Спосіб визначення проліферативної активності пухлин

Винахід стосується медицини, а саме, онкології, і може бути використаним для встановлення проліферативної активності пухлин. Існує декілька способів визначення проліферативної активності пухлин, але вони недостатньо точні, занадто працеємкі, що не дозволяє залучити їх до практичної онкології для більш детальної характеристики пухлин. Відомий спосіб визначення проліферативної активності пухлин, який полягає у приготуванні парафінових блоків, імуногістохімічного забарвлення тканин за допомогою антитіл PC-10 до ядерного антигену проліферуючих клітин, проведення кількісного аналізу зображення (Упоров А.В., Семиглазов В.Ф., Пожарисский К.М. Иммуногистохимическое изучение клеток рака молочной железы с использованием разных маркеров пролиферации // Ар х. патол.. - 2000. - №2. - с.26-30.) Спільними суттєвими ознаками аналога і винаходу, що заявляється, є такі: - виготовлення парафінових блоків; - імуногістохімічне забарвлення тканин антитілом PC-10 до ядерного антигену проліферуючих клітин; - проведення кількісного аналізу зображення. Цей спосіб є недостатньо ефективним, тому що підрахунок кількості проліферуючих клітин проводився людиною, що може призводить до помилок при підрахунку. Також оцінювалась лише кількість проліферуючих клітин. Найбільш близьким за технічною сутністю та результатом, що досягається, є спосіб, який полягає у приготуванні парафінових блоків, імуногістохімічного забарвлення за допомогою антитіл PC-10 до ядерного антигену проліферуючи х клітин, проведення кількісного аналізу зображення (Виллетт К., Ха ган М., Далей В. и др. Изменения пролиферации опухолевых клеток при раке прямой кишки, вызванное предоперационным лечением 5-фторурацилом и облучением // Международный медицинский журнал. - 1998. - №8. - с. 705-709.) Спільними суттєвими ознаками прототипу і винаходу, що заявляється, є такі: - виготовлення парафінових блоків; - імуногістохімічне забарвлення тканин антитілом PC-10 до ядерного антигену проліферуючих клітин; - проведення кількісного аналізу зображення; Цей спосіб є недостатньо ефективним, тому, що аналіз зображення проводився людиною, а це приводить до суб'єктивних висновків. При аналізі результатів враховувалась лише кількість проліферуючи х клітин, що на сучасному рівні розвитку науки і техніки не є достатнім. В основу винаходу поставлено задачу удосконалення способу визначення проліферативної активності пухлин, шляхом застосування системи комп'ютерного аналізу та визначення додаткових показників проліферативної активності, що забезпечить підвищення точності та вірогідності оцінки активності пухлин. Поставлена задача вирішується тим, що у способі, який включає приготування парафінових блоків, імуногістохімічне забарвлення тканин антитілом PC-10 до ядерного антигену проліферуючих клітин та проведення кількісного аналізу зображення, новим є те, що зображення вивчають в автоматичному режимі за допомогою системи компьютерного аналізу та додатково визначають площу ядра клітин, що діляться, кількість антигену в ядрі і його концентрацію. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у такому. Використання системи комп'ютерного аналізу зображення дозволяє з великою точністю підраховувати кількість проліферуючих клітин. При цьому система фіксує тільки чітке зображення ядер клітин, що діляться та ігнорує артефакти. Крім кількості проліферуючи х клітин система комп'ютерного аналізу зображення підраховує площу ядра клітин, що діляться, а також кількість та концентрацію ядерного антигену проліферуючої клітини. Це дозволить ретельніше характеризувати морфологічні властивості пухлин, що допоможе індивідуалізувати лікування онкологічних хворих, прогнозувати метастазування, розвиток рецидиву, виживання пацієнтів. Спосіб здійснюється таким чином. Готують парафінові блоки. Проводять імуногістохімічне забарвлення препаратів за допомогою первинного антитілу (Monoclonal anti-PCNA, clone р10) виробництва Sigma chemical (USA) до ядерного антигену проліферуючих клітин, а також вторинного антитіла (Anti-mouse JgG(Whole molecule), FITC conjugate) виробництва Sigma chemical (USA). Зображення, отримане на флюоресцентному мікроскопі Axioskop, об'єктив 40х (Zeiss, Германія) вводили до системи комп'ютерного аналізу зображення. Розраховувалась кількість проліферуючих клітин, площа ядра клітин, що діляться, кількість та концентрація ядерного антигену проліферуючих клітин. Приклад. Хвора Верман В.Ф. 79 p., була госпіталізована у клінічний диспансер з діагнозом "Рак середньо ампулярного відділу прямої кишки T3N0M0, st 2, gr 2", історія хвороби №5035. Була проведена операція Гартмана. З пухлини та нормальної слизової оболонки взяті шматки препарату. Після проведення дослідження отримані наступні результати: проліферативна активність пухлини - 59, нормальної слизової оболонки - 39, площа ядер клітин що діляться у пухлині - 18,01, у нормальній слизовій оболонці - 15,73, кількість та концентрація ядерного антигену проліферуючих клітин у пухлині 3,48 та 43,97, а у нормальній слизовій оболонці - 2,98, та 39,8 відповідно. Таким чином, зроблено висновок про вірогідно більшу проліферативну активність в колоректальному раку ніж у нормальній слизовій оболонці, що підтверджує високу інформативність методу, а в подальшому дозволить скоригувати лікування.