Застосування полісахаридних кон’югатів для пригнічення метастазів або запобігання рецидиву злоякісної пухлини

1. Застосування похідного полісахариду або його солі як активного інгредієнта для приготування лікарського засобу для пригнічення метастазів або запобігання рецидиву злоякісної пухлини, при якому вказане похідне полісахариду містить полісахарид з карбоксильною групою, зв'язаною з активною речовиною, що має протипухлинну активність, через амінокислоту або пептид, що складається з від 2 до 8 амінокислот, які є однаковими чи різними. 2. Застосування за п.1, при якому активною речовиною, що має протипухлинну активність, є похідне камптотецину формули (І): C2 2 (19) 1 3 Даний винахід стосується фармацевтичної композиції для інгібування метастазів або запобігання рецидиву злоякісної пухлини. Зокрема, даний винахід стосується фармацевтичної композиції для інгібування метастазів або запобігання рецидиву злоякісної пухлини, яка містить як активний інгредієнт похідне полісахариду, що включає полісахарид з карбоксильною групою, зв'язаною з активною речовиною, що має протипухлинну активність, наприклад, похідним камптотецину формули (І) або (II), як згадано нижче, через амінокислоту або пептид, що складається з 2-8 амінокислот, які є однаковими чи різними, або його сіль. Злоякісні пухлини є однією з головних причин смерті у розвинутих країнах, і більшість смертей, пов'язаних із злоякісними пухлинами, відбуваються через метастази у віддалені органи або рецидив, супроводжуваний метастазом у віддалені органи після місцевої терапії. Метастази у віддалених органах можуть бути викликані гематогенним метастазом або лімфогенним метастазом і відомо, що пацієнт, який має лімфогенний метастаз, схильний до високого ризику рецидиву злоякісної пухлини після місцевої терапії. Основними органами для рецидиву є мозок, легеня, печінка і кістка. Особливо, пухлина у травних органах, наприклад, рак товстої кишки, від якого страждає велика кількість пацієнтів, може вторгатися і поширюватися на печінку, а рак грудей і рак легені також часто вторгається і поширюється на печінку. Далі, лімфома і лімфатичний лейкоз можуть поширюватися головним чином на лімфатичну систему і є відомості, що під час розтину виявляли метастази у печінці з високою частотою. Щоб інгібувати рецидив, включаючи метастаз у віддалені органи, такий як метастаз в печінку, і для того, щоб продовжити життя, застосовують хіміотерапію та інші методи підтримувального лікування після місцевої терапії, але хіміотерапія має велику токсичність і не може використовуватися для постійного застосування. Крім того, майже не повідомлялося, що тривалість життя у більшій мірі продовжується за допомогою підтримувального лікування у вигляді хіміотерапії, ніж за допомогою однієї місцевої терапії. Наприклад, у дослідах з хіміотерапії на пацієнті, який був об'єктом хірургічного втручання з приводу широкого раку шлунка, одного з ракових утворень травних органів, проводили клінічні випробування різних агентів проти злоякісних пухлин, але жоден терапевтичний метод, який демонстрував би помітно кращий ступінь виживання, ніж одна хірургія, не був встановлений. За цих обставин було б бажаним знайти новий агент, ефективний для інгібування рецидиву або для продовження життя після місцевої терапії, застосовний щодо метастазів лімфатичних вузлів і віддалених органів з незначними побічними ефектами і придатний для постійного введення. З іншого боку, [WO 94/19376, WO 97/46260, WO 97/38727, JP-A-10-72467 і JP-A-10-95802] розкривають полісахаридне похідне, що включає полісахарид, зв'язаний з активною речовиною з протипухлинною активністю через амінокислоту або 75450 4 пептид. Однак ці публікації розкривають застосування вказаних полісахаридів для лікування ракових утворень шляхом накопичення їх в ділянці пухлини і знищення пухлинних клітин, але ніде не зазначена активність щодо інгібування метастазів або запобігання рецидиву злоякісної пухлини. Об'єктом даного винаходу є одержання нової фармацевтичної композиції для інгібування метастазів або запобігання рецидиву злоякісних пухлин. Були проведені численні дослідження і було виявлено, що похідне полісахариду, яке включає полісахарид з карбоксильною групою, зв'язаною через амінокислоту або пептид з активною речовиною, що має протипухлинну активність, справляє чудову дію при інгібуванні метастазів і/або у запобіганні рецидиву злоякісної пухлини, що дозволило здійснити даний винахід. Таким чином, даний винахід стосується фармацевтичної композиції для інгібування метастазів або запобігання рецидиву злоякісної пухлини, яка включає як активний інгредієнт похідне полісахариду, що включає полісахарид з карбоксильною групою, зв'язаною з активною речовиною, що має протипухлинну активність, через амінокислоту або пептид, що складається з 2-8 амінокислот, які є однаковими чи різними, або його сіль. Фіг.1 показує кількість днів, що минули після імплантації пухлини, та число тварин, які вижили, на моделях метастазу печінки Μ 5076. Полісахарід з карбоксильною групою, відповідно до даного винаходу, включає ті ж самі полісахариди, які розкриті у вищезазначених [WO 94/19376 і WO 97/46260], і включає полісахариди з карбоксильними групами, що первинно містяться у його структурі (наприклад, гіалуронова кислота, пектинова кислота, альгінова кислота, хондроїтин, гепарин і т.д.), і полісахариди, що первинно не містять карбоксильні групи (наприклад, пулулан, декстран, манан, хітин, маноглюкан, хітозан і т.д.), але які вводяться в них, і полісахариди, що не мають первинно карбоксильної групи у своїй структурі, але в які карбоксильні групи вводяться після утворення поліспиртів (наприклад, полісахарид поліспирт, що має карбоксильну групу). Полісахарід, що не має первинно карбоксильної групи, але в який вводиться карбоксильна група, означає полісахариди, які одержують заміщенням атома водню частини або всіх гідроксильних груп полісахаридів, що не мають первинно карбоксильної групи, на карбокси-С1-4-алкільну групу. У даному винаході полісахарид включає ті ж самі полісахариди, які одержують обробкою полісахариду, що первинно не має карбоксильної групи, за допомогою відновного агента, з наступним заміщенням атома водню частини або всіх гідроксильних груп утвореної сполуки на карбокси-С1-4алкільну групу. Полісахарід поліспирт, що має карбоксильну групу, включає, наприклад, карбокси-С1-4алкілполісахарид поліспирт, який одержують обробкою полісахариду, що первинно не має карбоксильної групи, послідовно періодатом натрію і боргідридом натрію за способом, [описаним у WO 5 75450 6 97/46260], з одержанням полісахариду поліспирту, амінокислоти і синтетичні амінокислоти (включаюякий далі обробляють галогенованою C1-4чи D-амінокислоти, L-амінокислоти, їхню суміш), і алкілкарбоновою кислотою. також включає як нейтральні амінокислоти, основАлкільна частина карбокси-C1-4-алкільної груні амінокислоти, так і кислі амінокислоти. Крім топи, яка заміщує атом водню гідроксильних груп го, амінокислота даного винаходу може бути не вищезазначеного полісахариду (включаючи політільки α-амінокислотою, але також й βсахарид поліспирт), може бути або алкільною груамінокислотами, γ-амінокислотами, εпою з лінійним ланцюгом, або алкільною групою з амінокислотами і т.д. розгалуженим ланцюгом. Прикладами амінокислот є гліцин, α-аланін, βПереважною карбокси-C1-4-алкільною групою аланін, валін, лейцин, ізолейцин, серин, треонін, є, наприклад, карбоксиметильна група, 1цистеїн, метіонін, аспарагінова кислота, глутамікарбоксіетильна група, 3-карбоксипропільна група, нова кислота, лізин, цитрулін, аргінін, фенілаланін, 1-метил-3-карбоксипропільна група, 2-метил-3тирозин, гістидин, триптофан, пролін, гідроксипрокарбоксипропільна група, 4-карбоксибутильна грулін, γ-аміномасляна кислота, ε-амінокапронова па і т.д., і карбоксиметильна група є найбільш пекислота і т.д. реважною. Пептид даного винаходу включає пептид, що У даному винаході полісахарид, що має карбоскладається з 2-8 амінокислот, переважно 2-5 аміксильну групу, переважно являє собою карбоксинокислот, які є однаковими чи різними. ПрикладаC1-4-алкілдекстран або карбокси-C1-4ми пептидів є гліцил-гліцил-L- або D-фенілаланілалкілдекстран поліспирт, і карбокси-C1-4гліцин, гліцил-гліцин, гліцил-гліцил-гліцин, гліцилалкілдекстран є особливо переважним. гліцил-гліцил-гліцин, гліцил-глщил-гліцил-гліцилСтупінь утворення поліспирту (шляхом послігліцин, L-або D-фенілаланіл-гліцин, L- або Dдовного окиснення періодатом натрію і відновлентирозил-гліцин, L- або D-лейцил-гліцин, L- або Dня боргідридом натрію) на стадії одержання карбофенілаланіл-цитрулін і L- або D-валіл-цитрулін (Nкси-C1-4-алкілполісахариду поліспирту, згаданого кінець цих пептидів введений у карбоксильній групі вище, не визначено, але проміжний полісахарид полісахариду). поліспирт переважно одержують обробкою полісаСеред цих пептидів переважними є гліцилхариду за умов, що дозволяють по суті майже погліцил-L- або D-фенілаланіл-гліцин, гліцил-гліцин, вне утворення поліспирту. гліцил-гліцил-гліцин, гліцил-гліцил-гліцил-гліцин, Більш того, у даному винаході полісахарид, що гліцил-гліцил-гліцил-гліцил-гліцин і L- або Dмає карбоксильну групу, переважно являє собою фенілаланіл-гліцин. карбоксиметильований декстран або карбоксимеАктивна речовина, що має протипухлинну актильований декстран поліспирт, і серед цих політивність за даним винаходом, може включати різні сахаридів особливо переважним є декстран, що сполуки, відомі як протипухлинний агент, і може має середню молекулярну вагу від 20000 до бути цитотоксичними агентами або цитостатични500000, і декстран, що має середню молекулярну ми агентами. Цитотоксичний агент являє собою вагу від 50000 до 350000, є найбільш переважним переважно похідні камптотецину і похідні таксану, і (зазначена середня молекулярна вага визначаєтьцитостатичний агент являє собою переважно інгіся методом гель-проникної хроматографії (GPC), бітори ангіогенезу, інгібітори рецептора EGF. [Shinseikagaku, Jikken Koza, Vol.20, p.7, TokyoБільш переважно, цитотоксичний агент являє соKagaku-Dojin, 5.11.1991]. бою похідні камптотецину і цитостатичний агент При введенні карбоксіалкільної групи у полісаявляє собою інгібітори ангіогенезу. хариди ступінь її введення виражається як "ступінь Прикладами похідних камптотецину є сполуки заміщення", який визначається числом карбоксіалформули (І), розкриті [в JP-A-10-72467]: кільних груп (включаючи групи пептидного ланцюга, що вводяться цими групами) з розрахунку на (I) залишок цукру. Це виражене наступним рівнянням: Ступінь заміщення = де R1 являє собою заміщену або незаміщену кількість карбоксіалкільних груп у молекулі нижчу алкільну групу, X1 являє собою групу фор= загальна кількість залишків цукру у молекулі мули: -NHR2 (R2 являє собою атом водню або ниЯкщо карбоксіалкільною групою є карбоксимежчу алкільну групу) і Alk являє собою С1-6тильна група, ступінь заміщення іноді виражається алкіленову групу з лінійним ланцюгом або розгаступенем карбоксиметилування (СМ-ступінь). луженим ланцюгом, що має за потреби в ланцюзі Якщо полісахарид являє собою декстран, стуатом кисню. Серед них переважною є сполука 10пінь його заміщення знаходиться переважно в діа(3'-амінопропілоксі)-7-етил-(20S)-камптотецин. пазоні від 0,3 до 0,8. Якщо полісахарид являє соІншими прикладами похідних камптотецину є бою декстран поліспирт, ступінь заміщення сполуки формули (II), розкриті [в JP-A-10-95802]: знаходиться переважно в діапазоні від 0,3 до 0,5. Амінокислота або пептид даного винаходу відіграють роль спейсера (зв'язувальної ланки), іс(II) нуючого між полісахаридом, що має карбоксильну групу, і активною речовиною, що має протипухлинну активність, і амінокислота чи амінокислота, де дві групи з числа від R2 до R6, що є суміжщо утворює зазначений пептид, включає природні ними одна з одною, об'єднані з утворенням нижчої 7 75450 8 алкіленової групи, і один з атомів вуглецю зазнаредієнта даного винаходу можуть бути одержані ченої нижчої алкіленової групи заміщений аміногзгідно з способам, розкритим [у WO 94/19376, WO рупою, і три групи, що залишилися, з числа від R2 97/46260, WO 97/38727, JP-A-10-72467 і JP-A-10до R6 являють собою атом водню, нижчу алкільну 95802]. групу або атом галогену. Серед них переважною є Фармацевтична композиція даного винаходу сполука (1S,9S)-1-аміно-9-етил-5-фтор-2,3може активно накопичуватися у сайті, такому як дигідро-9-гідрокси-4-метил-1Н,12Нлімфатичний вузол або печінка, на які може пошибензо[(dе]пірано[3',4':6,7]індолізино[1,2-b]хінолінрюватися ракова пухлина, може вивільняти актив10,13(9Н,15Н)-діон і т.д. ну речовину з відповідною швидкістю так, щоб Прикладами похідних таксану є таксол, таксоактивна речовина ледве зачіпала нормальні клітитер, 13-[(2'R,3'R)-3'N-трет-бутилоксикарбоніл-3'ни і пригнічувала зростання клітин пухлини, і отже, циклопропіл]-10-дезацетилбакатин III і т.д. фармацевтична композиція даного винаходу заВ активному інгредієнті даного винаходу відстосовна для інгібування метастазів або для запоношення полісахариду і активної речовини, що бігання рецидиву злоякісної пухлини. Фармацевмає протипухлинну активність, може бути обране тична композиція даного винаходу особливо відповідно до виду полісахариду, який повинен застосовна для інгібування метастазів лімфатичбути використаний, але якщо полісахаридом є них вузлів або метастазів печінки, зокрема, корисдекстран або декстран поліспирт, тоді вміст активна для інгібування метастазів лімфатичних вузлів. ної речовини, що має протипухлинну активність, Крім того, серед метастазів лімфатичних вузлів переважно знаходиться в інтервалі від 0,1 до 20% дана фармацевтична композиція застосовна для за вагою, більш переважно, в інтервалі від 2 до інгібування метастазування в лімфатичні вузли з 10% за вагою, з розрахунку на загальну вагу актитовстої кишки або метастазування в лімфатичні вного інгредієнта. вузли з легені. Серед активних інгредієнтів даного винаходу Крім того, дана фармацевтична композиція переважними є полісахаридні похідні або їхні солі, може чинити дію не тільки перед початком появи в яких амінокислота чи пептид, що складається з метастазів, але також й після початку утворення 2-8 амінокислот, які є однаковими або різними, метастазів. Тому дана фармацевтична композиція введені у частину чи у всі карбоксильні групи політакож застосовна для інгібування метастазів або сахариду, що має карбоксильну групу, через кисзапобігання рецидиву злоякісної пухлини після лотно-амідний зв'язок, і частина, що залишилася, місцевої терапії (наприклад, хірургії, променевої або всі аміногрупи чи карбоксильні групи, які не терапії, термотерапії, кріотерапії, лазероспалюваберуть участі у зв'язуванні з карбоксильними грульної терапії і т.д.). Крім того, дана фармацевтичпами вищезазначеного пептиду, зв'язані з карбокна композиція також підходить для повторного сильними групами, аміногрупами або гідроксильдозування протягом тривалого часу і може виконими групами активної речовини, що має ристовуватися разом з місцевою терапією. протипухлинну активність, через кислотно-амідний Дана фармацевтична композиція переважно зв'язок або складний ефірний зв'язок. вводиться парентерально (наприклад, внутрішОсобливо переважним активним інгредієнтом ньовенною ін'єкцією) і звичайно вводиться у формі є похідне полісахариду, в якому полісахаридом, рідкого складу, такого як розчин, суспензія, емульщо має карбоксильну групу, є карбоксиметильовасія і т.д. ний декстран, активною речовиною, що має проДана фармацевтична композиція переважно типухлинну активність, є 10-(3'-амінопропілоксі)-7приготовляється у формі ін'єкції або краплинного етил(20S)-камптотецин і пептидом є гліцил-гліцилвливання, використовуючи дистильовану воду для гліцин, або його сіль. Особливо переважним є поін'єкції, фізіологічний сольовий розчин, водний хідне полісахариду, в якому полісахаридом, що розчин глюкози. має карбоксильну групу, є карбоксиметильований Дозування даної фармацевтичної композиції декстран, що має середню молекулярну вагу від може змінюватися залежно від способів введення, 60000 до 200000, і ступінь карбоксиметилування віку, ваги або стану пацієнтів і т.д., але вона знайого знаходиться в діапазоні від 0,3 до 0,8, або ходиться звичайно в межах від 0,002 до 50мг/кг, його сіль. більш переважно в межах від 0,01 до 5мг/кг, у раІншим переважним активним інгредієнтом є зовій дозі, в перерахунку на кількість активної репохідне полісахариду, в якому полісахаридом, що човини. має карбоксильну групу, є карбокси-С1-4У даному описі нижчою алкільною групою і ниалкілдекстран поліспирт, активною речовиною, що жчою алкіленовою групою може бути група, що має протипухлинну активність, є (1S,9S)-1-аміно-9має від 1 до 6 атомів вуглецю, переважно, має від етил-5-фтор-2,3-дигідро-9-гідрокси-4-метил1 до 4 атомів вуглецю, і атомом галогену є атом 1Н,12Н-бензо(dе]пірано[3',4':6,7]індолізіно[1,2-b]фтору, атом хлору, атом брому, атом йоду і т.д. хінолін-10,13(9Н,15Н)-діон і пептидом є гліцилПриклади гліцил-L- чи D-фенілаланіл-гліцин, або його сіль, і Експеримент 1 (моделі метастазу печінки Μ особливо переважними є похідне полісахариду 5076) або його сіль, у якому полісахаридом, що має карОдин мільйон клітин Μ 5076 (клітини саркоми боксильну групу, є карбокси-С1-4-алкілдекстран яєчників миші) імплантують самцям мишей BDF1 поліспирт, що має середню молекулярну вагу від (5-тижневого віку, 8 тварин у групі) у хвостову ве200000 до 400000, і ступінь заміщення його знахону. Тестовану сполуку (сполуку А; сполуку, одердиться в діапазоні від 0,3 до 0,5. жану як описано нижче у розділі Препарат 1, і іриПохідне полісахариду або сіль активного інгнотекан (СРТ-11) розчиняють у фізіологічному 9 75450 10 сольовому розчині і кожну кількість, зазначену у Як показано у Таблиці 1, сполука, одержана як Таблиці 1, як згадано нижче, вводять внутрішньоописано нижче у розділі Препарат 1 (сполука А), венно мишам на 4-ий, 8-ий і 12-ий день після імвиявляє чудову активність стосовно продовження плантації, і мишей спостерігають протягом 120 життя на моделях метастазу печінки М5076. Необднів після імплантації пухлини. У контрольній групі хідно відзначити, що іринотекан не відомий як за(не обробленій тестованою сполукою) вводять сіб для інгібування метастазів або запобігання тільки фізіологічний сольовий розчин. Спостерігарецидивам злоякісної пухлини, а він був просто ли час виживання (дні) у групах, оброблюваних протестований як лікарський засіб з ряду похідних тестованими сполуками, та у контрольній групі, і камптотецину. рівень продовження життя розраховують згідно з Експеримент 2 (метастатичні моделі НТ-29) наступним рівнянням. Сегмент (2мм2) НТ-29 клітин (рак товстої кишРезультати показані у Таблиці 1 та на Фіг.1. ки людини) імплантують у червоподібний відросток Рівень продовження життя = самці миші 100NCr пі/пі (5-6-тижневого віку, 10 дні життя у групі, обробленій тестованою сполукою тварин у групі). Тестовану сполуку (сполуку А; = 100 сполуку, одержану, як згадано нижче у розділі дні життя у конкретній групі Препарат 1, сполуку В; сполуку, одержану, як згадано нижче у розділі Препарат 4, і іринотекан Таблиця 1 (СРТ-11) розчиняють у фізіологічному сольовому розчині, і кожну кількість, зазначену у наведеній Рівень проДоза Дні Стандартна нижче Таблиці 2, вводять внутрішньовенно мишам дов-ження (мг/кг) життя помилка на 15-ий, 19-ий, 23-ий і 25-ий день після імплантажиття (%) ції пухлини. З іншого боку, контрольній групі (не Контроль 15,00 1,24 обробленій тестованою сполукою) вводять тільки Сполука А 12,5 37,57 5,27 150,5 фізіологічний сольовий розчин. Присутність або 25 43,13 5,98 187,5 відсутність метастазів кожного органа перевіряють 50 48,71 5,33 224,8 на 84-ий день після імплантації пухлини. Іринотекан 80 22,50 0,5 50,0 Результати показані у наступній Таблиці 2. Таблиця 2 Група Сполука А (40мг/кг)**** Сполука А (20мг/кг)**** Сполука А (10мг/кг)**** Сполука А. (5мг/кг)**** Сполука В (5мг/кг)***** Сполука В (2,5мг/кг)***** Іринотекан (40мг/кг) Іринотекан (20мг/кг) Контроль Число тварин 10 10 10 10 10 10 10 10 10 Лімфатичний Печінка вузол МІ* Р** МІ* Р** 0