Спосіб визначення концентрації білка в жовчі

Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики и может быть использовано для определения белка в желчи. Известен способ фотометрического определения концентрации белка в желчи, включающий экстракцию пробы смесью органических растворителей, осаждение белка, растворение осадка в щелочном растворе, обработку биуретовым реагентом и определение оптической плотности окрашенного раствора [1]. Согласно способу-прототипу желчь предварительно центрифугируют, прибавляют 20% раствор трихлоруксусной кислоты для осаждения белка в смесь спирт - ацетон (1 : 1) для удаления билирубина, перемешивают и центрифугируют, надосадочную жидкость сливают и промывают осадок указанной смесью растворителей до получения прозрачной надосадочной жидкости с использованием центрифугирования. Полученный осадок белка растворяют а 3% растворе едкого натра, прибавляют 25% раствор сернокислой меди, через 20мин центрифугируют, измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости при 540 - 560нм и производят расчет содержания белка. Основным недостатком известного способа является сложность и трудоемкость процедуры подготовки образца к измерению оптической плотности, использование большого количества реактивов, в т. ч. токсических веществ. В основу изобретения поставлена задача разработать такой способ определения концентрации белка в желчи, который был бы более простым, менее трудоемким, не требующим большого количества реактивов. Поставленная задача осуществляется, согласно изобретению, путем разбавления желчи 0,9% раствором хлористого натрия, измерения оптической плотности раствора при 278нм и расчета содержания белка по формуле [1] где - концентрация белка в желчи, мг/мл, - оптическая плотность при 278 нм, - величина разведения желчи 0,9% - ным раствором хлорида натрия, - толщина оптического слоя, см. Способ осуществляют следующим образом: пузырную желчь, взятую при операции больных желчнокаменной болезнью, и желчь, полученную при дуоденальном зондировании (порции и центрифугируют и разбавляют 0,9% раствором хлорида натрия. Измеряют спектр поглощения желчи в области 220 - 350нм на спектрофотометре Спекорд М-40, подбирая кювету с длиной оптического пути, соответствующей величине экстракции препарата. С помощью предлагаемого способа проведены исследования 32 образцов желчи больных, установлено, что максимум поглощения • измеряемой области находится в диапазоне 272 284нм, а среднее его положение составляет 278 ± 0,99нм. Параллельные определения содержания белка у этих больных по методу Лоури показали, что наблюдается линейная зависимость между концентрацией белка и коэффициентом экстинции при 278нм. Пример. Определяют содержание белка пузырной желчи, взятой при операции больной желчнокаменной болезнью Д-ой Н. М., 51 год. Величина оптической плотности разбавленной в 50 раз желчи при 278нм в 0,2см кювете составляет 0,61. Содержание белка в пузырной желчи рассчитывают по формуле [1] Применение предлагаемого способа в сравнении с прототипом позволяет сократить расходы, упростить и ускорить определение белка а желчи путем исключения процедур предварительной экстракции билирубина и проведения цветной реакции.