Спосіб отримання гексапептиду

1. Спосіб отримання гексапептиду формули Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg шля хом пептидного синтезу у розчині, що передбачає постадійне нарощування пептидного ланцюга з'єднанням у певній послідовності захищених чи незахищених амінокислот або пептидів з подальшим вилученням тимчасових захисних гр уп після кожної стадії з'єднання, виділенням та очисткою проміжних пептидів, повторенням процесу до отримання частково або повністю захищеного гексапептиду, вилучення усіх захисних гр уп, виділення та хроматографічну очистку кінцевого пептиду, який відрізняється тим, що в процесі нарощування пептидного ланцюга отримують і виділяють проміжні пептиди загальної формули Вос-AA...AA-CPG, де АА...АА - ланцюг від двох до шести сусідніх амінокислотних залишків з послідовності Tyr(SPG)-d-Ala-Gly-Phe-LeuArg(SPG), де Tyr(SPG)=Туr, Tyr(Bzl), Arg(SPG)=Arg, Arg(NO2), CPG=OMe, ONb z, причому одна з захисних гр уп Вос чи CPG може бути відсутня, з'єднання захищених амінокислот чи пептидів проводять карбодіімідним методом, а приєднання незахищеного аргініну за допомогою дифенілфосфорилазиду, очистку проміжних пептидів проводять екстракцією, перекристалізацією або, при необхідності, хроматографічно, очистку кінцевого пептиду 2. Спосіб проводять за перекристалізацією та тим, що в п. 1, який відрізняється методами процесі синтезу, іонної хроматографії чи їх зворотно-фазової, починаючи з нітробензилового ефіру лейцину, приєднанням Вос-захищених аміпоєднанням. нокислот послідовно отримують проміжні пептиди загальної формули Boc-AA-Leu-ONbz, де АА=Phe, Gly-Phe, d-Ala-Gly-Phe, Tyr(Bzl)-d-Ala-Gl y-Phe, далі після вилучення захисних ONbz- та Bzl-груп і приєднання незахищеного аргініну отримують проміжний гексапептид Boc-Tyr-d-Ala-Gl y-Phe-Leu-Arg. 3 36558 Корисна модель стосується нового способу одержання біологічно активного гексапептиду Tyrd-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg, що належить до синтетичних аналогів природного поліпептиду енкефаліну, який широко використовується у фармації та медицині під назвою даларгін [1]. На даний час при промисловому освоєнні найбільш використовуваними є два способи синтезу пептидів - у розчині та на полімерній смолі (твердофазний синтез). Переваги синтезу у розчині - дешеве обладнання для синтезу, можливість легкої масштабізації, можливість очистки проміжних продуктів, що покращує чистоту кінцевого продукту, та облегшує його подальшу очистку. Більшість пептидів, що виробляються промисловістю у даний час, є продуктами синтезу у розчині [2]. Переваги твердофазного способу - висока швидкість синтезу та можливість отримання великих пептидів. Недоліки - необхідність складного обладнання, низька чистота кінцевого продукту (обумовлена неможливістю очистки проміжних продуктів), потреба у токсичних реагентах, таких, як рідкий аміак та фтороводень для відщеплення пептиду від смоли на кінцевій стадії. При синтезі можливо як приєднання одиничних захищених чи незахищених амінокислот (лінійний метод), так і приєднання захищених чи незахищених ланцюгів амінокислот (конвергентний метод синтезу). Компонент реакції з'єднання, який має незахи щену аміногрупу, називають амінокомпонентом, компонент, який має незахищену карбоксильну груп у називають карбоксикомпонентом. Однією з найбільш поширених схем синтезу пептидів є ортогональна Boc/Bzl схема [2]. Третбутилоксикарбонільна (Вос) та бензильна (Bzl) групи є захисними групами, одну з яких можливо видаляти у присутності іншої при проведені синтезу. Вос гр упа відщеплюється за допомогою ацидолізу. Бензильна група відщеплюється за допомогою гідрогенолізу у присутності каталізатора. Серед захисних груп карбоксильної групи найважливішими є складні ефірні (наприклад, метокси-, етокси-, трет-бутокси-, бензокси-захисні групи) та заміщені гідразидні групи (бензилоксикарбоніл-, третбутилоксикарбоніл-, тритил-, фенілгідразиди). Для переведення захищених пептидів у вільні використовують спеціальні методи деблокування, які засновані на реакціях, що забезпечують видалення різних захисних груп за умови зберігання усі х пептидних зв'язків ланцюга пептиду. Приклади деблокування: видалення Z-захисної групи каталітичним гідрогенолізом, Вос-захисної групи - м'яким ацидолізом, Fmoc-захисної групи - дією розведених розчинів органічних основ. При синтезі у розчині велике значення має розчинність компонентів реакції. При використанні стратегії максимального захисту (коли усі функціональні групи пептиду мають захисні групи) проміжні сполуки мають високу розчинність у малополярних розчинниках, що дозволяє вести реакцію у 4 висококонцентрованих розчинах, та сприяє більш повному проведенню реакції. Метод нарощування ланцюга за допомогою дициклогексилкарбодііміду при поєднанні з додаванням 1-гідроксибензтриазолу для подавлення рацемізації є одним з найбільш поширених методів синтезу у розчині. При використанні цього способу як правило отримують високі виходи, до того ж усі проміжні компоненти є стабільними сполуками, навіть при кімнатній температурі, та не мають тенденції до гідролізу на відміну від, наприклад, пнітрофенілових ефірів, яки потребують особливих умов зберігання, є чутливими до світла та навіть до слідів вологи. Дифенілфосфорилазид є перспективним зшиваючим агентом у хімії пептидного синтезу. Реакція йде по азидному механізму. Тамада зі спів. та інші [3-5] довели можливість використання дифенілфосфорилазиду для утворення амідного зв'язку при проведенні пептидного синтезу без втрати оптичної чистоти, а також при наявності бокової незахищеної гідроксильної групи. При синтезі біологічно активних пептидів важливо застосування таких умов реакцій, при яких риск рацемізації є найменшим. Рацемізації сприяють як сильні основи, так і сильні кислоти, висока температура та проведення реакції у полярні розчинниках. При інших рівних умовах ступінь рацемізації при проведенні реакції у такому полярному розчиннику як диметилформамід вищий, ніж у дихлорметані, ацетонітрилі, тетрагідрофурані, етилацетаті, тоді як використання суміші тетрагідрофуран / диметилформамід (1:1) ступінь рацемізації такого ж рівня, як для малополярних розчинників [6, 7]. Найбільш важливі засоби виключення рацемізації: 1) нарощення пептидного ланцюга у напрямку від С-кінця до N-кінця із застосуванням Nзахисних груп уретанового типу (наприклад, Z-, Вос-, Fmoc- та ін.); 2) активація N-захищених пептидних фрагментів з С-кінцевими залишками проліну або гліцину; 3) використання азидного методу (за відсутності надлишку третинної основи та підтримки низької температури при проведенні реакції); 4) застосування активованих ефірів амінокислот, аміноліз яких протікає через перехідний стан, що стабілізований водневими містками (наприклад, ефірів, що утворені з N-гідроксипіперидином та 8-оксихіноліном); 5) використання карбодіімідного методу з додаванням N-гідроксисполук або кислот Л'юіса. Відомий спосіб [чеський патент CZ 7038 U1] отримання пептиду з формулою Tyr-d-Ala-GlyMe(Phe4)-Leu-Arg методом твердофазного синтезу на п-метоксибензгідраміновій смолі нарощуванням ланцюга з Вос-захищених амінокислот, відщепленням від смоли безводним фтороводнем та кінцевою очисткою методом ВЕРХ. Проте твердофазний синтез для серійного виробництва коротких пептидів є більш кошторисним, ніж синтез у розчині. Використання безводного фтороводню на кінцевій стадії потребує створення спеціальної установки та умов для безпечної експлуатації. 5 36558 Найбільш близьким до заявленого є спосіб отримання гексапептиду Tyr-d-Ala-Gly-Phe-LeuArg, що заснований на лінійному синтезі у розчині починаючи з С-кінця [авторське свідоцтво SU 1348343 А1]. За цим способом спочатку незахищений аргінін з'єднують з п-нітрофеніловим ефіром карбобензоксилейцину у диметилформаміді протягом доби при кімнатній температурі, проміжний захищений пептид виділяють, перекристалізовують з ефір у, видаляють захисну карбобензоксигруп у током сухого бромоводню у трифтороцтовій кислоті, незахищений пептид виділяють, перекристалізовують з ефіру, обробляють іонообмінною смолою у водному розчині до видалення бромідіонів, та виділяють азеотропною перегонкою з ізопропанолом. Повторюють цю процедуру, приєднуючи поступово п-нітрофенілові ефіри Z-Phe, ZGly, Z-d-Ala, Z-Tyr(Bzl), і таким чином отримують пептид Z-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gl y-Phe-Leu-Arg. Відщеплюють всі захисні групи каталітичним гідрогенолізом у оцтовій кислоті з додаванням анізолу, у присутності паладієвого каталізатору, випарюють розчинник, очищують отриманий кінцевий пептид спочатку перекристалізацією з ефіру, потім хроматографічно на колонці із сефадексом у градієнті піридин-ацетатного буфера 0,05М-1,0 М з подальшим фракціонуванням. Цей спосіб має деякі недоліки. Використання диметилформаміду як розчинника на кожній стадії з'єднання, відсутність захисних гр уп гуанідинової та карбоксильної груп аргініну під час проведення всіх стадій синтезу збільшує ризик побічних реакцій, подовжує тривалість проведення реакцій за рахунок зменшення розчинності проміжних пептидів, знижує ступені виходу продуктів реакції. Використання і виділення як окремих речовин не досить стабільних п-нітрофенілових ефірів як проміжних продуктів ускладнює процес. Використання токсичного та агресивного газоподібного бромоводню на кожній стадії відщеплення тимчасової Z-захисної групи та диетилового ефіру у надто великих об'ємах потребує спеціальних умов для роботи. Вагомим недоліком цього способу є те, що після кожного приєднання амінокислоти та після кожного видалення захисної групи проводять випарювання значних кількостей таких малолетких розчинників як диметилформамід, вода або водні суміші. При випарюванні при підвищених температурах значно підвищується ризик побічних реакцій, розкладання продуктів реакції і т.і., тоді як випаровування при відносно низьких температурах значно збільшує тривалість цієї операції. Це потребує застосування надто потужних вакуумних установок для промислового використання цього способу синтезу. Предмет корисної моделі полягає в розробці нового, поліпшеного щодо прототипу, способу отримання гексапептиду. В основу корисної моделі, що заявляється, поставлено задачу розробки способу отримання пептиду Tyr-d-Ala-Gl y-Phe-Leu-Arg, з чистотою не менш 97%, з найменшим використанням агресивних та шкідливих реагентів та зменшенням об'ємів використовуваних розчинників, зі збільшеним щодо прототипу виходу продукту, та спрощеною що 6 до прототипу можливістю промислового впровадження та скорочення тривалості технологічного процесу. Поставлену мету досягають новим способом отримання гексапептиду з використанням пептидного синтезу у розчині, використанням схеми максимального захисту, що дозволило підвищити ступінь виходу продуктів реакції, зменшити ризик побічних реакцій, використання тимчасових захисних гр уп, що видаляються в м’яких умовах, використанням летких розчинників, що технічно спрощує їх видалення у процесі виробництва, використанням методів конденсації захищених амінокислот чи пептидів карбодіімідним методом, а приєднання незахищеного аргініну - за допомогою дифенілфосфорилазиду, проведенням очистки проміжних пептидів екстракцією, перекристалізацією або, при необхідності, хроматографічно, застосуванням для кінцевої очистки продукту перекристалізації та методів зворотньо-фазової, іонної хроматографії, чи їх поєднання. Вилучення ОМе-захисної гр упи - додаванням лугу у суміші води й органічного розчинника, ONbz-, NO2-, Bzlзахисних гр уп - каталітичним гідрогенізуванням. У одному з аспектів ця корисна модель передбачає отримання пептиду з формулою Tyr-d-AlaGly-Phe-Leu-Arg, який складається з наступних стадій: 1) проводять реакцію з'єднання Boc-Phe з LeuONbz, у результаті чого отримують повністю захищений дипептид Boc-Phe-Leu-ONbz; реакцію проводять додаванням до реакційної суміші карбоксикомпоненту, амінокомпоненту, дициклогексилкарбодііміду, 1гідроксибензтриазолу та органічної основи у молярному співвідношенні 1:1:1:1:1; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, коли як органічну основу використовують N-метилморфолін; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, коли реакцію проводять спочатку 2,5 години при температурі мінус 20°С, потім 15 годин при температурі 0°С; 2) відфільтровують осад дициклогексилсечовини; 3) випаровують розчинник; 4) проводять екстракційну очистку з етилацетатом; 5) випаровують етилацетат; 6) видаляють тимчасову захисну третбутилоксикарбонільну груп у змішуванням захищеного дипептиду із деблокуючим реагентом; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому як деблокуючий реагент використовують суміш дихлорметан/трифтороцтова кислота; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому проводять перемішування реакційної суміші упродовж всієї реакції; при проведенні реакції відщеплення бажаним є спосіб, при якому відщеплення контролюється за допомогою аналітичного обладнання, наприклад системи ВЕРХ; 7) випаровують розчинник; 8) проводять аналітичний контроль отриманого проміжного пептиду; 7 36558 9) повторенням стадій 1)-8) послідовно приєднують до отриманого пептиду захищені амінокислоти Boc-Gly, Boc-d-Ala, таким чином отримують пептид загальною формулою d-Ala-Gly-Phe-LeuONbz; 10) приєднують до отриманого пептиду захищену амінокислоту Вос-Туг, аналогічно стадіям 1)5), таким чином отримують пептид загальною формулою Boc-Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-ONbz; 11) відщеплюють ONbz груп у на каталізаторі за допомогою газоподібного водню, який пропускають крізь розчин з Boc-Tyr-d-Ala-Gly-Phe-LeuONbz; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому як каталізатор використовується губчастий паладій; 12) відфільтровують каталізатор; 13) випаровують розчинник; 14) приєднують аргінін у суміші диметилформамід/тетрагідрофуран (1:1) за допомогою дифенілфосфорилазиду з додаванням органічної основи; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому карбоксикомпонент Boc-Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu, амінокомпонент аргінін, дифенілфосфорилазид та органічна основа змішуються у розчиннику у молярному співвідношенні 1:1:1:1; 15) випаровують розчинник до половини об'єму; 16) проводять екстракційну очистку з етилацетатом; 17) випаровують розчинник; 18) відщеплюють трет-бутилоксикарбонільну тимчасову захисну груп у від отриманої сполуки Boc-Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg аналогічно стадіям 6)-8); 19) перекристалізовують сполуку Tyr-dAla-Gl yPhe-Leu-Arg після відщеплення останньої захисної групи; 20) проводять очищення хроматографічними методами; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому застосовують поєднання іонно-хроматографічної та зворотньо-фазової хроматографічної очистки. У іншому аспекті ця корисна модель передбачає отримання пептиду з формулою Tyr-d Ala-GlyPhe-Leu-Arg, який складається з наступних стадій: 1) проводять реакцію з'єднання Boc-Phe з LeuONbz, у результаті чого отримують повністю захищений дипептид Boc-Phe-Leu-ONbz; реакцію проводять додаванням до реакційної суміші карбоксикомпоненту, амінокомпоненту, дициклогексилкарбодііміду, 1гідроксибензтриазолу та органічної основи у молярному співвідношенні 1:1:1:1:1; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, коли як органічну основу використовують Nметилморфолін; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, коли реакцію проводять спочатку 2,5 години при температурі мінус 20°С, потім 15 годин при температурі 0°С; 2) відфільтровують осад дициклогексилсечовини; 3) випаровують розчинник; 4) проводять екстракційну очистку з етилацетатом; 8 5) випаровують етилацетат; 6) видаляють тимчасову захисну третбутилоксикарбонільну груп у змішуванням захищеного дипептиду із деблокуючим реагентом; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому як деблокуючий реагент використовують суміш дихлорметан/трифтороцтова кислота; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому проводять перемішування реакційної суміші упродовж всієї реакції; при проведенні реакції відщеплення бажаним є спосіб, при якому відщеплення контролюється за допомогою аналітичного обладнання, наприклад системи ВЕРХ; 7) випаровують розчинник; 8) проводять аналітичний контроль отриманого проміжного пептиду; 9) приєднують до отриманого пептиду захищену амінокислоту Вос-Gly та вилучають Восзахисну груп у аналогічно стадіям 1)-8), таким чином отримують пептид Gly-Phe-Leu-ONbz; 10) повторенням стадій 1)-5) приєднують до отриманого пептиду захищену амінокислоту Boc-dAla, таким чином отримують повністю захищений пептид Boc-d-Ala-Gly-Phe-Leu-ONbz; 11) відщеплюють ONbz груп у на каталізаторі за допомогою газоподібного водню, який пропускають крізь розчин з Boc-d-Ala-Gly-Phe-Leu-ONbz; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому як каталізатор використовується губчастий паладій; 12) відфільтровують каталізатор; 13) випаровують розчинник і отримують сполуку Boc-d-Ala-Gly-Phe-Leu; 14) проводять реакцію з'єднання Arg(NO2)OMe з Boc-d-Ala-Gl y-Phe-Leu та вилучення захисної Вос-групи аналогічно 1)-8), у результаті чого отримують пентапептид d-Ala-Gly-Phe-LeuArg(NO2)-OMe; 15) проводять реакцію з'єднання Boc-Tyr(Bzl) з d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg(NO2)-OMe аналогічно 1)-5), у результаті чого отримують повністю захи щений гексапептид Boc-Tyr(Bzl)-d Ala-Gly-Phe-LeuArg(NO2)-OMe; 16) відщеплюють метоксильну захисну гр упу, додаючи деблокуючий розчин; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому у якості деблокуючого розчину використовується водно-спиртовий розчин лугу; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому температурний режим реакції деблокування складає: утримування при температурі 0°С; при проведенні реакції відщеплення бажаним є спосіб, при якому відщеплення контролюється за допомогою аналітичного обладнання, наприклад системи ВЕРХ; 17) відщеплюють бензильну та нітро-захистні групи аналогічно 11)-13) та отримують сполуку Boc-Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg; 18) відщеплюють трет-бутилоксикарбонільну тимчасову захисну груп у аналогічно стадіям 6)-8) та отримують пептид Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg; 9 36558 19) перекристалізовують сполуку Tyr-dAla-Gl yPhe-Leu-Arg після відщеплення останньої захисної групи; 20) проводять очищення хроматографічними методами; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому застосовують поєднання іонно-хроматографічної та зворотньо-фазової хроматографічної очистки. Ще в одному аспекті ця корисна модель передбачає отримання пептиду з формулою Tyr-dAla-Gly-Phe-Leu-Arg конвергентно за такими стадіями: 1) проводять реакцію з'єднання Boc-Leu з Arg(NO2)-OMe, у результаті чого отримують повністю захи щений дипептид Boc-Leu-Arg(NO2)-OMe; реакцію проводять додаванням до реакційної суміші карбоксикомпоненту, амінокомпоненту, дициклогексилкарбодііміду, 1-гідроксибензтриазолу та органічної основи у молярному співвідношенні 1:1:1:1:1; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, коли як органічну основу використовують N-метилморфолін; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, коли реакцію проводять спочатку 2,5 години при температурі мінус 20°С, потім 15 годин при температурі 0°С; 2) відфільтровують осад дициклогексилсечовини; 3) випаровують розчинник; 4) проводять екстракційну очистку з етилацетатом; 5) випаровують етилацетат; 6) видаляють тимчасову захисну третбутилоксикарбонільну груп у змішуванням захищеного дипептиду із деблокуючим реагентом; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому як деблокуючий реагент використовують суміш дихлорметан/трифтороцтова кислота; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому проводять перемішування реакційної суміші упродовж всієї реакції; при проведенні реакції відщеплення бажаним є спосіб, при якому відщеплення контролюється за допомогою аналітичного обладнання, наприклад системи ВЕРХ; 7) випаровують розчинник; 8) проводять аналітичний контроль; 9) приєднують до отриманого пептиду LeuArg(NO2)-OMe за хищен у амінокислоту Boc-Phe аналогічно стадіям 1)-8), таким чином отримують трипептид Phe-Leu-Arg(NO2)-OMe; 10) проводять реакцію з'єднання Boc-d-Ala з Gly-OMe та вилучення захисної Вос-групи аналогічно стадіям 1)-8), у результаті чого отримують дипептид d-Ala-Gly-OMe; 11) приєднують до d-Ala-Gly-OMe захищен у амінокислоту Вос-Tyr(Bzl) аналогічно стадіям 1)-5), таким чином отримують повністю захищений трипептид Boc-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gly-OMe; 12) відщеплюють метоксильну захисну гр упу, додаючи деблокуючий розчин; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому у якості деблокую 10 чого розчину використовується водно-спиртовий розчин лугу; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому температурний режим реакції деблокування складає: утримування при температурі 0°С; при проведенні реакції відщеплення бажаним є спосіб, при якому відщеплення контролюється за допомогою аналітичного обладнання, наприклад системи ВЕРХ; 13) проводять екстракційну очистку з етилацетатом; 14) випаровують етилацетат; 15) проводять реакцію з'єднання отриманого трипептиду Вос-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gly з Phe-LeuArg(NO2)-OMe аналогічно стадіям 1)-5), у результаті чого отримують повністю захищений гексапептид Вос-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg(NO2)-OMe; 16) відщеплюють метоксильну захисну груп у аналогічно стадіям 12)-14); 17) відщеплюють бензильну та нітро-захистні групи на каталізаторі за допомогою газоподібного водню, який пропускають крізь розчин з ВосTyr(Bzl)-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg(NO2); переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому як каталізатор використовується губчастий паладій; 18) відфільтровують каталізатор; 19) випаровують розчинник; 20) відщеплюють трет-бутилоксикарбонільну тимчасову захисну груп у аналогічно стадіям 6)-8) та отримують пептид Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg; 21) перекристалізовують сполуку Tyr-dAla-Gl yPhe-Leu-Arg після відщеплення останньої захисної групи; 22) проводять очищення хроматографічними методами; переважним прикладом описаного вище способу є такий спосіб, при якому застосовують поєднання іонно-хроматографічної та зворотньофазової хроматографічної очистки. Передбачається, що спеціаліст у галузі пептидного синтезу на основі приведеного опису зможе використати цю корисну модель у її повному обсязі. Тому, наведені нижче приклади здійснення корисної моделі слід розглядати лише як ілюстративні, а не як такі, що обмежують об'єм корисної моделі. Аналіз отриманих сполук проводили за наведених нижче умов. 1 Н-ЯМР-спектри знімали на імпульсному Фур'є-спектрофотометрі із робочою частотою 400МГц при температурі 20°С з використанням ДМСО-d6 як розчинника та тетраметилсилану як внутрішнього стандарту. Ультрафіолетовий спектр знімали у діапазоні 190-400нм у метанолі. Хроматографічний аналіз проводили на рідинному хроматографі із спектрофотометричним детектором. Умови хроматографування: колонка Reprosil Pur C8 150мм×4,6мм×5мкм, температура термостату колонки -20°С, інші умови: (A) - рухома фаза: вода - ацетонітрил (30/70), довжина хвилі детектування - 210нм; 11 36558 (Б) - рухома фаза: 0,02М розчин перхлорату калію - ацетонітрил (65/35), довжина хвилі детектування -220нм; (B) - рухома фаза: вода - ацетонітрил (20/80), довжина хвилі детектування - 210нм; (Г) - рухома фаза: фаза А-0,02М фосфа тний буфер (рН4,5); фаза Б-суміш ацетонітрил/вода (1:1); градієнтний режим: 0хв. - 30% фази Б, 35хв. 60% фази Б; довжина хвилі детектування - 220нм; (Д) - рухома фаза: фаза А-0,02 М розчин триетиламіну фосфату с рН3,2; фаза Б-ацетонітрил; градієнтний режим 0хв. - 10% фази Б, 25хв. - 40% фази Б; довжина хвилі детектування - 220нм; (Е) - рухома фаза: вода - ацетонітрил (6:4), довжина хвилі детектування - 210нм. (Ж) - рухома фаза: вода - ацетонітрил (4:6), довжина хвилі детектування - 220нм; (З) - рухома фаза: 0,05% розчин трифтороцтової кислоти - метанол (3:7), довжина хвилі детектування - 210нм; (К) - рухома фаза: вода - ацетонітрил (7:3), довжина хвилі детектування - 220нм; Приклад 1 Boc-Phe-Leu-ONbz 8,9г (21,7ммоль) пара-толуолсульфонату нітробензилового ефіру лейцину поміщають в 100мл дихлорметана, додаючи 2,9г (21,7ммоль) 1гідроксибензтриазолу, 4,4г (21,7ммоль) дициклогексилкарбодііміду, 2,1г (21,7ммоль) Nметилморфоліну і 5,7г (21,7ммоль) Восфенілаланіну. Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20°С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 100мл етилацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин суша ть над безводним сульфатом магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 10,6г продукту. Вихід 96%. Час утримування основного компоненту в умовах А-2,81 хв. Boc-Gly-Phe-Leu-ONbz 9,7г (19,0ммоль) третбутилоксикарбонілфенілаланіл-лейцину нітробензилового ефіру поміщають в 25мл суміші дихлорметантрифтороцтова кислота (1:1) при 1-4°С, контролюють відщеплення третбутилоксикарбонільної групи за допомогою зворотньофазового режиму ВЕРХ в умовах Б. Після закінчення реакції (25 хвилин) розчин упарюють на роторному випарнику насухо. Осад розчиняють в етилацетаті, додають 2,5г (19,0ммоль) 1-гідроксибензтриазолу, 3,9г (19,0ммоль) дициклогексилкарбодііміду, 1,9г (19,0ммоль) N-метилморфоліну і 3,3г (19,0ммоль) Вос-гліцину. Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20°С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 100мл етилацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин сушать над сульфатом магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 9,4г продукту. Вихід 87%. Час утриму 12 вання основного компоненту в умовах В-2,21 хв. Ультрафіолетовий спектр речовини має максимум поглинання 268нм. 1Н-ЯМР - спектр ( d , м. д.): 0.87 (6Н, дд, (СН3)2СН-), 1.34 (9Н, с, (СН3)3С-), 1.62 (3Н, м, (СН3)2СНСН2), 2,82 (2Н, м, PhCH2-), 3.45 (2Н, м м, -CHNH-, -CHNH-), 7.27 (2Н, дд, n-O2NC6H4CH2-), 6.92 (1Н, т, -NHCH2), 7.20 (5Н, м, PhCH2-), 7.63 8.20 (2Н 2Н, д д, n-O 2NC6H4CH2-), 7.92 8.50 (1Н 1Н, д д, -NHCH-, -NHCH-). Boc-d-Ala-Gly-Phe-Leu-ONbz 9,0г (15,7ммоль) трет-бутилоксикарбонілгліцил-фенілаланіл-лейцину нітробензилового ефіру поміщають в 25мл розчину дихлорметантрифтороцтова кислота (1:1) при 1-4°С, контролюють відщеплення третбутилоксикарбонільної групи за допомогою зворотньофазового режиму ВЕРХ в умовах Б. Після закінчення реакції (30 хвилин) розчин упарюють на роторному випарнику насухо. Осад розчиняють в суміші тетрагідрофуран/дихлорметан (1:1), додаючи 2,1г (15.7ммоль) 1-гідроксибензтриазолу, 3,2г (15.7ммоль) дициклогексилкарбодііміду, 1,5г (15,7ммоль) Nметилморфоліну і 2,8г (15.7ммоль) Boc-d-аланіну. Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20°С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 100мл етилацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин сушать над сульфатом магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 8,2г продукту. Ви хід 82%. Час утримування основного компоненту в умовах А - 2,71хв. Boc-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gl y-Phe-Leu-ONbz 3,7г (5,7ммоль) третбутилоксикарбоніл-dаланіл-гліцил-фенілаланіл-лейцину нітробензилового ефіру поміщають в 20мл розчину дихлорметан-трифтороцтова кислота (1:1) при 1-4°С, контролюють відщеплювання третбутилоксикабонільної групи за допомогою зворотньофазового режиму ВЕРХ в умовах Б. Після закінчення реакції (40 хвилин) розчин упарюють на роторному випарнику насухо. Осад розчиняють в дихлорметані, додаючи 0,7г (5,7ммоль) 1гідроксибензтриазолу, 1,1г (5.7ммоль) дициклогексилкарбодіїміду, 0,5г (5.7ммоль) Nметилморфоліну і 2,0г (5.7ммоль) Вос-(о-бензил)тирозину. Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20°С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 80мл етилацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин сушать над сульфатом магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 4,6г продукту. Вихід 91%. Час утримування основного компоненту в умовах А - 2,79хв. Boc-Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu 4,2г (4,6ммоль) трет-бутилоксикарбонілтирозил-(о-бензил)-d-аланіл-гліцил-фенілаланіллейцину нітробензилового ефіру розчиняють в 95мл суміші метиловий спирт/вода (9:1), і гідрують за присутності каталізатора протягом 2 годин при 13 36558 25С. Каталізатор фільтрують, промивають водою і метиловим спиртом. Фільтрат упарюють на роторному випарнику. Отримують 2,9г продукту. Ви хід 97%. Час утримування основного компоненту в умовах А-1,48 хв. Boc-Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg 2,7г (4,0ммоль) третбутилоксикарбонілтирозил-d-аланіл-гліцил-фенілаланіл-лейцину розчиняють в 80мл суміші диметилформамид/тетрагідрофуран (1:1), додають 0,3г (4,0ммоль) N-метилморфоліну і 1,0г (4,0ммоль) дифенілфосфорилазиду. Реакційну суміш витримують 12 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють до половини об'єму (до видалення тетрагідрофурану) на роторному випарнику, додають 100мл етилацетату, і промивають послідовно 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію Розчин сушать над сульфатом магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 2,9г продукту. Ви хід 89%. Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg 2,6г (3,1ммоль) третбутилоксикарбонілтирозил-d-аланіл-гліцил-фенілаланіл-лейциларгініну помішають в 25мл суміші дихлорметантрифтороцтова кислота (1:1) при 1-4°С, контролюють відщеплювання третбутилоксикабонільної групи за допомогою зворотньофазового режиму ВЕРХ в умовах Б. Після закінчення реакції (25 хвилин) розчин упарюють на роторному випарнику насухо. Отримують 2,2г продукту. Ви хід 99%. 3,0г третбутилоксикарбоніл-тирозил-d-аланілгліцил-фенілаланіл-лейцил-аргініну розчиняють у 6мл оцтової кислоти, охолоджують, додають 60мл етилацетату, осад відфільтровують та промивають охолодженим етилацетатом та висушують в вакуум-ексикаторі. Проводять першу стадію хроматографічної очистки. 0,55г тирозил-d-аланіл-гліцилфенилаланіл-лейцил-аргініну наносять на колону 1200·10мм, заповнену сорбентом IR-120, та проводять очистку за допомогою східчатого градієнту 0,1М; 0,2М; 0,3М піридин - ацетатного буферу. Фракціонують. Проводять другу стадію хроматографічної очистки. Фракції з цільовим компонентом наносять на колону 250·25мм, заповнену октадецилсилікагелем із зерненням 10мкм, та хроматографують за допомогою східчатого градієнта 10% метилового спирту у 0,5% оцтовій кислоті, 20% метилового спирту у 0,5% оцтовій кислоті, 30% метилового спирту у 0,5% оцтовій кислоті. Чистота отриманого кінцевого продукту в умовах Д-99,6%. Час утримання в умовах Б-2,4хв.; Д9.6хв.: Г-10,5хв. Ультрафіолетовий спектр речовини має максимум поглинання на 274нм, та плечє при 226нм. 1Н-ЯМР-спектр ( d , м. д.): 0 .87 (6Н, дд, (СН3)2СН-), 1.03 (ЗН, д, СН3СН-), 1.62 (7Н, м, СН2СН2СН2СН-, (СН3)2СНСН2-), 2.90 (7Н, м, СН2СН2СН2СН- (n-HO)PhCH2CH-, PhCH2-), 3.66 (2Н, м, -NHCH2C(O)-), 3.98 4.17 4.31 4.52 (1Н 1Н 1Н 1Н, м м м м, -СН- метинові), 6.70 7.02 (2Н 2Н, д д, (n-НО)С6Н4СН2СН-), 7.23 (5Н, м, PhCH2-), 7.12 (2Н, шд, -NH2), 7.66 8.00 8.17 8.26 8.59 (1Н 1H 4Н 14 2Н 1Н, т д м м д, інші -NH- -NH2), 9.39 (1Н, с, (nНО)С6Н4), 12.32 (1Н, шс, -СООН). Приклад 2 Boc-d-Ala-Gly-Phe-Leu-ONbz отримують аналогічно прикладу 1 Boc-d-Ala-Gly-Phe-Leu 3,3г (5,1ммоль) грет-бутилоксикарбоніл-dаланіл-гліцил-фенілаланіл-лейцину нітробензилового ефіру розчиняють в 75мл суміші метиловий спирт-вода (9:1), і гідрують за присутності каталізатора протягом 2 годин при 25°С. Каталізатор фільтрують, промивають водою і метиловим спиртом. Розчин упарюють на роторному випарнику. Отримують 2,5г продукту. Ви хід 97% Далі наносять на колону 50·500мм, заповнену октадецилсилікагелем, та хроматографують за допомогою фази 0,02М фосфатний буфер - метиловий спирт - етиловий спирт (65:20:15). Фракції збирають. Ультрафіолетовий спектр речовини має максимум поглинання при 264нм. 1Н-ЯМР-спектр ( d , м. д.): 0.87 (6Н, дд, (СН3)2СН-), 1.14 (3Н, д, CH3CHNHC(O)-), 1.37 (9Н, с, (СH3)3С-), 1.6 (3Н, м, (СН3)2СНСН2-), 2.9 (2H, м, PhCH2-), 2.62 (2Н, м, NHCH2C(O)-), 3.92 4.21 4.54 (1H 1Н 1Н, м м м, СН метинові), 7.25 (5Н, м, Ph-), 7.0 8.0 (1H 2Н, м, NH амідні), 11.8 (1H, шс,НООС-). Boc-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg(NO2,)-OMe 1,9г (3,7ммоль) третбугилоксикарбоніл-dаланіл-глщил-фенілаланіл-лейцину розчиняють в тетрагідрофурані, додаючи 0,5г (3,7ммоль) 1гідроксибензтриазолу, 0,7г (3,7ммоль) дициклогексил-карбодііміду, 0,3г (3,7ммоль) Nметилморфоліну і 1г (3,7ммоль) аргініну( w -нітро) метилового ефіоу Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20°С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 100мл етилацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин сушать над сульфа том магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 2,4г продукту. Ви хід 91%. Час утримування основного компоненту в умовах Е 2,79хв. Boc-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gl y-Phe-Leu-Arp(NO2)-OMe 1,5г (2,1ммоль) третбутилоксикарбоніл-dаланіл-глиціл-фенилаланіл-лейцил-аргініну( w нітро) метилового ефіру в 25мл суміші дихлорметан-трифтороцтова кислота (1:1) при 1-4°С, контролюють відщеплювання третбутилоксикарбонільної групи за допомогою зворотньофазового режиму ВЕРХ в умовах Б. Після закінчення реакції (50 хвилин) розчин упарюють на роторьому випарнику насухо. Осад розчиняють в етилацетаті, додаючи 0,3г (2,1ммоль) 1гідроксибензтриазолу, 0,4г (2,1ммоль) дициклогексилкарбодііміду, 0,2г (2,1ммоль) Nметилморфоліну; 0,8г (2,1ммоль) Вос-(обензил)тирозину. Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 100мл ети 15 36558 лацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої' кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин сушать над сульфа том магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 1,8г продукту. Ви хід 88%. Час утримування основного компоненту в умовах Ж 4,03хв. Boc-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gl y-Phe-Leu-Arg(NO2) 1,6г (1,6ммоль) Boc-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gly-Phe-LeuArg(NO2)-OMe поміщають в 20мл суміші водаметанол (1:1), при 0°С, додають 0,1г (3,2ммоль) гідроксиду натрію. Контролюють відщеплювання метильной групи за допомогою зворотньофазового режиму ВЕРХ в умовах Б. Після закінчення реакції (45 хвилин) розчин підкисляють лимонною кислотою до рН3, екстрагують етилацетатом (3 порції по 15мл); екстракт упарюють на роторному випарнику насухо. Отримують 1,4г продукту. Ви хід 94%. Boc-Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg 0,9г (0,9ммоль) трет-бутилоксикарбонілтирозил-(о-бензил)-d-аланіл-гліцил-фенілаланіллейцил-аргініну( w -нітро) розчиняють в 50мл суміші метиловий спирт-вода (9:1), і гідрують за присутності каталізатора протягом 2 годин при 25°С. Каталізатор фільтрують, промивають водою і метиловим спиртом. Фільтрат упарюють на роторному випарнику. Отримують 0,8г продукту. Ви хід 97%. Tyr-d-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg 0,49г (0,6ммоль) трет-бутилоксикарбонілтирозил-d-аланіл-глиціл-фенилаланіл-лейциларгініну поміщають в 25мл розчину дихлорметантрифтороцтова кислота (1:1) при 1-4°С, контролюють відщеплення третбутилоксикарбонільної групи за допомогою зворотньофазового режиму ВЕРХ в умовах Б . Отримують 0,42г продукту. Ви хід 99%. Хроматографічну очистку кінцевого продукту проводять аналогічно прикладу 1. Приклад 3 Boc-Leu-Arg(NO2)-OMe 5,4г (20,0ммоль) аргініну( w -нітро) метилового ефіру поміщають в 50мл тетрагідрофурану, додаючи 2,7г (20,0ммоль) 1-гідроксибензтриазолу, 4.0г (20,0ммоль) дициклогексилкарбодііміду, 2,0г (20,0ммоль) триетиламіну і 4,6г (20,0ммоль) Вослейцину. Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20°С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 100мл етилацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин сушать над безводним сульфатом магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 8,4г продукту. Вихід 95%. Час утримування основного компоненту в умовах А - 4,50хв. Boc-Phe-Leu-Arg(NO2)-OMe 7,1г (16,0ммоль) третбутилоксикарбоніллейцил-аргініну( w -нітро) метилового ефіру поміщають в 50мл розчину дихлорметантрифтороцтова кислота (1:1) при 1-4°С, контро 16 люють відщеплення третбутилоксикарбонільної групи методом ВЕРХ в умовах Б. Після закінчення реакції (35 хвилин) розчин упарюють на роторному випарнику насухо. Залишок розчиняють в етилацетаті, додаючи еквімолярні кількості 2,1г (16,0ммоль) 1-гідроксибензтриазолу, 3,2г (16,0ммоль) дициклогексилкарбодіїміду, 1,6г (16,0ммоль) триетиламіну і 4,2г (16,0ммоль) Восфенілаланіну. Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20°С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 75мл етилацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин сушать над безводним сульфатом магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 8,6г продукту. Ви хід 91%. Час утримування основного компоненту в умовах A - 10,85хв. Ультафіолетовий спектр речовини має максимум поглинання на 272нм. 1Н-ЯМРспектр ( d , м. д.): 0.86 (6Н, дд, (СН3)2СН-), 1.29 (9Н, с, (СН3)3С-), 1.60 (7Н, м, -CHCH2 CH2CH2-, (CH3)2CHCH2-), 2.82 3.14 (2Н 2Н, м м, HNCH2CH2CH2-, PhCH 2CH-), 3.61 (3Н, с, CH3O-), 4.39 4.23 4.16 (1Н 1Н 1H, м м м, PhCH2CH, (CH3)2CHCH2CH-,-CH2CH2CH-), 7.20 (5H, м, PhCH2-), 6.92 7.92 8.37 (1H 1H 1H, д д д, NH амідні), 8.00 (>2H, м, NH). Boc-dAla-Gly-OMe 1,7г (14,2ммоль) метилового ефіру гліцину поміщають в 70мл тетрагідрофурану, додаючи 1,9г (14,2ммоль) 1-гідроксибензтриазолу, 2,8г (14,2ммоль) дициклогексилкарбодііміду, 1,4г (14,2ммоль) триетиламіну і 2,6г (14,2ммоль) Boc-dаланіну. Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20°С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 100мл етилацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин сушать над безводним сульфатом магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 2,9г продукту. Вихід 81%. Час утримування основного компоненту в умовах К - 3,57хв. Boc-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gl y-OMe 2,7г (10,5ммоль) Boc-dAla-Gly-OMe поміщають у 20мл розчину дихлорметан-трифтороцтова кислота (1:1) при 1-4°С, контролюють відщеплення третбутилоксикарбонільної групи за допомогою зворотньофазового режиму ВЕРХ в умовах Б. Після закінчення реакції (30 хвилин) розчин упарюють на роторному випарнику насухо. Осад розчиняють в етилацетаті, додаючи 1,4г (10,5ммоль) 1гідроксибензтриазолу, 2,1г (10,5ммоль) дициклогексилкарбодііміду, 1,0г (10,5ммоль) триетиламіну і 3,8г (10,5ммоль) Вос-(о-бензил) тирозину. Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 75мл етилацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин сушать над без 17 36558 водним сульфатом магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 4,6г продукту. Ви хід 86%. Час утримування основного компоненту в умовах Ж-3,33 хв. Ультрафіолетовий спектр сполуки має максимум поглинання при 228нм і 274нм. 1Н-ЯМР-спектр ( d , м. д.): 1.15 (3Н, д, СН3СН-), 1.30 (9Н, с, (СН3)3С-), 2.77 (2Н, м, СH2CН-), 3.84 (2Н, м, -COCH2NH-), 4.10 4.30 (1Н 1Н, м м, СН3СН-, -СН2СН-), 5.06 (2Н, с, PhCH2-), 6.90 7.15 (2Н 2Н, д д, -СН2ОС6Н4-), 7.38 (5Н, м, PhCH2O-), 6.95 8.11 8.27 (1Н 1Н 1Н, м м м, -NH-, NH-, -NH-). Boc-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gl y 4,4г (8,6ммоль) Boc-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gl y-OMe поміщають в 40мл суміші вода/метанол (1:1), при 0°С, додають 0,6г (17,2ммоль) гідроксиду натрію. Контролюють відщеплення метальной групи за допомогою зворотньофазового режиму ВЕРХ в умовах Б. Після закінчення реакції (45 хвилин) розчин підкислюють лимонною кислотою до рН3, екстрагують етилацетатом (3 порції по 20мл); екстракт упарюють на роторному випарнику насухо. Отримують 4,1г продукту. Ви хід 94%. Boc-Tyr(Bzl)-d-Ala-Gl y-Phe-Leu-Arg(NO2)-OMe 5г (8,4ммоль) третбутилоксикарбонілфенілаланіл-лейцин-аргініну( w -нітро) метилового ефіру поміщають в 40мл суміші дихлорметантрифтороцтова кислота (1:1) при 1-4°С, контролюють відщеплення третбутилоксикабонільної групи за допомогою зворотньофазового режиму ВЕРХ в умовах Б. Після закінчення реакції (35 хвилин) розчин упарюють на роторному випарнику насухо. Осад розчиняють у те трагідрофурані, додаючи 1,1г (8,4ммоль) 1-гідроксибензтриазолу, 1,7г (8,4ммоль) дициклогексилкарбодіїміду, 0,8г (8,4ммоль) триетиламіну і 4,1г (8,4ммоль) третбутилоксикарбоніл-тирозил-(о-бензил)-d-аланілгліцину. Реакційну суміш витримують 2 години при температурі мінус 20°С, 15 годин при температурі 0°С. Далі розчин упарюють на роторному випарнику насухо, розчиняють в 80мл етилацетату, промивають послідовно 1М розчином хлороводневої кислоти, водою, 1М розчином гідрокарбонату натрію, 25% розчином хлориду натрію. Розчин сушать над безводним сульфатом магнію, фільтрують, упарюють на роторному випарнику при 30°С. Отримують 6,3г продукту. Ви хід 78%. Подальший синтез та хроматографічну очистку проводять таким же чином як у прикладі 2. Інші приклади Із приведеного вище опису спеціаліст у даній галузі те хніки може легко виявити основні особли Комп’ютерна в ерстка Д. Шев ерун 18 вості цієї корисної моделі і не відхиляючись від суті та об'єму, провести різні зміни і модифікації корисної моделі для адаптації її до різних прикладних задач та умов. Тому інші приклади корисної моделі також охоплюються формулою корисної моделі. Скорочення та абревіатури Вос - трет-бутилоксикарбонільна захисна група Bzl - бензильна захисна група Fmoc - 9-флуоренілметоксиарбонільна захисна група NO2 - нітрогрупа ОМе - метоксильна група ONbz - нітробензильна захисна група Z - карбобензоксикарбонільна захисна група ДМФА - диметилформамід ВЕРХ - високоефективна рідинна хроматографія ТГФ - тетрагідрофуран ДМСО-d6 - дейтерований диметилсульфоксид Літературні посилання: 1. Компендиум 2007 - Лекарственные препараты/п.р. В.Н. Коваленко, А.П. Викторова. - К.: Морион, 2007. 2. Peptides chemistry and Biology. Norbert Sewald, Hans-Dieter Jakubke / 2002 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. 3. A stereoselective synthesis of tilivalline //Shigehiro Mori, Toyohiko Ao yama, Takayuki Shioiri //Tetrahedron Letters, # 50, pp.6111-6114, 1986y. 4. A synthesis of ascidiacacyclamide, a cytoto xic peptide from ascidian -determination of its absolute configuration //Yasumasa Hamada, Shinji Kato, Takayuki Shioiri // Tetrahedron Letters, # 27, pp.3223-3226, 1985y. 5. A new synthesis of prumycin as an application of direct c-alkylation using diphenyl phosphoazidate (DPPA) // Yasumasa Hamada, Takayuki Shioiri // Tetrahedron Letters, # 11, pp.1193-1196, 1982y. 6. D.S. Kemp, M. Trangle, K. Trangle // Anderson test assessment of racemization for the hydroxybenzotriazole-dicyclohexylcarbodiimid peptide coupling procedure // Tetrahedron Letters #31, pp.2695-2696, 1974y. 7. Toshifumi Miyazawa, Toshihiko Ot.omatsu, Takashi Yamada, Shigeru Kuwata // Copper(II) chlorides a new, efficient additive suppressing racemization in peptide synthesis by the carbodiimide method // Tetrahedron Letters #7, pp.771-772, 1984y. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601