Спосіб отримання ліпосомального засобу, що містить кверцетин

Спосіб отримання ліпосомального засобу з фармакологічною дією шляхом змішування розчину фосфатидилхоліну в етиловому спирті із розчином фізіологічно активної речовини при масовому співвідношенні (фосфатидилхолін:фізіологічно активна речовина) 1:0,01-0,10, висушування суміші у вакуумі, її емульгування у водному середовищі, диспергування емульсії з додаванням лактози у вигляді водного розчину, поетапної фільтрації, стерилізуючої фільтрації і ліофільного висушування, який відрізняється тим, що як фізіологічно активну речовину застосовують кверцетин, який розчиняють у спирті етиловому при температурі 47-53°С, висушування суміші розчинів проводять при температурі 42-50°С, а масове співвідношення кверцетин:лактоза складає 1:24-30. UA (21) a200604675 (22) 27.04.2006 (24) 17.07.2006 (46) 17.07.2006, Бюл. № 7, 2006 р. (72) Стефанов Олександр Вікторович, Григор'єва Ганна Савівна, Соловйов Анатолій Іванович, Пасечнікова Наталія Володимирівна, Хромов Олександр Станіславович, Конахович Наталія Філімонівна, Краснопольський Юрій Михайлович (73) ІНСТИТУТ ФАРМАКОЛОГІЇ ТА ТОКСИКОЛОГІЇ АКАДЕМІЇ МЕДИЧНИХ НАУК УКРАЇНИ, Стефанов Олександр Вікторович, Григор'єва Ганна Савівна, Соловйов Анатолій Іванович, Пасечнікова Наталія Володимирівна, Хромов Олександр Станіславович, Конахович Наталія Філімонівна, Краснопольський Юрій Михайлович (56) UA С2 46528 15.05.2002 UA C2 38504 15.05.2001 RU C1 2181051 10.04.2002 C2 2 (19) 1 3 76393 4 отримання засобів кверцетину, які відповідають далення розчинників випаровуванням у вакуумі, умовам відмінного від перорального шляху ввеемульгування у водному середовищі при співвіддення. ношенні (мас. ч.) ФХ:водне середовище емульгуВідомий спосіб одержання ін'єкційного засобу вання 1:(60-80), диспергування емульсії з додана основі КB, який включає розчинення кверцетину ванням водного розчину лактози, фільтрацію з у воді для ін’єкцій при температурі (75-85)°С в послідовним зменшенням розміру пор фільтрів, присутності натрію тетраборату, трилону Б і полістерилізуючу фільтрацію, з наступним розливом і вінілпіролідону при співвідношенні (мас. ч.) 1:(0.7ліофільним висушуванням. 1.0):(5.5-8.0):(0.01-0.015), охолодження, фільтраТим не менш, спосіб-прототип за природою цію та ампулювання отриманого розчину з наступкомпонентів його реалізації не передбачає отриною термічною стерилізацію ампул [Патент РФ мання засобу кверцетину, а за принципом відтво№2181051, МПК7 А61КЗЗ/22, А61К9/08, рення - вимагає певних умов та операцій, які моА61К31/351, А61К31/79, А61К31/198, 2002] [2]. Нежуть визначати відносне зниження якості доліками цього способу є операція термічної стеліпосомального продукту, особливо враховуючи рилізації і розширений компонентний склад, що не природу кверцетину з точки зору обмеженої розтільки ускладнює технологічний процес, але й чинності, нестійкості у розчині та інших фізикосприяє нестабільності цільового продукту, а також хімічних властивостей. високий (70-90%) кількісний вміст допоміжних реПо-перше, це стосується застосування при човин, що погіршує якість цільового продукту з здійсненні прототипу двох органічних розчинників, огляду на відому специфічну шкідливість трилону одним з яких є хлороформ, що здатний провокуваБ і полівінілпіролідону. ти часткове окислення ліпосом ще в процесі здійсВідомий також спосіб одержання засобу KB з ненні способу-прототипу, а як залишкова домішка кардіопротекторною дією для парентерального негативно впливати на нешкідливість цільового введення, який передбачає розчинення КB у розпродукту. По-друге, здійснення стадії розчинення чині полівінілпіролідону у 95%-ному спирті етилокомпонентів без нагрівання, а наступного видавому при співвідношенні полівінілпіролідон:КB лення розчинників під вакуумом при температурі (мас. ч.) 9:1, нейтралізацію, стерилізацію, дозуне вищій 40°С - збільшує тривалість цих операцій, вання розчину у флакони та ліофілізацію [Патент а відповідно - часу перебування інгредієнтів у розУкраїни №38504, МПК7 А61К9/14, А61К31/79, чині до включення у ліпосоми, сприяючи їх окисА61К31/455, 2001 [3]. Ґрунтовним недоліком цього ленню/розкладу. По-третє, спосіб-прототип передспособу є можливість його відтворення лише у бачає введення лактози у майже 75-разовому присутності до 90% полівінілпіролідону, який обнадлишку по відношенню до активного компоненту межено виводиться з організму людини, накопи(ФАР), що призводить до штучного підвищення чуючись у печінці і нирках. Останній фактор обувмісту нефізіологічної допоміжної речовини у цімовив вкрай насторожене ставлення до льовому продукті. парентеральних препаратів, які містять полівінілВказані обставини знижують ефективність піролідон, аж до обмеження їх клінічного застосуспособу-прототипу щодо процесу його відтворенвання у багатьох країнах. ня, а також щодо стабільності та якості цільового Вказані недоліки відомих способів отримання продукту - ліпосомального засобу з фармакологічзасобів на основі KB обумовлюють зниження біоними властивостями. доступності і нешкідливості цільового продукту, В основу винаходу, що заявляється, поставтобто його якості, а звідси - неоптимальну фармалено задачу створення способу отримання ліпокологічну дію. сомального засобу кверцетину, що забезпечує Критеріями створення оптимальних парентепідвищення якості цільового продукту за фармакоральних засобів з використанням гідрофобних або терапевтичною ефективністю, стабільністю та малорозчинних фізіологічно активних субстанцій є адекватністю різним способам введення до органіадекватні способи отримання ліпосомальних прозму. Реалізація цієї задачі досягається запропонодуктів, створених на основі фосфоліпідів - основваним способом отримання ліпосомального засоних компонентів ліпідного матрикса клітинних бу на основі композиції певних співвідношень мембран [4]. фосфатиділхоліну і кверцетину. Відомий спосіб отримання ліпосомального заПоставлена задача вирішується тим, що у собу на основі природного фосфатидилхоліну (ФХ способі отримання ліпосомального засобу, який - яєчного лецитину) і фізіологічно активної сполуки включає створення розчину суміші ФХ і фізіологічкомплексу трис-[N-2,3но активної речовини при співвідношенні ФХ:ФАР диметилфенілантранілато]алюмінію [Патент Укра(мас.ч.) 1:(0.01-0.10), видалення розчиннику випаїни №46528, МПК А61К9/127, А61К31.14, ровуванням, емульгування суміші у водному сереА61КЗЗ/06, 2003] [5]. Цей спосіб обраний прототидовищі, диспергування емульсії з додаванням вопом заявляемого об’єкту - способу як найбільш дного розчину лактози, поетапну фільтрацію, близький його аналог за сумою ознак, а саме: сутстерилізуючу фільтрацію, розлив та ліофильне тю і послідовністю основних операцій і заходів та висушування з герметичним закриванням, згідно із ліпосомальною організацією цільового продукту, винаходом, в якості ФАР використовують кверцещо має фармакотерапевтичну активність. тин, який розчиняють у спирті етиловому при темСпосіб за прототипом передбачає створення пературі (47-53)°С, висушування суміші проводять суміші розчинів ФХ і фізіологічно активного компри температурі у вакуумі (42-50)°С, а при додаплексу алюмінію в різних органічних розчинниках ванні лактози додержуються співвідношення (спирті етиловому і хлороформі, відповідно), виКB:лактоза (мас.ч.) 1:(24-30). 5 76393 6 Можливість здійснення способу, що заявляПісля повного зняття плівки у скляну ємність доється, ілюструється наступними прикладами, а для дають воду для ін’єкцій до загального об'єму рідипорівняння - прикладом за способом-прототипом. ни 15л, струшують і перемішують до отримання Приклад 1 - Заявляємий об'єкт. Точну наважку однорідної емульсії. Емульсію переносять у реак20г КB (субстанція "Кверцетину дигідрат" [6]) розтор гомогенізатора високого тиску α-Laval, додачиняють у 2л спирту етилового при температурі ють 12л води для ін’єкцій і піддають диспергуван50°С і додають до розчину 800г ФХ ("лецитинове ню при тиску 60МПа і температурі (40-45)°С з масло" - "лецетин-стандарт" [7], випарений до посконтролем оптичної густини рідини, що гомогенізутійної ваги) у 2.0л спирту етилового. Розчин суміші ється. При досягненні показника оптичної густини ретельно перемішують і переносять у круглодонну не більше 0.15 (довжина хвилі 540нм; товщина скляну колбу, яку вміщують на ротаційний випарошару поглинання 1=0.5см) до отриманої емульсії вувач, і видаляють спирт етиловий у вакуумі при додають стерильний розчин 505г лактози (молочтемпературі 42°С. По закінченні процесу висушуний цукор фармакопейний) у 3л води для ін'єкцій. вання у колбу протягом 5хв. пропускають інертний Продовжують диспергування в реакторі гомогенігаз. Отриману ліпідну плівку із стінок колби кількісзатора високого тиску до досягнення показника но знімають приблизно 3л води для ін’єкцій і переоптичної густини емульсії не більше 0.15 (при тих носять в скляну ємність. Після повного зняття пліже умовах вимірювання). вки у скляну ємність додають воду для ін’єкцій до Отриману емульсію послідовно фільтрують на загального об'єму рідини 15л, струшують і переустановці Millipore, спочатку через мембрани мішують протягом 2-3год. до отримання однорід0.65мкм і 0.22мкм, а далі піддають стерилізуючій ної емульсії. Емульсію переносять у реактор гомофільтрації та дозовано розливають в асептичних генізатора високого тиску α-Laval, додають 12.6л умовах у скляні флакони. Флакони з емульсією води для ін’єкцій і піддають диспергуванню при піддають інтенсивному заморожуванню та провотиску 60МПа і температурі (40-45)°С з контролем дять ліофільне (сублімаційне) висушування в оптичної густини рідини, що гомогенізується. При установці ТГ-50. Після висушування флакони із досягненні показника оптичної густини 0.15 (довліпосомальним продуктом продувають інертним жина хвилі 540нм; товщина шару поглинання газом, закривають і герметизують в асептичних 1=0.5см) до отриманої емульсії додають стерильумовах. ний розчин 480г лактози (молочний цукор фармаЗа результатами відтворення способукопейний) у 2.4л води для ін'єкцій. Продовжують прототипу отримують продукт у вигляді легкої диспергування в реакторі гомогенізатора високого аморфної маси білого або світло-жовтого кольору тиску до досягнення показника оптичної густини з характерним запахом. емульсії, не вищого 0.15 (при тих же умовах виміУ таблиці 1 наведені параметри здійснення рювання). операцій за способом, що пропонується, і спосоОтриману емульсію послідовно фільтрують на бом-прототипом. Для ідентифікації і підтвердженустановці Millipore, спочатку через мембрани ня якості цільових ліпосомальних засобів, отрима0.45мкм і 0.22мкм, а далі піддають стерилізуючій них запропонованим способом, їх фільтрації та дозовано розливають в асептичних використовували у вигляді емульсії, отриманій умовах у скляні флакони. Флакони з емульсією шляхом додавання у флакони із ліофілізованим піддають інтенсивному заморожуванню та провопродуктом стерильного 0.9% розчину натрію хлодять ліофільне (сублімаційне) висушування в риду ізотонічного і адекватній формі його фармаустановці ТГ-50. Після висушування флакони із котерапевтичного застосування. ліпосомальним продуктом продувають інертним Ефективність заявляемого способу за якісною газом, закривають і герметизують в асептичних і кількісною ідентифікацією у цільовому продукті умовах. ліпідного компоненту (ФХ) підтверджена: У прикладах 2-5 операції та заходи за спосо- методом тонкошарової хроматографії на бом, що заявляється, здійснюють відповідно до пластинці за хроматограмою розчину цільового прикладу 1. Зміни відображені в таблиці 1. продукту в етиловому спирті, на якій основна пляЦільовий продукт є легкою аморфною масою ма жовтого кольору виходить на рівні основної яскравого світло-жовтого кольору з характерним плями розчину стандартного зразка лецитину; запахом. - спектофотометричним методом за величиПриклад 6. - Прототип за [41. Точну наважку ною оптичної густини при довжині хвилі 820нм 500г ФХ ("лецитинове масло" - "лецетин-стандарт" продуктів кольорової реакції продукту, оброблено[6], випарений до постійної ваги) розчиняють у го пергідролем в присутності сірчаної кислоти, з 250мл спирту етилового. До отриманого розчину амонію молібдатом (визначення фосфору); додають розчин точної наважки 6.75г трис-[N-2,3- за показником індексу окислювання ліпідної диметилфенілантранілато]алюмінію (субстанція фракції ліпосом цільового продукту у порівнянні із препарату "Антраль") у 600мл хлороформу. Розстандартним зразком лецетину. чин суміші переносять у круглодонну скляну колбу, Ефективність заявляемого способу за якісною яку вміщують на ротаційний випаровувач, і видаі кількісною ідентифікацією у цільовому продукті ляють розчинники у вакуумі при температурі (30кверцетину (КB) підтверджена: 40)°С. По закінченні процесу випаровування роз- спектофотометричним методом за характечинників у колбу протягом 5хв. пропускають інертристичним УФ поглинанням розчину цільового ний газ. Отриману ліпідну плівку із стінок колби продукту в етиловому спирті при довжинах хвиль кількісно знімають порціями приблизно по 250мл (257±2)нм і (375±2)нм і величиною оптичної густиводи для ін’єкцій і переносять в скляну ємність. ни при довжині хвилі (375±2)нм у порівнянні із ста 7 76393 8 ндартом - розчином кверцетину. або його перенавантаження нефізіологічним ексЕфективність способу, що пропонується, за ципієнтом (лактоза); статусом цільового продукту як замкнених фосфа- підвищення рівню впливу ліпосомального затиділхолінових ліпосом із внутрішньою водною собу на агрегацію тромбоцитів in vitro (як тест на порожниною, які містять КB, доведена: відповідність парентеральному способу застосу- методом діаліза емульсії ліофілізованого вання). продукту в фізіологічному розчині з радіоізотопним Крім того, осмоляльність емульсії цільового маркером 22Na в нормотонічних (проти фізіологічпродукту знаходиться у межах, встановлених фаного розчину) або гіпотонічних (проти бідистильормакопеєю для офтальмологічних засобів (214ваної води) умовах із визначенням різниці вмісту 434мосмоль/кг), тоді як для продукту за способоммітки 22Na у вихідній емульсії і після видалення її прототипом - дещо перевищує максимально допучастини, яка не включилась у ліпосоми; стимий показник. - методом гель-фільтрації емульсії на колонці Таким чином, спосіб, що пропонується саме за із Сефадексом G-25 (елюат - фізіологічний розчин) прикладами 1-3 забезпечує створення цільового із контролем виходу ліпосомального продукту за продукту, який за фізико-хімічною якістю відповіхарактеристичною смугою поглинання в області дає фармацевтичним вимогам до лікарських пре540нм, яка відображає дисперсний склад ліпосом. паратів, у т.ч. офтальмологічних і парентеральних. - методом ІЧ-спектроскопії шляхом порівняння Відповідно до задачі винаходу, якість цільовохарактерних змін у спектрі цільового продукту пого продукту - ліпосомального засобу кверцетину рівняно з ФХ і КB. оцінено за показниками фармакотерапевтичної Крім того, визначали осмоляльність ліпосомаякості в офтальмології і кардіології при субльного засобу і його активність в тесті агрегації кон’юнктивальному (краплі) і внутрішньовенному тромбоцитів in vitro, маючи на увазі адекватність (ін’єкції) способі введення, відповідно. цільового продукту, створеного за запропоноваУ експериментальних доклінічних дослідженним способом, вимогам до офтальмологічних і нях порівняння цільових продуктів, отриманих за парентеральних лікарських засобів, відповідно. запропонованим способом (приклади 1-5) і спосоЗгідно із результатами фізико-хімічної ідентибом-прототипом, здійснювали у двох моделях: 1) фікації заявляємий спосіб забезпечує якість і стаза динамікою показника агрегації тромбоцитів в більність цільового продукту як ліпосом (ФХ+КB) із крові гіпертензивних самців щурів (АГ), яким внутсупрамолекулярними зв'язками між компонентами рішньочеревно (адекватно внутрішньовенному композиції (таблиця 2), а саме: клінічному застосуванню) вводили емульсію ліо- компоненти композиції включаються у ліпофілізованих продуктів (15 мг/кг) у фізіологічному сомальну структуру і кількісно співпадають до та розчині, двічі на добу протягом 3-х діб; 2) динаміпісля гель-фільтрації; кою репарації рогівки кролів при травматичному - кількість мітки 22Na співпадає у вихідних і пекератиті, яким робили інстиляції емульсії (0.06мл) реформованих ліпосомах; швидкість виходу 22Na у кон’юнктивальний мішок правого ока 4 рази на зростає у гіпотонічних умовах; добу (ліве око - інтактний контроль). У всіх експе- за даними хімічного аналізу, ТШХ та УФриментальних групах (у т.ч. контрольній) було по спектроскопії, склад і природа ФХ і кверцетину в 6-9 тварин. ліпосомах зберігаються і збігаються з такими для В таблиці 3 наведена оцінка ефективності стандартів: лецитину і кверцетину; способу, що заявляється, за показниками репара- аналіз характерних змін в ІЧ-спектрі цільовоційної і протизапальної активності (офтальмологія) го продукту у порівнянні із стандартами лецитину і і протиагрегаційної дії (при АГ) цільового продукту кверцетину підтверджує входження КB до фосфоу доклінічному експерименті. Застосовані ліпосомальні продукти покращують показники стану тваліпідного шару ліпосом за участю -електронних рин, однак реалізація способу, що пропонується зв’язків і можливої комплементарної чи стекінгзабезпечує якість цільового ліпосомального засовзаємодії: зниження інтенсивністі поглинання бу, яка відповідає більш високому фармакологіч1650-1590см-1 (для дієнових С=С систем; дефорному ефекту: маційних коливань ОН, С-Н), поява триплету - активації і скороченню терміну репарації де(1650, 1630 и 1590см-1) у місці знаходження єдиної епітелізованої зони травмованого ока (ранозаживсмуги деформаційних коливань 1640см-1 у спектрі лення); ФХ, значні відмінності на ділянці площинних -1 - різкому ослабленню проявів запалення, що ОН+ С-Н (1390-1350см ) і позаплощинних С-Н супроводжує травматичний кератит, в усіх струк(900-650см-1) деформаційних коливань. турах ока і віка; Реалізація способу, що пропонується при від- зниженню і нормалізації аномальної агрегації мінних від вказаних у прикладах 1-3 параметрах тромбоцитів, що супроводжує АГ. операцій (приклади 4 і 5), а також за способомПереваги способу, що пропонується, перед прототипом обумовлює зниження якості і стабільспособом-прототипом за фармакотерапевтичним ності цільового продукту, а саме: ефектом продуктів виявлені при обох експеримен- неоднорідність розміру ліпосом; тальних патологіях різного генезу. Це свідчить про - збільшення індексу окислювання ліпосомате, що висока якість ліпосомального засобу льного продукту; (ФХ+КВ), підтверджена фізико-хімічними дослі- зменшення стабільності емульсії, відтвореної дженнями, створює найвищий політропний фарз ліофілізованого продукту (за візуальним розшамакологічний ефект. Така якість забезпечується руванням); при реалізації способу, що пропонується, згідно із - неповне включення КB до цільового продукту 9 76393 10 операціями і параметрами, які відрізняються від але лише при здійсненні способу, що пропонуєтьспособу-прототипу і описуються прикладами 1-3, а ся, якість цільового ліпосомального засобу саме: як фізіологічно активну речовину в ліпосо(ФХ+КВ) відповідає сталому високому рівню політмальному засобі використовують кверцетин, який ропного фармакологічного ефекту: розчиняють в спирті етиловому при температурі - достовірно зменшується тривалість клінічних (47-53)°С, видалення розчинника у вакуумі провопосттравматичних і запальних симптомів у хворих дять при температурі (42-50)°С, а масове співвідпісля екстракапсулярної екстракції катаракти в усіх ношення КB:лактоза складає (1:24):(1:30). При структурах ока (рогівки, райдужки, кон’юнктиви і недотриманні цих параметрів (приклади 4 і 5, а очного яблука), що вже на 4-у добу обумовлює також прототип - приклад 6) реалізація способу нормалізацію стану 100% пацієнтів (стандартна ускладнюється і пролонгується (таблиця 1), не терапія - 6-7 доба); забезпечуються фізико-хімічні характеристики, які - достовірно покращуються об'єктивні характеідентифікують цільовий продукт як стабільний ліристики серцевої діяльності у хворих з гострим посомальний засіб (таблиця 2), і не забезпечуєтькоронарним синдромом за параметрами електросся його висока політропна фармакологічна активтабільності міокарда, внутрішньосерцевої гемодиність (таблиця 3). наміки і морфо-функціонального стану серця, що Оптимальне сполучення технологічності спона закінчення спостереження обумовлює 100% собу, що пропонується, із стабільною фізиковиживаємість і позитивний прогноз пацієнтів; хімічною і встановленою у доклінічних досліджен- в 1.5-2 рази, у порівнянні з вихідними, покнях фармакотерапевтичною якістю і нешкідливістю ращуються кардіоспецифічні біохімічні показники у отриманого цільового продукту повністю відповітих же хворих, у т.ч. різко спадає вираженість сердає нормативним вимогам до створення і клінічноцевого запального процесу за вмістом маркерів го застосування лікарських засобів. Завдяки цьозапалення, причому, їх позитивна динаміка спому, цільовий продукт, отриманий за способом, що стерігається вже у найважливіші перші 12 годин пропонується, зареєстрований як новий препарат фармакотерапії гострого коронарного синдрому, в двох лікарських формах (очні краплі та ін’єкції на відміну від стандартної терапії і препарату порідля внутрішньовенного введення), що дозволені вняння (на тлі яких у ці терміни патологічні процедо клінічного застосування в офтальмології і карси ще підсилюються). діології [8]. Слід підкреслити, що, порівняно із стандартУ клінічних дослідженнях оцінка ефективності ною терапією (і препаратом порівняння ) застосуспособу, який пропонується, у порівнянні із протовання цільового продукту обумовило більш виразтипом, щодо фармакотерапевтичної активності ну позитивну динаміку всіх досліджених цільових продуктів була неможлива з огляду на офтальмологічних і кардіологічних показників, законодавчі і біоетичні фактори, які регламентують прискорення досягнення повноцінного відновлення умови клінічних випробувань і клінічне застосу(після екстракції катаракти) або клініковання лікарських препаратів. Тому для коректної лабораторної ремісії (гострий коронарний синдоцінки ефективності способу, який заявляється, ром) і відсутність подальшого прогресу патологічпри порівнянні клінічної активності створюваного ного стану. продукту (приклад 1) використано функціональні Побічні прояви у процесі лікування цільовим аналоги - стандартні фармакотерапевтичні схеми, продуктом спостерігали у 2 % хворих на гострий які реально застосовуються у лікуванні відповідних коронарний синдром (гіпотонія і алергічний висип), офтальмологічних і кардіологічних станів (але без але їх безпосередній зв’язок з препаратом клініципрепаратів, що містять кверцетин). Окремо в карсти оцінюють як "не встановлений". В офтальмодіологічній клініці нестабільної стенокардії порівлогічній клініці побічні прояви не відзначені. няння проведене також із парентеральним препаДані технологічного відтворення, фізикоратом, що містить КB [3]. хімічної ідентифікації, експериментальних фармаВ офтальмологічній клініці емульсію цільового кологічних досліджень і клінічної апробації дозвопродукту вводили 20 пацієнтам після оперативного ляють зробити висновок про те, що спосіб, що втручання з приводу екстракапсулярної екстракції пропонується має значні переваги перед прототикатаракти крапельно, 6 разів на добу з рівними пом при вирішенні задачі отримання стабільного проміжками часу у кон’юнктивальний мішок обох ліпосомального засобу, що має високу поліфункціочей протягом 7 днів. В кардіологічній клініці ціональну фармакологічну активність. Створена за льовий продукт вводили струйно, внутрішньовенно способом, що пропонується, ліпосомальна компо50 пацієнтам з установленим діагнозом нестабільзиція фосфатиділхоліну і кверцетину має цінні ної стенокардії/інфаркту міокарда без зубця Q в фармакологічні властивості, за широтою, рівнем і дозі 1.13г кожні 12 годин у перші 2 доби лікування, динамікою проявів яких при експериментальних потім по 1.13г один раз на добу ще протягом 5 діб. доклінічних дослідженнях вигідно відрізняється від Хворі з кожним з цих діагнозів були рандомізовані ліпосомального продукту, отриманого за спосоза станом, віком і статтю. Спостереження за хвобом-прототипом, а при застосуванні в клініці офрими проводили протягом 15 діб. тальмологічних і кардіологічних захворювань - від Висновки про клінічну ефективність цільового відомих стандартних схем фармакотерапії і препродукту отримані на підставі порівняння показнипарату порівняння, що містить КB. ків суб'єктивного стану хворих і об'єктивного, у т.ч. Отримані результати обґрунтовують доцільапаратурного і лабораторного обстеження (таблиність застосування способу, що пропонується, для ці 4 і 5). Проведені лікувальні заходи покращують реалізації шляху отримання сучасного ефективновсі аномально змінені показники стану пацієнтів, го ліпосомального засобу, який має широкий 11 76393 12 спектр фармакологічної дії. 4. Ebrahim S., Peyman G.A, Lee P. Application of Література liposomes in ophtalmology // Surv. Ophtalm. - 2005. 1. Middleton E., Kandaswwami C, Theoharides Vol.50, N 2. - p.167-182. Theoharis C. The effects of plant flavonoids on 5. Патент України №46528, МПК7 А61К9/127, mammalian cells: implication for inflammation, heart A61К31.14, A61К33/06, 2003. disease and cancer // Pharm.rev. - 2000. - Vol.52, N 6. Кверцетин АНД до Реєстраційного посвід4. - p.673-751. чення №Р.08.03/07178. 2. Патент РФ №2181051, МПК7 A61К33/22, 7. Лецитин-стандарт. АНД до Сертифікату A61К9/08, A61К31/351, A61К31/79, A61К31/198, державної реєстрації №96/03-300200000. 2002. 8. Ліпофлавон. Реєстраційне посвідчення 3. Патент України №38504, МПК7 А61К9/14, №UA/3581/01/01 від 14.08.05, №UA/3053/01/05 від А61К31/79, А61К31/455, 2001. 7.04.05 Таблиця 1 Параметри здійснення процесу отримання ліпосомального засобу за способом, що пропонується, і за способом-прототипом Співвідношення ФХ:ФАР* (мас.ч.) Розчинник: Спирт етиловий(ФХ) + хлороформ(ФАР) Спирт етиловий(ФХ,ФАР) Температура розчинення ФАР, ° С Температура видалення розчинника у вакуумі, ° С Співвідношення ФАР*:лактоза (мас.ч.) Час диспергування, хв. Оптична густина емульсії після диспергування Час фільтрації, год. 1 1:0.025 + 50 42 1:24 27 0.08 1.0 № прикладу Спосіб, що заявляється 2 3 4 1:0.010 1:0.100 1:0.009 + 47 45 1:27 27 0.09 1.2 + 53 45 1:30 30 0.12 1.4 6 Спосіб-прототип 5 1:0.112 1:0.025 + 55 50 1:32 36 0.15 1.7 + Кімнатн. 30-40 1:75 40 0.15 2 + 45 40 1:20 27 0.09 1.0 * ФАР - фізіологічно активна речовина у складі цільового продукту: кверцетин (спосіб, що заявляється), трис-[N-2,3диметилфенілантранілато]алюміній (спосіб-прототип). Таблиця 2 Характеристики якості цільового продукту, отриманого за способом, що пропонується, і за способом-прототипом, як ліпосомального засобу 1 Розмір ліпосом, нм Замкнені ліпосоми: Вміст 22Na (% від уведеного): вихідні ліпосоми переформовані ліпосоми Вихід 22Na, %: нормотонічні умови гіпотонічні умови Співвідношення ФХ:ФАР* у ліпосомах (мас.ч.): до гельфільтрації після гельфільтрації Включення ФАР до ліпосом, % (від уведеного) Індекс окислювання Стабільність емульсії ** (до розшарування), год ІЧ-спектри (см-1): Деформаційні коливання ОН, С-Н Площинні ОН+ С-Н коливання Позаплощинні коливання С-Н Агрегація тромбоцитів in vitro, % Осмоляльність емульсії***, мосмоль/кг 1 2 290±20 № прикладу (відповідно до таблиці 1) Спосіб, що заявляється 2 3 4 5 3 4 5 6 280±15 290±25 280±15 310±25 Спосіб-прототип 7 340±20 95.2 94.2 95.8 94.3 95.0 94.4 95.6 94.3 94.6 93.2 94.0 93.5 65 92 67 90 70 90 65 92 75 92 70 90 1:0.025 1:0.025 100 0.29 6.2 1:0.010 1:0.010 100 0.30 6.0 1:0.100 1:0.099 100 0.30 6.0 1:0.009 1:0.009 100 0.31 5.9 1:0.12 1:0.10 94 0.40 5.7 1:0.020 1:0.019 99 0.43 5.7 1650 1630 1590 1410 965 770 4.6±0.2 340 1650 1630 1590 1410 965 770 4.7±0.1 360 1650 1630 1590 1415 970 770 4.7±0.3 400 1650 1630 1590 1410 965 740 4.6±0.2 300 1650 1630 1590 1415 930 710 5.1±0.1 400 1640 1390-1350 5.2±0.2 445 * ФАР - фізіологічно активна речовина у складі цільового продукту: кверцетин (спосіб, що заявляється), трис-[N-2,3диметилфенілантранілато]алюміній (спосіб-прототип). ** Визначається для емульсії продукту, відтвореної шляхом емульгування вмісту одного флакону у 50мл стерильного ізотонічного розчину для ін’єкцій, яку зберігали при температурі 3-5°С. *** Для офтальмологічних засобів осмоляльність має бути в межах (214-434)мосмоль/кг. 13 76393 14 Таблиця 3 Ефективність способу, що пропонується, у порівнянні із способом-прототипом за показниками фармакологічної якості ліпосомального засобу в експериментальних моделях травматичного кератиту і артеріальної гіпертензії Показники фармакологічної активності Травматичний кератит Рівень агрегації тромбоцитів при АГ, % Ранозаживлення (площа рани, Запальна реакція ока (сума мм2) балів) 2 доба 5 доба 2 доба 5 доба 7 доба 11 доба Продукти реалізації способу, що пропонується 1 45.0±1.6 6.9±1.1 4.9 2.8 4.74±0.14 4.55±0.20 2 43.9±1.7 6.0±0.6 3.8 2.5 4.60±0.16 4.44±0.21 3 41.7±1.5 4.8±0.8 2.1 2.5 4.09±0.14 3.89±0.26 4 36.8±1.8 8.0±1.2 6.2 4.0 5.00±0.36 4.82±0.16 5 45.9±1.6 6.8±0.7 5.0 3.9 4.81±0.16 4.40±0.20 Продукт реалізації способу-прототипу 6 58.7 42.0 9.5 8.9 6.10±0.10 6.01±0.15 Інтактний контроль 0 0 4.0±0.10 Патологія 63.6±0.1 43.3±0.1 12.6 23.7 6.17±0.12 6.22±0.10 Продукт реалізації способу за прикладом Таблиця 4 Ефективність способу, що пропонується, за показниками лікувальної активності цільового ліпосомального продукту у хворих після екстракапсулярної екстракції катаракти з імплантацією задньокамерної ШОЛ у порівнянні із стандартної терапією Симптом Печія і свербіж в оці Відчуття чужорідного тіла Світло боязкість Циліарна болісність Набряк вік Гіперемія кон"юнктиви Набряк рогівки Набряк райдужної оболонки Тривалість регресії основних суб'єктивних та об'єктивних симптомів запального процесу (діб) при застосуванні: Продукт за способом, що пропонується Стандартна терапія 3.0±0.5 4.7±0.3 3.7±0.4 5.3±0.4 2.1±0.3 3.6±0.4 4.0±0.5 4.9±0.5 4.1±0.7 5.9±0.5 4.2±0.3 6.7±0.2 1.7±0.4 2.9±0.5 2.6±0.3 3.5±0.3 Таблиця 5 Ефективність способу, що пропонується, за показниками лікувальної активності цільового ліпосомального продукту у хворих з установленим діагнозом нестабільної стенокардії/інфаркту міокарда без зубця Q у порівнянні із стандартної терапією і препаратом порівняння 1 Параметри добового моніторингу ЕКГ Динаміка показників при застосуванні засобів: Продукт за способом, Стандартна терапія Препарат порівняння [3] що пропонується 2 3 4 Шлуночкова екстрасистолія (ШЕ), компл/доба 356.4±40.2 408.8±70.2 129.6±20.4 233.1±30.9 Шлуночкова тахікардія (ШТ), (3 і більше компл)/доба До лікування 9.4±2.5 10.7±5.9 Закінчення спостереження 1.8±0.9 5.2±1.6 Суправентрикулярна екстрасистолія (СВЕ), компл/доба До лікування 96.8±10.5 103.2±12.9 Закінчення спостереження 71.3±8.51 96.2±10.2 Суправентрикулярна тахікардія (СВТ), компл/доба До лікування 5.9±2.8 3.1±0.9 Закінчення спостереження 2.1±1.2 2.5±1.8 Депресія сегменту ST, епізод/доба До лікування 12.8±4.7 11.3±5.3 Закінчення спостереження 3.1±1.2 4.9±1.5 Параметри внутрішньосерцевої гемодинаміки і морфо-функціонального стану серця Кінцевий діастолічний об’єм лівого шлуночка (КДО), мл До лікування 147.4±5.0 140.8±3.4 Закінчення спостереження 128.2±2.8 166.1±6.9 Ліве передсердя, см До лікування 4.4±0.3 4.3±0.8 Закінчення спостереження 3.6±0.9 4.0±0.9 Фракція викиду лівого шлуночка, % До лікування 51.6±2.5 52.7±1.4 Закінчення спостереження 60.9±2.5 55.9±1.1 Специфічні біохімічні показники До лікування Закінчення спостереження 390.7±55.5 221.2±28.5 9.6±3.3 3.6±1.4 99.9±8.1 80.92±7.4 4.0±1.6 2.6±1.3 12.0±4.5 5.0±1.3 141.9±4.5 150.0±7.0 4.2±0.5 4.0±0.6 50.9±1.5 56.2±2.1 15 76393 16 Продовження таблиці 5 До лікування (0 год) Через 12 год Через 24 год До лікування Закінчення спостереження До лікування Закінчення спостереження Активність креатин-фосфокінази MB фракції (КФК-МВ), ммоль/л 35.74±6.10 40.92±10.00 23.92±4.92 149.54±20.69 15.77±2.85 67.83±4.73 Маркер запалення інтерлейкін-8 у сироватці (ІЛ-8), пг/мл 91.92±8.51 105.39±10.18 75.89±10.0 87.41±9.38 Маркер запалення С-реактивний протеїн сироватки (С-РП), мг/л 12.41±5.35 10.17±3.74 5.05±1.03 11.73±2.39 Комп’ютерна верстка Т. Чепелева Підписне 36.22±8.01 103.00±14.01 50.22±18.34 93.98±9.06 94.32±8.95 9.98±2.26 9.92±2.51 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601