Спосіб отримання ліпосомального гепатопротекторного засобу

Спосіб отримання ліпосомального гепатопротекторного засобу шляхом створення розчину суміші фосфатид илхоліну і трис-[ІЧ(2,3 диметилфеніл-антранілато]алюмшію) із масовим співвідношенням інгредієнтів 1 (0,01-0,1), висушування суміші, її емульгування у водному середовищі, диспергування емульсії з проміжковим додаванням лактози, стерилізуючої фільтрації і ліофільного висушування, який відрізняється тим, що фосфатидилхолін розчиняють у спирті етиловому, а трис-[І\І-(2,3-диметилфенілантранілато]алюмшій) - у хлороформі, лактозу вводять у вигляді водного розчину, співвідношення фосфатидилхолін водне середовище емульгування становить (мас ч) 1 (60-80), а перед стерилізуючою фільтрацією емульсію додатково фільтрують, послідовно зменшуючи розмір пор на фільтрах Винахід стосується нового способу отримання гепатопротекторного засобу, що є ліпосомальною композицією певних співвідношень двох речовин, а саме - природного фосфоліпіду - фосфатидихоліну (ФХ) о о ВООЗ епідеміологічним характером патолопй цього органу Через несприятливі екологічні, санітар СНл - С/г — Crfі CO CO { (снг\ СН; - координаційної сполуки алюмінію з Nдиметилфеніл-антраніловою кислотою (трис[N(2 3-діметилфенілантранілато]алюмшію) С00' СЯ, СН, і призначений для використання у фармації і медицині Актуальність і прагматичний характер проблеми розробки нових способів отримання ефективних гепатопротекторів та їх застосування у лікуванні захворювань печінки обумовлені визнаним но-ппєнічні, ДІЄТОЛОГІЧНІ та ІНШІ фактори, ця про блема є актуальною і для України в структурі гастроентерологічних захворювань частота хронічного активного гепатиту перевищує 30% з трансформацією у цироз печінки - 8% при СТІЙКІЙ тенденції до зростання цих негативних показників Разом з тим, запити фармакотерапії печінки випереджають реальні можливості їх задоволення, оскільки більшість відомих способів отримання гепатопротекторів не забезпечують якості цільового продукту та схем його застосування, адекватних поліморфному характеру гепатоуражень орієнтації на цілеспрямований гепатоспецифічний транспорт, забезпечення протекції мембран гепатоцитів і відновленню функції печінки, протидії формування ппербілірубінемм Внаслідок цього якість отримуваних цільових продуктів не відповідає вимогам оптимального транспорту і метаболізму в печінці, а також не забезпечує спрямований вплив на явище аутоагресм, яке відіграє суттєву роль у розвитку первинних гепатоуражень і може призвести до їх клінічної еволюції у цироз печінки Ці недоліки характерні для більшості способів одержання індивідуальних сполук і композицій, реалізованих як гепатопротектори, на основі компонентів метаболічних процесів, субстанцій рос 00 ю (О 46528 линного походження і кортикостероїдів (суміші Спосіб передбачає змішування розчинів ФХ і комамінокислот, пептидів, пуринових і піримідинових плексу АІІ_з у різних органічних розчинниках, видаструктур, ЛІПІДІВ і вітамінів, СИНОНИМІЧНІ препарати лення розчинників випаровуванням у вакуумі з із плодів расторопши під торговими марками Леодержанням плівки, її емульгування у водному галон, Карсил, Силібор, препарат "Есенціале" та середовищі, диспергування при високому тиску з ін) проміжковим додаванням лактози у вигляді водного розчину, поетапну фільтрацію на фільтрах із Критеріям ефективності у створенні оптимальрозміром пор, який послідовно зменшується до них засобів терапії печінки адекватні способи кінцевой стерилізуючої фільтрації отриманої емуотримання ліпосомальних продуктів, які містять льсії, розлив у пляшки, люфильне висушування та фосфоліпіди - основні компоненти ЛІПІДНОГО матгерметичне закривання рикса клітинних мембран Відомий спосіб отримання ліпосомальної комДалі наводимо конкретні приклади отримання позиції на основі природного фосфатидилхоліну ліпосомальної композиції за способом, що пропо(яєчного лецитину) - ФХ і (трис-[І\І(2,3нується, і способом-прототипом диметилфеніл-антранілато]алюмшію) (АІІ_з), яка Приклад 1 Заявляємий об'єкт Точну наважку має антитоксичну гепатозахисну дію [1] Ліпосома500г фосфатиділхоліну, ФХ, ("лецитинове масло" льна організація і природа продукту реалізації цьо"лецитин-стандарт" [2], випарений до постійної го способу забезпечує гепатоспецифічність його ваги) розчиняють у 250мл спирту етилового До фармакокінетики, спрямований транспорт і тропотриманого розчину додають розчин точної наважність до кисню ки 6,75г комплексу АИз (субстанція "Антраль" [3]) у 600мл хлороформу Суміш розчинів переносять у Спосіб отримання ліпосомальної композиції, круглодонну скляну колбу, яку вміщують на ротаякий здійснюється ВІДПОВІДНО до [1], обраний проційний випаровувач, і видаляють розчинники у тотипом заявляемого об'єкту - способу як найвакуумі при температурі ЗО - 40°С По закінченні більш близький його аналог за сумою ознак, а сапроцесу випаровування розчинників у колбу протяме суттю і ПОСЛІДОВНІСТЮ здійснення основних гом 5хв пропускають інертний газ Ліпідну плівку із операцій і заходів, ХІМІЧНОЮ природою компонентів стінок колби КІЛЬКІСНО знімають порціями приблиз- фосфоліпіду і комплексу алюмінію, ліпосомально по 250мл стерилізованої води Кожну порцію ною організацією цільового продукту і близькістю утвореної рідкої системи переносять в одну скляну його фармакотерапевтичних проявів ємкість об'ємом 20л Після повного зняття плівки у Спосіб за прототипом передбачає змішування скляну ємкість додають стерилізовану воду до розчинів ФХ і комплексу АІІ_з у хлороформі, випазагального об'єму рідини 15л, струшують і переровування розчинника, емульгування отриманої мішують до отримання однорідної емульсії суміші компонентів у водному середовищі, гомогенізацію з проміжковим додаванням допоміжної речовини лактози, стерилізуючу фільтрацію і люфильне висушування отриманої емульсії Однак спосіб отримання за прототипом передбачає деякі операції та заходи, які ускладнюють його реалізацію і можуть сприяти відносному зниженню якості ліпосомального продукту Поперше, це пов'язане із застосуванням для розчинення компонентів виключно хлороформу, яке може провокувати часткове окислення ліпосомального продукту ще у процесі його отримання Подруге, введення у процесі гомогенізації в емульсію лактози в порошкоподібному стані без упевненості в и розчинності погіршує стабільність системи і може сприяти руйнуванню ліпосомальної структури По-третє, процес одностадійної стерилізуючої фільтрації водної емульсії (стандартний стерилізуючий фільтр 0,22мкм ) вимагає дуже тривалого часу, а при великих об'ємах емульсії, у т ч при промислове доцільних обсягах отримання продукту, процес фільтрації в одну стадію взагалі унеможливлюється Все це знижує ефективність способупрототипу щодо процесу його відтворення, а також щодо стабільності та якості цільового продукту як гепатопротектора Задачею винаходу є спрощення процесу отримання і підвищення якості ліпосомального засобу за показниками стабільності і специфічної гепатопротекторної ефективності Реалізація цієї задачі досягається запропонованим способом отримання ліпосомальної композиції на основі фосфатиділхоліну і комплексу АІІ_з Емульсію переносять у реактор гомогенізатора високого тиску a-Laval, додають 12л стерилізованої води і піддають диспергуванню при тиску бОМПа і температурі 40 - 45°С з контролем оптичної густини рідини, що гомогенізується При досягненні показника оптичної густини не більше 0,15 (довжина хвилі 540нм, товщина шару поглинання = 0,5см) до отриманої емульсії додають стерилізований розчин 505г лактози (молочний цукор фармакопейний) у Зл води для ІН'ЄКЦІЙ Продовжують диспергування в реакторі гомогенізатора високого тиску до досягнення показника оптичної густини емульсії не більше 0,15 (довжина хвилі 540нм, товщина шару поглинання = 0,5см) Отриману емульсію послідовно фільтрують на установці Millipore, спочатку через мембрану 0,65мкм, потім - 0,22мкм, а далі піддають стерилізуючій фільтрації та дозовано розливають в асептичних умовах у скляні флакони на 50мл Флакони з емульсією піддають інтенсивному заморожуванню до -70°С та проводять ліофільне (сублімаційне) висушування в установці ТГ-50 Після висушування флакони продувають інертним газом, закривають і герметизують флакони із ліпосомальним продуктом в асептичних умовах У прикладах 2 - 5 операції та заходи за способом, що заявляється, здійснюють ВІДПОВІДНО ДО прикладу 1 Зміни відображено утаблиці 1 Цільовий продукт є легкою аморфною масою білого або світло-жовтого кольору з характерним запахом Приклад 6 - Прототип за [1] Точну наважку 50г фосфатиділхоліну, ФХ [], розчиняють у 250мл хло 46528 роформу До отриманого розчину додають розчин - за характеристичним поглинанням в УФ обточної наважки 5г комплексу АІІ_з у 250мл хлороласті при довжинах хвиль (282 ± 2)нм і (349 ± 2)нм форму Розчин суміші вміщують у круглодонну та характеристичною смугою випускання в спектрі скляну колбу, ретельно перемішують і видаляють флуоресценції (457 ± 5)нм у порівнянні із стандаррозчинник на роторному випаровувачі у вакуумі том - комплексом АІІ_з, при температурі ЗО - 40°С На закінчення процесу - спектофотометричним методом за величивипаровування у колбу пропускають інертний газ ною оптичної густини при довжині хвилі (349 ± В колбу, на стінках якої утворилась ліпідна плівка, 2)нм у порівнянні із стандартом - комплексом АІІ_з додають 1250мл стерилізованої води Колбу Спектри поглинання реєстрували на приладі Speструшують і перемішують систему, що знаходитьcord UV-Vis, спектри флуоресценції на приладі ся у ній, до повного переходу плівки у водну фазу Hitachi MPF-4 з отриманням емульсії Ефективність способу, що пропонується, за включенням вихідних компонентів в ліпосомальну Емульсію піддають двократному диспергуванкомпозицію і статус цільового продукту як замкненю по 10 хвилин в реакторі гомогенізатора високо7 них ліпосом (ФХ + АІІ_з) із внутрішньою водною го тиску a-Laval при тиску 6,5 10 Па і температурі порожниною доведені ЗО - 35°С з 5-хвилинною перервою між циклами гомогенізації До отриманої емульсії додають 32г - методом діаліза емульсії люфілізованого лактози (молочний цукор фармакопейний), ретепродукту в фізіологічному розчині з радіоізотопним льно перемішують, а потім проводять обробку ремаркером 2 Na в нормотонічних (проти фізіологічакційної системи протягом 5 - 7хв в реакторі гомоного розчину) або ГІПОТОНІЧНИХ (проти бідистильогенізатора високого тиску a-Laval ваної води) умовах в апараті "Віскинг туб 1/32" із визначенням різниці вмісту мітки 22Na у ВИХІДНІЙ Отриману емульсію піддають стерилізуючій емульсії і після видалення її частини, яка не вклюфільтрації на установці Milhpore та дозовано розчилась у ліпосоми, ливають в асептичних умовах у скляні флакони на 25 - ЮОмл Флакони з емульсією піддають інтен- методом гель-фільтрацм емульсії на колонці сивному заморожуванню до -70°С та проводять із Сефадексом G-25 (елюат - фізіологічний розчин) ліофільне (сублімаційне) висушування Після виіз контролем виходу ліпосомального продукту за сушування в асептичних умовах флакони з ліпохарактеристичною смугою поглинання в області сомальним продуктом продувають інертним газом, 540нм, яка відображає дисперсний склад ліпосом закривають і герметизують Згідно ІЗ результатами фізико-хімічної ідентифікації заявляємий спосіб забезпечує якість цільоЗа результатами відтворення способу за прового-продукту як ліпосом (ФХ + АІІ_з) із супрамолетотипом отримують продукт у вигляді легкої амокулярними зв'язками між компонентами композиції рфної маси білого або білого із жовтуватим ВІДТІНКОМ кольору з характерним запахом - компоненти композиції (приклади 1 - 3) включаються у ліпосомальну структуру і КІЛЬКІСНО співВ таблиці 1 наведені параметри операцій спопадають дота після гель-фільтрацм, собу отримання продукту, що пропонується, и способу прототипу В таблиці 2 узагальнено фізико- КІЛЬКІСТЬ мітки 22Na співпадає у вихідних і пеХІМІЧНІ характеристики, що ідентифікують ЦІЛЬОВІ реформованих ліпосомах, швидкість виходу 22Na продукти, отримані за запропонованим способом і зростає у ГІПОТОНІЧНИХ умовах, способом-прототипом, як ліпосомальну компози- за даними ХІМІЧНОГО аналізу, ТШХ, УФ і флуцію (ФХ + АІІ_з) Для проведення досліджень ЦІЛЬОоресцентної спектроскопії склад і природа ФХ і ВІ продукти використовували у вигляді емульсії, АІІ_з в ліпосомах зберігаються і збігаються з такивідтвореної шляхом додавання у флакон із люфіми для стандартів лецитину і комплексу АІІ_з лізованим продуктом стерильного ІЗОТОНІЧНОГО Таким чином, результати незалежних фізикорозчину натрію хлориду та адекватної формі фарХІМІЧНИХ досліджень свідчать про те, що продукт, макотерапевтичного застосування ліпосомального отриманий за способом, що пропонується, за прицільового продукту кладами 1 - 3 є стабільною композицією замкнених ліпосом із внутрішньою водною порожниною при Ефективність заявляемого способу за якістю масовому співвідношенні інгредієнтів ФХ АІІ_з від та КІЛЬКІСНОЮ ідентифікацією в цільовому продукті (1 0,01) до (1 0,1) Відтворення способу, що проЛІПІДНОГО компоненту (ФХ) оцінена понується, при ЗМІНІ параметрів, порівняно із таки- методом тонкошарової хроматографії на ми у прикладах 1 - 3 (тобто за прикладами 4 і 5), а пластинці СОРБФІЛ за хроматограмою розчину також за способом-прототипом обумовлює усклацільового продукту в метанолі, на якій основна днення реалізації самого способу і зниження якості пляма жовтого кольору виходить на рівні основної цільового продукту, а саме плями розчину стандартного зразка лецитину, - спектофотометричним методом за величи- суттєве пролонгування часу фільтрації ліпоною оптичної густини при довжині хвилі 820нм сомальної емульсії (більш ніж на порядок), продуктів кольорової реакції сухого залишку після - збільшення розміру і неоднорідність диспервипаровування емульсії продукту (при температурі сного складу ліпосом, 105°С), обробленого пергідролем в присутності - нестабільність відтвореної після люфілізацм сірчаної кислоти, з аммонію молібдатом емульсії ліпосом, яка проявляється у різкому зменшенні часу до її візуального розшарування, яке у Ефективність заявляемого способу за якісною свою чергу, унеможливлює визнання якості продута КІЛЬКІСНОЮ ідентифікацією в цільовому продукті кту як лікарського препарату ВІДПОВІДНО ДО задачі комплексу АІІ_з оцінена у розчині цільового продуквинаходу, оцінено якість цільового продукту - ліпоту в системі розчинників (етанол-хлороформсомальної композиції (ФХ - АІІ_з), який отримано за вода) 8 46528 способом, що пропонується (приклади 1 - 5), за ця 3) Це свідчить про те, що саме вираженістю гепатозахисного ефекту у порівнянні запропонований спосіб забезпечує створення стаіз такою для продукту, триманого за способом більного продукту, ліпосомальна структура якого прототипом зберігається значно довше, ніж у продукту за способом-прототипом, руйнування якого в емульсії Гепатозахисну дію продуктів визначали у мовідбувається вже через 1 годину після відтворенделі експериментального гепатиту, викликаного ня введенням комбінації гепатотропного ксенобютика ССЦ з наркотичним токсином — етанолом [4] При цьому цільовий продукт, створений за Модель відтворювали за наступною схемою проспособом, що пропонується, саме за прикладами 1 тягом 4 діб експериментальним тваринам (білі - З (параметри реалізації яких забезпечують оптищури обох статей масою 180 - 200г) підшкірно 1 мізацію процесу і стабільну якість продукту) забезраз на добу вводили ССЦ (0,4 мл/ЮОг маси тіла), і печує достовірну нормалізацію всіх досліджених потім через 3 години - етанол (40% розчин по 1,2 показників функції печінки Це свідчить про те, що мл/ЮОг маси тіла) Тестовані засоби вводили за 1 висока якість ліпосомальної композиції (ФХ - АІІ_з), год до введення ксенобютика протягом 4 діб, а підтверджена фізико-хімічним тестуванням, обупотім ще 3 доби Тварин декапітували на 7 добу мовлює найвищий гепатозахисний ефект У всіх експериментальних групах (у т ч контЦьому висновку відповідають результати рольний інтакт) було по 12 тварин Перед застосуморфологічних досліджень Аномальні зміни струванням люфілізовані продукти емульгували у стектури печінки експериментальних тварин контрорильному фізіологічному розчину і вводили льної групи повністю відповідають картині пошивнутрішньочеревне в дозах 15мг/кг, що з фармакореного гепатиту лізис мембран гепатоцитів, кінетичної точки зору є адекватним внутрішньолокальна некротизація, повнокров'я центральних венному клінічному застосуванню препаратів Для вен, мікроциркулярні розлади, зниження вмісту порівняльної оцінки ефективності способу, що глікогену і СДГта ш пропонується, і способу прототипу стосовно кореНа тлі збереження основних патоморфолопчляції стабільності цільових продуктів із гепатозаних ознак токсичного гепатита при застосуванні хисною активністю експеримент проводили параліпосомальної композиції, отриманої за способомлельно для ліпосомальних емульсій, які вводили прототипом, спостерігається послаблення некрочерез різні проміжки часу після відтворення через тизацм гепатоцитів, периваскулярної інфільтрації, 0,5 и 2 години, ВІДПОВІДНО часткової деструкції мембран Спостерігається тенденція до нормалізації вмісту ЛІПІДНИХ включен Ефективність способу, що пропонується, у поу цитоплазмі, СДГ і глікогену рівнянні із прототипом оцінювали за впливом ліпосомальної композиції (ФХ - АІІ_з) на структурний і При цьому морфологічна картина виявила пеморфологічний стан печінки тварин з експерименреваги цільового продукту, отриманого за спосотальним гепатитом Основні біохімічні, морфологібом, що пропонується, які відбивають його здібчні і ГІСТОЛОГІЧНІ показники визначали стандартниність позитивно впливати на глибокі патологічні ми методами [5 - 7] зміни при токсичному гепатиті Оцінка ефективності способу, що заявляється, - лізис мембран гепатоцитів відзначається за показниками гепатозахисної активності продуклише на окремих ділянках, ту наведена у таблиці 3 Експеримент показав, що - мітохондрм рівномірно розподілені по всьому вибрана модель токсичного гепатита обумовлює об'єму гепатоцитів, їх зовнішня оболонка не дерізкі зміни функціонального стану і морфологічної структурована, картини печінки тварин Проведені лікувальні за- КІЛЬКІСТЬ ЛІПІДНИХ включень, вміст глікогена і ходи покращують практично всі показники, аномаСДГ характерні для норми, льно змінені внаслідок гепатоураження, однак ли- ультраструктура мікроциркуляторного русла ше внаслідок реалізації способу, що пропонується, має типову будову якість цільової ліпосомальної композиції (ФХ Оптимальна якість цільового продукту за рівАІІ_з) відповідає більш високому рівню інтегральнонем інтегрального гепатозахисного ефекта забезго гепатозахисного ефекту печується при реалізації способу, що пропонується, згідно із операціями і параметрами, які - підвищенню показників антиоксидантного відрізняються від способу-прототипу і описуються статусу (зменшення вмісту малонового альдепда, прикладами 1 - 3, а саме при розчиненні фосфаМДА, при зростанні рівню цитохрома Р-450), тиділхоліну у спирті етиловому, а трис-[І\І-(2,3- зниженню специфічної пперферментемм і діметілфенілантранілато]алюмшію) у хлороформі, синдрому цитоліза (зменшення активності фермевведенні лактози у вигляді водного розчину, при нтів АЛТ і ACT), масовому співвідношенні фосфатиділхолін водне - активацію репаративних і синтетичніх процесередовище емульгування 1 (60 - 80), а також із сів в ураженій печінці (зростання вмісту глікогену, додатковим фільтруванням емульсії перед стерибілку і ЛІПІДІВ) лізуючою фільтрацією При недотриманні цих паПереваги способу, що пропонуються, стосовно раметрів (приклади 4 і 5, а також прототип - прирівня інтегрального гепатозахисного ефекту проклад 6) реалізація способу ускладнюється і дукту особливо виражені при порівнянні показників пролонгується (таблиця 1), не забезпечуються активності ліпосомальної емульсії, яку перед ввефізико-хімічні характеристики, які ідентифікують денням зберігали різні проміжки часу На відміну цільовий продукт як стабільну ліпосомальну комвід способу прототипу, активність продукту, ствопозицію (таблиця 2), а також знижується рівень реного за способом, що пропонується, не залейого специфічної гепатозахисної активності (табжить від терміну попереднього зберігання (табли 46528 10 ними антитілами класів CD+, рівень циркулюючих імунних комплексів (ЦІК), малоновий діальдепд (МДА) і ДІЄНОВІ кон'югати (ДК) в сироватці крові, перекісний гемоліз еритроцитів, ферменти системи антиоксидантного захисту - каталазу (КТ) і супероксиддисмутазу (СОД), показники енергетичного метаболізму (АТФ, АДФ, лактатдегідрогеназу, ЛДГ) При ПГ визначальним показником був рівень непрямого білірубіну Оцінка ефективності способу, що заявляється, за показниками гепатозахисної активності продукКЛІНІЧНОГО застосування ту при клінічному застосування наведена у таблиці 4 Проведені лікувальні заходи покращують показВІДПОВІДНО ДО задачі винаходу, при клінічному ники стану хворих, аномально змінені при ХГ або застосуванні оцінено якість цільового продукту ПГ, однак лише внаслідок реалізації способу, що ліпосомальної композиції (ФХ - АІІ_з), який отримапропонується, якість цільової ліпосомальної комно за способом, що пропонується, за вираженістю позиції (ФХ - АІІ_з) відповідає сталому високому гепатозахисного ефекту В цьому випадку поріврівню інтегрального гепатозахисного ефекту (табняння із продуктом, отриманим за способомлиця 4) прототипом, було неможливим, виходячи із законодавчих і етичних міркувань, оскільки технологіч- достовірно зменшується тривалість КЛІНІЧНИХ ні недоліки способу-прототипу, а також нестабільсимптомів при ХГ і суттєво зростає КІЛЬКІСТЬ пацієність і відносно знижена фармакологічна нтів із задовільним і хорошим станом, активність продукту унеможливлювали його клініч- в 2,4 - 4,0 разів зменшується рівень аномане застосування Тому для коректної оцінки рівня льного ПОЛ при ХГ і, ВІДПОВІДНО, зростає ендогенефективності способу, що пропонується, при поріний антиоксидантній захист, внянні клінічної функціональної активності ство- відзначається позитивна динаміка імунних рюваного продукту використано стандартні лікарпоказників при ХГ (підвищення клітинного імунітету ські засоби, які реально застосовуються у КЛІНІЦІ в 1,7 - 2 рази), гепатоуражень (фосфоліпідний препарат Есенціа- має місце суттєве (в 1,6 - 2,8 рази) підвиле (Natterman, Німеччина) у сполученні із спазмощення показників енергетичного метаболізму при літиками і ферментними засобами) ХГ при досягненні їх збалансованості (кореляція вмісту АТФ і АМФ), Під КЛІНІЧНИМ спостереженням знаходились 128 дорослих хворих на хронічний гепатит (ХГ) - при ПГ відбуваєтеся значне зниження анотоксичного або криптогенного генезу віком від 23 мально підвищеного різня білірубіну (в 1,7 рази) із до 58 років, а також 14 ПІДЛІТКІВ ІЗ веріфікованим тенденцією до достовірної нормалізації цього подіагнозом пігментного гепатозу (ПГ), основним казника проявом якого є некон'югована ппербілірубшемія Слід підкреслити, що, порівняно із стандартХворі із кожним із цих діагнозів були розподілені в ною терапією, застосування цільового продукту дві групи, рандомізовані за характером патологічобумовлювало більш виразну позитивну динаміку ного процесу, віком і статтю При ХГ основну групу всіх досліджених показників, прискоренння досягсклали 62 особи, які отримували продукт, отриманення повноцінної клініко-лабораторної ремісії ХГ і ний за способом, що пропонується (приклад № 1) відсутність подальшого прогресування патологічпо 325мг, внутрішньовенне крапельно у вигляді ного процесу в печінці На відміну від стандартної емульсії у стерильному фізіологічному розчині, терапії, при ПГ цільовий продукт сприяє швидкому ДВІЧІ на день протягом двох тижнів у поєднанні із досягненню клінічної компенсації хворих дітей із підтримуючою терапією (стандартні спазмолітики і різким зменшенням жовтухи та астенічного синдферментні засоби) Контрольну групу співставленрому ня склали 66 осіб, які щоденно отримували внутУ процесі лікування не спостерігалось жодного рішньовенно фосфоліпідний препарат Есенціале у випадку токсичного, алерпзуючого чи іншого побісполученні із тими ж спазмолітиками і ферментчного прояву введення ліпосом (ФХ + АІІ_з), отриними засобами При ПГ основну групу склали 7 маних за способом-прототипом осіб, які отримували продукт, отриманий за спосоОтримані дані фізико-хімічної ідентифікації, бом, що пропонується (приклад № 1) - по 325мг, експериментальних фармакологічних досліджень внутрішньовенно крапельно у вигляді емульсії у та КЛІНІЧНОГО застосування дозволяють зробити стерильному фізіологічному розчині, раз на день висновок про те, що спосіб, що пропонується, має протягом 10 днів Контрольну групу співставлення суттєві переваги перед прототипом при вирішенні склали 7 осіб, які щоденно отримували препарат задачі спрощення шляху отримання стабільного фенобарбітал у ВІДПОВІДНИХ ВІКОВИХ дозах як індукефективного ліпосомального засобу, який має гетор мікросомальних ферментів (наголосимо, що патозахисну дію Створена за способом, що продо сьогодні у КЛІНІЧНІЙ практиці відсутні специфічні понується, ліпосомальна композиція природного засоби фармакотерапії некон'югованої ппербіліруфосфатид ілхоліну і (трис-[І\І(2,3бінемії) діметилфенілантранілато]алюмшію) має високі ЦІННІ гепатозахисні властивості, за рівнем яких при При ХГ, поряд із загальноклінічними і стандарекспериментальному гепатиті вигідно відрізняєтьтними лабораторними обстеженнями, визначали ся від ліпосом (ФХ + АІІ_з), отриманих за способомкомплекс імунологічних і біохімічних показників [5, прототипом, а при клінічному застосуванні - від 6] (показники клітинного імунітету з моноклональлиця 3) Стабільне сполучення технологічності способу, що пропонується, із високою фізико-хімічною і встановленою за доклінічними даними фармакотерапевтичною якістю і нешкідливістю отриманого цільового продукту відповідає нормативним вимогам до регламентації процесу створення і КЛІНІЧНОГО застосування лікарських засобів Завдяки цьому цільовий продукт, отриманий за способом, що пропонується, міг бути зареєстрований як новий лікарський гепатозахисний засіб [8], дозволений до 11 46528 12 відомих схем фармакотерапії часного ліпосомального засобу терапії патолопй Все це робить спосіб, що пропонується, реапечінки різного генеза льною основою для отримання ефективного суТаблиця 1 Параметри процесу отримання ліпосомального гепатопротекторного засобу (ФХ + АІІ_з) заспособом, що пропонується, і за способом-прототипом № прикладу СпосібПараметр Спосіб, що заявляється прототип 1 2 3 4 5 6 Співвідношення (ФХ+ АІІ_з) (мас ч) 1 0,0135 1 0,04 1 0,1 1 0,009 1 0,12 1 0,1 Співвідношення хлороформ етанол (% об ) 70 30 80 20 90 10 70 30 100 0 100 0 Співвідношення ФХ водне середовище емуль1 60 1 60 1 80 1 50 1 90 1 25 гування (мас ч) Спосіб введення лактози + + + + - водний розчин, 16,8% - порошок + + Оптична густа емульсії після диспергування, А = 0,10 0,12 0,15 0,10 0,18 0,26 540нм ПОСЛІДОВНІСТЬ фільтрації емульсії - фільтр 0,65мкм + + + + - фільтр 0,22мкм + + + + - стерилізуюча фільтрація + + + + + + Час стерилізуючої фільтрації, год 1,2 2 25* 19* 38* 1,5 Час ліофільного висушування, год 106 100 100 100 100 100 Примітка фільтрів Вказаний час стерилізуючої фільтрації передбачає перерви у процесі фільтрації із зміною Таблиця 2 Характеристики якості цільового продукту за способом, що пропонується, за способом-прототипом як ліпосом (ФХ + АІІ_з) № прикладу (ВІДПОВІДНО до таблиці 1) СпосібПараметр Спосіб, що заявляється прототип 1 2 3 4 5 6 Розмір ліпосом, нм 300 ±10 320 ±10 340 ± 20 380 ±10 420 ± 20 420 ± 20 Характеристики замкнених ліпосом 100 0 - мітка ^Na (% від введеної) ВИХІДНІ ЛІПОСОМИ 95,0 95,0 94,3 95,0 92,2 92,0 переформовані ліпосоми 93,6 94,0 93,5 94,0 90,0 90,1 - вихід ^Na, % нормотонічні умови 67 65 70 75 70 70 ГІПОТОНІЧНІ умови 90 92 90 92 90 90 Об'єм водної порожнини, мл/мМ ФХ 0,25 0,24 0,26 0,19 0,32 0,34 Співвідношення компонентів у ліпосомах, ФХ AIL3 - до гель-фільтрацм 1 0,014 1 0,04 1 0,1 1 0,009 1 0,12 1 0,1 - після гель-фільтрацм 1 0,014 1 0,04 1 0,1 1 0,008 1 0,12 1 0,1 Спектральні характеристики - поглинання при А= 540нм11 0,12 0,15 0,10 0,18 0,26 А = 349нм21 - флуоресценція, 457 нм 21 Стабільність відтвореної емульсії ліпосом 5,8 5,9 5,7 0,8 0,7 1,5 (час до розшарування), год 3| Примітки 11 Визначається для емульсії продукту, відтвореної шляхом емульгування вмісту одного флако ну у 50мл стерильного ІЗОТОНІЧНОГО розчину натрію хлориду 21 Визначається для розчину продукту (вміст 13 14 46528 одного флакону) в системі розчинників (етанолхлороформ-вода) 97 1 2 (% об ) 3| Визначається для емульсії продукту, відтво реної ВІДПОВІДНО до примітки 1, яку зберігали при температурі, що не перевищує 4°С Таблиця З Ефективність способу, що пропонується, за показниками гепатозахисної активності цільового ліпосомального продукту (ФХ + АІІ-з) у порівнянні із прототипом в експериментальній моделі токсичного гепатиту Показники гепатозахисної активності за синдромами Оксидантний Цитоліза Синтетичний Продукт реаліЦито-хром РЗагальний зації способу МДА, АЛТ, ACT, Загальні 450 (31 білок, Глікоген за прикладом ммоль/г (± ммоль/г (± ммоль/г (± ЛІПІДИ, г/л (± нмоль/мг (± мг/100 (± мг/л (± 0,02) 0,5) 0,2) 0,1) 0,2) 10) 0,2) Продукти реалізації способу, що пропонується 1(1) 238 24 0 2,0 0,9 0,17 5,8 10,0 1(2) 242 23,9 2,1 0,9 0,16 5,8 9,8 2(1) 240 23,3 2,0 0,8 0,18 5,8 10,0 2(2) 242 23,6 2,1 1,0 0,18 5,7 10,0 3(1) 252 26,5 1,9 0,9 0,16 5,9 10,1 3(2) 255 25,8 2,1 1,0 0,15 5,7 10,0 4(1) 200 33,0 2,6 1,1 0,10 4,9 8,8 4(2) 156 57,1 3,3 0,08 3,8 7,7 1,5 5(1) 211 36,0 2,8 1,4 0,15 5,4 9,2 5(2) 175 51,0 3,5 0,10 4,0 7,9 1,5 Продукт реалізації способу за прототипом 6(1) 226 36,0 2,2 1,0 0,15 5,4 9,1 6(2) 150 56,2 4,0 1,6 0,09 3,7 7,4 Контроль Інтакт 260 23,5 0,8 0,16 5,9 10,3 1,7 Патологія 110 75,0 4,3 2,0 0,06 2,7 6,4 Примітки Помер прикладу (1) - показник відповідає введенню цільового продукту протягом 0,5 години після відтворення ліпосомальної емульсії із люфілізованого продукту Номер прикладу (2) - показник відповідає введенню цільового продукту через 2 години після відтворення ліпосомальної емульсії із люфілізованого продукту (3) Визначено у ізольованій фракції мікросом гепатоцитів Таблиця 4 Ефективність способу, що пропонується, за показниками лікувальної гепатозахисної активності цільового ліпосомального продукту (ФХ + АІІ_з) у хворих на хронічний гепатит і пігментний гепатоз у порівнянні із стандартною терапією Після лікування Симптоми і показники До лікування Продукт за способом, Стандартна терапія що пропонується Тривалість КЛІНІЧНИХ симптомів при ХГ (діб) Слабкість Не реєстр 6,2 ±0,3 11, 4 ±0,6 -"Підвищена втомлюваність 6,2 ±0,3 10,2 ±0,5 -"Порушення сну 6,2 ±0,3 16,6±1,1 Головний біль 6,2 ±0,5 16,8 ±1,1 -"-"Важкість в епігастрм 6,0 ±0,5 10,5 ±0,5 -"Спленомегалія 6,0 ±0,4 10,8 ±0,8 -"БОЛІСНІСТЬ краю печінки при пальпації 5,1 ±0,3 10,8 ±0,8 -"Диспептичні скарги 5,5 ±0,4 10,6 ±0,5 Показники ПОЛ та системи антиоксидантного захисту при ХГ МДА, мкмоль/л * 9,9 ±0,6 4,2 ±0,3 6,6 ±0,4 15 46528 ДК, мкмоль/л * 19,2 ±0,8 7,5 ±0,4 Перекисний гемоліз еритроцитів, % * 5,5 ±0,4 16,3 ± 1,2 КГ МО мг/НЬ * 325 ±12 282 ±11 СОД МО мг/НЬ * 16,3 ± 1,2 24,8 ±2,2 Показники клітинного імунітету при ХГ CD-3, % 64,9 ±2,4 50,1 ±1,8 10% 0,60 ± 0,02 1,10 ±0,03 CD-4, % 30,5 ±1,8 43,7 ±2,7 10% 0,37 ± 0,03 0,74 ± 0,05 CD-8, % 21,5 ± 1,3 18,3 ± 1,1 10% 0,22 ±0,01 0,37 ± 0,03 CD-4 / CD-8 1,67 ±0,05 2,03 ± 0,03 Циркулюючі імунні комплекси, загальні, 4,70 ±0,14 2,60 ±0,18 г/л Показники енергетичного метаболізму при ХГ АТФ, ммоль/л * 235,2 ±12,7 499,7 ± 8,4 АМФ, ммоль/л * 91,6 ± 1,7 57,2 ±1,2 ЛДГ, ммоль/год л * 3,26 ±0,12 2,65 ±0,14 Білірубшемія у дітей з пігментним гепатозом * * Рівень білірубіну в крові, мкмоль/л ( ± 47,4 28,3 0,4) Примітка * Норма становить МДА - 3,3 мкмоль/л, ДК 6,5 мкмоль/л, ПГЕ 3,9%, КТ - 358 МО мг/НЬ, СОД - 28,3 МО мг/НЬ, АТФ - 645,1 ммоль/л, АМФ - 53,5 ммоль/л, Л Д Г 2,07 ммоль/год л * * на 5-й день після початку введення препарату (норма = 20,5 мкмоль/л) Література 1 Патент України № 14596 А, МКІ А61К9/127, А61КЗЗ/06 Спосіб одержання ліпосомальної композиції, що має антитоксичну гепатозахисну дію / Г С Григор'єва, О В Стефанов, Н Ф Конахович, С М Дроговоз, В В Слишков, Ю М Краснопольський, Ю П Теміров//Опубл 25 04 97 Бюл 16 Продовження таблиці 4 9,8 ±0,5 10,2 ±0,5 295 ±14 18,8 ± 1,5 56,3 ±2,6 0,90 ± 0,08 38,8 ±2,2 0,62 ± 0,09 20,6 ±1,6 0,31 ±0,02 1,75 ±0,07 3,23 ± 0,80 348,6 ±10,1 84,7 ±1,4 3,0 ±0,15 44,0 №2 2 Лецитин-стандарт ФС 42У-200/20-285-97 3 Антраль-субстанція ФС 42У-2/3 8-676-00 4 Саратиков А С , Новожеева Т Г , Венгеровский А И - Вопр Мед химии, 1983 - № 2, С 2326 5 Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред В В Меньшикова - М Медицина, 1987 -365 с 6 Руководство по клинической лабораторной диагностике Ч 1 - 3 - Киев, Выща школа, 1991 7 Меркулов Г А Курс патоморфологической техники-Л Медгиз, 1961 -189с 8 Реєстраційне свідоцтво України "Люлів" № Р 08 00/02205 від 15 08 00 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71