Спосіб моделювання затримки статевого дозрівання у самок

J*/$: 6 \ G 09 В 23/28 Спосіб моделювання затримки статевого дозрівання у самок. Винахід відноситься до біології та медицини і може бути ви користаний в експериментальній ендокринологи. За сучасною класифікацією причиною затримки пубертатогенезу є пошкодження центральної або периферичної ланок репродуктивної системи СІ]. На сьогодні відома модель затримки статевого дозрівання у самок, яка утворена шляхом використання інтенсивних фізичних навантажень [21 або г іпокі нетичним стресом С 31 до періоду пубертаці'к Однак в обох випадках розвиток патології починається з пош кодження гіпоталамо-гіпофізарної системи [3,41. Як наслідок цього виникає порушення структури і функції яєчників С 2,41Затримка статевого дозрівання периферичного оваріального , геневу може бути викликана пригніченням ендокринної функції го над. Це досягається за допомогою введення активних інгібіторів аїх>матази, які знижують синтез і секрецію естрогенів [5,61. Але застосування інгібіторів ферментів передбачає безпосереднє втручання у стероідогенез, щэ приводить до побічного ефекту, а саме, підвищується рівень попередників естрогенів - андрогенів. Збільшення концентрації останніх у жіночому організмі не гативно впливає на репродуктивну систему. Задача винаходу - підвищення точності способу за рахунок наближення моделі до природно і патолог 11 затримки статевого дозрівання оваріального генезу без прямого втручання у функціональну активність гонад. 2 Поставлена задача вирішується тим, що самкам щурів у препубертатному періоді вводять внутрішньої*!'язаво кісточкову олію у дозі 0,2 мл одноразово або щоденно на протязі 5 днів. Для вибору оптимально! дози кісточкової олії були сформовані 3 групи інтактних самок шурів по ЗО тварин у кожній групі, які до 30-денного віку не мали статистично вірогідних відмінностей за показниками соматичного розвитку. Групу 1 складали контрольні інтактні щури, групи 2 і 3 - піддослідні тварини, яким у період препубертату вводили внутрішньом'язово кісточкову олію у дозі 0,2 мл одноразово у 35-денному віці або щоденно на протязі 5 днів з 31 до 35 днів життя. У інтактних (гр. 1) і піддослідних (гр.;:( 3) тварин аналізували темп статевого дозрівання (табл. і;, гонадотропну функцію гіпофізу та функціональну активність яєчників (табл. 2) і динаміку маси тіла (табл. 3). У інтактних самок шурів (гр. 1) відкриття вагінальної мембрани (початкова фаза пубертації) і перша овуляція (яка відбувається» як наслідок встановлення позитивного зворотнього зв'язку) були у 100 Z випадків до й-місячного віку (табл. 1). У піддослідних тварин обох груп (гр.2, 3) строки статевого дозрівання значно запізнювались у часі. Затримка темпів пубертації у цих щурів мала дозозалежний характер В умовах одноразо. вого введення кісточкової олії (гр.2) початок і завершення пубертації відбувались на 45 % і 59 % відповідно, пізніше, ніж у інтактних самок, Гїри тривалому введенні олії (гр. 3) строки відкриття піхви і овуляції у щурів зростали на 91 Z і 106 1 відповідно. Значно підвищувався інтервал між початком і завер шенням пубертації у групах піддослідних тварин, особливо в умовах тривалого застосування олії (гр. 3). У ЗО % випадків у цих з щурів після відкриття вагіни овуляція не спостерігалась до 4-місячного віку. Аналіз показників гормонального статусу у периферичній крові піддослідних самок (гр. 3) у 40-денному віці (саме перед початком очікуваної овуляції) продемонстрував вірогідне зниження рівня тестостерону і естрадіолу (табл. 2). Зменшення концентрації цих стероїдів на фоні нормального рівня їх попередника - прогестерону свідчить про пригнічення ендокринної функції яєчників що , пов'язано з гальмуванням оваріального фолікулогенезу(на гісто логічних препаратах яєчників - значне зменшення кількості фолікулів, які зростають) у щурів, оброблених кісточковою олією. Бміет гонадотрояініа у гіпофізах ПІДДОСЛІДНИХ тварин був у межах вікової норми. ЇІри вивченні динаміки маси тіла самок щурів показана вірогідна затримка соматичного розвитку тварин, яким у препубертаті вводили кісточкову олію на протязі 5 днів (гр. 3). Приріст маси тіла у цих самок до 3-міеячного віку відповідав такому у 60-денних інтактних щурів (табл. 3). Таким чином, спосіб моделювання затримки статевого дозрівання у самок, який пропонується, не порущуючи центральної ланки репродуктивної системи (відсутність впливу на гонадотропну функцію гіпофізу), виявляє гальмуючу дію на периферичному рівні , а саме: пригнічує функціональну активність яєчників (гальмує оваріальний фолікулогенез і знижує рівень тестостерону та ест рад і олу). Гіпофункція гоішд в недостатньою секрецією анаболічних стероїдів затримує фізичний розвиток (масу тіла) та темп пубертатогенезу (відкриття піхви, встановлення позитивного зворотнього зв'язку та першу овуляцію). Все вищевшсладене наближає спосіб до природної патології 4 затримки статевого дозрівання у жіночому організмі внаслідок розвитку гіпофункції яєчників. Приклад 1. Самці щура з нормальним соматичним розвитком і масою тіла у 30-денному віці 40 г на 35 день одноразово вводили внутрішньом'язово кісто.чкову олію у дозі 0,2 мл. У 2- і 3-місячному віці маса тіла була 79,4 г і 142,3 г відповідно. Відкриття ваг іни відбувалось у 61-денному віці, а перша овуляція на 72 день життя. Спостерігали затримку статевого дозрівання (табл. 1). ^ . Приклад 2. У самки щура маса тіла у ЗО-денному віці була 42 і\ 3 Зі до 35 дня тварині шрденно внутрішньом'язово вводили кісточкову олію у дозі 0,2 мл> Маса тіла у 2- і 3-місячному віці була 55 г і 85 г відповідно. Відкриття ваг і ни та овуляція зареєстровані на 72 і 120 дні відповідно, тобто спостерігалась затримка фізичного (табл. 2) і статевого (табл. 1) розвитку. Приклад 3. Самці щура з масою тіла у ЗО-денному віці 40 г з 31 до 35 дня щоденно внутрішньом'язово вводили кісточкову олію у дозі 0г 2 мл. До 3-міеячиого віку маса досягала лише 65 г (табл.2). Відкриття вагіни відбулось на 118 день життя, але овуляція не настала (табл. 1). Приклад 4. У самки щура з масою тіла (на ЗО день) 39 г після щоденного введення в 31 до 35 дня кісточкової олії у дозі 0,2 мл маса тіла у 40-денному віці складала 42 г. На 40 день самку забивали У периферичній крові визначали рівні статевих гормонів радіоімунологічтш методом, а у гошгенаті гіпофізу вміст гонадотропінів методом біологічного тестування. Рівні тестостерону і естрадіолу у периферичній крові були 0,38 нмоль/л і 0,11 нмоль/л відповідно, up було нижче, ніж у контролі (табл. 2). Вміст гонадотропная у гіпофізі - 1,04 мкг, тобто у межах 5 вікової норми. На гістологічних зрізах яєчників зареєстрована незначна кількість фолікулів, що зростають. Таблиця 1.- Гіоказники статевого дозрівання самок щурів після введення кісточкової олії у препубертаті Гру- Характер Статиспа і період тичний (вік)дії показник 1 Кон тр оль , інтактні 2 Кісточкова олія, 35 день Строки (дні життя) статевого дозрівання Відкриття Перша Інтервал між поваг і ни овуляція чатком і завершенням пубертації п М + т п М+m Р 1-2 23 41,30+1,16 44.30+1,35 22 Кісточко- п ва олія, М + m 31-35 дні Р 1-3 LX 20 3,70+0,62 18 18 60, QOj-3,09 71,39+3,19 12,00+2,27