Поживне середовище для вирощування вакцинних штаммів мікроорганізмів і спосіб його приготування

1. Питательная среда для выращивания вакцинных штаммов микроорганизмов, содержащая обогащенную белковую основу, воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что в качестве обогащенной белковой основы используют ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясо-молочных производств при следующем соотношении компонентов, об.%: Ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных ' продуктов мясо-молочных производств 18-51 Вода Остальное 2. Питательная среда для выращивания вирусных штаммов микроорганизмов по п. 1 , о т л и ч а ю щ а я с я тем, что содержание аминного азота в питательной среде составляет 140-230 мг%. 3. Способ приготовления питательной среды для выращивания вакцинных штаммов микроорганизмов, предусматривающий подготовку белковой основы путем ферментативного гидролиза, разбавление гидролизата водой, регулирование рН среды, ее температурную обработку кипячением, стерилизацию, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что основу для ферментативного гидролиза в виде сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясо-молочных производств смешивают с подогретой до температуры 90+1 °С водой в количественном соотношении 1:7-20 соответственно, после чего смесь охлаждают до температуры 50+1 °С, затем в нее добавляют ферментативный агент с осуществляют ферментативный гидролиз полученной смеси при температуре 49+0,5°С в течение 3,5-8 часов, и после окончания гидролиза в полученном гидролизате устанавливают оптимальне значение рН с последующим кипячением. 4. Способ по п. 3, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве ферментативного агента используют поджелудочную железу крупно с > ю со о 22376 6 Способ по п. 3, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что после окончания гидролиза опти мальное значение рН в полученном гидролизатб устанавливают последовательно', при этом вначале рН доводят до значения 4 , 1 4,2 с последующим кипячением в течение 8-12 минут, а затем рН доводят до значения 7,2-7,6 с последующим кипячением в течение 9-11 минут. 7 Способ по п. 3, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что приготовленную питательную среду кипятят в течение 25-30 минут, затем фильтруют и стерилизуют. Изобретение относится к биотехнологии, а именно к питательной среде для выращивания вакцинных штаммов микроорганизмов и к способу ее приготовления. В настоящее время одной из проблем развития биотехнологической отрасли является поиск дешевых качественных питательных сред для глубинного культивирования различных микроорганизмов, в том числе при производстве вакцин. Существует питательная среда для микробиологических целей, содержащая ферментативный гидролизат - мясной перевар Хоттингера, воду[1] Однако такая питательная среда и способ ее приготовления предусматривают использование и других компонентов источников питания. А из-за продолжительности ферментативного гидролиза в процессе получения такой питательной среды, который длится 5-8 суток, существующая технология является затратной. В производственной практике существуют питательная среда для изготовления вакцины против рожи свиней и способ ее приготовления [2], питательная среда для изготовления рузивака - смеси живых вакцинных культур штаммов ErysipeJothrix Insidiosa BP-2 и ВГНКИ-6/26 и способ ее приготовления [3]. Однако из-за использования в качестве белковой основы мясного перевара Хоттингера в таких средах необходимо использование и других источников питания. Коме того, длительный, в течение 5-6 часов, процесс ферментативного гидролиза при получении известных питательных сред обуславливает значительные производственные затраты. Наиболее близким к заявляемому изобретению является одна из производственных питательных сред для выращивания ассоциированных вакцинных штаммов микроорганизмов и способ ее приготовления, используемые в отечественной практике [4]. Такая питательная среда содержит белковую основу в виде мясного перевара Хоттингера, обогащенного другими добавками, и воду Известный способ приготовления питательной среды предусматривает ферментативный гидролиз белковой основы после смешивания ее с водой, регулирование рН среды, ее температурную обработку кипячением и стерилизацией. Однако из-за дефицита, высокой стоимости используемых в известных питательных средах мясных переваров Хоттингера существующие питательные среды экономически не целесообразны. Такие питательные среды не содержат достаточного количества аминокислот, при этом мясо не является оптимальным продуктом для приготовления питательных сред, коэффициент его использования в этом случае составляет лишь 20%, в результате чего для обогащения белковой основы необходимо использование дополнительных источников питания. Известный способ приготовления питательной среды из-за длительности ферментативного гидролиза в течение 5-6 суток предусматривает значительные материальные затраты на осуществление процесса. Такой способ также не обеспечивает получения гидролизата с высоким содержанием аминокислот, что в итоге не способствует повышению накопления биомассы на стадии культивирования целевых микроорганизмов. В основу изобретения поставлена задача создания питательной среды для выращивания вакцинных микроорганизмов и способа ее приготовления, в которых соответственно, в питательной среде для выращивания вакцинных штаммов микроорганизмов за счет состава, совокупности и количественного соотношения компонетов с использованием при этом в качестве белковой основы ферментативного гидролизата сухого белкового го рогатого скота или свиней в количестве 20-30 %вес. 5. Способ по п. 3, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что ферментативный гидролиз осуществляют при постоянном перемешивании при рН 7,9-8,1 с подщелачиванием реакционной взвеси 33%-ным раствором едкого натра через каждый час. 5 Ю 15 20 25 30 35 40 22376 концентрата побочных продуктов мясомолочных производств, а в способе получения этой питательной среды - за счет осуществления в определенной последовательности при соответствующих параметрах процесса 5 кратковременного ферментативного гидролиза белковой основы в результате увеличения в питательной среде содержания аминокислот от 3,7 до 8,9 мг%, увеличения степени расщепления белка от 0,4 до 0,8 10 увеличилось бы накопление биомассы, концентрация микроорганизмов на стадии культивирования в 1,5 раз, сократились материальные затраты на проведение процесса приготовления питательной среды. 15 Для решения поставленной задачи питательная среда для выращивания вакцинных штаммов микроорганизмов, содержащая обогащенную белковую основу и воду, согласно изобретению, в качестве Обога- 20 щенной белковой основы содержит ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясомолочных производств при следующем соотношении компонентов, объем. %: фер- 25 ментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясомолочной промышленности в количестве 18-51, вода - остальное. Содержание аминного азота в заявляє- ЗО мой питательной среде составляет 140-230 мг%. Для решения поставленной задачи в способе приготовления питательной среды для выращивания вакцинных штаммов 35 микроорганизмов, предусматривающем подготовку белковой основы путем ферментативного гидролиза, разбавление полученного гидролизата водой, регулирование рН питательной среды, ее температурную обра- 40 ботку кипячением, стерилизацию, согласно изобретению, для приготовления ферментативного гидролизата используют основу в виде сухогр белкового концентрата из побочных продуктов мясомолочных произ- 45 водств, который смешивают с подогретой до 90+1°С водой в количественном соотношении 1:7-20 соответственно. После этого смесь охлаждают до температуры 50+1°С и добавляют в нее ферментативный агент. За- 50 тем осуществляют ферментативный гидролиз полученной смеси при температуре 49+0,5°С в течение 3,5-8 часов. После окончания гидролиза в полученном гидролизате устанавливают оптимальное значение рН с 55 последующим кипячением. В качестве ферментативного агента используют поджелудочную железу животных в количестве 20-30 % вес. Ферментативный гидролиз осуществляют при постоянном перемешивании при рН 7,9-81, подщелачивая реакционную взвесь 33%-ным раствором едкого натра через каждый час. После окончания гидролиза оптимальное значение рН в полученном гидролизате устанавливают последовательно в два приема, на первом из которых рН доводят до значения 4,1-4,2 с последующим кипячением в течение 8-12 минут, а затем рН доводят до значения 7,2-7,6 с последующим кипячением в течение 9-11 минут. Приготовленную питательную среду кипятят в течение 25-30 минут, затем фильтруют и стерилизуют. Совокупность всех признаков заявляемой бактериальной питательной среды для выращивания вакцинных штаммов микроорганизмов и способа получения этой питательной среды при осуществлении этих решений в промышленном производстве позволяют увеличить по сравнению с прототипом степень расщепления белка от 0,4 и> 0,8, содержание суммы аминокислот в питательной среде - от 3,7 до 8,9 мг%, коэффициент использования продукта при приготовлении питательных сред - от 0,08. до0,76 и, соответственно, увеличить накопление биомассы, концентрацию микроорганизмов в процессе культивирования микроорганизмов в 1,5 раза, а также сократить материальные затраты в процессе производства. При поиске различных вариантов прописей питательных сред для выращивания вакцинных штаммов микроорганизмов установлено, что ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата, полученного из побочных продуктов мясомолочных производств, является наиболее оптимальным среди азотсодержащих компонентов. При этом согласно заявляемому изобретению его используют не как добавку, а как основу питательной среды, не требующую введения в ее состав дополнительных источников питания. Из ферментативных гидролизатов сухого белкового концентрата были получены 52 серии производственных питательных сред для выращивания в биореакторах вакцинных штаммов микроорганизмов. Конструирование прописей сред проводилось с учетом количественных показателей общего и аминного азота, пептона, аминокислот, необходимых для выращивания конкретных микроорганизмов. Многочисленными экспериментами установлено, что количество аминокислот в заявляемой питательной среде составляет 27, а в прототипе - 18. Таким образом, предлагаемая питательная среда в 22376 сравнении с питательной средой, приготовленной на мясном переваре Хоттингера, оказалась обогащенной по аминокислотам. В заявляемом способе приготовления питательной среды для выращивания вакци- 5 онных штаммов микроорганизмов количественные параметры процесса оптимальны в выбранных граничных пределах. Относительно основного временного режимного параметра, а именно - времени проведения 10 ферментативного гидролиза в течение 3,5-8 часов неочевидным оказалось то, что выход всех аминокислот при ферментативном гидролизе сухого белкового концентрата осуществляется именно за этот период с начала 15 гидролиза, в то время как ферментативный гидролиз согласно прототипу продолжается 5-6 суток. При этом очень важно строгое соблюдение температуры проведения гидролиза, а именно температуры 49+0,5°С. 20 Именно заявляемый состав питательной среды для выращивания вакцинных штаммов микроорганизмов в неразрывной связи со способом ее получения обеспечивает достижение технического результата и постав- 25 ленной задачи при осуществлении микробиологического промышленного способа производства вакцин. Таким образом, предлагаемая питательная среда для выращивания вакцинных 30 штаммов микроорганизмов и способ получения этой среды соответствуют критериям "новизна" и "изобретательский уровень". Предлагаемая питательная среда и способ ее приготовления широко испытаны в 35 производственной практике Сумской биологической фабрики. Здесь впервые из производственных штаммов, выращенных на питательных средах на основе ферментативного гидролизата сухого белкового концент- 40 рата из побочных отходов мясомолочных производств, изготовлены экспериментально производственные серии вакцин против сальмонеллеза свиней, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят, ассоцииро- 45 ванные вакцины против сальмонеллеза и другие, которые по всем контрольным тестам отвечали требованиям инструкций и технических условий. Установлено высокое качество и экономичность питательных сред 50 на основе ферментативного гидролизата сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясомолочных производств. Такая питательная среда содержит все необходимые ингредиенты для жизнедеятельности 55 вакцинных штаммов микроорганизмов. Сущность предлагаемых решений иллюстрируется следующими примерами. П р и м е р 1 Питательная среда для культивирования производственного штам 8 ма Salmonella choleral suis № 370 при изготовлении вакцины против сальмонеллеза поросят имеет следующий состав, объем.%: Ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясомолочных производств 27,4 Вода Остальное Питательную среду в количестве 100 л с указанным процентным соотношением компонентов и концетрацией по амин ному азоту 200 мг% получают, добавляя 72,6 л воды к 27,4 л ферментативного гидролизата с исходным содержанием аминного азота 730 мг%. Технологический процесс получения заявляемой питательной среды в соответствии с заявляемым способом ее приготовления осуществляют следующим образом. Вначале получают ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясомолочных производств (Концетрат сухой белковый. Технические условия ТУУ 46.15.209-97). Для этого сухой белковый концентрат смешивают с подогретой до 90+1 °С водой в количественном отношении 1:15. Затем полученную смесь охлаждают до температуры 50+1 °С и добавляют в нее 25 вес.% измельченной поджелудочной железы крупных рогатых животных или свиней. Ферментативный гидролиз осуществляют в течение 4-х часов при температуре 49+0,5°С при рН 8,0, подщелачивая реакционную смесь 33%-ным раствором едкого натра через каждый час. После окончания гидролиза гидролизат подкисляют соляной кислотой до рН 4,1, кипятят 10 минут, фильтруют под давлением. Затем устанавливают рН 7,2-7,6, кипятят 10 минут, вновь фильтруют. Готовый гидролизат используют по назначению. В полученном ферментативном гидролизате сухого белкового концентрата в зависимости от его концентрации содержится: общего азота 1900-2100 мг%, аминного азота 730 мг%, пептонов 4,3-5,7%, а также аминокислоты, %: до 0,120 цистина (цистатионин), 0,165 орнитина, 0,490 лизина, 0,600 аргинина, 0,300 аспарагиновой кислоты, 0,250 глицина, 0,290 глутаминовой кислоты, 0,290 треонина, 0,295 аланина, 0,015 пролина, 0,04 триптофана, 0,07 метионина, 0,170 валина, 0,095 фенилаланина, 0,315 лейцина (изолейцина). Готовый ферментативный гидролизат используют по назначению - как основу питательной среды для выращивания вакцинного штамма. К ферментативному гидролизату добавляют водопроводную, деминерализованную или дистиллирован 22376 мера. На полученной питательной среде в условиях аэрации при постоянном перемешивании осуществляют культивирование производственного вакционного штамма при температуре 37+1 °С. 5 Концентрация микробных клеток, полученных при выращивании штаммов с использованием заявляемых изобретений, составляет 25.-27 млрд./мл, а концентрация микробных клеток, полученных с использо- 10 ванием прототипа, составляет 15-18 млрд./мл. П р и м е р 2. Питательная среда для культивирования производственного штамма Pasteurella multocida I f 656 при изготов- 15 Sc лении вакцины против пастероллеза поросят имеет следующий состав, объем.%: Ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных 20 продуктов мясо-молочных производств 19,4 Вода Остальное Питательную среду в количестве 100 л с указанным процентным соотношением ком- 25 понентов и концетрацией по аминному азоту 140 мг% получают, добавляя 80,6 л воды к 19,4 л ферментативного гидролизата с исходным содержанием аминного азота 720 мг%. 30 Технологический процесс получения заявляемой питательной среды в соответствии с заявляемым способом ее приготовления осуществляют следующим образом. Вначале получают ферментативный гид- 35 ролизат сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясомолочных производств (Концетрат сухой белковый. Технические условия ТУУ 46.15.209-97). Для этого сухой белковый концентрат смешивают с по- 40 догретой до 90+1 °С водой в количественном соотношении 1:10. Затем полученную смесь охлаждают до температуры 50+1°С и добавляют в нее 27 вес.% измельченной поджелудочной железы крупных рогатых животных 45 или свиней. Ферментативный гидролиз осуществляют в течение 4-х часов при температуре 49+0,5°С при рН 8,0-8,1, подщелачивая реакционную смесь 33%-ным раствором едкого натра через каждый час. После оконча- 50 ния гидролиза гидролизат подкисляют соляной кислотой до рН 4,1, кипятят 11 минут, фильтруют под давлением. Затем устанавливают рН 7,2-7,62, кипятят 11 минут, вновь фильтруют. Готовый гидролизат ис- 55 пользуют по назначению. В полученном ферментативном гидролизате сухого белкового концентрата в зависимости от его концентрации содержится: общего азота 2000-2200 мг%, аминного азота 720-770 10 мг%, пептонов 4,3-6%, а также аминокислоты, %: до 0,130 цистина (цистатионин), 0,170 орнитина, 0,490 лизина, 0,610 аргинина + 0,090 гистидина, 0,340 аспарагиновой кислоты, 0,250 глицина, 0,340 глутаминовой кислоты, 0,240 треонина, 0,272 аланина, 0,012 пролина, 0,03 триптофана, 0,055 метионина, 0,175 валина, 0,095 фенилаланина, 0,330 лейцина (изолейцина). Готовый ферментативный гидролизат используют по назначению - как основу питательной среды для выращивания вакционного штамма. К ферментативному гидролизату добавляют водопроводную, деминерализованную или дистиллированную воду, как описано в настоящем примере выше. На полученной питательной среде в условиях аэрации при постоянном перемешивании осуществляют культвирование производственного вакционного штамма при температуре 37+1 °С. Концентрация микробных клеток, полученных при выращивании вакцинного штамма с использованием заявляемых изобретений составляет 22-23 млрд./мл, а концентрация микробных клеток, полученных с использованием прототипа составляет 1516 млрд./мл. П р и м е р 3. Питательная среда для культивирования производственного штамма Streptococcus faecallis 13,345 при изготовлении вакцины против энтерококковой инфекции поросят имеет следующий состав, объем. %: Ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясо-молочных производств 30,5 Вода Остальное Питательную среду в количестве 100 л с указанным процентным соотношением компонентов и концентрацией по аминному азоту 220 мг% получают, добавляя 69,5 л воды к 30,5 л ферментативного гидролизата с исходным содержанием аминного азота 720 мг%. Технологический процесс получения заявляемой питательной среды в соответствии с заявляемым способом ее приготовления осуществляют следующим образом. Вначале получают ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясо-молочных производств (Концетрат сухой белковый. Технические условия ТУУ 46.15.209-97), Для этого сухой белковый концентрат смешивают с подогретой до 90+1 °С водой в количественном отношении 1:20, Затем полученную смесь охлаждают до температуры 50+1 °С и добавляют в нее 20 вес.% измельченной поджелу 11 22376 охлаждают до температуры 50+1 °С и добавляют в нее 20 вес.% измельченной поджелудочной железы крупных рогатых животных или свиней. Ферментативный гидролиз осуществляют в течение 4-х часов при темпера- 5 туре 49°С при рН 7,9-8,0, подщелачивая реакционную смесь 33%-ным раствором едкого натра через каждый час. После окончания гидролиза гидролизат подкисляют соляной кислотой до рН 4,1, кипятят 12 ми- 10 нут, фильтруют под давлением. Затем устанавливают рН 7,2-7,6, кипятят 10 минут, вновь фильтруют. Готовый гидролизат используют по назначению. В полученном ферментативном гидролизате сухого белко- 15 вого концентрата в зависимости от его концентрации содержится: общего азота 2000-2050 мг%, аминного азота 720-730 мг%, пептонов 4,3-5%, а также аминокислоты, %: до 0,136 цистина (цистатионин), 0,130 2Q орнитина, 0,490 лизина, 0,610 аргинина, 0,310 аспарагиновой кислоты, 0,250 глицина, 0,300 глутаминовой кислоты, 0,240 треонина, 0,272 аланина, 0,01 пролина, 0,03 триптофана, 0,05 метионина, 0,18 валика, 2g 0,09 фенилаланина, 0,310 лейцина (изолейцина). Готовый ферментативный гидролизат используют по назначению - как основу питательной среды для выращивания вакцинного штамма. К ферментативному гидролизату до- 2Q бавляют водопроводную, деминерализованную или дистиллированную воду, как описано в настоящем примере выше. На полученной питательной среде в условиях аэрации при постоянном перемеши- 3^ вании осуществляют культвирование производственного вакционного штамма при температуре 37+1 °С. Концентрация микробных клеток, полученных при выращивании вирусного штамма ил с использованием заявляемых изобретений составляет 25-26 млрд./мл, а концентрация микробных клеток, полученных с использованием прототипа составляет 12-15 млрд./мл. П р и м е р 4. Питательная среда для 45 культивирования производственных штаммов, указанных в примере 1 и в примере 3, при изготовлении ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции поросят имеет следующий состав, к п объем. %: Ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных ек продуктов мясо-молочных производств 51 Вода Остальное Питательную среду в количестве 100 л с указанным процентным соотношением ком 12 понентов и концентрацией по аминному азоту 23 мг% получают, добавляя 49 л воды к 51 л ферментативного гидролизата с исходным содержанием аминного азота 450 мг%. При культивировании штаммов на этой среде концентрация микробных клеток в среднем составляет 24-26 млрд./мл. П р и м е р 5. Питательная среда для культивирования смеси живых культур Erysipelothrix in sidiosa ВР-2 и ВГНКИ 6/24 при изготовлении вакцины против рожи свиней имеет следующие состав, объем. %: Ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясо-молочных производств 36,0 Вода . Остальное Питательную среду в количестве 100 л с указанным процентным соотношением компонентов и концентрацией по аминному азоту 180 мг% получают, добавляя 64 л воды к 36 л ферментативного гидролизата с исходным содержанием аминного азота 500 мг%. Технологический процесс получения заявляемой питательной среды в соответствии с заявляемым способом ее приготовления осуществляют следующим образом. Вначале получают ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата из побочных продуктов мясо-молочных производств (Концетрат сухой белковый. Технические условия ТУУ 46.15.209-97). Для этого сухой белковый концентрат смешивают с подогретой до 90+1 °С водой в количественном отношении 1:20. Затем полученную смесь охлаждают до температуры 50+1 °С и добавляют в нее20 вес.% измельченной поджелудочной железы крупных рогатых животных или свиней. Ферментативный гидролиз осуществляют в течение 4-х часов при температуре 49°С при рН 7,9-8,0, подщелачивая реакционную смесь 33 %-ным раствором едкого натра через каждый час. После окончания гидролиза гидролизат подкисляют соляной кислотой до рН 4,1, кипятят 12 минут, фильтруют под давлением. Затем устанавливают рН 7,2-7,6, кипятят 10 минут, вновь фильтруют. Готовый гидролизат используют по назначению. В полученном ферментативном гидролизате сухого белкового концентрата в зависимости от его концентрации содержится: общего азота 1750 1850 мг%, аминного азота 500-580 мг % . Готовый ферментативный гидролизат используют по назначению - как основу питательной среды для выращивания вакционного штамма. К ферментативному 22376 13 14 гидролизату добавляют водопроводную, деминерализованную или дистиллированную воду, как описано в настоящем примере выше. На полученной питательной среде в условиях аэрации при постоянном перемешивании осуществляют культвирование производственного вакционного штамма при температуре 37+1 °С. В таблице приведены сравнительные характеристики заявляемой питательной среды, приготовленной заявляемым способом и известной питательной среды, приготовленной известным способом. Эти данные иллюстрируют преимущества заявляемой среды по составу ~ содержанию пептонов, аминокислот. В связи с большим содержанием в ферментативных 10 гидролизатах, получаемых в процессе осуществления заявляемых изобретений, пепКонцентрация микробных клеток, полтонов и различных минеральных солей, ученных при выращивании вирусного штамисключается необходимость их добавления ма с использованием заявляемых при приготовлении заявляемой питательной изобретений составляет 0,8 млрд./мл, а концентрация микробных клеток, полученных с 15 среды, что имеет значительные преимущества перед прототипными мясными перевараиспользованием прототипа составляет 0,55 ми Хоттингера. млрд./мл. Сравнительные характеристики заявляемой питательной среды, приготовленной предлагаемым способом и известной питательной среды, приготовленной известным способом Ингредиенты и показатели качества питательной среды Мясной перевар Хоттингера Ферментативный гидролизат сухого белкового концентрата Вода деминерализованная Печеночный экстракт Пептон Двухзамещенный фосфорнокислый натрий Хлорид натрия Кислота соляная (конц.) Раствор едкого натрия (33%) Показатели качества среды: рН Аминный азот Пептоны Аминокислоты Известная питательная сре- Заявляемая питательная среда, полученная известным да, полученная заявляемым способом способом Количество Качественные Количество Качественные вводимого показатели вводимого показатели компонента, компонента, л/кг л/кг 40 60 10 0,4 30 70 0,3 0,3 0,6 0,8 7,8 200 мг % 0,4% 18 аминокислот 7,8 220 мг % 3% 27 аминокислот 22376 Упорядник Замовлення 4484 Техред М.Кеяемеш Коректор О. Кравцова Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655. ГСП, Київ-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.Гагаріна, 101