Спосіб отримання препарату тимосоміну

Спосіб отримання препарату тимосомшу шляхом гомогенізації тканини тимусу, центрифугування, обробки ацетоном, який відрізняється тим, що гомогенізацію здійснюють в 65-75% охолодженому розчині ацетону і після центрифугування надосадову рідину упарюють, а потім здійснюють діаліз центрифугування, осадження ацетоном, люфілізацм, розділення на колонці з сефадексом Недоліком даного способу отримання препарату є довготривалість (в середньому процес отримання готового продукту займає 72 - 120 годин) Виконання способу потребує складного апаратурного оформлення та значних енерговитрат В основу створення винаходу ставиться завдання отримання препарату тимосомшу шляхом гомогенізації в 65 - 75% охолодженому розчині ацетону, центрифугування, упарювання надосадової рідини та діалізу, що дозволить отримати висооактивний ліпосомний препарат гормонів тимусу Покладене завдання досягається тим, що в способі отримання препарату тимосомшу шляхом гомогенізації тканини тимусу, центрифугування, обробки ацетоном, гомогенізація здійснюється в 65-75% охолодженому розчині ацетону і після центрифугування надосадову рідину упарюють та діалізують В лабораторних умовах отримання препарату здійснювалось наступним чином Тканини тимусу подрібнювали і заливали охолодженим до -15 - -20°С 65 - 75% розчином ацетону при співвідношенні тканини до розчину ацетону 1 2,5 - 3,0 та гомогенізували Отриману після гомогенізації суміш витримували на протязі 20хв при 5 - 10°С і потім центрифугували при 2500 3000об/хв на протязі ЗО - 40хв при 5 - 10°С Осад відкидали, а надосадову рідину упарювали при 40°С на роторному випарювані або на водяній бані при 60 - 70°С для часткового видалення ацетону СО (О (О Ю 56613 Після упарювання розчин центрифугували та звіАктивність препарату склала 1,46мкг/мл льняли від залишків ацетону діалізом проти 0.14М Приклад 4 фосфатного буферу (рН7,6) Після діалізу отримаДо 100г подрібненої тканини тимусу додавали ли опалесцюючий розчин, який містив навантажені ЗООмл охолодженого до -15 - -20°С 60% розчину тимічними гормонами ліпосоми ацетону та гомогенізували (14000об/хв, 1хв, 4°С) Отриману суміш витримували 20 хвилин при 5°С Приклад 1 та центрифугували (3000об/хв, 35хв, 5°С) ОтриДо 100г подрібненої тканини тимусу додавали ману надосадову рідину (290мл) упарювали на ЗООмл охолодженого до -15 - -20°С 65% розчину водяній бані при 60°С Упарений розчин (94мл) ацетону та гомогенізували (14000об/хв, 1хв, 4°С) центрифугували (3000об/хв, 35хв, 5°С) та діалізуОтриману суміш витримували 20 хвилин при 5°С вали проти 0.14М фосфатного буферу (рН7,6) та центрифугували (3000об/хв, 35хв, 5°С) ОтриПісля діалізу отримали опалесцкшчий розчин ману надосадову рідину (280мл) упарювали на (89мл) водяній бані при 60°С Упарений розчин (82мл) центрифугували (3000об/хв г 35хв, 5°С) та діалізуКонцентрація білка - 7,8мг/мл вали проти 0.14М фосфатного буферу (рН7,6) Активність препарату склала 82мкг/мл Після діалізу отримали опалесщючий розчин Приклад 5 (78мл) До 100г подрібненої тканини тимусу додавали ЗООмл охолодженого до -15 - -20°С 80% розчину Концентрація білка [О Н Lowry et al, 1946]ацетону та гомогенізували (14000об/хв, 1хв, 4°С) 2,06мг/мл Отриману суміш витримували 20 хвшшн при 5°С Активність препарату визначали за тестом та центрифугували (3000об/хв, 35хв, 5°С) Отри[Bach J Р et al, 1973] відновлення чутливості спонману надосадову рідину (274мл) упарювали на танних розеткоутворюючих клітин селезінки тимеводяній бані при 60°С Упарений розчин (78мл) ктомованих мишей до анти-Тпу-1 -сироватки Актицентрифугували (3000об/хв, 35хв, 5°С) та діалізувність препарату склала 1,28мкг/мл, тобто та його вали проти 0.14М фосфатного буферу (рН7,6) мінімальна концентрація, при якій спостерігалась Після діалізу отримали опалесцюючий розчин 50% редукція КІЛЬКОСТІ розеткоутворкючих клітин (70мл) Приклад 2 До 100г подрібненої тканини тимусу додавали Концентрація білка - 0,1мг/мл ЗООмл охолодженого до -15 - -20°С 70% розчину Активність препарату склала 475мкг/мл ацетону та гомогенізували (14000об/хв, 1хв, 4°С) Порівняльна характеристика препарату тимоОтриману суміш витримували 20 хвилин при 5°С сомшута препарату Т-актившу (див табл та центрифугували (3000об/хв, 35хв, 5°С) - Отриману надосадову рідину (278мл) упарювали на Таблиця водяній бані при 60°С Упарений розчин (81 мл) центрифугували (3000об/хв, 35хв, 5°С) та діалізуПрепарат тимосомш Препарат Т -активін вали проти 0.14М фосфатного буферу (рН7,6) Ліпосомний препарат Розчинний препарат Після діалізу отримали опалесцюючий розчин Розмір ліпосом 20 (76мл) ЮОмкм, КІЛЬКІСТЬ в 1мл Концентрація білка - 1,85мг/мл препарату 2,1 -8,5хЮ 8 Активність препарату склала 1,33мкг/мл Білкова частина препа- Препарат містить суміш Приклад З рату предсталена набо- поліпептидів з молекуДо 100г подрібненої тканини тимусу додавали ром поліпептидів з мо- лярною масою від 1200 ЗООмл охолодженого до -15 - -20°С 75% розчину лекулярною масою 10,6 до 6000 дальтон ацетону та гомогенізували (14000об/хв, 1хв, 4°С) - 25,7кД Отриману суміш витримували 20 хвилин при 5°С Активність препарату Активність препарату 1 та центрифугували (3000об/хв, 35хв, 5°С) Отри1,2 - 1,5мкг/мл 5мкг/мл ману надосадову рідину (286мл) упарювали на водяній бані при 60°С Упарений розчин (89мл) Таким чином, запропонований спосіб отрицентрифугували (3000об/хв, 35хв, 5°С) та діалізумання препарату тимосомшу дозволяє отримати вали проти 0.14М фосфатного буферу (рН7,6) високоактивний (1,2-1,5мкг/мл) препарат гормонів Після діалізу отримали опалесцюючий розчин тимусу в ЛІПОСОМНІЙ формі (81 мл) Концентрація білка - 1,52мг/мл Підписано до друку 05 06 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24