Спосіб корекції імунної системи у молодняка сільськогосподарських тварин

1 Спосіб корекції імунної системи у молодняка сільськогосподарських тварин, який включає дієтичний режим і введення через рот засобу у вигляді суміші спиртових настоянок із рослинної сировини, який відрізняється тим, що як лікарську сировину застосовують корінь ревеню пальчастого, кріп запашний, корінь оману високого, листя бобівника трилистого, листя шавлії лікарської, корінь ПІВНИКІВ німецьких, траву Заявлений винахід належить до ветеринарної медицини, а саме до способів підвищення резистентності організму тварин і може бути використаним для лікування їх захворювань, наприклад, імунних дефіцитів, на фоні яких виникають шлунково-кишкові захворювання у новонароджених телят, поросят Відомо, ЩО імунодефіцитний стан молодняку характеризується низьким вмістом імуноглобулінів і недостатньою реакцією організму давати повноцінну ВІДПОВІДЬ на вплив антигенів Тому зміни імунологічної резистентності новонародженого молодняку широко поширені в господарствах України і визивають великі економічні збитки в сільському господарстві Вони характеризуються високим ступенем захворюваності - до 80% і смертності - більше 30% (Карпуть И М Иммунология и иммунопатология болезней молодняка,1993) На фоні імунної недостатності виникають шлунково-кишкові та ІНШІ захворювання внаслідок значної втрати захисних факторів Тому при лікуванні різних розладів травлення велику увагу приділяють способам корекції імунної системи (Федоров Ю Н , Верховский О А Ветеринарные болиголова плямистого і спирт етиловий при наступному співвідношенні інгредієнтів, вага % 9,0 корінь ревеню пальчастого 10,0 кріп запашний 10,0 корінь оману високого 30,0 листя бобівника трилистого 30,0 листя шавлії лікарської 10,0 корінь ПІВНИКІВ німецьких 1,0 (у розведенні трава болиголова 10 6) плямистого решта спирт етиловий 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що засіб із рослинної сировини застосовують через рот по 3-5 крапель в 30-50 мл води (молозива) для тварин до триденного віку і по 5-7 крапель в 50-60 мл (для старших) за 30-40 хвилин до випоювання молозива (молока) тричі на день протягом 5-7 діб зоотехнические проблемы животноводства, 1996) Високоефективних способів і засобів профілактики та лікування імунних дефіцитів у більшості господарств немає Набір імуностимуляторів для таких цілей обмежується застосуванням препаратів вилочкової залози та тимуса (Соколов В Д Ветеринария, 1992), введенням глюкозо-цитратної крові, різних ентеросорбентів та ш (Левченко В І та співавт Шлунково-кишкові хвороби новонароджених телят /Метод рекомендації/, Біла Церква, 1997) Головним недоліком цих засобів є те, що стимулююча дія імунокоректорів виявляється лише в перші 3 - 5 діб, а більшість тварин починають хворіти в першу добу життя і введення цих препаратів не завжди дає потрібний лікувальний ефект Тому зусилля ДОСЛІДНИКІВ направлені на пошуки більш сучасних та ефективніших способів лікування цих порушень Відомий спосіб корекції імунної системи при гострих розладах травлення у телят за допомогою тетраімунофіту фітоекстракційного препарату, виготовленого із трави звіробою, листя сени, плодів шипшини та коренеплодів буряка (Макарадзе Л А 00 47289 Ветеринария, 1999) Автором установлена позитивна дія цього препарату на гуморальний імунітет, проліферативну реакцію на мітогени у тварин та стимуляцію фагоцитарної активності макрофагів Цей спосіб найбільш близький до заявленого, взято за прототип Але недоліком прототипу є незначний ріст відносної КІЛЬКОСТІ функціональної активності імунокомпетентних клітин у ПІДДОСЛІДНИХ тварин (мишей) В основу винаходу поставлено завдання розробити такий спосіб підвищення резистентності організму молодняку сільськогосподарських тварин, який би забезпечив більш значніше збільшення показників клітинного та гуморального імунітету і тим самим сприяв більш ефективному лікуванню хворих тварин Поставлене завдання згідно з формулою винаходу досягається використанням заявленого способу у вигляді суміші спиртових настоянок із рослинної сировини (мас%) кореня ревеня пальчастого (9 0), кропу запашного (10 0), кореня оману високого (10 0), листя бобівника трилистого (ЗО 0), листя шавлії лікарської (ЗО 0), кореня ПІВНИКІВ німецьких (10 0) і трави болиголову плямистого (1 0 в розведенні 10 ) Заявлений спосіб і прототип мають СПІЛЬНІ ознаки - використання засобу із рослинної сировини ВІДМІННИМИ ознаками є використання заявленого способу в указаному співвідношенні у вигляді суміші спиртових настоянок по 5 - 7 крапель в 50 - 60мл води (молозива) тричі на добу за ЗО хвилин до випоювання (молозивом) на протязі 5 - 7 діб Поєднання загальних та ВІДМІННИХ ознак зумовлюють вирішення поставленого завдання Запропонований спосіб корекції імунної системи готують таким чином спочатку проводять екстрагування кожного інгредієнта 40% етиловим спиртом і витримують протягом 1 0 - 1 4 діб, потім екстракти змішують, суміш витримують при кімнатній температурі 7 - 1 0 діб, потім зливають і фільтрують Цільовий продукт являє собою прозору рідину жовто-бурого або червоного кольору із специфічним ароматичним запахом та пекучим смаком Заявлений спосіб корекції імунної системи молодняку сільськогосподарських тварин здійснюється таким чином хворій тварині на фоні дієтичного режиму у вигляді прийому молозива в загальноприйнятих кількостях через рот застосовують засіб із рослинної сировини у вигляді суміші спиртових настойок по 3 - 5 крапель в ЗО - 50мл води (молозива) для тварин до триденного віку і по 5 - 7 крапель в 50 - 60мл (для старших) за ЗО - 40 хвилин до випоювання молозива (молока) тричі на день протягом 5 - 7 діб Імуностимулюючу дію заявленого способу вивчали в експериментах на білих мишах лінії СВА і C57BL Показники гуморального та клітинного імунітету були вивчені в динаміці при мінімальній та максимальній дозах (50 і 300мг/кг) При вивченні впливу заявленого способу на гуморальний імунітет використовували метод, який заключався у слідуючому мишей імунізували еритроцитами барана (внутрішньочеревинно, 2 х 105) Дослідним тваринам одночасно з імунізацією вводили через рот заявлений спосіб, а контрольним тваринам - фізіологічний розчин Величину титрів аглютинінів визначали в реакції аглютинації на 7, 14 та ЗО добу Результати досліджень наведені в таблиці 1 Таблиця 1 Вплив заявленого способу на первинну імунну відповідь у мишей лінії СВА (М+м) Дні І контроль log: Доза заявленого способу, мг/кг 50 титр log І ^ 300 титр log титр ! 7 9,0+0,35 5бЗ+-45,б 11,8+-Q,37 4096+-111^10,8+-0,37 £048,0+-550,9І X !14 8,8+0,37 51£+-15,8 10,4+-0,27 14S3+-£8G 11,£+-0,37 266£>4+-6S6*9[ ЗО 8,б+-0,45 435+-85,9 10,61-0,67 2150+-894** 9,8+-0,37 1024,0+-£50,0*| ' Примітка х Р < 0,05, хх Р < 0,01, ххх Р < 0,001 Аналіз результатів таблиці показує, що заявлений спосіб у мишей лінії СВА чинить дозозалежну стимулюючу дію на синтез специфічних тіл до 1 -залежного антигену еритроцитів барана Так, введення його в дозі 50мг/кг маси тварини через 7 діб після імуностимуляції титр антитіл збільшився в 7,2 раз (Р < 0,01) порівняно з контролем На 14 добу стимулююча дія способу декілька зменшилась, а через ЗО діб знову титр антитіл підвищився і перевершував контрольний рівень в 4,9 раз (Р < 0,01) 5 47289 У дозі 300мг/кг заявлений спосіб виявляв максимальний ефект через 7 та 14 діб антитілогенезу, коли титр антитіл збільшився в 3,6 (Р < 0,01) та 5,2 раз (Р < 0,001) На ЗО добу стимулююча дія імунної ВІДПОВІДІ зберігається (Р < 0,05) Аналогічні результати одержані також у мишей лінії C57BL лише з тією різницею, що максимальна ВІДПОВІДЬ у них виявлялась на 14 добу після імунізації заявлений спосіб у дозі 50мг/кг підвищував титр антитіл в 4,9 ради (Р < 0,001), а в дозі 300мг/кг - в 7,7 рази (Р < 0,001) 6 Стимулююча дія дози 300мг/кг зберігається і через ЗО діб титр антитіл залишався збільшеним в 5,1 разів ( Р < 0,001) Таким чином, заявлений спосіб у мишей лінії СВА и C57BL май виражену стимулюючу дію на гуморальний імунітет, яка зберігається на протязі ЗО діб Для підтвердження цього висновку нами поставлені додаткові дослідження про вплив заявленого способу на тимус-незалежний антиген (VI-АГ) у тварин обох ЛІНІЙ (таблиця 2) Таблиця 2. Вплив заявленого способу на імунну відповідь на тимуснезалелший антиген у мишей лінії СВА і C57BL М+м г г І Лінія і імишейh контроль log доза заявленого способу (мг/кг) титр 50 титр log 300 log титр хх І |CBA 16,8*0,37 12S±35,0 |9,0t0,3 563,2^125,418,8-0,55 537,6tl59 f 3| | | | XXX| XXXI |C57BL!6,0iO,45 77i24,2 |8,4г1,0 704,0^422,1(8,8^0,58 5S8,3±188,1| Примітка хх Р < 0,01, ххх Р < 0,001 Як видно із таблиці 2 у мишей лінії СВА доза 50мг/кг також виявляє стимулюючу дію на гуморальний імунітет, викликаний тимус незалежним VI-АГ титр антитіл збільшився в 4,4 рази (Р < 0,01), а при дозі 300мг/кг - в 4,2 раз (Р < 0,01) порівняно з контролем У мишей лінії C57BL при дозі 50мг/кгтитр антитіл підвищився в 9,2 раз (Р < 0,001) і зберігався на такому рівні на ЗО добу При вивченні впливу заявленого способу на вторинну імунну ВІДПОВІДЬ (клітинний імунітет) установлено (таблиця 3), що у мишей лінії СВА (високореагуючих на антиген) при мінімальній дозі 50мг/кг титр антитіл збільшувався в 3,1 раз (Р < 0,05), тоді як у мишей лінії C57BL (низькореагуючих на антиген) стимулюючий ефект при цій же дозі був більш значним - титр антитіл підвищився в 9,1 раз (Р < 0,001) (Р < 0,001) Таблиця 3. Вплив заявленого способу на вторинну імунну відповідь у мишей лінії СВА і C57BL, М+м (ЛІНІЯ! доза, мг/кг контроль І мишей I log титр 1 log 50 титр 300 log титр X |СВА (12,4+0,24 5734+1000 j14+0,35 17948+441 112,2+0,42 5324+1375f І j | ххх | ххх[ ІC57BL)10,0+0,26 1109+205,5113+0,73 10035+2903 (10,8+0,86 4198+3056) 47289 Примітка х Р < 0,05, хх Р < 0,01, ххх Р < 0,001 Доза способу 300мг/кг не чинить впливу на мишей лінії СВА і статистичне достовірно стимулює клітинний імунітет у мишей лінії C57BL - титр антитіл при цій дозі збільшився в 4 рази (Р< 0,01) Таким чином, заявлений спосіб викликає більш помітну стимулюючу дію на вторинну імунну ВІДПОВІДЬ у мишей з низькою початковою реактивністю (ЛІНІЯ С57ВІ_),НІЖ у мишей високореагуючих на еритроцити барана (ЛІНІЯ СВА) В доповнення до цього заявлений спосіб викликає значне пригноблення реакції пперчутливості уповільненого типу (ГУТ), вірогідне збільшення спленоцитів (Р < 0,01), що свідчить про стимуляцію способу на реакції клітинного імунітету Крім того, заявлений спосіб викликав дозозалежну імуномодулюючу дію на проліферативну функцію лімфоцитів практично здорових людей, не виявляючи прямого мітогенного впливу на їх структуру Отже, заявлений спосіб з використанням суміші спиртових настоянок кореня ревеня пальчастого, кропу запашного, кореня оману високого, листу бобівника трилистого, листу шавлії лікарської, кореня ПІВНИКІВ германських та трави болиголову плямистого у дозах 50 та 300мг/кг виявляє виражену імуностимулюючу ефективність на показники гуморального та клітинного імунітету Вплив прототипу на ці показники був набагато менш помітними Корекція порушень імунітету у тварин здійснювалась таким чином хворій тварині на фоні дієтичного режиму у вигляді прийому молозива в загальноприйнятих кількостях через рот застосовують засіб із рослинної сировини у вигляді суміші спиртових настоянок по 3 - 5 крапель в ЗО - 50мл води (молозива) для тварин до триденного віку і по 5 - 7 крапель в 50 - 60мл (для старших) за ЗО - 40 хвилин до випоювання молозива (молока) тричі на день протягом 5 - 7 діб Спосіб лікування ілюструється прикладами Приклад 1 Теля №32, вік 2 дні, жива маса 28кг з ознаками вікового імунодефіциту (загальна КІЛЬКІСТЬ імуноглобулінів у сироватці крові експрес-методом з натрієм сульфатом та цинком сульфатом складають 15мг/л, загального білка 48г/л - в нормі ці показники повинні бути не нижче 20г/л і 60 - 70г/л, ВІДПОВІДНО) На такому фоні виникали шлунково-кишкові захворювання у вигляді діареї часта дефекація до 8 раз за добу, кал розріджений, в'ялість, перистальтика кишечнику посилена, температура тіла в межах норми Розпочато лікування заявленим способом за схемою На третю добу стан тварини поліпшився підвищилась рухливість, зменшилась частота дефекації, кал став напівоформленим На 5 добу від початку лікування в сироватці крові виявлено підвищення концентрації імуноглобулінів до ЗОг/л 8 і вмісту загального білка до бОг/л На 6 добу теля видужало, симптомів розладу шлунковокишкового тракту не спостерігалось Приклад 2 Порося №16, вік 14 днів, жива маса 2 5кг, з ознаками вікового імунодефіциту в сироватці крові спостерігається зниження концентрації імуноглобулінів і вмісту загального білка нижче загальноприйнятої норми, розлади шлунково-кишкового тракту (пронос) Лікування проводилось за допомогою заявленого способу у вигляді суміші спиртових настойок в дозі 5 крапель в 50мл води, який давали поросяті З рази на день через рот за ЗО хвилин до ссання свиноматки На другу добу стан тварини поліпшився, кал став оформленим, на третю добу всі симптоми захворювання повністю щезли Через 5 днів в сироватці крові вміст загального білка та імуноглобулінів нормалізувався Ефективність заявленого способу при імунодефіцитному стані молодняку, на фоні якого виникають різні розлади, в тому числі шлунковокишкові, вивчено в серії спостережень, які були виконані в господарствах, базою яких є Дніпропетровський аграрний університет Перша серія спостережень виконана на новонароджених телятах, у яких виявлялись ознаки імунодефіциту з синдромом діареї Були сформовані дві групи тварин 1 - 3-денного віку по 5 голів в кожній Перша група - дослідна - для лікування використовували заявлений спосіб Лікування здійснювалось таким чином хворій тварині на фоні дієтичного режиму у вигляді прийому молозива в загальноприйнятих кількостях через рот застосовували засіб із рослинної сировини у вигляді суміші спиртових настоянок за ЗО - 40 хвилин до випоювання молозивом у КІЛЬКОСТІ 3 - 5 крапель в ЗО - 50мл води (молозива) тричі на добу протягом 5 - 7 діб У групі враховували виникнення порушень з боку резистентності організму і шлунково-кишковихзахворювань з синдромом діареї, тяжкість і тривалість лікування, збереження телят, а також масу тіла при народженні і в КІНЦІ експерименту Другу групу склали здорові тварини Обидві групи тварин знаходились в аналогічних умовах утримання і ГОДІВЛІ Перед початком лікування у тварин обох груп проводили ряд біохімічних та імунологічних досліджень крові визначали вміст загального білка, гаммаглобуліни, імуноглобуліни М і G , а також КІЛЬКІСТЬ Т і Б клітин за загальноприйнятими методиками Імунологічні дослідження у ПІДДОСЛІДНИХ тварин проводили в Дніпропетровському державному університеті на кафедрі біохімії та біофізики Такий же обсяг досліджень був виконаний через 10 діб Результати КЛІНІЧНИХ, біохімічних та імунологічних показників після лікування порівнювали з вихідними даними, а також з показниками групи здорових тварин Результати порівняння відображено в таблиці 4 9 47289 10 Таблиця 4. Стан показників клітинних і гуморальних факторів резистентності у новонароджених телят у вихідному рівні І І ! INN| І групи тварин |пп| Імунологічні показники| дослідна, Щи здорова, Ш-м |1,|Загальний білок,г/л |2.|Гаммаглобуліни,г/л |3.|Імуноглобуліни,г/л G і І М 14.|Т-лімфоцити, % |5,]В-лімфоцити, % 48,0 12,4 35,2 29,0 23,2 4,6 Аналіз даних таблиці 4 показує, що у новонароджених телят у ДОСЛІДНІЙ групі спостерігається зниження всіх вивчених імунологічних показників порівняно з групою здорових тварин, що свідчить про імунодефіцитний стан молодняку На такому фоні у телят виникає синдром + + + + + + 1,5 1,6 1,2 1,5 1,2 0,2 50,0 20,0 48,6 50,0 34,8 8,4 + + + + + + 2,0 2,0 4,2 3,4 1,5 0,8 діареї (часте випорожнення до 6 - 7 раз на добу, в'ялість, зниження апетиту, відмова від корму, підвищення температури тіла) Почато лікування за схемою За період спостереження у ДОСЛІДНІЙ групі захворіло 27% телят, в тому числі за першу добу - 2,5% (таблиця 5) Таблиця Б. Застосування заявленого способу для лікування гострих розладів шлунково-кишкового тракту Показники ШІі I |1. Маса тіла, кг 1 - при народженні \ - через 10 діб 12. Приріст живої маси,г |3. Захворіло телят,% | в т.ч. за першу добу J4.Випорожнення (раз/добу) 15. Термін зникнення клінічних j проявів (дні) 16. Тривалість хвороби,діб 17. Збереження ігоголів'я,% ! (в 10-денному віці) групи тварин дослідна | здорова 1 32,0 + 0,65 35,0 + 0,8 200,0+ 0,26 27 Е,5 6 33,5 ± 0,0 36,0 + 0,6 220,0 + 22 2,5 + 0,25 2,5 + 0,25 100 100 1 | | | і 1 1 і 1 1 1 1 J У ПІДДОСЛІДНИХ тварин хвороба протікала у більш легкій формі, без різкого обезводнення організму Уже на другу добу фекалії набували кашоподібну або нормальну консистенцію Термін зникнення КЛІНІЧНИХ проявів та тривалість хвороби склали 2,5 ± 0,25 діб Збереження телят була 100% При цьому заявлений спосіб позитивно впливав на ріст і розвиток телят в 10денному ВІЦІ у молодняку дослідної групи приріст живої маси був на рівні здорової групи Результати імунологічних показників через 10 днів після лікування показано в таблиці 6 Таблищ 6, Стан імунологічних показників у телят на 10 добу після лікування |NN| І плі Показники І Вихідний | Групи тварин, М+м на 10 добу І рівень | дослідна | здорова X |1. Загальний білок,г/д 48,0+1,5 |2. Гаммзглобуж1ни,г/л 12,4+1,5 Є и |4. Т-лімфоцити, ) І (5. В-лімфоцитиД 35,2+1,2 29,0+1,5 23,2+1,2 4,6+0,2 Примітка х Р < 0,05, ххх Р < 0,001 Аналіз таблиці 5 показує, що заявлений спосіб виявляє стимулюючу дію на імунологічні показники Так, у телят дослідної групи КІЛЬКІСТЬ загального білка підвищилась з (48,0 - 1,5) до (65,0 - 3,0)г/л ,що на 35%, більше в порівнянні з вихідним рівнем (Р < 0,05), рівень гаммаглобулінів збільшився на 55% (Р