Спосіб прогнозування розвитку автоімунних реакцій у хворих на хронічні гепатити

Спосіб прогнозування розвитку автоімунних реакцій у хворих на хронічні гепатити, який вклю чає загальноклінічне та гістологічне обстеження, визначення вмісту глобулінів, гамаглобулінів, імуноглобулінів, циркулюючих імунних комплексів, показників клітинного імунітету з визначенням імунорегуляторного індексу, специфічних і неспецифічних автоантитіл в крові, який відрізняється тим, що додатково визначають вміст у крові бетагмікроглобуліну (р2-мг), експресію Fas/APO-1 (CD95) на лімфоцитах периферичної крові, КІЛЬКІСТЬ патологічно змінених ядер гепатоцитів Винахід відноситься до медицини, зокрема до розділу гепатологм, а саме до способу прогнозування розвитку автоімунних реакцій у хворих на хронічні гепатити Відомо, ЩО проблема хронічних запальних захворювань печінки на теперішній час є однією з найбільш важливих в сучасній гастроентерологи, має загальномедичне і соціальне значення [2, 4, 6, 21] Спектр цих захворювань печінки дуже широкий-це різні варіанти хронічних гепатитів (ХГ) і, в кінцевому рахунку, нерідко цироз печінки (ЦП) В цілому по Україні за 5 років захворюваність на ЦП зросла на 76,6%, поширеність ЦП-на 59,6% [19] Все частіше відзначається автоімунна природа гепатитів [13] Відомо, ЩО розвиток автоімунних реакцій у хворих на хронічні гепатити різної етіології супроводжується активним прогресуючим перебігом захворювання, активацією фіброзоутворення в печінці з більш швидким розвитком ЦП [8, 13, 14, 23, 33] Віруси, зокрема гепатиту А, В, С та ш, розглядаються як головні кандидати для індукції автоімунних захворювань, в тому числі автоімунного гепатиту (АІГ) [4, 24] Тригерну роль в розвитку АІГ можуть виконувати токсико-алерпчні агенти та медикаменти [9,21,22] Відомо, ЩО розвиток АІГ зумовлений реакцією імунної системи перш за все на органоспецифічні автоантигени [8, 20, 23, 35], якими можуть виступати нуклеотидні уламки нерепарованої ДНК, фра гменти незрілої РНК, поліпептидного ланцюга та карюлеми, тобто цитогенетично порушені структури гепатоцитів Відомо, що апоптоз, опосередкований Fas-системою, розглядається як один з основних механізмів пошкодження гепатоцитів при хронічних гепатитах різної етіології [3, 5, 7, 11, 17, 25, 27, 31, 34, 37] Ряд авторів вказують на участь бетаг-мікроглобуліну (Р2-МГ)низькомолекулярного білка, що є інтегрованою частиною молекули основного комплексу пстосуМІСНОСТІ HLA І типу,-в розвитку імунних реакцій [26, 29] Відомо, ЩО реакції пперчутливості сповільненого типу обумовлюють появу в печінці та інших органах і тканинах лімфомакрофагальних інфільтратів Можливе поєднання реакцій пперчутливості сповільненого типу та імунокомплексних, з якими зв'язують розвиток васкулітів КЛІНІЧНО розвиток автоімунних реакцій проявляється позапечінковими проявами такими як змішана крюглобулінемія, мембранопроліферативний гломерулонефрит, пізня шкірна порфирія, автоімунний тиреоідит, синдром Шегрена та ін [16, 22, ЗО, 36, 38, 39, 40] Морфологічно для АІГ характерний склад клітинних інфільтратів в тканині печінки, які включають велику КІЛЬКІСТЬ хелперів-лімфоцитів в портальних трактах, переважання супресорних/цитотоксичних лімфоцитів у ділянках пієцемального некрозу, наявність В-клітин і натуральних кілерів [4, 13, 18, 00 со сч (О 62381 20] Лабораторно розвиток автоімунних реакцій ся від 20 до 74 років, середній вік-(45,6±7,7) роки При цьому, хворих молодого віку було 77 (16,9%), при хронічних гепатитах характеризується збільзрілого-125 (27,5%), середнього-163 (35,8%), пошенням вмісту глобулінів, гамаглобулінів, імунохилого-90 (19,8%) Тривалість захворювання склаглобуліну G та появою в крові автоантитілдала в середньому (5,4±2,7) років антинуклеарних, антиглад ком'язових, антимікроДослідження проводили за розробленою просомальних (печінка/нирки) у високому титрі та анграмою з ретельною оцінкою загальноклінічних, тимітохондріальних згідно критеріїв Міжнародної лабораторних показників, результатів інструменгрупи по вивченню АІГ [4, 14, 22, 35] За автоімунтальних методів обстеження В діагностиці хронічний характер захворювання можуть вказувати зміних захворювань печінки використовували класини показників клітинної ланки імунітету із збільфікацію Міжнародної робочої групи і Всесвітнього шенням імунорегуляторного індексу [12] конгресу гастроентерологів (Лос-Анжелес,1994) та Недоліками всіх попередніх способів є те, що МКБ-10 Діагноз встановлювали на основі КЛІНІЧвони дають можливість діагностувати розвиток НИХ, ультразвукових, біохімічних, імунологічних та автоімунних реакцій при хронічних гепатитах різної ГІСТОЛОГІЧНИХ досліджень [4, 6,12, 14, 16, 22] етіології, а не прогнозувати їх на ранніх стадіях Критеріями включення хворих в групи спостеВідомо, ЩО лікування автоімунних реакцій при реження були тривалість захворювання печінки хронічних гепатитах несе значно більші економічні більше 18 МІСЯЦІВ, наявність клініко-лабораторних затрати, ніж профілактичні заходи їх розвитку Тота ультразвукових доказів ураження печінки, виявму важливо розробити діагностичні критерії для лення серологічних маркерів гепатиту В і С, алкопрогнозування розвитку автоімунних реакцій гольного, автоімунного, токсичного генезу захвоСуть винаходу пропонується всім хворим на рювання хронічні гепатити різної етіології поряд із загальноПроводили визначення вмісту в крові загальклінічним, біохімічним та імунологічним обстеженного та прямого білірубіну, активності АсАТ, АлАТ, ням визначати наявність в крові маркерів ХГС та загального холестерину, бета-ліпопротеїдів, сечоХГВ, вміст у крові циркулюючих імунних комплеквини, креатиншу, загального білка та його фракцій, сів (ЦІК), бетаз-мікроглобуліну ( Р 2 ' ^ П . експресію тимолової проби, показників коагулограми за стаFas/APO-1 (CD95) на лімфоцитах периферичної ндартними методиками досліджень [6] За метокрові, КІЛЬКІСТЬ патологічне змінених ядер гепатодом біхроматичної спектрофотометрії на апараті цитів з метою виявлення ризику розвитку автоімуSTAT-FAX 1904 Plus (HIM) проводили визначення нних реакцій активності ферментів ЛДГ, ЛФ, ГГТП, холінестераВ основу винаходу поставлено задачу прогнози, вмісту в крові загального холестерину, триглізування розвитку автоімунних реакцій у хворих на церидів, фосфоліпідів з використанням стандартхронічні гепатити на основі комплексного КЛІНІКОних наборів лабораторного і цитогенетичного обстеження паРозвиток автоімунних порушень підтверджуцієнтів для вибору раціональної терапії і поперевали за наявністю в сироватці крові органоспецидження прогресування захворювання фічних-І_КМ-1 та органонеспецифічних-ANA, SMA, Об'єкт і методи дослідження АМА автоантитіл Вміст LKM-1, ANA та АМА виПід спостереженням було 455 пацієнтів, серед значали імуноферментним, SMAяких 375 (82,4%) хворих на хронічні гепатити і 80 імунофлюоресцентним методами за методиками (17,6%)-на ЦП А і В стадій за Чайлд-Пью фірм-виробників Для визначення LKM-1 викорисВсі хворі були розділені на 4 основних групи товували комерційні набори фірми "ІММСО Група хронічних вірусних гепатитів (ХВГ) включала Diagnostics" (США), ANA-"dark Laboratories" (США), 223 (49,0%) хворих, алкогольної хвороби печінки AMA-"lmmunodiagnostics" (США), SMA-"The Binding (АХП)-88 (19,3%), автоімунних захворювань печінSite" (Великобританія) ки-60 (13,2%), хронічних токсичних гепатитів (ХТГ)Вміст IgA, IgG, IgM визначали за методом ра84 (18,5%) хворих Серед хворих на ХВГ було 134 діальної імунодифузії в агарозному гелі за Мапсіпі (60,1%) випадки HBV-етюлопі 122-хронічного ге(1965) Вміст ЦІК в сироватці крові визначали шляпатиту В (ХГВ), 12-ЦП та 89(39,9%)-НСУ-етюлопі хом осадження їх розчином поліетиленгліколю 67-хронічного гепатиту С (ХГС), 22- ЦП Серед (ПЕГ) з наступним визначенням оптичної густини хворих на АХП було 12 (13,6%) хворих на стеатоз досліджуваного розчину Для визначення ЦІК різпечінки, 40 (45,5%)-на алкогольний гепатит (АГ) та ної молекулярної маси використовували розчини 36 (40,9%)-на ЦП Серед хворих на ХТГ у 28 ПЕГ в концентрації 3%, 4% та 5,5% Вміст р 2 - М І ~ (33,3%) випадках захворювання було пов'язане з визначали в сироватці крові радюімунним методом тривалим контактом з ХІМІЧНИМИ чинниками, в 10 з використанням наборів РИО-БЕТА-2-МИКРО(35,7%) з них діагностовано ЦП, та у 56 (66,7%)-із 125-1 [Мінськ] вживанням медикаментів, зокрема, в 27 (48,2%)нестероідних протизапальних середників, у 29 АКТИВНІСТЬ процесу апоптозу лімфоцитів пе(51,8%) -сульфаніламідних Хворі на ХТГ виділені риферичної крові оцінювали за експресією в одну групу в зв'язку з однотипністю уражень пеFas/APO-1 (СО95)-трансмембранного глікопротеїчінки, а саме-розвиток внутрішньопечінкового хону Експресію Fas/APO-1 (CD95) на периферичних лестазу Серед хворих на автоімунні захворюванлімфоцитах визначали за допомогою FITCня печінки було 42 (70,0%) на АІГ та 18 (30,0%)-на кон'югованих моноклональних антитіл фірми первинний біліарний цироз (ПБЦ) Контрольну гру"Caltag laboratories" (США) імунофлюоресцентним пу склали 20 практично здорових донорів методом згідно методики фірми-виробника ВидіСеред обстежених було 293 (64,4%) ЧОЛОВІКІВ І 162 (35,6%) жінки Вік обстежених хворих коливав лення лімфоцитів із свіжої гепаринізованої периферичної крові також проводили в градієнті густи 62381 ни фікол-верографіну з наступною стандартизаціскладав 1 80 і більше 6 єю їх до кінцевої концентрації 2-10 /клітин в 1мл Встановлена особливість продукції автоантиКонтролем слугували 10 здорових донорів тіл у хворих на ХВГ, яка полягала в тому, що у хворих на ХГВ виявлені в переважній більшості Маркери вірусів HBsAg, HBeAg, антиНВеАд, SMA та ANA, а у хворих на ХГС-LKM-I Як відомо, антиНВсогАд ІдМ, антиНСУ і aHTHHDV визначали в наявність ANA та SMA характерно для АІГ І типу, а сироватці крові за допомогою комерційних наборів І_КМ-1-ІІтипу[4, 13, 14, 33] Diagnosticum Pasteur (Франція) на апараті фірми Sanofi імуноферментним методом (ELISA), HBVКлінічна картина хворих з ANA та SMA як при ДНК та HCV-РНК-методом полімеразної ланцюгоХГВ, так і при ХГС в більшості (82,0%) випадків вої реакції згідно алгоритму діагностики вірусних була характерною для активного гепатиту і проявгепатитів [1] лялась, крім гепатомегалм, інтоксикаційним, мезенхімально-запальним та цитолітичним синдромаДля ГІСТОЛОГІЧНОГО дослідження тканину печінми Активність трансаміназ була в них вищою від ки отримували шляхом пункційної біопсії Фарбунорми більш як в 3 рази, а показник Де Рітіса вання проводили гематоксиліном і еозином, за АсАТ/АлАТ-нижчим одиниці В цих хворих відзнаВан-Гізоном та за Маллорі [18] Для цитогенетиччалось підвищення тимолової проби до (8,9±1,2)од ного дослідження були відібрані хворі з характер(р