Спосіб одержання пептидів у вигляді кислотно-адітивних солей

Изобретение к а с а е т с я пептидов, в частности их получения в виде кислотно-аддитивных солей общей форму а «О с го 4 &Э4* 4 '( / 1 7 7903 ONB • НС1 р 15 м; Изобретение относится к гпособу получения новых пептидов общей фор0,84 мл (6,0 ммоль) триэтиламина и мулы 2,45 г (5,0 ммоль) Boc-Asp-OPfp. X-Arg-Lys-V Реакционную смесь перемешивают в виде кислотно-аддитивных солей, 5 30 мин при комнатной температуре, где X - водород, Glp; упаривают, остаток растворяют в 30 мл V-Asp, Asp-Val, Asp-Val-NH 3 , Aspэтилацетата. Раствор промывают 15 мл Val-OMe, Asn-Val, Asp-Ala, A s p - I l e , 1 н. соляной кислоты, 15 мл 5%-ного Ala-Val, Gly-Val, Asu-Val, обладаюраствора бикарбоната натрия и 15 мл 10 щих нммуномодулирующей активностью, воды, сушат над безводным сульфатом которые могут найти применение в э к натрия и упаривают в вакууме, Полуспериментальной биологии и медицине. ченный защищенный дипептид (R f 0 , 9 ) Цель изобретения - способ получерастворяют в 10 мл 8 н. НС 1 в диокния новых пептидов, обладающих более сане, через 15 мин добавляют 40 мл широким спектром иммунорегулирующего 15 беэводного эфира и упаривают досуха. действия. Полученный в остатке свободный дипепПринятые сокращения: Z - бензилтид ( R j 0,5) растворяют в 10 мл оксикарбонил-; Вое - трет-бутилоксиДМФА, доводят значение рН раствора карбонилил-; OBufc- трет-бутилокси-; с помощью триэтиламина до 8,0 и д о Opfp - пентафторфенокси-; Asu - ами- 20 бавляют 3,1 г (5,5 ммоль) Boc-Lysносукцинил-; ОМе - метокси-; OBzl I?J- OPfp. Реакционную смесь перемебенэилокси-; ОКБ - 4-питробензилокшивают 30 мин, поддерживая рН 8,0 с си-группа; Д Ф - диметилформамид; М А помощью триэтиламина, разбавляют ТЭА - триэтиламин. 25 60 мл хлороформа и промывают 15 мл I н. соляной кислоты и 15 мл воды, Температуру плавления определяют сушат безводным сульфатом натрия с помощью прибора Тоттоли фирмы BU— и упаривают, остаток упаривают с б е з c h i (Швейцария). Гомогенность проводным эфиром. Полученный защищенный межуточных и конечных соединений кон тролируют с помощью тонкослойной хро 3Q трипептид (R^ 0,4) высаждают со матографии на пластинках с силикате100 мл безводного эфира,отфильтролем фирмы Merck (ФРГ) в системах: вывают, дважды промывают эфиром и растворяют в 20 мл ДМФА. К полученно1 - этилацетат-(пиридин-уксусная му раствору добавляют триэтиламин до кислота - вода, 2 0 : 6 : 1 1 ) , 9 5 : 5 ; рН 8,0, а затем 3,3 г (7,0 ммоль) 2 - этилацетат - (пиридин-уксус35 £-Arg/NO2./~~OP£p' Реакционную смесь ная кислота - вода, 2 0 : 6 : 1 1 ) , 9 : 1 ; перемешивают 30 мин, поддерживают рН 3 - этилацетат - (пиридин-уксус8,0 с помощью триэтиламина, упариваная кислота - вода, 2 0 , 5 : 1 1 ) , 4 : 1 ; ют, остаток растирают с 50 мл э т а н о 4 - этилацетат - (пиридин-уксус• ная кислота - вода, 2 0 : 6 : 1 1 ) , 3:2; 4п ла, отфильтровывают, промывают э т а нолом (2 у 10 мл). В итоге получают 5 - н-бутанол - (пиридин-уксус3,85 г (.73%) 1 с т . п л . 135-І48°С; ная кислота - вода, 2 0 : 6 : 1 1 ) , 3 : 7 ; R . 0,80. 6 - хлороформ - метанол, 9 : 1 ; П р и м е р 2 (метод В). 2-Arg 7 - н-бутанол - уксусная кислота - вода, 1:1:1; (N0 2 )-LysiZ)-Asp(0BzI)-0BzI ( I I ) . 4S 8 - н-бутанол - уксусная кислоСмесь 1,62 г ( 3 , 3 ммоль) Boc-Lys ' т а - вода, 4: 1:5. (,Z)-OPfp, 1,40 г (4,0 ммоль) Asp Хроматограммы проявляли нингидри^OBzI)-OBzI. HC1 и 0,98 мл (7,0 ммоль) ном после хлорирования с К-толидитриэтиламина в 10 мл этилацетата о с ном. Удельное оптическое вращение i-n тавляют стоять в течение часа при измеряли на цифровом фотоэлектрическомнатной температуре и затек р а з ком поляриметре Perkin-Elmer 141 бавляется с 20 мл этилацетатд. Смесь (США). Растворители отгоняли на р о встряхивают сначала с 10 мл 1 в , торном испарителе фирмы (Швейцария) раствора соляной кислоты, затем с на водяной баке с температурой не ее Ю мл 5%-ного раствора бикарбоната выше 40 С. натрия, сушат над безводным сульфаП р и м е р 1 (Метод А). 2-Arg том натрия и затем упаривают в ваку(NO 2 )-Lys(Z)-Asp(0Bzl)-Val-ONB ( 1 ) . уме. Остаток укрепляют с н-гексаном, К раствору 1,73 г ( 6 , 0 ммоль) Valотфильтровывают и промывают с н-гек 127790.3 Г Я MOM, ПопуЧЯРМЫЙ Я Л1ПИШНПНЫЙ ДИПЕПТИД (выход: 81,2%; т.пл. 92-95°С; R» = 0,75) обрабатывают с 30 мл 4 н. солянокислого дчоксана в течение 30 мин, затем упаривают до сухого ос- 5 татка. Свободный дипептид ^ Г = 0, 10) растворяют в 10 мл днметилформамііда, раствор нейтрализуют с 0,35 мл триэтнламина и полученную суспензию доЮ бавляют к приготовленному следующим образом смешанному ангидриду: 10,6 г (3,0 ммоль) Z-Arg(NQ, )-0H и 0,42 мл ( 3 0 ммоль) триэтиламина растворяют ., в 5 мл диметилформамид. Раствор охлаждают до -!0 С и при этой темпера- \5 туре смешивают с 0,36 мл (3,0 ммоль) пивалоилхлорида капельным образом. К полученному таким путем раствору смешанного ангидрида через 5 мин при 20 -10 С добавляют раствор свободного пептида. Реакционную смесь перемепивают еще в течение 30 мин при 0 С, затем оставляют стоять на ночь и на следующий день испаряют до сухого о с 25 т а т к а . Остаток растворяют в 50 мл хлороформа и раствор встряхивают с І0 мл I н. раствора соляной кислоты, затем с 10 мл 5%-ного раствора бикарбоната натрия и, наконец, с 10 мл воды. После сушки органическая фаза 30 упаривается до сухого остатка и полученный остаток укрепляют приготовленной в соотношении 1:1 смесью эфира и н - г е к с а н а . Получают 1,82 г (выход 84%) защищенного трипептида с 35 R* = 0,70. ные защищенного т е т р а п е т и д а содержатся в табл. 5. П р и м е р 4. Arg-Lys-Asp-Val • АсОН (IV). 2,25 г (2,22 ммоль) Z-Arg(NO ) Lys(Z)-Asp(OBzI)-VaI-ONB (пример 1) суспендируют в 50 мл 90%-ной у к с у с ной кислоты. Суспензия смешивается с 1 г 5%-ного палладия на активном у г ле и через смесь в течение 14 ч пропускают водород. Затем катапизатор отфильтровывают, промывают с 2* 10 мл 90%-ной уксусной кислоты, фильтрат объединяют с промывной жидкостью и затем упаривают до сухого остатка. Остаток с водой и этанолом вновь упаривают, затем растворяют в 2 мл воды и смешивают с 30 мл этанола. Полученную суспензию фильтруют и о с а док промывают этанолом. Получают 0,92 г (80%) IV c U J ° = -24,8° ( С І ; 10% АсОН); R | = 0,10. и Аминокислотный аріализ: Lys I ,05 О ) ; Arg 0,95 ( 1 ) ; Asp 1,04 ( I ) ; Val 0,95 ( 1 ) . П р и м е р 5 . Glp-Arg-Lys-AspVal • АсОН (V). 4,1 г IBoc-LystZ)-Aspp-VaL 23,7 20,4 19,4 21,4 23, 2 22 , 8 -4,3 7Л 2,4 З 13 1277903 Продолжение табп Концентрация (написанная как отрицательный десятичньві логарифм концентрации, мол/л) Пептид 00 Г 11 I IZIIZZI !_JL_L 8 Clp-Arg-Lye-Авр** 23,7 18,4 19,7 19,5 18,7 20,6 -5,3 9 Arg-Lye-Aen-Val 27,7 24,3 23,7 24,7 21,9 22.3 -6,В 10 A r g - L y e - A e n - V a l 20,8 25,0 28,6 24,3 22,5 23,6 7,8 И Arg-Ala-Aap-Val 23,7 22,5 20,7 19,8 20,2 21,8 12 A r g - L y e - A l a - V a l 20,8 23,I 25,5 21,7 23,ч 20,3 13 A l a - L y e - A s p - V a l 23,7 20,3 23,9 22,5 22,8 25,3 14 A r g - L y a - A e p - A U 26,4 27,9 25,3 25,8 24,5 28,6 *2,2; 15 Arg-Lys-Aep-Ila 27,7 24,5 28,7 23,2 25,4 25,5 -4,5; +1:0 16 Arg-Aep-Lye-Val 27,7 27,5 27,3 26,4 26,2 25,4 17 Glp-Arg-Lye-Aep-Val-Tyr 20,8 24,9 26,6 22,6 22,7 24,1 4,7 -1,1 5,8 0 , 0 5 Ґ т е с т (с однап араметр-из меняющимся анализом, считая ня ТР5) 0,05 со S t u d e n t - l e s t . Т а б л и ц а 4 Связывающая Е-роэетки активность лимфоцитов здоровых в процентах активности лимфоцитов, п »4 Концентрация (написанная как отрицательный десятичный логарифм, 1 ІІIЇ1 выр_аженный_8 мол/лл