Спосіб модуляції реакції тн1 і тн2 в активованих т-клітинах людини, спосіб лікування пацієнта, спосіб лікування захворювання

1 Способ модулирования реакции Th1 и Th2 в активированных Т-клетках человека, включающий введение рибавирина в Т-клетки в дозировке, которая стимулирует реакцию Th1 и угнетает реакцию Th2 2 Способ по п 1, отличающийся тем, что включает лечение вирусного заболевания 3 Способ лечения пациента, страдающего невирусным заболеванием, характеризуемым цитокинным профилем, в котором Th1 угнетается, а Th2 усиливается, включающий введение рибавирина пациенту по схеме, которая стимулирует реакцию Th1 и угнетает реакцию Th2 4 Способ по п 3, отличающийся тем, что заболевание включает аллергию 5 Способ по п 3, отличающийся тем, что заболевание включает аутоиммунное заболевание 6 Способ по п 3, отличающийся тем, что заболевание включает заболевание, вызванное гельминтами 7 Способ лечения пациента, страдающего заболеванием, которое включает вирусный компонент и невирусныи компонент, при этом невирусныи компонент характеризуется уменьшением уровней Th1 и увеличением уровней Th2 в активированных Т-лимфоцитах, включающий введение рибавирина пациенту по схеме, достаточной для стимулирования реакции Th1 и угнетения реакции Th2 8 Способ по п 7, отличающийся тем, что заболевание вовлекает первичное иммунодефицитное состояние 9 Способ по п 7, отличающийся тем, что заболевание вовлекает вторичное иммунодефицитное состояние 10 Способ по п 7, отличающийся тем, что вирусный компонент вовлекает вирус иммунодефицита человека 11 Способ лечения заболевания, чувствительного к воздействию рибавирина, включающий распознавание развития заболевания как опосредованного по крайней мере частично лимфоцитами Th1, распознавание рибавирина как эффективного средства для стимуляции реакции Th1 и подавления реакции Th2 при введении в диапазоне доз, ниже которого обе реакции Th1 и Th2 угнетаются, и введение рибавирина пациенту, имеющему такое заболевание, в пределах этого диапазона доз 12 Способ по п 11, отличающийся тем, что заболевание включает гепатит С 13 Способ по п 11, отличающийся тем, что дозировка составляет около 4,5 мг/кг массы тела пациента в день 14 Способ по п 11, отличающийся тем, что дозировка достигает уровня сыворотки крови пациента около 0,25 -12,5 мкг/мл рибавирина 15 Способ по п 11, отличающийся тем, что заболевание включает гепатит С и дозировка достигает уровня сыворотки крови пациента около 0,25 12,5 мкг/мл рибавирина 16 Способ по п 11, отличающийся тем, что заболевание выбирают из группы, состоящей из аллергической астмы, атопического дерматита, гельминтной инфекции илейшманиоза 17 Способ по п 11, отличающийся тем, что заболевание - это первичное или вторичное иммунодефицитное состояние 18 Способ по п 11, отличающийся тем, что сти о ю 00 (О З 46815 4 муляция реакции Th1 характеризуется ростом 19 Способ по любому из пп 11-17, отличающийся производства интерлейкина 2 (IL-2), фактора нектем, что дополнительно включает введение 90% (от 90 до 99%) после обработки пользованием IL-2-зависимой клеточной линии, всеми используемыми концентрациями CTLL-2 (АТСС, Rockville, MD) Индуцированные активацией изменения в уровнях интерлейкина-4 Иммунофлуоресцентный анализ внутрикле(IL-4), фактора некроза опухоли (TNFa), интерлейточной экспрессии цитокинов кина-8 (IL-8) (R & D systems (Quantikme kit, Для анализа внутриклеточной экспрессии IL-2 Minneapolis, MN) и у-интерферона (Endogen в Т-клеточных субпопуляциях CD4+ и CD8+, T(Cambridge, MA) определили с использованием клетки первоначально обрабатывали в течение наборов ELISA Все результаты опытов с ELISA последних 4 часов 48 - 72 часовой активации 10мг выражались в пг/мл, а результаты биоанализа с Brefeldm A (Gibco BRL, Gaithersburg, MD) для того, CTLL-2 - в импульсах в минуту, представляя IL-2чтобы минимизировать секрецию недавно синте3 зависимое клеточное включение Н-тимидина зированного IL-2 во внеклеточную среду После (ICN, Costa Mesa, CA) клетками CTLL-2 активации 900мл клеточного супернатанта с каждого микропланшета переместили на другой микИсследования непосредственной иммунофлуропланшет для анализа производства производоресценции (рецепторы цитокинов) ных от клеток цитокинов Перед прямым Для прямого окрашивания меченных флуоокрашиванием (30 минут, 4°С, в темноте) ФИТЦресцином антител для клеточных поверхностных меченными антителами для клеточных поверхноантигенов клетки дважды промыли изотоническим стных антигенов CD4 и CD8, клетки дважды просолевым раствором, рН7,4 (Becton Dickinson, мыли в изотоническом солевом растворе, рН7,4, и Mansfield, MA) и повторно суспендировали в 50мл вновь суспендировали в 100 - 150мл окрашиваюизотонического солевого раствора и разделили на щего буфера (забуференного фосфатом физиолодва образца Один аликвотный образец окрасили гического раствора (ЗФР) (PBS), рН7,4, содержасовместно РЕ-анти CD25 / ФИТЦ-анти CD4 или щего 1%-ную фетальную телячью сыворотку РЕ-крысиным антимышиным IgG + анти-СО\л/124 / (Hyclone, Logan, UT) и 0 1% азид натрия), и расФИТЦ-анти CD4 (моноклональное антитело), а щепили на 2 образца Окрашенные клетки промынеспецифическую флуоресценцию определили ли в 1мл окрашивающего буфера, а дебрис клеток путем окрашивания второго аликвотного образца суспендировали в 100мл буфера фиксации (4%РЕ / ФИТЦ-меченным, изотонически сходным кон 11 46815 12 ный параформальдегид в ЗФР) после аспирации уровни циоюкинов в активированных Т-клетках супернатанта Фиксированные клетки в течение 20 Обработка ФМА / иономицином (48 - 72 часа) минут содержали при 4°С, затем промыли в 1мл Т-клеток человека существенно увеличивает окрашивающего буфера, и дебрис клеток суспенуровни всех анализируемых цитокинов, а именно дировали, смешав с 50мл буфера проницаемости IL-2, IL-4, TNFa, у-интерферона (Таблица 2) Пер(0,1%-ный сапонин (ICN, Costa Mesa, CA) в ЗФР) вое число в каждой клетке описывает среднее Пермеабилизированные клетки окрашивали РЕарифметическое значение, а числа в круглых меченным антителом IL-2 в течение 30 минут при скобках описывают релевантные диапазоны N = 4°С в темноте, а затем промыли в 1мл буфера 4 В демонстрационном эксперименте на Фиг 1 проницаемости, вновь суспендировали в 250мл рибавирин, добавленный в диапазоне доз 0,5 окрашивающего буфера перед началом анализа с 50мМ, увеличил активированные уровни цитокииспользованием клеточного сканера с возбужденов Th1, IL-2 и TNFa максимально при 5мМ (30%) нием флуоресценции и 20мМ (36%), соответственно Напротив, аАнализ мРНК цитокинов интерферон ингибировал экспрессию IL-2 и TNFa, Всю РНК экстрагировали из оставшихся Тв зависимости от дозы (диапазон 250 клеток и из необработанных активированных ТЮОООМЕ/мл, максимальное ингибирование 33 и клеток и активированных Т-клеток, обработанных 38%, соответственно), при сравнении с уровнями рибавирином и а-интерфероном, с использованив необработанных активированных Т-клетках ем коммерческого варианта методики экстрагироКроме того, рибавирин служил промежуточным вания гуанидин тиоцианата / фенола (реагент звеном в сопутствующем снижении активированTnzol (GIBCO / BRL) РНК промыли 70%-ным этаных уровней цитокина Th2, IL-4 (пиковое ингибинолом и, наконец, суспендировали в Юмкл воды, рование 74% при 2мМ), в то время как аобработанной DEPC интерферон максимально увеличил внеклеточный Реакцию синтеза кДНК проводили согласно IL-4 на 26% (ЮОООМЕ/мл) Используя комбинации инструкциям производителей (Promega, Madion, рибавирина и a-интерферона, Фигура 2 демонстWI) Вкратце, 1мкг всей РНК нагревали при 65°С в рирует, что постоянное количество 2000МЕ/мл атечение 10 минут и охлаждали на льду перед соинтерферона подавляет рост уровней активироединением с 2мкл буфера обратной транскрипции ванного IL-2 (А), обусловленный рибавирином, и 10Х (ЮОмМ Трис HCI (рН8,8), 500мМ KCI, 1%-ный реверсирует ингибирование уровней активироТритон Х-100), 5мМ МдСІ2, 2мкп ЮмМ dNTP (1мМ ванного IL-4 (С) Подобным же образом, постоянкаждый dNTP), 0,5мкл ингибитора рибонуклеази, ное количество ЮмМ рибавирина реверсировало, 1мкл олиго (dT)i5 праймера (0,5мкг/мкг РНК) и в зависимости от дозы, ингибирование уровней 0,65мкл обратной транскриптазы AMV (Н С) активированного IL-2 (В), обусловленное аПродукт реакции инкубировали при 42 °С в течеинтерфероном, и тормозило рост уровней активиние 1 часа, затем при 95°С в течение 10 минут, а рованного IL-4 (D) затем на 5 минут поместили на лед Воздействие рибавирина на уровни мРНК циПЦР выполняли с использованием набора токинов в активированных Т-клетках GeneAmp для ПЦР (Perkm-Elmer Cetus, Foster City, Это противоположное воздействие рибавириCA) В неиспользованной пробирке смесь для RTна и a-интерферона на уровни активированных реакции (Змкл) соединили с 5мкл 10Х буфера ПЦР внеклеточных цитокинов также наблюдали на (500мМ KCI, ЮОмМ Трис-НСІ, рН8,3, 15мМ МдСІ2 и уровне транскрипции Фигура 3 демонстрирует, 0,01% (% отношение вес/объем) желатин), 1мкл что обработка ФМА / иономицином Т-клеток челоЮмМ dNTP и 1ед полимеразы Taq ДНК Испольвека существенно увеличивает уровни IL-2, IL-4 и зовали следующие праймеры праймеры интермРНК у-интерферона Обработка рибавирином (2, лейкина-2, интерлейкина-4, праймеры у5 и ЮмМ) после активации Т-клеток увеличивает интерферона (человека) (Stratagene, La Jolla, CA) IL-2, уменьшает IL-4 и не оказывает никакого и рибосомный ген рНЕ7 Условия, при которых влияния на мРНК у-интерферона Напротив, аосуществляли амплификацию, были следующими интерферон при 1000, 2000 и 5000МЕ/мл умень45 секунд при 94°С, 1 минута при 57°С и 2 минуты шает IL-2, увеличивает IL-4 и уменьшает мРНК упри 72°С для 35 циклов, и затем 8 минут при 72°С Продукты ПЦР анализировали на 2% агарозном интерферона Поэтому, влияние рибавирина и геле, содержащем этид бромид После электроинтерферона, в зависимости от дозы, на экспресфореза продукты ПЦР перенесли на мембрану сию IL-2, TNFa и мРНК IL-4 соответствует анализу, Hybond N+ (Amersham, Arlington Heights, IL) в 20Х в котором используется набор ELISA Эти данные SSC на всю ночь, и иммобилизировали с испольпозволяют предположить, что рибавирин стимузованием 0,4М NaOH Блоты гибридизировали с лирует синтез цитокинов Th1, IL-2 и TNFa и ингипробами 32Р-уАТР меченных олигонуклеотидов в бирует экспрессию цитокина Th2, IL-4 в активиробуфере Rapid - hyb (Amersham) в течение 1 часа ванных Т-клетках человека при 42°С Каждую смесь праймеров цитокинов Воздействие рибавирина на уровни рецептоиспользовали в качестве пробы, меченной радиоров IL-2 и IL-4 в активированных Т-клетках активным изотопом (согласно инструкциям) ЭквиИспользуя анализ на основе клеточного скавалентную нагрузку определили после гибридизанера с возбуждением флуоресценции, мы сравниции с пробой, генерируемой из смыслового ли воздействие рибавирина и а-интерферона на праймера рНЕ7 Затем промытые блоты анализиэкспрессию IL-2 (CD25) и экспрессию рецепторов ровали с использованием Phosphorlmager IL-4 (CDw124) в активированных Т-клетках Обработка ФМА / иономицином усиливает экспрессию Воздействие рибавирина на внеклеточные 13 14 46815 CD25 и CDw124 с остаточных уровней 50,16 ± 0,45 и 62,31 ± 1,46 к активированным уровням 162,48 ± 2,89 и 87,53 ± 3,98, соответственно (п = 4) Изображая результаты трех экспериментов, Фигура 4 демонстрирует, что рибавирин (1 - 50мМ) оказывает незначительное воздействие на активированные уровни рецептора IL-2 и IL-4, в то время как а-интерферон в диапазоне доз 250 ЮОООМЕ/мл, уменьшает экспрессию рецептора IL2 и усиливает экспрессию рецептора IL-4, в зависимости от дозы, во время сравнения с уровнями рецепторов в контрольных активированных Тклетках Поэтому, эти данные демонстрируют, что воздействие рибавирина на синтез цитокинов происходит независимо от экспрессии рецепторов цитокинов Напротив, воздействие а-интерферона на рецепторы IL-2 и IL-4 коррелирует с воздействием на экспрессию активированных IL-2 и IL-4 Воздействие рибавирина на внутриклеточные уровни IL-2 в субпопуляциях CD4 и CD8+ активированных Т-клеток Мы исследовали, является ли воздействие рибавирина на экспрессию IL-2 специфичным для Т-клеток CD4+ или CD8+ Экспрессию внутриклеточного IL-2 в фиксированных и пермеабилизированных активированных Т-клетках определили путем двухцветной проточной цитометрии с использованием меченных флуоресцином антител для CD4 или CD8 и для IL-2 Фигура 5 демонстрирует, что после обработки рибавирином при ЮмМ, процентное соотношение Т-клеток CD4+, экспрессирующих IL-2 выросло с 82 до 91%, и процентное соотношение CD8+, экспрессирующих IL-2, выросло с 81 до 91% Напротив, процентное соотношение клеток CD4+ и CD8+, экспрессирующих IL-2, после обработки а-интерфероном (5000МЕ/мл) было, соответственно, 81 и 7 1 % Эти данные позволяют предположить, что рибавирин оказывает воздействие на экспрессию внутриклеточного IL-2 и не делает различий между субпопуляциями Тклеток CD4+ и CD8+ Напротив, обработка аинтерфероном оказывает незначительное воздействие на Т-клетки CD4+ и даже уменьшает экспрессию IL-2 в популяции Т-клеток CD8+ Аналоги рибавирина Существует несколько классов аналогов рибавирина, которые, как полагают, являются эффективными в клинических условиях при модулировании Тп1 или Тп2 - опосредованных реакций Тклеток Эти аналоги включают молекулы, совпадающие с характерными формулами Фигуры 6, где X - это О, S, СН 2 СНОН или N-CO-Rn, А, В и С - это независимо N, Р, СН, С-ОН, С-СНз, С-алкил, С-алкенил, С-СН2, -CN, С-галоген, C-CN, ССООСНз, C-NH2, C-SNH2, C-SO2-NH2, C-CONH2, CCS-NH2, C-C(NH)NH2, CPO2-NH2, или С - гетероциклическая кольцевая система, D - это S, Se, Те, РН, NH или NR i2 , Ri - это Н, (СН2)р(ОН), галоген, CN, (CH2)p0NH2, (CH2)pNH2, CH3, CH2SPH или (СН2) - гетероциклическое кольцо, R2 - это Н, ОН, ОСНз, SH, SCH3, галоген, CN, NH2, ONH2, NHCH3, (СН2)ОН, (CH2)pNH2, СНз, или СООМе, R3l R4, R5l R6, R7 и R8 - независимо Н, ОН, ОСН3, SH, SCH3, галоген, CN, NH2, ONH2, NHCH3, (CH2)OH, (CH2)pNH2, CH3, СООМе или фенил, R9 - это Н, галоген, NH2, CH3, CONH, CSNH2, COOMe, SNH2, SO2NH2, PO2NH2, (CH2)p, (CH2)p - гетероциклическая кольцевая система или (СН2)р-глюкоза, R-ю это Н, галоген, NH2, CH3, CONH, CSNH2, СООМе, SNH2, SO2NH2, PO2NH2, (CH2)p, (CH2)p - гетероциклическая кольцевая система, (СН2)р-глюкоза, О-СН3, О-СН2СН3 или аминокислота, Y - это О, S, NhWHCI, NOH, NOCH3 или NOCH2PH, R10 и Y в комбинации - гетероциклические кольцевые системы, такие как тиазол, имидазол и т д , Rn - это СН 3 (CH2)pNH2, (СН2)р-гетероцикл, (СН2)раминокислота или (СН2)р-сахар (глюкоза и т д ),р -это целое число между 0 и 8, описанное выше включает L и D нуклеозиды Такие молекулы можно производить согласно одной или более типовых схем, приведенных далее 1 Синтез ICN1369 (Пиразомицин) Методика синтеза для этого соединения описана в следующих работах (a) J Farkas Z Flegelova and F Sorm, Tetrahedron Letts , 22, 2279 (1972), (b) S De Bernardo and M Weigele, J Org Chem , 41, 287 (1976), (c) J G Buchanan, A Stobie and R H Wightrnan J Chem Soc Chem Commun , 916 (1980), N Karagin, К Takashirna, T Haneda and T Kato, J Chem Soc Perkm Trans' , 553 (1984) 2 Синтез ICN3438 (i-p-D-ксилофуранозил1,2,4-триазол-З-карбоксамид) Синтез этого соединения выполнялся согласно процедуре, описанной в J Т Witkowski, М Fuertes, P D Cook and R К Robins J Carbohydr Nucleosides, Nucleotides 2(1), 1 (1975)) 3 Синтез ICN3844 (1(5-О-сульфамоил-р-0рибофуранозил)-1,2,4-триазол-3-карбоксамид) Соединение готовили согласно процедуре, описанной в G D Kim, В М Henry, R К Robins, S В Larson, J J Marr, R L Berens, С J Bacchi, H С Nathan and 3 S Keithly, J Med Chem , 33, 44 (1990) 4 Синтез ICN4625 (1(3-деокси-р-Оэритропентофуранозил)-1,2,4-триазол-3карбоксамид) Соединение готовили с применением следующего метода синтеза о о MeO "ОВя ВгО Ссылка J Med Chem , 8,659П965) OBs CHjOH/NH, NaOMe/Me H,N СНзОН/NH, OH 5 Синтез ICN5531 (5-амино-1-р-Орибофуранозилпиразол-4-карбоксамид) Метод синтеза, который использовали для приготовления соединения, описан в В К Bhattacharya, R К 15 Robins and G R Revankar J Heterocychc Chem , 21, 795(1990) 6 Синтез ICN5676 (i-p-D-арабинофуранозил1,2,4-триазол-З-карбоксамид) Синтез этого соединения осуществили с помощью процедуры, описанной в J T Witkowski, M Fuefles, P D Cook and R К Robins J Carbohydr Nucleosides, Nucleotides, 2(1), 1 (1975)) 7 Синтез ICN5839 (i-p-D-эритрофуранозил1,2,4-3-карбоксамид) Это соединение готовили с использованием последовательности синтеза, описанной ниже о 46815 16 этого соединения осуществлен согласно процедуре, описанной в J Igoleo, Т Н Dinh, A Keib and С Perreur, ChimieTherapeutique, 207 (1972) Для карбоксильных 4'-тиосахар и 4'-азасахар производных аналогов рибавирина следующие сахара можно конденсировать с соответствующими гет и оциклическими соединениями и синтезировать согласно описанным выше схемам и ссылкам АсО OAc OAc АсО АсО OAc Сахар с углеродным циклом 4'-Тиоеахар NaOMe/MeOH АсО ОАс но1 н 8 Синтез ICN6242 (2-6poMO-1-p-Dрибофуранозилимидазол-4-карбоксамид) ICN6242 готовили согласно способу, представленному ниже NH.OH/HA НО АсО' ОАс Ссылка; Р С- Srivastava, G .A Ivanovies, R J. Rousseau and R К Robins, J.Org. Chem., 40 2920(1975) Aep/Py HO OAc 9 Синтез ICN11808 (i-p-D-рибофуранозилпиразол-3,4-дикарбоксамид) Синтез этого соединения осуществляли согласно описанию, представленному в Y S Sanghvi, В К Bhattacharya, G D Kim, S S, Matsumoto, S В Larson, W J Jolley, R К Robins and G R Revankar, J Med Chem , 33, 336(1990) 10 Синтез ICN12204 (2-(p-Dрибофуранозил)имидазол-5-карбоксамид) Синтез АсО ОАс 4'-Азасахар 1 Сахар с углеродным циклом можно приготовить согласно процедуре, описанной в М Yoshikawa, Y Yoshikawa, Y Inoue, S Yamaguchi and N Murakami, Tetrahedron, 50, 9961 (1994), L Agrofogho, E Suhas, A Parese, R Condom, S R Challand, R A Earl and R Guedj, Tetrahedron, 50, 10611 (1994) 2 4-азасахар готовили согласно процедуре, описанной в Е J Reist, D E Gueffroy and L Goodman, J Am Chem Soc , 87, 677 (1965) 3 4-тио-О-рибофуранозу готовили согласно процедуре, описанной в М Hobek and R L Whistler in "Methods in Carbohydrate Chemistry," Vol 1, 292(1962) Доказательство эффективности аналогов рибавирина при модулировании цитокинов Th1 и Th2 приведено на Фигуре 7 и в таблице, представленной ниже Анализы, которые описаны здесь, включают короткий список 35 тестируемых аналогов рибавирина, все анализы проводили три раза Вообще, видно, что тестируемые соединения делятся натри основные категории (1) соединения, такие как ICN1369 и ICN3844, которые подавляют у-интерферон, IL-2, IL-4, IL-S и TNFa, (2) соединения, такие как рибавирин, которые усиливают IL-2 и TNFa и подавляют ILA и IL-5, и (3) соединения, такие как ICN6242, ICN3839 и ICN3531, которые усиливают IL-2 и у-интерферон и подавляют IL-4 и IL-5 Такой список видов активности позволяет определить, в какой модуляции цитокина произойдет соответствующая иммунная реакция Таблица 2 Концентрация клеток на лунку 2 х 106 х 24 = 48 х 106 в 48мл (полный объем каждой лунки 2000мкл) 17 A В С D 18 46815 1 Среды 2 ФМА ICN 3 ФМА ICN ФМА ICN ЮмкМ 3438 ФМА ICN ЮмкМ 4625 ФМА ICN ЮмкМ 5676 ФМА ICN 5мкМ 3438 ФМА ICN 5мкМ 4625 ФМА ICN 5мкМ 5676 ФМА ICN 2мкМ 3438 ФМА ICN 2мкМ 4625 ФМА ICN 2мкМ 5676 4 ФМА ICN ЮмкМ 1369 ФМА ICN ЮмкМ 3844 ФМА ICN ЮмкМ 5531 ФМА ICN ЮмкМ 5839 5 ФМА ICN 5мкМ 1369 ФМА ICN 5мкМ 3844 ФМА ICN 5мкМ 5531 ФМА ICN 5мкМ 5839 6 ФМА ICN 2мкМ 1369 ФМА ICN 2мкМ 3844 ФМА ICN 2мкМ 5531 ФМА ICN 2мкМ 5839 Концентрация клеток на лунку 2 х 10 х 24 = 48 х 10 в 48мл (полный объем каждой лунки 2000мкл) 1 А 2 3 4 5 6 ФМА ФМА ФМА ФМА ФМА ФМА ICN А ICN ICN ICN ICN ICN ЮмкМ 6242 5мкМ 6242 2мкМ 6242 ЮмкМ 11808 5мкМ 11808 2мкМ 11808 ФМА ФМА ФМА ФМА ФМА ФМА ICN ICN ICN ICN ICN ICN ЮмкМ 12204 5мкМ 12204 2мкМ 12204 ЮмкМ RIB 5мкМ RIB 2мкМ RIB Итак, мы продемонстрировали эффективность рибавирина и аналогов рибавирина в модифицировании экспрессии лимфокинов в активированных Т-клетках Несмотря на специфические варианты осуществления и применения настоящего изобретения, для специалистов вэтой обла % активнрол&нных контрольных клеток сти станет очевидной возможность различных модификаций, не отходящих от концепций настоящего изобретения Поэтому изобретение не ограничивается, кроме как в духе прилагаемой формулой изобретения % активированных контрольных клеток 0 -20 Рибавнрик (мкМ) а-интерферон (ед.) (мкМ) ФИГ. І В Фиг. 1А % активированных контрольных клеток % активированных контрольных клеток (мкМ) Фиг. 1С , (мкМ) а-интерферон (ед.) Фиг. Ш Фиг. 1 к-интерферон (ед.) JUUU 1 A I 2GQ0" 11 1 4 s J пг/мл ;3 1000^ 0 20 46815 19 -r— • s v s .з ™ - я І gg* Рибавирин § 8Х (мкМ) 8 1 I § Ч | ферон{ед.) 1 ^1 s © Фиг. 2А Фиг. 2В 500 500 400 300 пг/мл пг/мл 0& Є І ШШ- Рибавирин Фиг. 2С І І ^ f сс-интерg - ю ферон{ед.) Фиг. 2D Фиг. 2 а-интерферон Рибаеирин 6 Є IL-2 •*> - ^ ^ ' H f IL-4 у-интерферон рНе7 Фиг. 3 22 46815 21 IL-2R % активированных -Ї9 контрольных клеток -20і—I—I—I—Г'"|'"Г1—г (мкМ) а-интер ферон (ед ) Фиг. 4А 30 IL-4R 20 % активированных контрольных клеток І0 йібавирин І 1 (мкМ) а-ннтерфероя