної ремісії, застосовують понад 40 протипухлинних препаратів, активних при різних формах злоякісних утворень. Відомі протипухлинні препарати з різними механізмами дії застосовують в схемах лікування. При цьому виражений клінічний ефект складає від 20 % до 80 %, в окремих випадках ремісія до 2 років, понад 10 % хворих мають ремісію понад 3 роки. Широке застосування набули циклофосфан, метатрексат, вінкристин, адріабластин. Вказані лікарські засоби мають необхідні лікувальні властивості, але проявляють значні побічні ефекти з боку системи кровотворення (лейкопенія, анемія, тромбоцитопенія), ЦНС (почуття втоми, головокружіння головна біль, афазія, сонливість, судоми), репродуктивної системи (порушення оогенезу та сперматогенезу, олігоспермія, порушення менструального циклу, зниження лібідо, імпотенція), сечовидільної системи (гематурія, цистит, виражені порушення функції нирок, алергічні та дерматологічні реакції тощо. Відомі також сполуки - похідні 1,2,4-триазолу (лікарський засіб анастрозол та летрозол), які мають структури: N N N N N N N N N N Анастрозол 25 30 35 Летрозол Анастрозол [1] проявляє активність проти естрогензалежних пухлин молочної залози у жінок. Він є селективним нестероїдним інгібітором ферменту ароматази, який призводить до зниження рівня естрадіолу в периферичних тканинах. Відомо [2], що захворювання на пухлини молочної залози в світі становлять 22.9 % від загальної кількості онкологічних захворювань. При застосуванні анастрозолу та летрозолу може розвиватися анемія, тромбофлебіт та лейкопенія, що є показаннями, щоб відмінити препарат. Підвищення ефективності хіміотерапії пухлинної хвороби в першу чергу пов'язано із створенням нових, ефективних протипухлинних препаратів. В основу корисної моделі поставлена задача пошуку нових речовин, що проявляють протипухлинну активність - здатність пригнічувати ріст клітин раку молочної залози, зокрема клітин MCF-7 та T-47D. 1 UA 116901 U 5 Поставлена задача вирішується тим, що як нові хімічні речовини синтезовані 2-[5-(2Ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4-феніл-4H-[1,2,4]триазол-3-іл-сульфаніл]-1-арилетанони 6 а, b. Заявлені 2-[5-(2-Ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4-феніл-4H-[1,2,4| триазол-3-ілсульфаніл]-1-арилетанони 6 а, b одержують з високими виходами при використанні відомих синтетичних підходів у декілька стадій (схема 1). Схема 1. Синтез 2-[5-(2-Ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4-феніл-4H-[1,2,4]триазол-3-ілсульфаніл]-1-арилетанонів 6 а, b. O O OH O O ClCH2COOEt OEt NHNH 2 NH2NH2 K2CO3 3 2 1 N N N SH O NaOH O O N H HCl H N H N S 4 5 ArCOCH2Br K2CO3 R N N S N O O 6 a,b 10 , де a) R=OCF2, b) R=Cl Дослідження мітотичної активності проведено зафарбування (барвник - сульфородамін Б) (табл.). за допомогою флуоресцентного Таблиця Протипухлинна активність сполук 5 та 6 a-b in vitro -5 на лініях клітин раку при дії речовин в концентрації 10 моль/л Лінії ракових клітин MDA-MB231/ATCC HS 578T Рак Молочної залози ВТ-549 T-47D MDA-MB-468 Сполука 5 Сполука 6 а Сполука 6 b 107.95 67.62 48.69 101.92 101.44 87.17 100.14 72.70 36.13 40.19 57.83 72.65 62.59 48.83 58.58 2 UA 116901 U Таблиця Протипухлинна активність сполук 5 та 6 a-b in vitro -5 на лініях клітин раку при дії речовин в концентрації 10 моль/л Лінії ракових клітин MCF-7 А549/АТСС НОР-62 НОР-92 NCI-H226 Мілкоклітинний рак легень NCI-H23 NCI-H322M NCI-H522 NCI-H460 786-0 А498 ACHN САКІ-1 Рак нирок RFX 393 SN12C ТК-10 UO-31 COLO 205 НСС-2998 НСТ-116 Рак товстого кишечнику НТ29 KM 12 SW-620 OVCAR-3 OVCAR-4 OVCAR-5 Рак яєчників OVCAR-8 NCI/ADR-RES SK-OV-3 SF-268 SF-539 Рак кори головного мозку SNB-75 U251 LOX IMVI М14 MDA-MB-435 SK-MEL-2 Меланома SK-MEL-28 SK-MEL-5 UACC-257 UACC-62 CCRF-CEM HL-60(TB) K-562 Лейкемія MOLT-4 RPMI-8226 SR 5 Сполука 5 93.34 99.42 106.03 103.46 101.54 96.71 90.02 102.05 106.92 102.72 94.76 101.97 114.36 99.05 103.79 98.23 102.31 105.72 97.08 88.93 109.81 112.04 100.96 90.11 108.01 102.03 93.40 107.10 92.67 96.61 101.20 63.67 103.12 111.66 92.43 109.10 91.93 113.13 93.17 91.64 92.55 90.65 84.41 83.43 83.71 Сполука 6 а 13.49 47.54 49.55 75.80 57.81 44.46 85.49 30.23 51.17 48.21 72.72 47.25 55.28 61.47 56.01 64.09 28.83 63.30 73.19 18.16 24.67 40.04 64.32 59.67 67.63 74.45 68.47 30.31 55.16 65.82 68.39 75.19 60.69 39.16 37.10 4.49 74.82 88.12 25.59 87.99 57.99 17.25 22.01 10.78 6.25 39.04 0.25 Сполука 6 b 29.03 43.58 79.97 46.64 66.41 56.05 109.10 57.91 63.67 59.91 60.09 64.91 63.37 75.13 61.09 85.43 36.83 89.26 94.88 43.94 85.34 50.68 91.16 71.91 61.82 51.44 69.5253.77 91.57 59.39 86.00 79.52 67.24 52.05 60.54 39.45 95.57 85.77 37.70 82.63 64.98 48.95 45.74 27.17 24.61 38.62 4.53 Для визначення протипухлинної активності 5-(2-ізопропіл-5-метил-феноксиметил)-4-феніл4H-[1,2,4]триазол-3-тіолу 5 та похідних 2-[5-(2-ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4-феніл-4Я[1,2,4]триазол-3-іл-сульфаніл]-1-арилетанонів 6а-b проведено in vitro дослідження на 60 лініях ракових клітин (лейкемії, легень, товстого кишечнику, ЦНС, меланоми, яєчників, нирок, 3 UA 116901 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 простати, молочної залози) при дії речовини в концентрації 10" моль/л за стандартною процедурою оцінки мітотичної активності нових потенційних біологічно активних сполук, виконаних в Національному інституті раку США (National Cancer Institute of Health, USA) в рамках Development Therapeutic Program. Результат проведених досліджень виражали у відсотках росту клітин раку у порівнянні з контролем. Як контроль використовували 5фторурацил та адріаміцин. В умовах експерименту заявлені сполуки в концентрації 10° моль/л виявили здатність пригнічувати ріст клітин раку, що охоплюють практично весь спектр онкологічних захворювань людини (табл. 1). За результатами отриманих даних, можна зробити висновок, що введення до базової сполуки 5 радикалів заміщених арилетанонів (сполуки 6а-b) значно підвищує здатність сполуки пригнічувати ріст клітин раку. Найкращі результати були отримані при дії сполук на лейкозні клітини, що може свідчити про перспективність розробки нових сполук на основі 1,2,4триазолу для боротьби з лейкемією. Приклади конкретного виконання. Гідразид (2-ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-оцтової кислоти 3 був одержаний за методом [3] взаємодією тимолу з хлороцтовим ефіром і подальшою обробкою гідразин-гідратом в спиртовому розчині. Заміщена тіосечовина 4 та 2-[5-(2-ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4-феніл-4H[1,2,4]триазол-3-тіол 5 були отримані за методом [4]. 1 2-Бром-1-(4 -дифлуорометоксифеніл)етанон був одержаний бромуванням відповідного ацетофенону бромом в середовищі етеру та діоксану за методом [5]. 1 Приклад 1. Синтез 1-(4 -дифлуорометоксифеніл)-2-[5-(2-ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4феніл-4H-[1,2,4]триазол-3-іл-сульфаніл|-етанону 6 а. До розчину 3.39 г. (0.01 моль) 2-[5-(2Ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4-феніл-4H-[1,2,4]триазол-3-тіолу 5 в 40 мл сухого ДМФА додавали 2.76 г (0.02 моля) карбонату калію. Потім при інтенсивному перемішуванні додавали 1 2.65 г (0.01 моль) 2-бром-1-(4 -дифлуорометоксифеніл)етанону. Нагрівали при перемішуванні на водяній бані 2 години при температурі 50 °C. Охолоджували і виливали в 100 мл води. Осад, що утворився, відфільтровували, промивали водою. Перекристалізовували із етанолу. Вихід 1 4.40 г (84 %). Тпл= 95-6 °C. Знайдено, %: N 8.19, C28H27F2N3O3S. Розраховано, %: N 8.02. ЯМР H (δ, м.ч., DMSO-d6): 0.93 (д, 6H, СН(СH3)2), 2.20 (с, 3Н, СН3), 2.73 (м, 1Н, СН(СН3)2), 4.94 (с, 2Н, ОСН2С), 5.10 (с, 2Н, SCH2C=O), 6.69-7.60 (м, 8H, Ph + С6Н3), 7.45 (т, 1Н, OCHF2), J=73.5 Гц), 7.34 та 8.11 (д-д, 4Н, С6Н4, J=8.7 Гц), 1 Приклад 2. 1-(4 -Хлорфеніл)-2-[5-(2-ізопропіл-5-метилфеноксиметил)-4-феніл-4H[1,2,4]триазол-3-іл-сульфаніл]-етанон 6 b, був одержаний аналогічно прикладу 1 із 3.39 г. (0.01 моль) 2-[5-(2-Ізопропіл-5-метил-феноксиметил)-4-феніл-4H-[1,2,4]триазол-3-тіолу 5 та 2.33 г 1 (0.01 моль) 2-бром-1-(4 -хлорфеніл)етанону. Вихід 3.99 г (81 %). Тпл.=116-7 °C (з етанолу). 1 Знайдено, %: N 8.37, C27H26ClN3O2S. Розраховано, %: N 8.54. ЯМР H (δ, м.ч., DMSO-d6): 0.92 (д, 6Н, СН(СН3)2), 2.20 (с, 3Н, СН3), 2.73 (м, 1Н, СН(СН3)2), 4.94 (с, 2Н, ОСH2С), 5.10 (с, 2Н, SCH2C=O), 6.69-7.60 (м, 8Н, Ph + С6Н3), 7.64 та 8.04 (д-д, 4Н, С6Н4, J=8.7 Гц), Визначення цитотоксичного ефекту in vitro. Основною метою досліджень in vitro є оцінка прямого цитотоксичного ефекту потенційних протипухлинних сполук та виявлення можливої диференційної чутливості пухлинних клітин людини різного генезу до сполук, що вивчаються. Експеримент in vitro проводили на 60 лініях ракових клітин (лейкемії, легень, товстого кишечнику, ЦНС, меланоми, яєчників, нирок, простати, молочної залози), при цьому сполуки -5 використовували в концентрації 10 моль/л та визначали мітотичну активність сполук за стандартною процедурою оцінки мітотичної активності нових потенційних біологічно активних сполук [6]. Визначення проводили високочутливим флюорометричним методом, кількісно оцінюючи інтенсивність кольору флуоресцентного випромінювання (барвник - сульфородамін Б) через 48 год. опромінення клітини з тестованою сполукою. Результат проведених досліджень виражали у відсотках росту клітин раку у порівнянні з контролем. Використана система відбору та вивчення сполук з потенційною протипухлинною активністю in vitro основана на визначенні відсотку росту клітин пухлини (PG) під впливом тестованої сполуки, який обчислюється за однією із наступних формул: Якщо (середня ODтест. - Середня ODtzero)>0, тоді PG=100 x (середнє ODtest. - середнє ODtzero)/(середнє ODctrl - середнє ODtzero); Якщо (середнєODtest - середнє ODtzero)