Спосіб ранньої діагностики передчасного старіння судин при поєднаній терапевтичній патології

Реферат: Спосіб ранньої діагностики передчасного старіння судин при поєднаній терапевтичній патології включає проведення загальноприйнятих клініко-інструментальних обстежень та біохімічного дослідження крові, вимірювання та оцінку діагностичних критеріїв передчасного старіння судин. Передчасне старіння судин оцінюють у пацієнтів на неалкогольну жирову хворобу печінки в поєднанні з субклінічним гіпотиреозом: як ранні діагностичні критерії передчасного старіння судин додатково, як маркери пошкодження ендотелію судинної стінки підраховують кількість десквамованих циркулюючих ендотеліальних клітин (ЦЕК) у збагаченій тромбоцитами плазмі крові та вимірюють вміст васкулоендотеліального фактора росту (ВЕФР) у сироватці крові, як маркер клітинного старіння вимірюють відносну довжину теломір у клітинах букального епітелію за допомогою методу кількісної полімеразної ланцюгової реакції у реальному часі, оцінку вибраних ранніх діагностичних критеріїв здійснюють у порівнянні із встановленими їх нормальними значеннями, і, якщо кількість десквамованих ЦЕК перевищує норму (7,5 кл  1,8/100мкл) не менш, ніж на 20 %, вміст ВЕФР перевищує середнє значення норми (127 пг/мл) не менш, ніж у 1,5 рази, а визначена відносна довжина теломір менше 0,8, діагностують передчасне старіння судин на ранній стадії. UA 121761 U (12) UA 121761 U UA 121761 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі медицини, а саме до терапії, кардіології, гастроентерології, ендокринології і може бути використана для ранньої діагностики передчасного старіння судин при поєднаній терапевтичній патології, зокрема у хворих на неалкогольну жирову хворобу печінки в поєднанні з субклінічним гіпотиреозом на молекулярногенетичному рівні. Пошук критеріїв передчасного старіння серцево-судинної системи обумовлені, з однієї сторони, світовою тенденцією до підвищення частки осіб старше за працездатний вік та особливостями демографічної ситуації в світі, зокрема в Україні, з іншої - нарощуванням процесів передчасного старіння серед осіб зрілого та навіть молодого віку. Ці обставини примушують по-новому розглядати структуру захворюваності та смертності з точки зору сучасних знань про фізіологічне та передчасне старіння [Nick Townsend, Lauren Wilson, Prachi Bhatnagar, Kremlin Wickramasinghe, Mike Rayner, Melanie Nichols. Cardiovascular disease in Europe: epidemiological update 2016 // European Heart Journal, First published online., 2016]. В даний час проблема коморбідного перебігу захворювань залишається важливою як для науки, так і для практичної охорони здоров'я. Відомо, що коморбідний перебіг захворювань, зокрема неалкогольної жирової хвороби печінки (НАЖХП) з субклінічним гіпотиреозом (СГ), змінює їх стандартну клінічну картину, потребує особливих підходів до діагностики та лікування. В останні роки ретельна увага дослідників привернута до пошуку спільних механізмів розвитку та прогресування поєднаної патології. Однією з патогенетичних ланок розвитку захворювання у цієї категорії хворих вважають порушення функціонального стану ендотелію, зокрема передчасне старіння серцево-судинної системи [Lampka M. Circulating endothelial cells in coronary artery disease/ M.Lampka, Z.Grobczewska, E.Jendryczka-Mackiewicz// Kardiologia Polska. - 2010. - Vol. 68 (10). - P. 1100-1105]. Оцінка стану судинної стінки у різних вікових групах у практично здорових пацієнтів та при захворюваннях, їх сполученнях мало вивчені, відсутні єдині підходи до того, які критерії дають вірогідні дані про істинний вік індивідуума, що диктує необхідність удосконалення способів ранньої оцінки передчасного старіння судин при поєднаній патології, зокрема при НАЖХП неалкогольній жировій хвороби печінки з СГ. Наявні різні неінвазивні методики з використанням клініко-інструментальних та біохімічних діагностичних критеріїв для оцінки ступеня судинного старіння у людей, зокрема передчасного старіння серцево-судинної системи, які використовують у клінічних дослідженнях, та для порівняння даних спостережень з урахуванням контрольних значень для «нормального старіння» населення. Так відомі дослідження [Башук В.В. Новое в изучении процессов преждевременного старения сердечно-сосудистой системы // Фундаментальне исследования. - № 7. - 2014. - С. 903], у які було включено 253 пацієнтів, 122 - середнього віку та 131 пацієнт похилого віку. Під час дослідження здійснювали оцінку впливу процесів старіння у пацієнтів з патологією серцевосудинної системи (ССС) (пацієнти з артеріальною гіпертензією (АГ); пацієнти з АГ, ішемічною хворобою серця (ІХС)). Як клініко-інструментальних діагностичних критеріїв оцінювали біологічний вік (БВ) та старіння серцево-судинної системи за значенням товщини інтима-медіа (ТКІМ) загальних сонних артерій. За результатами проведених досліджень виявлено, що у пацієнтів з АГ темп старіння ССС підвищується, у 1,6 разів на фоні гіперхолестеринемії у порівнянні з пацієнтами з ізольованою гіперхолестеринемією. При приєднанні іншої терапевтичної патології (АГ та ІХС) темпи старіння підвищуються ще у 1,5 разів. При цьому аналіз ультразвукових методів оцінки темпів старіння ССС показав, що ехографічний метод біологічного віку за оцінкою ТКІМ є скоріше орієнтовним та може бути рекомендований для скринінгових досліджень діагностики темпів старіння у групі здорових осіб, але недоліком можна вважати те, що цей метод не може використовуватися при ізольованій та поєднаній терапевтичній патології. Відомі також дослідження [Гомыранова Н.В., Метельская В.А., Ткачева О.Н., Озерова И.Н., Перова Н.В., Стражеско И.Д. Биохимические маркеры атерогенных нарушений в системе липопротеинов: связь с биологическим и хронологическим старением сосудов // Атеросклероз и дислипидемии. - 2014. - № 4 (17). - С. 14-19.], вибрані за прототип, у яких досліджували чи залучені порушення у системі ліпопротеїнів у зміни показників судинного старіння, пов'язаного чи не пов'язаного з хронологічним віком людини. Обстежено 202 пацієнта (жінки та чоловіки), 30-75 років без клінічних проявів атеросклерозу, які не одержували регулярної терапії серцевосудинними препаратами. В залежності від біологічного віку судин (еластичні або жорсткі) та хронологічного віку (роки) пацієнти були розподілені на 4 групи. Як біохімічні діагностичні критерії у сироватці крові вимірювали концентрацію ліпідів та аполіпопротеїнів (апо) АІ і В, використовуючи рутинні лабораторні методи. Швидкість розповсюдження пульсової хвилі 1 UA 121761 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (ШРПХ) > 10 м/с визначали як показник жорсткості судин. Субфракціонний спектр ліпопротеїнів низьких щільностей визначали з використанням «Липопринт-системы» (Quantimetrix Lipoprint system, США). За результатами досліджень у групі умовно молодих з жорсткими судинами у порівнянні з особами з еластичними судинами виявлений більш високий рівень загального холестерину (ЗХС) та ХС ліпопротеїнів низької щільності (ЛНІД). А у групі умовно старих пацієнтів з жорсткими судинами, у порівнянні з еластичними судинами рівень тригліцеридів (ТГ) виявився вищим, а рівень ЛП (а) виявився більш низьким. Таким чином виявлено: підвищена жорсткість судин у хронологічно старих пацієнтів асоціюється з підвищеною долею більш дрібних підфракцій ліпопротеїнів проміжної щільності (ЛПЩ), за розміром близьких до ліпопротеїнів низької щільності (ЛНЩ). Більш високі рівні загального холестерину (ЗХС) та ХС ліпопротеїнів низької щільності (ЛНЩ) в групі молодих з жорсткими судинами сприяють порушенню функціонального стану ендотелію, передчасному старінню серцево-судинної системи та розвитку атеросклерозу, що підвищує серцево-судинний ризик. Недоліками прототипу є те, що у дослідженнях: - не здійснюють оцінку порушення функціонального стану ендотелію на ранній стадії, що обумовлено відсутністю оцінки морфологічних ознак стану ендотелію, що знижує вірогідність оцінки передчасного старіння серцево-судинної системи; - не враховують пацієнтів з поєднаною патологією, зокрема хворих на неалкогольну жирову хворобу печінки (НАЖХП) в поєднанні з субклінічним гіпотиреозом (СГ), що знижує ефективність оцінки серцево-судинного ризику та унеможливлює вирішення питань щодо оптимізації підходів до лікування, первинної та вторинної профілактики цієї соціально значимої соматичної поєднаної патології. Незважаючи на достатню вивченість клінікопатогенетичних механізмів ізольовано перебігаючих НАЖХП та СГ, що ізольовано перебігають, залишається нез'ясованим, які взаємовпливи будуть мати ланцюги патогенезу при їх коморбідному перебігу. Задача корисної моделі - підвищити вірогідність діагностики передчасного старіння судин у пацієнтів з поєднаною патологією, зокрема у хворих на неалкогольну жирову хворобу печінки в поєднанні з субклінічним гіпотиреозом, шляхом вибору таких діагностичних критеріїв, кількісна оцінка яких дасть змогу більш вірогідно та інформативно дослідити патогенетичні зміни у судинах на молекулярно-генетичному рівні. А це дозволить на ранній стадії вибирати більш адекватну та персоніфіковану тактику лікування та своєчасно здійснювати превентивні заходи з використанням сучасних класів рекомендацій і рівнів доказовості. Задача вирішується у запропонованому способі ранньої діагностики передчасного старіння судин при поєднаній патології, який включає проведення загальноприйнятих клінікоінструментальних обстежень та біохімічного дослідження крові, вимірювання та оцінку діагностичних критеріїв передчасного старіння судин. Ознаки, що відрізняють корисну модель від прототипу, є такі: - передчасне старіння судин оцінюють у пацієнтів на неалкогольну жирову хворобу печінки в поєднанні з субклінічним гіпотиреозом; - як ранні діагностичні критерії передчасного старіння судин додатково, як маркери пошкодження ендотелію судинної стінки підраховують кількість десквамованих циркулюючих ендотеліальних клітин (ЦБК) у збагаченій тромбоцитами плазмі крові та вимірюють вміст васкулоендотеліального фактора росту (ВЕФР) у сироватці крові; - Як маркер клітинного старіння вимірюють відносну довжину теломір у клітинах букального епітелію за допомогою методу кількісної полімеразної ланцюгової реакції у реальному часі; - оцінку вибраних ранніх діагностичних критеріїв здійснюють у порівнянні із встановленими їх нормальними значеннями; - і, якщо кількість десквамованих ЦЕК перевищує норму (7,5 кл1,8/100 мкл) не менш, ніж на 20 %, вміст ВЕФР перевищує середнє значення норми (127 пг/мл) не менш, ніж у 1,5 рази, а визначена відносна довжина теломір менше 0,8, діагностують передчасне старіння судин на ранній стадії. Вибір діагностичних критеріїв обумовлений наступним. Відомо, що судинний ендотелій є поверхнею, що динамічно змінюється, його структурні і функціональні властивості реагують на різні стимули, як локальні, так і системні. Порушення балансу функцій ендотелію і як наслідок - цілісності ендотеліального моношару є підсумком дії різних патогенних чинників серцево-судинного ризику, що знаходяться в системному і тканинному кровотоці [Воробьева Е.Н., Шумахер Г.И., Хорева М.А., Осипова И.В. Дисфункция эндотелия - ключевое звено в патогенезе атеросклероза // Российский кардиологический журнал. - 2010. - № 2. - С. 84-91; Марков Х.М. и соавт. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия // Кардиол. - 2005. - №12. - С.62-72]. Відомо також, що розвиток серцево 2 UA 121761 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 судинних ускладнень реалізується через процес генералізованої дисфункції ендотелію судин, яка супроводжується порушенням цілісності ендотеліального моношару. На клітинному рівні пошкодження ендотелію пов’язують з порушенням експресії молекул міжклітинної адгезії та прискореним апоптозом ендотеліальних клітин. Ендотеліоцити, що втратили зв'язок з базальною мембраною в результаті порушення міжклітинних взаємодій і ініціації процесів апоптозу, потрапляють в кров, де створюють пул десквамованих циркулюючих ендотеліальних клітин (ЦЕК) [Николаев К.Ю., Гичева И.М., Лифшиц Г.И., Николаева А.А. Микроциркуляторная эндотелийзависимая сосудистая реактивность и основные факторы риска. // Бюллетень СО РАМН, № 4 (122), 2006 г. - С. 63-66 ]. Відомо, що фактори росту важливі для регулювання різноманітних клітинних процесів. Конкретний ефект на клітину та тип клітин, на які діє фактор росту, залежить від конкретного фактора. Васкулоендотеліальний фактор росту (ВЕФР) стимулює диференціювання кровоносних судин (ангіогенез). ВЕФР здатний впливати на стан ліпідного обміну - знижувати токсичність ліпопротеїдів низької щільності. Наводяться дані про зв'язок рівнів ВЕФР з показниками ліпідного обміну та факторами запалення. У даний час показано, що ВЕФР, відіграючи важливу роль у підтримці стабільності ендотелію, у фізіологічному неоангіогенезі, водночас бере участь у процесах неоваскуляризації у патологічних ситуаціях, зокрема в зростанні атеросклеротичної бляшки [Гавриленко Т.И., Рыжкова Н.А., Пархоменко А.Н. Сосудистый эндотелиальный фактор роста в клинике внутренних заболеваний и его патогенетическое значение // Український кардіологічний журнал. - 2011. - № 4.- С. 87-95]. З рівня сучасних знань відомо, що теломіри - кінцеві ділянки хромосом, котрі були запропоновані як маркери процесу біологічного старіння клітин. Виявлено, що відносна довжина теломір скорочується з кожним поділом клітин, а швидкість скорочення довжини теломір пов'язують з впливом окисного стресу та запалення. Останні роки активно вивчають фактори, які пов'язані з ризиком розвитку серцево-судинних захворювань, які можуть впливати на скорочення довжини теломір. Виявлена наявність зв'язку скорочення довжини теломір лейкоцитів відповідно ступеня розвитку та прогресування атеросклерозу. Відомо також, що при нормальному старінні судин, пов'язаному з віком, має місце процес підвищення ригідності артерій (атеросклероз), який обумовлений зменшенням кількості еластину та збільшенням кількості колагену, а також якісними змінами в структурі стінки артерії, які пов'язані з порушеннями вазодилятації та обумовлені особливостями ендотелію. Визначено, що біологічне старіння з віком сприяє накопиченню пошкоджень ендотелію через різноманітні механічні, гемодинамічні та імунологічні механізми. Вік-асоційовані зміни судин є не лише результатом гормонально-метаболічних змін, але й наслідком патогенетичного каскаду у межах пошкодження теломірної ДНК, а укорочення теломір в букальному епітелію, може бути використано як маркер біологічного старіння клітин на ранніх етапах [G.D. Fadeenko., E.V. Kolesnikova., A.S. Popovych. Role of telomere length in the development of cardiovascular diseases// J. NAMS Ukraine. - 2015. - V. 21, № 1. - P. 28-34]. Новим є те, що вибір та кількісна оцінка вибраних ранніх діагностичних критеріїв (кількість десквамованих ЦЕК, вміст ВЕФР, відносна довжина теломір) при поєднаній патології, зокрема при поєднанні НАЖХП з СГ, забезпечить можливість одержати додаткову інформацію про особливості порушення морфофункціонального стану судинного ендотелію, прискорення процесу вік-залежного скорочення відносної довжини теломір та системні порушення, і на цій підставі діагностують передчасне старіння судин. А це дозволить на ранній стадії передбачати більш адекватну та персоніфіковану тактику лікування та профілактику з використанням сучасних класів рекомендацій і рівнів доказовості. Дослідження за запропонованою корисною моделлю були проведені в ДУ "Національний інститут терапії імені Л.Т. Малої НАМН України". Обстежено 83 хворих (32 чоловіків (38,5 %) та 51 жінка (61,5 %)), віком (48±6,52) років. В усіх пацієнтів діагностовано НАЖХП та субклінічний гіпотиреоз (СГ). Пацієнти були поділені на 2 групи: 1 група (n=41) пацієнти с НАЖХП, 2 група (n=69) пацієнти НАЖХП в поєднанні з СГ. Контрольна група - 25 практично здорових осіб. За проведеною кількісною оцінкою вибраних діагностичних критеріїв (згідно з власними даними оригінальними дослідженнями) у 37 пацієнтів на поєднану патологію діагностовано передчасне старіння судин на ранній стадії Математичну обробку даних здійснено на персональному комп'ютері з використанням статичної програми "Statistica", версія 8.0. Для оцінки відмінностей між групами при розподілі, близькому до нормального, використовували критерій t-Стьюдента. Відмінності вважали статистично значущими при р