Спосіб визначення активності комплементу по гемолітичному індексу

Изобретение относится к области медицины, а именно, к иммунологии. Известен способ определения титра комплемента по 100% гемолизу, когда ставится опыт с двенадцатью разведениями сыворотки и результат учитывается по результатам той пробы, в которой наступил полный гемолиз (Чернушенко Е.Ф., Когосова Л.С. Иммунологические исследования в клинике. - К.: Здоров'я, 1978. С.21 - 24). Однако известный способ громоздкий, не обеспечивает высокой точности и не имеет количественных критериев оценки. В основу изобретения положена задача создать способ количественного определения активности комплемента путем гемолиза комплементом исследуемой сыворотки предварительно сенсибилизированных эритроцитов барана в присутствии гемолизированной сыворотки, которая может служить одним из наиболее объективных показателей иммунологического состояния организма человека. Способ осуществляется следующим образом. Определение активности комплемента в сыворотке крови проводят путем гемолиза сенсибизированных эритроцитов барана испытуемой сывороткой в разведении 1 : 100 и 1 : 33 в присутствии гемолизированной сыворотки. Гемолитическую систему готовят по классической методике, смешивая равные количества 3% взвеси эритроцитов барана и разведенной гемолитической сыворотки. Гемолитическую сыворотку предварительно разводят физиологическим раствором в зависимости от титра, указанного в инструкции к ней. Смесь выдерживают в термостате при 37° в течение 30мин. Испытуемую сыворотку, предварительно разведенную физиологическим раствором в 5 раз разливают по пробиркам, в первую пробирку вносят 0,05мл, во вторую 0,15мл и добавляют физиологический раствор до объема 1,0мл и гемолитическую систему в количестве 0,5мл. Инкубируют полученную смесь в термостате при 37° в течение 60мин. Сразу после термостатирования производят измерение экстинкции обеих проб на приборе Multiskan Plus (рабочий объем лунки планшета 0,2мл, длина волны Затем производят расчет индекса гемолиза по формуле где экстинкция пробы (разведение сыворотки 1 : 100), -экстинкция пробы (разведение сыворотки 1 : 33) и при значении индекса гемолиза 58,35 и более активность комплемента определяют как нормальную, при значении от 58,34 до 55,14 - умеренно сниженную, а при значении 55,13 и менее - резко сниженную активность комплемента. Предлагаемый способ имеет существенные отличия в сравнении с прототипом: количество исследуемых проб сокращается с 12 до 2, даны критерии количественной оценки активности комплемента по гемолитическому индексу. Разработанные критерии могут быть использованы для оценки состояния реактивности организма, врожденных и приобретенных форм дефицита комплемента, эффективности лечебных мероприятий, помогут оценить глубину поражения и функциональные особенности организма. Пример 1. Испытуемый Р., 48 лет, машинист разливочных машин, стаж 28 лет. Испытуемую сыворотку, предварительно разведенную физиологическим раствором в 5 раз налили в 2 пробирки: в первую внесли 0,05мл, во вторую - 0,15мл, довели до объема 1,0мл физиологическим раствором и добавили гемолитическую систему, приготовленную по классической методике в количестве 0,5мл. Провели инкубацию полученной смеси в термостате при 37° в течение 60мин. Сразу после термостатирования провели измерение экстинкции обеих проб, Экстинкция первой пробы была равна 1133, второй - 420. Индекс гемолиза, рассчитанный по формуле равен 62,93 Заключение: Активность комплемента соответствует норме. Пример 2. Больной Г., 46 лет, горнорабочий, саж 24 года. Диагноз: Пылевой бронхит стадии. Исследование проведено аналогично примеру 1. Экстинкция первой пробы равна 1052, второй пробы 457. Индекс гемолиза равен Заключение: Активность комплемента умеренно снижена. Пример 3. Больной А., 54 лет, горнорабочий, стаж 26 лет. Диагноз: Силикотуберкулез, сидеросиликоз очаговый туберкулез легких в фазе инфильтрации, МРТ(-) прогрессирующий период, эмфизема легких Исследование проведено аналогично примеру 1. Экстинкция первой пробы равна 1261, второй пробы 749. Индекс гемолиза равен Заключение: Активность комплемента резко снижена. Критерии оценки активности комплемента в предлагаемом способе разработаны на основе результатов исследований 35 человек, у которых при иммунологических исследованиях изучалась активность комплемента в зависимости от состояния здоровья и иммунологического статуса. Предлагаемый способ прост, позволяет количественно охарактеризовать комплементарную активность сыворотки крови. Способ может быть использован в клинических лабораториях как один из методов оценки врожденных и приобретенных форм две щита комплемента, имунной реактивности организма, эффективности проведенного лечения.