Спосіб лікування та/або профілактики протозойної паразитарної інфекції та комбінація атовакуону та прогуанілу, що застосовується в ньому

1 Способ лечения и/или профилаїсгики протозойной паразитарной инфекции или инфекции, вызываемой Р саппи у млекопитающих, отличающийся тем, что включает введение прогуанила и 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3-гидрокси1,4-нафтохинона в соотношении от 1 1 до 1 3 2 Способ по п 1, отличающийся тем, что соотношение прогуанила 2-[4-(4хлорфенил)циклогексил]-3-гидрокси-1,4нафтохинона представляет собой 2 5 3 Способ по п 1 или 2, отличающийся тем, что протозойная паразитарная инфекция представляет собой малярию 4 Способ по п 1 или 2, отличающийся тем, что протозойная паразитарная инфекция представляет собой токсоплазмоз 5 Способ по п 1 или 2, отличающийся тем, что он предназначен для лечения и/или профилактики инфекции, вызываемой Р саппм 6 Способ по любому из пп 1-5, отличающийся тем, что 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3гидрокси-1,4-нафтохинон находится в форме ІНФЕКЦІЇ ТА транс-изомера или смеси цис- и транс-изомеров, в которой преобладает транс-изомер 7 Комбинация 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3гидрокси-1,4-нафтохинона и прогуанила, отличающаяся тем, что соотношение прогуанила 2[4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3-гидрокси-1,4нафтохинона находится в интервале 11-13 8 Комбинация по п 7, отличающаяся тем, что соотношение прогуанила 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3-гидрокси-1,4нафтохинона представляет собой 2 5 9 Комбинация по п 7 или 8, отличающаяся тем, что 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3-гидрокси1,4-нафтохинон находится в форме транс-изомера или смеси цис- и транс-изомеров, в которой преобладает транс-изомер 10 Комбинация по любому из пп 7-9, отличающаяся тем, что предназначена для лечения и/или профилактики протозойной паразитарной инфекции или инфекции, вызываемой Р саппм, у млекопитающих 11 Комбинация по п 10, отличающаяся тем, что атовакуон и прогуанил находятся в форме для совместного введения 12 Комбинация по п 10, отличающаяся тем, что атовакуон и прогуанил находятся в форме для последовательного применения 13 Комбинация по любому из пп 7-9 в форме фармацевтической композиции, отличающаяся тем, что находится вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями 14 Комбинация по п 13, отличающаяся тем, что находится в виде стандартной дозы, содержащей от 50 мг до 3 г каждого из 2-[4-(4хлорфенил)циклогексил]-3-гидрокси-1,4нафтохинона и прогуанила 15 Комбинация по п 13, отличающаяся тем, что находится в виде стандартной дозы содержащей 500 мг 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]3-гидрокси1,4-нафтохинона и 200 мг прогуанила О 00 ю 45948 Данное изобретение касается синергических комбинаций 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3гидрокси-1,4-нафтохинона (атовакуона) и прогуанила, которые имеют противопаразитарную активность Более конкретно, изобретение касается фармацевтических композиций, содержащие такие комбинации, их применения в лечении инфекций, вызываемых протозойными паразитами, таких как малярия и токсоплазмоз, и их применения в лечении инфекций, вызываемых Pneumocystis carimi Соединение 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]3~гидрокси-1,4-нафтохинон (атовакуон) было описано ранее, например, в Европейском патенте №123238, который касается 2-замещенных 3гидрокси-1,4-нафтохинонов формулы (I) і (I) в которой каждый R1 представляет собой водород и R2 выбран из Сі є-алкокси, аралкокси, Сі є-алкилСі 6-алкокси, фенила, замещенного одной ели двумя группами, выбранными из галогена и Сі єалкила, галогена и пергало-Сі є-алкила, или R1 и R2 оба представляют собой Сі є-алкил или фенил, п обозначает 0 или 1, или их физиологически приемлемых солей Известно, что эти соединения обладают противопротозойной активностью В частности считают, что соединения формулы (І), в которых п представляет собой 0, активны против малярийного паразита человека Plasmodium falciparum и также против видов Eimena, таких как Е tenella и Е Acervulma, которые являются организмами, вызывающими кокцидиоз, а соединения формулы (І), в которых п представляет собой 1, активны против простейших рода Theilena, в частности Т annulata или Т parva Среда соединений, названных конкретно и приведенных в качестве примера, находится соединение формулы (І), в которой п представляет собой О, R представляет собой водород и R2 представляет собой 4хлорфенил, т е атовакуон Прогуанил представляет собой хорошо известное лекарственное средство для профилактики, но не для лечения малярии Он является одним из самых безопасных противомалярийных лекарственных средств и его можно давать маленьким детям и беременным женщинам Однако появилась устойчивость Р falciparum к прогуанилу, в частности в Юго-Западной Азии, и эта устойчивость к прогуанилу представляет собой все увеличивающуюся проблему Для преодоления устойчивости к лекарственным средствам стандартной практикой становится применение комбинаций более, чем одного противомалярийного средства, одновременно или последовательно Однако многие такие комбинации являются антагонистичными, что приводит к менее эффективному лечению, и схемы приема лекарственных средств часто усложняются, увеличивая вероятность того, что больные, но смогут завершить лечение, Поэтому целью данного изобретения было обеспечение комбинации противомалярийных лекарственных средств, которая не была бы антагонистичной и не требовала сложной схемы приема лекарственных доз Неожиданно было обнаружено, что путем комбинирования, либо одновременного, либо последовательного, атовакуона, представленного в данной спецификации формулой (II) и прогуанила достигается усиление противопаразитарной и, в частности, противомалярийной активности Кроме того, комбинация соединения формулы (II) и прогуанила может быть легко представлена в виде одного фармацевтического препарата В первом аспекте данное изобретение обеспечивает способ лечения и (или) профилактики инфекции, вызываемой протозойними паразитами, например, малярии или токсоплазмоза, или инфекции, вызываемой Р Саппи, у млекопитающих, в том числе у человека, предусматривающий введение эффективного количества атовакуона или его физиологически приемлемой соли и сопутствующее или последовательное введение эффективного количества прогуанила Во втором аспекте данное изобретение обеспечивает применение атовакуона при изготовлении лекарственного препарата для введения либо вместе, либо последовательно с прогуанилом для лечения и (или) профилактики инфекции протозойных паразитов, например малярии или токсоплазмоза, или инфекции, вызываемой Р саппм, у млекопитающих, в том числе у человека Предпочтительно соединение формулы (II) и прогуанил вводят вместе Более предпочтительно соединение формулы (II) и прогуанил вводят в потенциирующем соотношении Таким образом, согласно следующему аспекту данного изобретения обеспечена комбинация атовакуона или его физиологически приемлемой соли и прогуанила, в которой атовакуон или его соль и прогуанил присутствуют в потенциирующем соотношении Термин "потенциирующее соотношение" применяют здесь для указания, что атовакуон и прогуанил присутствуют в таком соотношении, что прротивопаразитная активность этой комбинации выше, чем активность одного атовакуона или одного прогуанила или аддитивной активности, которая могла бы быть прогнозирована для этой комбинации на основе активностей отдельных компонентов Таким образом, отдельные компоненты действуют синергически в комбинации при условии, что они присутствуют в потенциирующем соотношении Потенциирующее соотношение, которое можно успешно применять для лечения малярии, в том числе для действия на устойчивые к гидро 45948 пример, 3 - 20мг/кг/день прогуанила и 1 20мг/кг/день атовакуона, в частности, 5 16мг/кг/день прогуанила и 3 - 15мг/кг/день атовакуона Подходящая эффективная доза для введения человеку дан профилактики малярии находится в диапазоне от 3 до 20мг на кг веса тела в неделю для прогуанила и атовакуона, например, от бмг/кг в недолю до 10мг/кг в неделю для прогуанила и атовакуона Должно быть понятно, что названные выше дозы рассчитаны для лекарственных средств per Se Для применения согласно данному изобретению комбинация атовакуона и прогуанила предпочтительно представлена в виде фармацевтического препарата Фармацевтические препараты содержат эти активные ингредиенты (т е комбинацию атовакуона и прогуанила) вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями и иногда другими терапевтическими и (или) профилактическими ингредиентами Носитель или носители должны быть приемлемыми в смысле их совместимости с другими ингредиентами этой формулы и безвредными для реципиента Поэтому данное изобретение обеспечивает фармацевтический препарат, содержащий комбинацию атовакуона и прогуанила в ассоциации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями Кроме того, данное изобретение обеспечивает способ получения фармацевтического препарата, предусматривающий соединение комбинации атовакуона и прогуанила с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями Комбинация атовакуона и прогуанила может быть для удобства представлена в виде фармацевтического препарата в форме стандартных (унифицированных) доз Удобный препарат в виде стандартной дозы содержит активные ингредиенты в количествах от 10мг до Зг каждого, например, 50мг - Зг каждого Типичные стандартные дозы могут содержать, например, 500мг атовакуона и 200мг прогуанила или 500мг атовакуона и 500мг прогуанила Соединение формулы (II) может также существовать в его таутмерной форме, в которой гидФармацевтические препараты включают в сероксильная группа отдает ее протон одной из окбя препараты, пригодные для перорального, тописогрупп, и применение таких таутомерных форм ческого (втом числе дермального, трансбуккальнвключено в сферу действия данного изобретения го и подъязычного), ректального и Однако считают, что стабильной формой является парентерального (в том числе подкожного, чреформа, представленная в формуле (II) скожного, внутримышечного и внутривенного) введения, а также для введения при помощи назоКоличество комбинации атовакуона и прогуагастрального зонда Препарат может быть, если нила, необходимое для эффективного действия в нужно, представлен дан удобства в виде отделькачестве противопаразитарного агента, будет, ных дозированных единиц и может быть пригоконечно, применяться и в конце концов определятовлен любым из способов, хорошо известных в ется по усмотрению ветеринарного врача или меобласти фармации Все способы предусматривадицинского работника Факторами, которые должют стадию соединения активных ингредиентов с ны учитываться, являются путь введения и жидкими носителями или мелко измельченными природа препарата, вес тела млекопитающего, твердыми носителями или теми и другими с повозраст и общее состояние ж природа и тяжесть следующим приданием формы полученному прозаболевания В основном подходящая эффективдукту, если это желательно ная доза для введения человеку при лечении малярии находится в диапазоне 2,0мг - 30мг прогуаНаиболее предпочтительно фармацевтиченила на килограмм веса тела в день и 0,5мг - 30мг ские композиции для перорального введения, в атовакуона на килограмм веса тела в день, накоторых носитель является твердым, представ ксинафтохинону штаммы малярии, находится в диапазоне 1 0,1-1 100 (прогуанил атовакуон) Удобно, чтобы потенциирующее соотношение находилось в диапазоне 1 0,2 - 1 10 Особенно предпочтительное потенциирующее соотношение находится в диапазоне 1 1 - 1 3 Данное изобретение обеспечивает также в другом аспекте способ лечения и (или) профилактики малярии у млекопитающих, в том числе у человека, предусматривающий введение эффективного количества комбинации атовакуона или его физиологически приемлемой соли и прогуанила Гидроксильная группа атовакуона может образовать соли с подходящими основаниями и физиологически приемлемыми солями атовакуона являются соли неорганического основания, такие как соли щелочных металлов (например, натрия и калия) и щелочно-земельных металлов (например, соли кальция), соли органических оснований, например, фенилэтилбензиламина, дибензилэтилендиамина, этаноламина и диэтаноламина, и соли аминокислот, например, лизина и аргинина Должно быть понятно, что соединение формулы (II) может существовать в виде цис- иди транс-изомера, т е кольцо циклогексила может быть цис- или транс-замещенным нафтохиноновым ядром и карбофенильной группой В соответствии с данным изобретением можно использовать как цис, так и транс-изомеры и их смеси Вообще при использовании этого соединения в виде смеси изомеров транс-изомер будет присутствовать в количества приблизительно 50% или будет преобладающим изомером, но использование смесей, в которых преобладает цис-изомер, также включено в сферу действия изобретения Конкретное отношение изомеров можно варьировать, если требуется, типичными являются смеси, в которых отношение цис^ранс изомеров равно приблизительно 1 1, 40 60 и 5 95 Для применения согласно данному изобретению предпочтительны транс-изомер соединения формулы (II) или смесь его цис- и транс-изомеров содержащая по меньшей море 95%, например, 99% трансизомеа 45948 лять в виде препаратов со стандартной, рассчитанной на один прием дозой, таких как болюсы, капсулы или таблетки, каждая содержащая заданное количество активных ингредиентов Таблетка может быть приготовлена путем прессования или формования при помощи шаблона (формы), иногда с одним или несколькими вспомогательными ингредиентами Прессованные таблетки могут быть приготовлены путем прессования в пригодной для этого машине активных соединений в свободно текучей форме, такой как порошок или гранулы, иногда смешанные со связывающим веществом, смазывающим веществом, инертным разбавителем, смягчающим агентом, поверхностно-активным веществом или диспергирующим агентом Формованные таблетки могут быть приготовлены путем отливки в форме инертного жидкого разбавителя Иногда таблетки могут иметь покрытие, а если они но покрыты, то могут иметь отметки на их поверхности Капсулы могут быть приготовлены путем помещения активных ингредиентов, либо одних, либо в смеси с одним или несколькими вспомогательными ингредиентами, в капсульные оболочки с последующим загерметизированием их обычным образом Крахмальные облатки аналогичны капсулам, в которых активные ингредиенты вместе с любым вспомогательным ингредиентом (ингредиентами) загерметизированы в оболочку из рисовой бумаги Комбинация соединения формулы (II) и прогуанила может быть также сформована в виде диспергируемых гранул, которые, например, могут быть суспендированы в воде перед введением или насыпаны на пищевой продукт Гранулы могут быть упакованы, например, в небольшой пакет Препараты, пригодные для перорального введения, в которых носитель представляем собой жидкость, могут быть представлены в виде раствора или суспензии в водкой или неводной жидкости или в виде жидкой эмульсии типа масло в воде Препараты для прорального введения могут представлять собой лекарственные формы с контролируемым высвобождением активных ингредиентов (формы пролонгированного действия), например, таблетки, в которых активные ингредиенты готовят в подходящем контролирующим высвобождение матриксе, или активные ингредиенты покрыты пленкой, контролирующей выделение Такие препараты могут быть особенно пригодны дня профилактического применения Активные ингредиенты могут быть также приготовлены в виде раствора иди суспензии, пригодных для введения при помощи назогастрального зонда Фармацевтические препараты душ ректального введения, в которых носитель твердый, наиболее предпочтительно готовят в виде суппозиториев, содержащих лекарственное средство для одного введения Пригодными носителями являются какао-масло и другие материалы, обычно применяемые для суппозиториев в фармации Суппозитории могут быть приготовлены смешиванием активной комбинации с размягченным или расплавленным носителем (носителями) с последующие охлаждением и формованием в шабло 8 нах Фармацевтическими препаратами, пригодными для парентерального введения являются стерильные растворы ила суспензии активной комбинации в водных или маслянистых носителях Инъецируемые препараты могут быть приспособлены для инъекции ударной дозы или для непрерывного вливания Такие препараты для удобства помещают в контейнеры дог упаковок на один прием и для многократного приема, которые герметизируют после введения препарата и хранят до момента использования Альтернативно, активные ингредиенты могут быть в виде порошка, который находится в подходящем носителе, таком как стерильная апирогенная вода, перед применением Комбинация атовакуона и прогуанила может быть приготовлена в виде депо-препарата пролонгированного действия, который можно вводить при помощи внутримышечной инъекции или имплантации, например, подкожной или внутримышечной Депо-препараты могут содержать, например, пригодные полимерные или гидрофобные материалы или ионообменные смолы Такие препараты пролонгированного действия особенно удобны для профилактического применения Должно быть понятно, что кроме упомянутых выше компонентов-носителей, фармацевтические препараты для различных путей введения, описанных выше, могут содержать в случае необходимости один или несколько дополнительных компонентов-носителей, таких как растворители, буферы, вкусовые вещества, связывающие вещества, поверхностно-активные агенты, загустители, смазывающие вещества, консерванты (в том числе антиоксиданты) и т п , и вещества, включаемые для того, чтобы сделать препарат изотоничным с кровью будущего реципиента Для применения в ветеринарии могут быть использованы композиции для перорального, парентерального и интрарубцового введения (через рубец) Способы получения атовакуона описаны в ЕР123238 и один конкретный способ иллюстрирован в примере 1 Пример 1 2-[транс-4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3гидрокси-1,4-нафтохинон а) 4-(4-хлорфенил)циклогексан-1-карбоновая кислота Ацетилхлорид (30г) и мелко растертый в порошок хлорид алюминия (60г) перемешивали вместе в дисульфиде серы (120ми) и затем охлаждали до - 50°С в бане с СС^/окситолом Циклогексен (ЗОг), предварительно охлажденный до - 50°С, добавляли по каплям в течение 10 минут, поддерживая температуру реакционной смеси ниже 20°С Смесь перемешивали при - 50°С еще 60 минут и затем растворитель декантировали, оставляя клейкий оранжевый комплекс Добавляли немного хлорбензола при нагревании материала до температуры окружающей среды, затем добавляли остаток хлорбензола (всего 300мл), полученный таким образом раствор нагревали при 40°С в течение 3 часов при перемешивании, выливали в смесь льда и концентрированной соля 45948 10 ной кислоты и отделяли органический слой Его пл 200 - 209°С, перекристаллизовывали из ацепромывали 2MI соляной кислотой, 2М гидрокситонитрила, получая названный в заголовке продом натрия и водой, сушили над безводным дукт в виде транс-изомера (300мг), т пл 216 сульфатом натрия и выпаривали досуха Продукт 219°С перегоняли в вакууме, фракцию, кипящую при 140 Пример 2 - 154°С (0,1мм Нд) собирали, растворяли в равном Следующие примеры иллюстрируют обычные объеме петролейного эфира (40 - 60мл), охлажфармацевтические препараты, которые могут дали до 6°С и пробулькивали через раствор азот в применяться в соответствии с данным изобретевиде непрерывного потока, после чего извлекали нием отделенное бесцветное твердое вещество А Покрытая пленкой таблетка Кор (центральная часть) К раствору гидроксида натрия (6,2г) в воде Соединение примера 1 500мг (42мл) при 0°С добавляли бром (2,8мл) Полученный, как описано више, замещенный гексагидроГидрохлорид прогуанила 200мг ацетофенон (3,1 г) растворяли в диоксане (15мл) и Микрокристаллическая целлюлоза затем добавляли холодный раствор гипобромита, (Avicel PHIOI) 130мг поддерживая реакционную смесь ниже 20°С РеГидроксипропил-целлюлоза, LOакционную смесь перемешивали при температуре SUB, (І_НПС, LHII) 99мг окружающей среда в течение 6 часов, затем осНатрий-гликолат крахмала (Exploтавляли стоять в течение ночи Для разрушения tan) 30мг избытка гипобромита добавляли метабисульфит Повидан КЗО 36мг натрия, смесь охлаждали и затем подкисляли, Стеарат магния 5мг получая бесцветное твердое вещество Его отМасса в прессованном виде 1000мг фильтровывали, промывали водой, сушили и пеПокрытие рекристаллизовывали из этанола, получая 4-(4Дисперсия полимера (Гидроксихлорфенил)циклогексан-1-карбоновую кислоту, т пропилметилцеллюлоза и диоксид пл 254-256°С титана и полиэтиленгликоль 400 и краситель) 20мг в) 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3-хлор-1,4нафтохинон Глянцевание Смесь 2-хлор-1,4-нафтохинона (3,95г, Полиэтиленгликоль 800 2мг 0,02моля), 4-(4-хлорфенил)циклогексан-1Общая масса 1022мг карбоновой кислоты (4,9г, 0,02моля) и порошкообВ Диспергируемая покрытая разного нитрата серебра (1,05г, 0,0062моля) напленкой таблетка гревали с обратным холодильником при сальном Ядро перемешивании в 40мл ацетонитрила Раствор Соединение примера 1 500мг персульфата аммония (12,0г, 0,0525моля) в 50мл Гидрохлорид прогуанила 200мг воды добавляли каплями в течение 1 часа Смесь Микрокристаллическая целлюлоза нагревали с обратным холодильником в течение 3 (Avicel PHIOI) 100мг часов, затем охлаждали на льду в течение 30 миГидроксипропилцеллюлоза, LOнут, после чего фильтровали и оставшееся липкое SUB, (LHPC, LHII) 83мг твердое вещество экстрагировали дважды кипяНатрий-гликолат крахмала (Exploщим хлороформом для удаления неорганического taB) 40мг материала Хлороформ удаляли выпариванием, Повидав КЗО 20мг получая в остатке желто-коричневое твердое веСтеарат магния 5мг щество (приблизительно 2,7г) Его растворяли в Докузат натрия 1 мг 40мл кипящего ацетонитрила, небольшое количеСиликат магния-алюминия ство нерастворимого материала удаляли фильт(Veegum F) 50мг рованием После охлаждения названное в загоНатрия сахарин 1мг ловке соединение отдаляли в виде желтых Масса в прессованном виде 1000мг кристаллов (550мг), т пл, 172 - 175°С ЯМР, dH (5 Покрытие Дисперсия полимера (Гидрокси- flMSO) 8 05 (2Н, мультиплет, р-нафт), 7,85 (2Н, пропилметилцеллюлоза и диоксид мультиплет, а-нафт), 7,30 (4Н, с,, РпН), 3,30 (1Н, титана и полиэтиленгликоль 400 и шир т,СН), 2,67 (1Н, шир т , СН), 1,2 - 2,4 (8Н, краситель) 10мг мультиплет, 4 х СНг) Глянцевание 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3-гидроксиПолиэтиленгликоль 8000 2мг 1,4-нафтохинон Общая масса 1012мг Продукт стадии в) суспендировали в 10мл киРезультаты биологического испытания пящего метанола и добавляли по каплям 0,55г Пример 3 гидроксида калия в 5,5мл воды в течение 15 миСравнение взаимодействия лекарственных нут Смесь кипятили с обратным холодильником, средств в комбинациях соединения примера 1 с пока не образовался темно-красный раствор (подругими противомалярийными препаратами сле приблизительно 6 часов), затем добавляли Исследования in vitro чувствительности к леосторожно по каплям 2мл концентрированной сокарственным средствам проводили при помощи ляной кислотыСмесь охлаждали и фильтровали полуавтоматизированного способа Desjardms и твердый остаток промывали тщательно водой (Desjardm et al Antimalanal Agents and ChemotherВодные промывки снова подкисляли и фильтроapy 1979, 16 (6) 710 - 718) Противомалярийную вали Объединенные твердые остатки (500мг), т 45948 12 11 активность в этой системе оценивают по ингибиции фолиевой кислоты и РАВА рованию вклинения радиоактивно меченого гипокОстальные биологические процедуры провосантина в паразитах градационными концентрадили согласно способу Desjardms, за исключением циями лекарственных средств того, что использовали три штамма Р falcipaum (устойчивый к множеству лекарственных средств Противомалярийные лекарственные средства W-2 клон, чувствительный к лекарствам, но устойдля испытания растворяли в воде, 95% этанола чивый к мефлохину Д)-6 клон и С2В изолят, устойили диметилсульфоксиде (ДМЭО), лекарственный чивый к соединению примера 1), и инкубацию удсредства, растворенные в воде, разводили 1 1 линяли до 72 часов 98% этанолом, а лекарственные средства, растворенные в 95% этаноле, разведали 1 1 водой Отдельные IC50 рассчитывали при помощи Затем растворы разводили культуральной средой, программы "MINSQ" из Micromath Scientific содержащей 10% сыворотку человека, до исходSoftware Каждая серия парных данных хорошо ных концентраций, превышающих в 20 - 50 раз соответствовала функции гиперболического танIC50 Испытанные лекарственные средства и их генса, примененной Desjardms растворители перечислены ниже IC50 нормализовали путам принятия за 1 величины IC50 для соединения примера 1 и для других находящихся в комбинациях лекарственных Лекарственное Исходный расСреда средств с пропорциональными нормализованнысредство творитель ми величинами для каждого соотношения из двух Соединение прилекарственных средств Путем подставления этих ДМБО 1640 мера 1 данных в уравнение, представленное ниже, была построена изоболограмма Хинин Этанол-вода 1640 Хлорохин Вода-этанол 1640 Мефлохин Этанол-вода 1640 Примахин Этанол-вода 1640 Артесунат Этанол-вода 1640 РМ443 ДМБО 1640 Тетрациклин ДМБО 1640 Норфлоксацин ДМБО 1640 Ципрофлоксацин ДМБО 1640 Прогуанил Этанол-вода LO-фолат Циклогуанил Этанол-вода LO-фолат Пириметамин ДМБО LO-фолат Триметоприм ДМБО LO-фолат Сульфаметоксазол ДМБО LO-фолат Дапсон ДМБО LO-фолат Кпопидол ДМБО LO-фолат Этанол-вода LO-фолат RS-15 ДМБО LO-фолат WR99210 ДМБО LO-фолат где У, = ІС50 для соединения примера 1 при комбинировании его с другим лекарственным средством, X, = ІС50 для другого лекарственного средства при комбинировании его с соединением примера 1, I = параметр взаимодействия, свидетельствующий о степени обратимости Величины I рассчитывали для каждой комбинации Положительные величины I свидетельствовали о синергической комбинации, отрицательные величины I свидетельствовали об антагонизме и I = 0 указывали на аддитивное взаимодействие Результаты представлены в таблице 1 Аллопуринол Для исследования комбинаций лекарственных средств их растворы в исходных концентрациях комбинировали в различных соотношениях (1 5, 1 2, 2 1 и 5 1) Затем растворы лекарственных средств и комбинации вносили в 96-луночный микротитрационный планшет, получая двойные ряды соединения примера 1, лекарственного сродства, комбинируемого с ним и четыре комбинации двух лекарственных средств Серийные разведения 1 3 лекарственных средств средой были сделаны для заполнения 96-луночного микротитрационного планшета при помощи 12канального пипеттора Для оценки лекарственных средств, классифицируемых как ингибиторы редуктазы дигидрофолиевой кислоты (flHFR), применяли модифицированную культуральную среду, содержащую только физиологические концентра Таблица 1 Лекарственное сродство, комбинированное с соединением примера 1 1 W-2 Хинин -1,84 Мефлохининн -1,19 Тетрациклин 1,27 С2В -1,36 Хлорохинин Д-6 Примахин Артесуновая слота -1,40 1,11 0,020,08 -0,79 ки -0,18 РМ443 Норфлоксацин -1,28 1,02 Ципрофлоксацин -1,22 Пириметамин 0,36 -0,48 13 Триметоприм Проуанил 1,27 2,43, 2,88 0,58 2,56 2,56 0,130,73 Циклогуанил 2,21 1,66 Аллопуринол 0,43 1,970,74 WR99210 1,14 1,77, 0,65 0,02 Сульфаметоксазол 2,75 Дапсон -0,39 Кпопидол 2,38, 2,65 45948 14 течение 30 дней и все смерти регистрировали Эти результаты представлены в таблицах 3 и 4 Таблица 3 PS-15 Среднее время до смерти (дни) Атовакуон Прогуанил (мг/кг) 20,1 24,1 9,0 18,4 29,3 0,73 Таблица 4 Таблица 2 софор 10м г/кг 25 м г/кг 140 25 Эти результаты показывают, что комбинации 2-[4-(4-хлорфенил)циклогексил]-3-гидрокси-1,4нафтохинона и прогуанила обнаружили наиболее стойкое потенциирование по сравнению с другими испытанными комбинациями лекарственных средств, в частности по отношению к устойчивому к гидроксинафтохинону штамму С2В Оптимальное соотношение комбинации с прогуанилом определяли для каждого из трех штаммов малярийного паразита путем определения отношения IC50 прогуанила к ICso соединения формулы (II) Эти результаты представлены в таблице 2 ниже Прогуанил единение мулы (1) 0 0 W-2 Д-6 С2В 920 1 4038 1 0,2 1 2473 1 Пример 4 Сравнение активностей против Toxoplasma in vivo соединения примера 1, прогуанила и их комбинаций Активности соединений и комбинаций испытывали в мышиной модели Т gondn, используя увеличение времени до смерти и процент выживания мышей как меры активности лекарственного средства Группы 10, 20г СВА/СА мышей инфицировали перорально путем введения через желудочный зонд бцист штамма Сбб Т gondn, и лечение лекарственным средством начинали спустя 3 дня и продолжали в точение 10 дней Все лекарственные средства вводили перорально при помощи желудочного зонда Исследовали следующие группы Контроли Атовакуоні 10м г/кг Атовакуоні 25 м г/кг Прогуанил 25 м г/кг Атовакуон і 10мг/кг + Прогуанил @ 25 м г/кг Атовакуон @ 25мг/кг + Прогуанил @ 25 мг/кг Всех животных обследовали дважды в день в Процент выживания Атовакуон Прогуанил (мг/кг) 0 10м г/кг 25 м г/кг 0 10,0 10,1 10,0 25 0,0 0,0 80,0 Среднее время до смерти контрольных мышей было равно 14 дням и выжило только одно животное (10%) (Это животное, возможно, не было инфицировано вследствие низкого количества инокулята) Один атовакуон увеличил время до смерти до 20,1 дней при 10мг/кг и до 24,1 дней при 25мг/кг, в обоих случаях с одним выжившим животным (10%) Прогуанил, вопреки его превосходной надежности (безопасности) для человека, является токсичным для мышей При 25мг/кг прогуанил обнаруживает признаки токсичности, снижая среднее время до смерти до 9 дней, без выживших животных Комбинация 25мг/кг атовкуона и 25мг/кг прогуанила дала увеличенное время до смерти, несмотря на токсичность прогуанила, и 80% мышей выжили по сравнению с минимальным выживанием 10% мышей, которым давали один атовакуон Пример 5 Сравнение активностей против Toxoplasma in vitro соединений примера 1, прогуанила и их комбинаций Исследования чувствительности к лекарственным средствам in vitro проводили при помощи полуавтоматического способа, основанного на способе, примененном для малярии (Desjiardms et al , Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1979 16 (6) 710 - 718), но с применением избирательного вклинения 3[Н]-урацила Т gondn Активность против Toxoplasma в этой системе оценивали по ингибированию поглощения радиоактивно меченого урацила в паразитов градационными концентрациями лекарственных средств Лекарственные средства растворяли в ДМБО и разведения готовили при помощи культуральной среды, содержащей 3% сыворотку плода теленка Для исследования комбинаций лекарственных средств растворы их при исходных концентрациях 15 45948 16 комбинировали в различных соотношениях 1 1, 1 3, 3 1 Серийные разведения 1 2 растворов Эти результаты показывают, что комбинации лекарственных средств и комбинаций готовили и атовакуона и прогуанила проявляют потенциироиспользовали в парных лунках 96-луночного вание in vitro против Т gondn планшета, засеянного предварительно клетками Пример 6 Неіл и штамма RH Т gondn Лекарственные средСравнение активностей против Pneumocystis ства добавляли через 2 часа после добавления in vivo соединения примера 1, прогуанила и их паразита и планшет инкубировали при 37°С в текомбинаций 3 чение 24 часов, после чего добавляли [Н]-урацил Активности этих соединений и их комбинаций и инкубирование продолжали еще 8 часов Анализ испытывали в модели scidmouse mouse Pneumoзавершали удалением супернатантной жидкости, cystis пневмонии разрушением содержащих Т gondn клеток в додеУровень инфекции мышей в каждой группе цилсульфате натрия и осаждением меченых белизмеряли при помощи стандартных легочных мазков при помощи ТХУ на фильтровальных подложков-отпечатков и иммунофлуоресцентных тестов ках Включение метки измеряли в Beta plate Был принят счет баллов для каждой мыши, в косцинтилляционном счетчике Процент ингибиротором 0 = нет инфекции и + 4 = очень тяжелая вания включения урацила рассчитывали для этих инфекция Результаты представлены в таблице 6 соединений и комбинаций и ICso рассчитывали при помощи программы GSI ICso нормализовали пуТаблица 6 тем принятия за I IC50 для соединения примера 1 и прогуанила с нормализованными величинами для каждого отношения двух исследуемых лекарстЧисло БАЛЛЫ венных средств Изоболограмму строили нанесеинфи- Средний %от нием на график этих нормализованных ICso друг Обработка + + + + цир /числ балл ± контроля 0 против друга Потенциирование было в том слуо испыSE 1 3 4 4 чае, когда эти величины находились ниже линии тан изоболограммы, величины на линии свидетельстКонтроль 3,70 + 0 0 0 3 7 10/10 100 вовали об аддитивном действии и величины выше (необраб) 0,14 линии свидетельствовали об антагонизме Атовакуон 2,50 + 50 м г/кг р 0 0 5 5 0 10/10 68 Планшеты применяли в трех повторностях и 0,16 о в день для построения изоболограммы использовали все Атовакуон величины 3,10 + 25 м г/кг р 0 0 1 7 2 10/10 84 Эти результаты представлены в таблице 5 0,17 о в день Прогуанил Таблица 5 3,80 + 25 м г/кг р 0 0 0 2 8 10/10 85 0,13 о в день Нормализованные Атовакуон Потенциирование 1С50 и прогуа0,50 + Атовакун Прогуанил нил 50 + 5 4 1 0 0 5/10 14 0,21 25 м г/кг р 0,559278 0,583893 Нет о в день 0,196689 0,614094 Да Атовакуон 0,729381 0,253691 Да и прогуа2,22 + нил 25 + 1 0 4 4 0 8/9 60 0,345238 0,527273 Да 0,31 25 м г/кг р 0,130952 0,6 Да о в день 0,233333 0,118182 Да 0,404959 0,451538 Да 0,229201 0,768462 Да 0,244904 0,091538 Да Атовакуон один давал уменьшение в балле инфекции Прогуанил один при 25мг/кг в день был неэффективен в профилактике РСР у мышей (scid mouse) Прогуанил в комбинации с атовакуоном обнаруживал синергию ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71