Спосіб лікування злоякісної пухлини

1. Спосіб лікування злоякісної пухлини, який включає видалення злоякісної пухлини, проведення имунотерапії шляхом лімфоцитаферезу - отримають лімфоцити із крові пухлиноносія, отримають пухлинні клітини із видаленої пухлини з подальшим їх опроміненням, інкубують пухлинні клітини та лімфоцити, їх відокремлюють один від одного, потім активовані лімфоцити вводять пухлиноносію внутрішньовенне, якій відрізняється тим, що проводять медикаментозну терапію, ставлять реакцію непрямої імунофлюоресценції пухлинних клітин з 38574 ваних а утологічних лімфоцитів хворому, при цьому лаферон вводять внутрішньом’язково у кількості 3 млн. од. у добу протягом 10 діб з повторенням курсу. Згідно винаходу, медикаментозну терапію проводять інтерлейкіном 12, при цьому інтерлейкін 12 вводять підшкірно протягом 8 тижнів. Винахідний рівень забезпечується неочевидністю можливості цілеспрямованої зміни гено- та фенотипу пухлинних клітин при проведенні трансфекції і внаслідок цього генерації специфічних Тлімфоцитів - кіллерів у тих випадках, в яких раніше цього не відбувалося та неочевидністю запропонованої комбінації медикаментозної терапії, за рахунок чого досягається кінцевий результат. Спосіб здійснюється таким чином: у хворого перед видаленням пухлини, проводять процедури лімфоцитаферезу за стандартною методикою (Гравитационная хирургия крови / За ред. O.K.Гаврилова. - С. 52-80). Отримані лімфоцити містять в стерильні умови в культуральне середовище RPMJ 1640, яке містить L-глутамін (2мМ), 2-меркаптоетанол (50 мкМ), пеніцилін (100 од/мл), стрептоміцин (100 мкг/мл) та 10% АВ-сироватку людини. Проводять видалення пухлини. Пухлин у містять в стерильний посуд, доставляють з операційної у лабораторію. Пухлин у подрібнюють, окремі фрагменти пухлинної тканини підлягають ферментативній обробці у трипсинізованих культуральних флаконах при 1370С (3 рази протягом 45 хвилин). Отримають клітинну суспензію. Проводять відмивання порціями середовища, усунення клітинних уламків еритроцитів у градієнті фікол-паку. Вилучають із суспензії пухлинних клітин 1мл. Проводять дві реакції непрямої імунофлюоресценції між пухлинними клітинами, моноклональними антитілами (анти-СД80 і анти-СД86) та антивидовими антитілами до них, які помічені флюоресцеїном. Реакції здійснюють таким чином: пухлинні клітини з 1 мл суспензії наносять на два предметних скла, роблять два мазки і фіксують ацетоном. Після чого обробляють перший мазок моноклональними антитілами анти-СД80, другий мазок обробляють моноклональними антитілами анти-СД86, інкубують 30 хвилин у вологій камері при t 370С, відмили, далі обидва мазки обробляють антивидовими ан титілами, які помічені флюоресцеїном, інкубують 30 хвилин. При розгляданні мазків у флюоресцентному мікроскопі специфічного світлення не виявляється, тобто обидві реакції негативні: експресії на пухлинних клітинах костимуляційних молекул СД80 та СД86 немає. Методом електропорації проводять трансфекцію гену В7-1 в пухлинні клітини, які містяться у суспензії. Опромінюють пухлинні клітини енергією 10000 Рад. Проводять інкубацію пухлинних клітин і лімфоцитів: до суспензії пухлинних клітин додають лімфоцити, які були одержані шляхом лімфоцитаферезу та попередньо (за 45 хвилин) проінкубовані з моноклональними антитілами анти-СД3 у концентрації 10 нг/мл середовища протягом 45 хвилин. В культуральне середовище додають інтерлейкін 1, інтерлейкін 2, інтерлейкін 12, альфаінтерферон і гама-інтерферон. Інкубують пухлинні клітини та лімфоцити протягом 6 діб, по закінченні яких, проводять повне відокремлення лімфоцитів та пухлинних клітин у переривчастому градієнті фікол-гіпаку (75% розчин). Отримають однорідну клітинну суспензію лімфоцитів, яка складається з активованих лімфоцитів пухлиноносія та плазми. Активовані аутологічні лімфоцити вводять пухлиноносію внутрішньовенне та місцеве. За 10 діб до цього розпочате введення хворому лаферону по 3 млн. од. на добу внутрішньом’язково 10 діб поспіль, а далі - також кожні півтора місяця протягом півроку. Після введення активованих лімфоцитів вводять інтерлейкін 12 підшкірне протягом 8 тижнів. Приклад. Хворий N потрапив у відділення загальної хірургії з діагнозом: меланома лівої пахвової області, III стадія, інвазія за Кларком 3, хворому проведене видалення меланоми з лівобічною пахвовою лімфаденектомією. Подалі проведене введення активованих аутологічних лімфоцитів і медикаментозна терапія за вищезгаданою методикою. Подалі ознак пухлинного росту немає. Перевага способу складається в тому, що пухлинний процес призупиняється у тих випадках, коли раніше, при використанні методу-прототипу, цього не відбувалося. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 2