Спосіб забарвлення апоптичних клітин у суспензії

Винахід відноситься до галузі медицини, а саме до галузі морфології та імунології. Відомий спосіб забарвлення апоптичних клітин у суспензії [Шишова Ю.В., Юрченко О.В., Хромяк В.М., Сидоренко С.П., Чехун В.Ф. Резистентность к цисплатине, ассоциированная с гиперчувствительностью к СD95-опосредованному апоптозу клеток эпидермоидной карциномы человека сублинии KB/DDP5. // Экспериментальная онкология. - 1999. - Т.21. - №2. - С. 141-145] виконується наступним чином. Цитоцентрифуговані препарати фіксують в метанолі протягом 15 хвилин, висушують та забарвлюють флуоресцентним барвником Hoechst 33342 у концентрації 1мкг/мл протягом 5 хвилин при температурі 37°С. Забарвлені препарати заключають у 50% розчин гліцерину, покривають предметним скельцем та запаюють. Препарати переглядають при освітленні люмінесцентною лампою. Недоліком цього способу є його дороговизна, пов'язана з необхідністю використовувати високі концентрації барвника Hoechst 33342 та, внаслідок цього, труднощі з використанням наведеного способу забарвлення для проведення скринінгу. Задачею заявляємого способу є здешевлення методу дослідження з метою використання методу для скринінгу та збільшення якості приготування препаратів. Задача досягається тим, що проводиться забарвлення живих клітин барвником з меншою концентрацією 0,05-0,15мкг/мл та більш тривалою експозицією - 25-35 хвилин, фіксацію клітин проводять після забарвлення. Заявлений спосіб виконують наступним чином. Отриману суспензію клітин, наприклад, мононуклеарні клітини крові, піпетують та двічі центрифугують по 8-12 хвилин з прискоренням 200g у розчині нейтрального буфера, наприклад phosphate buffer solution з рН 7,2. Відмиті клітини інкубують 25-35хв. при температурі 37°С з розчином барвника Hoechst 33342 у концентрації 0,05-0,15мкг/мл у співвідношенні суспензія клітин/розчин барвника - 1:1-2:1, центрифугують з додаванням розчину нейтрального буферу, наприклад phosphate buffer solution з рН 7,2. Клітини фіксують фіксуючою сумішшю, поміщають на предметне скельце, покривають покривним скельцем та запаюють. Препарати переглядають при освітленні люмінісцентною лампою при збільшенні 7x90. Таким чином, використання заявляємого способу в роботі ЦНДЛ ШАПО ім. П.Л. Шупика дозволило здешевити спосіб визначення апоптозу у суспензії клітин методом люмінесцентної мікроскопії у 10 разів порівняно з прототипом за рахунок використання меншої концентрації барвника з більш тривалою експозицією. Все зазначене дозволило використовувати заявляємий метод для скринінгу.