Спосіб діагностики функціонального стану геному гепатоцитів у хворих на хронічні гепатити і цироз печінки

Спосіб діагностики функціонального стану геному гепатоцитів у хворих на хронічні гепатити і Винахід відноситься до медицини, зокрема до розділу гепатологм, а саме до способу діагностики функціонального стану геному гепатоцитів у хворих на хронічні гепатити і цироз печінки Відомо, ЩО проблема хронічних запальних захворювань печінки на теперішній час є однією з найбільш важливих в сучасній гастроентерологи, має загальномедичне і соціальне значення [2, З, 4, 5, 14] Спектр цих захворювань печінки дуже широкий - це різні варіанти хронічних гепатитів і, в кінцевому рахунку, нерідко цироз печінки (ЦП) В цілому по Україні за 5 років захворюваність на хронічні гепатити зросла на 76,6%, на цироз печінки (ЦП) - на 75,6%, поширеність хронічних гепатитів за цей період збільшилась в 2,2 рази, ЦП на 59,6% [9] Відомо, ЩО КЛІТИНИ печінки під впливом вірусів, етанолу, ХІМІЧНИХ, медикаментозних та інших токсичних чинників, автоімунних реакцій набувають різного ступеню функціональних і структурних змін з наступним розвитком гепатоцелюлярноі недостатності [9] Відомо, що прогресування хронічних гепатитів супроводжується, крім біохімічних та імунологічних порушень, суттєвими цитогенетичними розладами [15, 22] Описані хромосомні аберрацм в клітинах кісткового мозку та периферичної крові у хворих на хронічні вірусні гепатити [5, 15] Проте залишається невивченим функціональний стан геному гепатоцитів при хронічних гепатитах різної етіології Відомо, що функціональний стан геному клітини визначає її функціонування в цілому [22, 23, 24], що обґрунтовує ДОЦІЛЬНІСТЬ його вивчення Відомо, ЩО функціональну активність геному цироз печінки, який включає цитогенетичне дослідження соматичних клітин з визначенням індексів хроматизаци (співвідношення ядер з перевагою еухроматину до ядер з гетерохроматином), ядерцевого, статевого хроматину та КІЛЬКОСТІ патологічно змінених ядер, який відрізняється тим, що визначають цитогенетичні показники власне гепатоцитів соматичних клітин, зокрема епітелюцитів слизової оболонки ротової порожнини, матки, шлунку можна оцінити за показниками карюграми інтерфазних ядер [11,12] Поєднане визначення чотирьох індексів (хроматизаци, ядерцевого, гетеропікнотичної Х-хромосоми, патологічно змінених ядер) дає можливість оцінити транскрипційну активність спадкового апарату і загальний метаболізм клітини, виявити порушення ампліфікації генів рибосомної РНК і зниження готовності рибосом до синтезу поліпептидного ланцюга, розбалансування механізмів регуляції як реплікації, так і транскрипції, тобто декомпенсацію дози генів, та патологічні зміни ядер клітини [11] Недоліком цих методів є те, що не проводилося цитогенетичне дослідження ядер гепатоцитів, що не давало можливості оцінити функціональний стан геному гепатоцитів Суть винаходу з метою діагностики функціонального стану геному гепатоцитів у хворих на хронічні гепатити і цироз печінки пропонується проводити цитогенетичне дослідження гепатоцитів з визначенням індексів хроматизацм (співвідношення ядер з перевагою еухроматину до ядер з гетерохроматином), ядерцевого, статевого хроматину та патологічне змінених ядер В основу винаходу поставлено задачу діагностики функціонального стану геному гепатоцитів у хворих на хронічні гепатити і цироз печінки з метою вибору раціональної терапії і попередження прогресування захворювання Об'єкт і методи дослідження Під спостереженням було 83 хворих, у 43(51,8%) з них захворювання було викликане ю о (О 60529 HBV- і HCV-інфекцією 21 (25,3%) хворий на хронічний гепатит В(ХГВ), 12(14,5%) - на хронічний гепатит С(ХГС), 10(12,0%) - на ЦП вірусної етіології Серед обстежених було 28(33,7%) хворих на алкогольну хворобу печінки (АХП) 6(7,2%) - на стеатоз, 12(14,5%) - на алкогольний гепатит АГ, 10(12,0%) - на ЦП і 12(14,5%) - на автоімунний гепатит (АІГ) Проведені дослідження у 10(48,6%) хворих на ХГВ виявили фазу інтеграції, в 11 (51,4%) - фазу реплікації Серед обстежених було 52(62,7%) ЧОЛОВІКІВ І 31(37,3%) жінка Вік обстежених хворих коливався від 20 до 68 років, середній вік - (44,6±7,9) роки Тривалість захворювання складала в середньому (5,3±2,9) років Дослідження проводили за розробленою програмою з ретельною оцінкою загальноклінічних, лабораторних показників, результатів інструментальних методів обстеження В діагностиці хронічних захворювань печінки використовували класифікацію Міжнародної робочої групи і Всесвітнього конгресу гастроентерологів (ЛосАнжелес,1994) та МКБ-10 Діагноз встановлювали на основі КЛІНІЧНИХ, ультразвукових (УЗД), біохімічних, імунологічних та ГІСТОЛОГІЧНИХ досліджень [1,2,3,5] Вираженість синдрому цитолізу печінкових клітин оцінювали за активністю трансаміназ АлАТ, АсАТ з визначенням коефіцієнта Де Рітіса (АсАТ/АлАТ), вмістом білірубіну в крові, синтетичну функцію печінки - за вмістом білка, зокрема альбуміну, протромбіну, фібриногену, активністю холінестерази Про вираженість мезенхімальнозапального синдрому судили за тимоловою пробою, альбуміно-глобуліновим (А/Г) показником, вмістом у-глобулінів, імуноглобулінів (Ід) А, М, G в крові [5] Стан перешеного окислення ЛІПІДІВ (ПОЛ) оцінювали за вмістом в сироватці крові малонового диальдепду (МДА) та дієнових кон'югатів (ДК), які визначали спектрофотометричним методом Розвиток синдрому метаболічної інтоксикації оцінювали за вмістом в сироватці крові середньомолекулярних пептидів (СМП) згідно рекомендацій Л Л Громашевської [7], рівень яких визначали за допомогою спектрофотометра за методом Н І Габріелян Вивчали вміст пептидних (СМП254) та нуклеотидних (СМП280) залишків в сироватці крові з наступним розрахунком нуклеотидно-пептидного індексу СМП280/СМП254 Маркери вірусів HBsAg, HBeAg, антиНВеАд, антиНВсогАд ІдМ, антиНСУ і антиЬЮУ визначали в сироватці крові за допомогою комерційних наборів Diagnosticum Pasteur (Франція) на апараті фірми Sanofi імуноферментним методом (ELISA), HBV-ДНК та HCV-PHK - методом полімеразної ланцюгової реакції згідно алгоритму діагностики вірусних гепатитів [1] Для ГІСТОЛОГІЧНОГО і цитогенетичного дослідження були відібрані хворі з характерними КЛІНІко-бюхімічними проявами вказаних захворювань Контрольну групу склали 10 хворих, яким проводилась лапароскопія в плановому порядку з приводу жовчокам'яної хвороби при відсутності ГІСТОЛОГІЧНИХ змін в тканині печінки Для ГІСТОЛОГІЧНОГО дослідження тканину печінки отримували шляхом пункційної біопсії Фар 4 бування проводили гематоксиліном і еозином, за Ван-Гізоном та за Маллорі Крім оглядового ГІСТОЛОГІЧНОГО дослідження тканини печінки визначали індекс гістологічної активності (ІГА) за R G Knodell і ГІСТОЛОГІЧНИЙ індекс склерозу (ГІС) за V J DesmetnO, 13, 16, 18] Функціональну активність геному клітин печінки встановлювали за показниками карюграми штерфазних ядер гепатоцитів Забарвлення ядер здійснювали за Фьольгеном в модифікації Л Є Ковальчук і співавт (1994) Комплексний аналіз чотирьох індексів карюграми (хроматизаци, ядерцевий, гетеропікнотичної Х-хромосоми, патологічно змінених ядер) проводили за методикою Л Є Ковальчук [11, 12] КІЛЬКІСНІ показники визначали в 100 штерфазних ядрах соматичних клітин Індекс хроматизацм (IX) вираховували за співвідношенням ядер з перевагою деконденсованого хроматину (еухроматину) до ядер, що містили великі ділянки конденсованого хроматину (гетерохроматину) Ядерцевий або нуклеолярний індекс (ЯІ) визначали співвідношенням ядер, що мали ядерця, до всіх вивчених ядер Реєстрували клітини з гетеропікнотичною Х-хромосомою, тобто такі, що містили статевий хроматин Вивчали зміни ядер гепатоцитів та вираховували КІЛЬКІСТЬ патологічно змінених ядер гепатоцитів (ПЗЯ) Статистичну обробку отриманих результатів проводили на IBM PC Pentium-200 з використанням стандартного пакету прогр ами "Statistica 5 1 for Windows" ("StatSoft", США) Результати дослідження Проведений порівняльний аналіз цитогенетичних характеристик гепатоцитів у хворих на хронічні вірусні гепатити дозволив виявити в них зміни всіх компонентів транскрипційнотрансляційного апарату (табл 1), де " - достовірність ВІДМІННОСТІ від контролю (р