Нутрицевтична композиція та її застосування для покращення цілісності інтестинального бар’єра

1. Застосування поліненасичених жирних кислот для одержання композиції для використання у способі стимулювання цілісності інтестинального бар'єра, який включає призначення ссавцю композиції, яка містить: а) ейкозапентаєнову кислоту (ЕРА), докозакапроєву кислоту (DHA) та арахідонову кислоту (AR A), у яких вміст довголанцюгової поліненасиченої жирної кислоти з 20 та 22 атомами вуглецю не перевищує 15 ваг. % загального вмісту жиру; та b) принаймні два окремі олігосахариди (OL1 та OL2), які мають гомологічність в монозних ділянках нижче 90 %. 2. Нутрицевтична композиція, яка містить: а) ЕРА, DMA та AR A, у яких вміст довголанцюгової поліненасиченої жирної кислоти з 20 та 22 атомами вуглецю не перевищує 15 ваг. % загального вмісту жиру; та b) принаймні два окремі олігосахариди (OL1 та OL2), які мають гомологічність в монозних ділянках нижче 90 %. 3. Композиція за п. 2, яка містить галактоолігосахарид та фруктан, вибрані з групи, до якої входять фр уктоолігосахариди, інулін та їх суміші. 4. Композиція за п. 2 або 3, у якій принаймні 10 ваг. % олігосахариду мають ступінь полімеризації (DP), рівний 2-5, і принаймні 5 ваг. % мають ступінь полімеризації (DP) з інтервалу 10-60. 2 (19) 1 3 81875 Представлений винахід відноситься до способу покращення цілісності інтестинального бар'єру та до композиції, придатної для застосування у такому способі. Шлунково-кишковий епітелій зазвичай функціонує як вибірковий бар'єр, що дозволяє адсорбцію поживних речовин, електролітів та води і перешкоджає дії харчових та мікробних антигенів, включаючи харчові алергени. Шлунково-кишковий епітелій обмежує потрапляння антигенів до великого кола кровообігу, яке може спричинятися реакціями запалення, наприклад алергічними реакціями. Ймовірність появи алергії, зокрема харчової алергії, підвищується, при цьому багато дослідницьких груп шукають (превентивні) ліки для цих недугів. ЕР1272058 описує композицію, яка містить неперетравлювані олігосахариди, для покращення щільного з'єднання з метою зниження інтестинальної проникності та послаблення алергічної реакції. Композиція може містити LCPUFA's (довголанцюгові поліненасичені жирні кислоти). ЕР 745001 описує суміш неперетравлюваних олігосахаридів та n-3 і n-6 жирних кислот для лікування виразкового коліту. Усамі та ін [Clinical Nutrition 2001, 20(4): 351359] описують вплив ейкозапентаенової кислоти (ЕРА) на проникність щільного з'єднання в інтестинальних моношарових клітинах. Насправді було виявлено, що ЕРА підвищує проникність, показуючи, непридатність для покращення цілісності інтестинального бар'єру. Композиції попереднього рівня техніки неоптимально придатні для покращення цілісності бар'єра. Представлений винахід надає суміш вибраних довголанцюгових поліненасичених жирних кислот (LC-PUFA's) та вибраних олігосахаридів. Представлена суміш LC-PUFA's та олігосахаридів ефективно покращує цілісність бар'єру шляхом синергічного покращення інтестинальної проникності та вироблення слизу і особливо придатна для покращення цілісності бар'єру у людських немовлят. На подив було виявлено, що вибрані LCPUFA's ефективно знижують епітеліальну трансклітинну проникність. На противагу до того, що зазначив Усамі та ін [Clinical Nutrition 2001, 20(4): 351-359], дані винахідники виявили, що С18 та С20 поліненасичені жирні кислоти, особливо ейкозапентаенова кислота (ЕРА), докозакапроєва кислота (DHA) та арахідонова кислота (ARA), придатні ефективно знижувати проникність інтестинального щільного з'єднання. На додаток до LC-PUFAs представлена композиція містить олігосахариди. Вибрані олігосахариди покращують цілісність бар'єру стимулюванням вироблення слизу, що надає більш товстий шар слизу. Вважається, що цей ефект спричинений впливами окремих олігосахаридів на вироблення коротколанцюгової 4 жирної кислоти (SCFA). Тому, коли лікарські засоби призначаються ссавцю інтестинально, то представлена суміш LC-PUFA та неперетравлюваних олігосахаридів синергічно покращує цілісність бар'єру і/або синергічно знижує інтестинальну проникність одночасним зниженням проникності щільного з'єднання та стимулюванням вироблення слизу. В подальшому аспекті представлена композиція покращує якість шару кишкового слизу. Слизовий шар містить муцини. Муцини є високомолекулярними глікопротеїнами, що синтезуються та секретуються бокаловидними клітинами. Вони формують желеподібний шар на слизовій поверхні, таким чином покращуючи цілісність бар'єру. Слизовий шар містить різні типи муцинів, наприклад, кислоту, нейтральні та сульфовані муцини. Вважається, що посилена гетерогенність слизового шару покращує функціональність бар'єру. Представлена композиція переважно містить принаймні два різні олігосахариди, які впливають на слизову стр уктур у і корисно впливають на муцинову гетерогенність в слизовому шару або безпосередньо або зміною кишкової флори. Вважається, що кожен відмінний вибраний олігосахарид має різний вплив на якість слизу та його кількість. Більше того, два окремі олігосахариди також здатні стимулювати якість слизу, як це відображено ступінню сульфування протягом їх синергічної стимуляції вироблення SCFA. На подив, даними винахідниками було виявлено, що суміш двох різних олігосахаридів згідно з представленим винаходом синергічно стимулює вироблення ацетату. Даними винахідниками також було виявлено, що вироблення слизу залежить від вироблення ацетату. Представлена композиція переважно покращується наданням як довго- так і коротколанцюгових олігосахаридів. Передбачення різних довжин ланцюгів призводить до стимулювання вироблення слизу в різних частинах клубової кишки та товстої кишки. Коротколанцюгові олігосахариди (типово із ступінню полімеризації (DP) 2, 3, 4 або 5) стимулюють вироблення муцину у верхній частині товстої кишки і/або нижній частині клубової кишки, тоді як вважається, що олігосахариди з більшими довжинами ланцюга (переважно із ступінню полімеризації (DP) більшою ніж 5-60) стимулюють вироблення муцину у більш віддалених частинах товстої кишки. Навіть подальші покращення можуть досягатися наданням принаймні двох різних олігосахаридів як довголанцюгових так і коротколанцюгових. Ці переважні варіанти втілення роблять внесок в подальшу покращену цілісність бар'єру по всій клубовій кишці і/або товстій кишці. Більше того, на подив було виявлено, що ЕРА, DHA та ARA були здатні послаблювати шкідливі 5 81875 впливи інтерлейкіна 4 (IL-4) на інтестинальну проникність. IL-4 є цитокіном, який секретується у певних пацієнтів у більших кількостях слизовими Т-клітинами та індукує інтестинальну проникність. Тому представлений винахід також передбачає спосіб лікування і/або профілактики хвороб, таких як алергія, особливо атопічний дерматит, у якому підвищують концентрацію інтестинального IL-4,. Представлений винахід відноситься до харчової композиції, яка містить: a) ЕРА, DHA та ARA, у яких вміст довголанцюгової поліненасиченої жирної кислоти з 20 та 22 атомами вуглецю не перевищує 15 вагових % загального вмісту жиру; і b) принаймні два окремі олігосахариди, які мають гомологічність в монозних ділянках, нижчу 90%. Ця композиція може переважно використовува тися у способі стимулювання цілісності інтестинального бар'єру, при цьому згаданий спосіб включає призначення ссавцю згаданої композиції. Поліненасичені жирні кислоти Дані винахідники на подив виявили, що ейкозапентаенова кислота (ЕРА, n-3), докозакапроєва кислота (DHA, n-3) та арахідонова кислота (ARA, n-6) ефективно знижують проникність щільного інтестинального з'єднання. Тому представлена композиція, яка особливо придатна для покращення цілісності інтестинального бар'єру, містить ЕРА, DHA та AR A. Дані винахідники виявили, що нижча концентрація LC-PUFA's була ефективною у зниженні проникності щільного з'єднання (дивіться Приклади, редакція Усамі та ін). Тому вміст LCPUFA з 20 та 22 атомами вуглецю у представленій композиції переважно не перевищує 15 вагових % загального вмісту жиру, переважно не перевищує 10 вагових %, навіть більш переважно не перевищує 5 вагових % загального вмісту жиру. Переважно представлена композиція містить принаймні 0,1 вагових %, переважно принаймні 0,25 вагових %, більш переважно принаймні 0,5 вагових %, навіть більш переважно принаймні 0,75 вагових % LC-PUFA з 20 та 22 атомами вуглецю загального вмісту жиру. З тієї ж причини вміст ЕРА переважно не перевищує 5 вагови х % загального вмісту жиру, більш переважно не перевищує 1 ваговий %, проте переважно становить принаймні 0,05 вагових %, більш переважно принаймні 0,1 вагових % загального вмісту жиру. Вміст DHA переважно не перевищує 5 вагови х %, більш переважно не перевищує 1 ва говий %, проте становить принаймні 0,1 вагових % загального вмісту жиру. Оскільки було виявлено, що AR A є особливо ефективною у зниженні проникності щільного з'єднання, то представлена композиція містить відносно високі кількості, переважно принаймні 0,1 вагових %, навіть більш переважно принаймні 0,25 вагових %, найбільш переважно принаймні 0,5 вагових % загального вмісту жиру. Вміст ARA переважно не перевищує 5 вагових %, більш переважно не перевищує 1 ваговий % загального вмісту жиру. На даний момент ARA, яка 6 містить ентеральну композицію, ЕРА та DHA переважно додають для балансування дії ARA, наприклад для послаблення потенційної прозапальної дії метаболітів ARA. Надлишок метаболітів з AR A може спричинити запалення. Тому представлена композиція переважно містить AR A, ЕРА та DHA, у якій вагове відношення AR A/DHA переважно вище 0,25, переважно вище 0,5, навіть більш переважно вище 1. Відношення переважно нижче 25. Вагове відношення ARA/EPA переважно знаходиться в інтервалі від 1 до 100, більш переважно від 5 до 20. Представлена композиція переважно містить 5-75 вагових % поліненасичених жирних кислот від загального вмісту жиру, переважно 10-50 вагових %. Якщо представлена композиція використовується як молочна суміш для немовлят (наприклад спосіб годування немовляти, який включає призначення йому представленої композиції), то вміст LC-PUFA, особливо LC-PUFA з 20 та 22 атомами вуглецю, переважно не перевищує 3 вагових % загального вмісту жиру, оскільки бажано якомога краще одержувати штучне жіноче молоко. З тієї ж причини, вміст омега-3 LC-PUFA переважно не перевищує.1 ваговий % загального вмісту жиру; вміст омега-6 LC-PUFA переважно не перевищує 2 вагових % загального вмісту жиру; вміст AR A (омега-6) переважно нижчий 1 вагового % загального вмісту жиру; і/або вагове відношення EPA/DHA становить переважно 1 або менше, більш переважно менше 0,5. LC-PUFA з 20 та 22 атомами вуглецю можуть надаватися у вигляді вільних жирних кислот у формі тригліцериду, у формі фосфоліпіду або як суміш одного або більшої кількості вищезгаданих речовин. Представлена композиція переважно містить принаймні один ARA та DHA у формі фосфоліпіду. Представлена харчова композиція також переважно надає омега-9 (n-9) жирну кислоту (переважно олеїнову кислоту, 18:1) для забезпечення належного харчування. Переважно представлена композиція надає принаймні 15 вагових % n-9 жирної кислоти від ваги усі х жирних кислот, більш переважно принаймні 25 вагових %. Вміст n-9 жирних кислот переважно нижчий 80 вагових %. Олігосахариди Придатні олігосахариди згідно з винаходом є сахаридами, які мають ступінь полімеризації (DP), що становить принаймні 2 монозні ділянки, які не або тільки частково перетравлюються в кишечнику дією кислот або травними ензимами, присутніми у людському вер хньому травному тракті (малий кишечник та шлунок), але які є здатними до ферментації людською кишковою флорою. Термін монозні ділянки відносяться до ділянок, які мають замкнену кільцеву структур у, переважно форми гексози, наприклад піранози або фуранози. Ступінь полімеризації олігосахариду типово менша 60 монозних ділянок, переважно нижче 40, навіть більш переважно нижче 20. 7 81875 Представлена композиція містить принаймні два різні олігосахариди, які мають гомологічність в монозних ділянках, меншу приблизно 90%, переважно меншу 50%, навіть більш переважно меншу 25%, навіть більш переважно меншу 5%. Термін "гомологічність", як він використовується у представленому винаході, є загальним процентним складом однакових монозних ділянок у різних олігосахаридах. Наприклад, олігосахарид 1 (OL1) має структур у fruc-fruct-ghi-gal і, таким чином, містить 50% fruc, 25% gal та 25% glu. Олігосахарид 2 (OL2) має структуру fruc-fruc-glu і, таким чином, містить 66% fruc, 33% glu. Таким чином, різні олігосахариди мають гомологічність 75% (50% fruc + 25% glu). У переважному варіанті втілення представлена композиція містить галактоолігосахариди і принаймні один, вибраний з групи, до якої входять фр уктоолігосахариди та інулін. Кожен з представлених олігосахаридів переважно містить принаймні 66%, більш переважно принаймні 90% монозних ділянок, вибраних з групи, до якої входять моноза, арабіноза, фруктоза, фукоза, рамноза, галактоза, b-D-галактопіраноза, рибоза, глюкоза, ксилоза, уронова кислота та їх похідні, обраховані на основі загальної кількості монозних ділянок, що містяться в них. Згідно з подальшим варіантом втілення принаймні один з олігосахаридів представленої композиції вибирається з групи, до якої входять фр уктани, фр уктоолігосахариди, неперетравлювані декстрини, галактоолігосахариди (включаючи трансгалактоолігосахариди), ксилоолігосахариди, арабіноолігосахариди, глюкоолігосахариди, маноолігосахариди, фукоолігосахариди, кислі олігосахариди (дивіться нижче, наприклад олігосахариди уронової кислоти, такі як гідролізат пектину) та їх суміші. Переважно представлена композиція містить принаймні один, переважно принаймні два олігосахариди, вибрані з групи, до якої входять фруктоолігосахариди або інулін, галактоолігосахариди та гідролізат пектину. Для гарної кількості та якості слизу представлена композиція переважно містить принаймні один олігосахарид, який містить принаймні 66% галактози або фруктози у вигляді монозної ділянки. У переважному варіанті втілення композиція містить принаймні один олігосахарид, який містить принаймні 66% галактози у вигляді монозної ділянки і принаймні один олігосахариди, який містить принаймні 66% фруктози у вигляді монозної ділянки. У особливо переважному варіанті втілення представлена композиція містить галактоолігосахарид і олігосахарид, вибраний з групи, до якої входять фруктоолігосахариди та інулін. Фруктоолігосахариди стимулюють вироблення сульфомуцину в дистальній колонії бактерій людської флори, пов'язаної зі щурами [Kleessen et al, (2003) Brit J Nutr 89:597-606], а галактоолігосахариди стимулюють вироблення кислого муцину [Meslin et al, Brit. J.Nutr (1993), 69: 903-912]. 8 Для подальшого збільшення товщини слизового шару по всій поверхні товстої кишки, принаймні 10 вагових % олігосахаридів у представленій композиції мають ступінь полімеризації (DP), рівну 2-5 (тобто, 2,3,4 і/або 5), і принаймні 5 вагових % мають ступінь полімеризації (DP), рівну 10-60. Переважно принаймні 50 вагових %, більш переважно принаймні 75 вагових % олігосахаридів мають ступінь полімеризації (DP), рівну 2-9 (тобто, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 і/або 9), оскільки вважається, що це поширюється на клубову кишку та верхню і середню частини товстої кишки, і оскільки ваговий процент олігосахаридів, який необхідно добавити в композицію для одержання бажаного ефекту, зменшується. Переважно вагові відношення: a. (олігосахариди із ступінню полімеризації (DP), рівною 2-5): (олігосахариди із ступінню полімеризації (DP) 6,7,8 і/або 9) > 1; та b. (олігосахариди із ступінню полімеризації (DP), рівною 10-60): (олігосахариди із ступінню полімеризації (DP), рівною 6, 7, 8 і/або 9) > 1 обидва більше 1. Переважно обидва вагові відношення більші 2, навіть переважно більші 5. Для подальшого збільшення товщини слизового шару та покращення якості по усій поверхні товстої кишки, переважно кожному з принаймні двох різних олігосахаридів надають різну довжину ланцюга, переважно принаймні 10 вагових % кожного олігосахариду від загальної ваги відповідного олігосахариду мають ступінь полімеризації (DP), рівний 2-5 (тобто, 2, 3, 4 і/або 5), і принаймні 5 вагових % мають ступінь полімеризації (DP), рівний 10-60. Переважно принаймні 50 вагових %, більш переважно принаймні 75 вагових % олігосахариду від загальної ваги таких олігосахаридів мають ступінь полімеризації (DP), рівний 2-10, оскільки вважається, що це поширюється на клубову кишку і верхню та середню частину товстої кишки. Кислі олігосахариди Для подальшого покращення цілісності бар'єру представлена композиція переважно містить кислі олігосахариди із ступінню полімеризації (DP), рівною 2-60. Термін кислий олігосахарид відноситься до олігосахаридів, які містять принаймні одну кислу груп у, вибрану з групи, до якої входять N-ацетилнейрамінова кислота, Nглікольоїлнейрамінова кислота, вільна або естерифікована карбонова кислота, група сірчаної кислоти та група фосфорної кислоти. Кислий олігосахарид переважно містить ділянки уронової кислоти (тобто, полімер уронової кислоти), більш переважно ділянки галактуронової кислоти. Кислий олігосахарид може бути гомогенним або гетерогенним карбогідратом. Придатні приклади є гідролізатами пектину і/або алгінатом. В кишковому тракті полімери уронової кислоти гідролізуються з одержанням мономерів уронової кислоти, які стимулюють вироблення кишкового ацетату, який у свою чергу стимулює секрецію кишкового слизу [Barcelo et al., Gut 2000; 46:218224]. 9 81875 Переважно кислий олігосахарид має нижченаведену структуру І, у якій термінальна гексоза (ліва) переважно має подвійний зв'язок. Ділянки гексози, відмінні від термінальної(их) ділянки(ок) гексози, є переважно ділянками уронової кислоти, навіть більш переважно ділянками галактуронової кислоти. Групи карбонової кислоти на цих ділянках можуть бути вільними або (частково) естерифікованими і переважно принаймні 10% метильовані (дивіться нижче). Структура І: Полімерний кислий олігосахарид у якій; R переважно вибирається з групи, до якої входять водень, гідрокси- або кислотна група, переважно гідрокси; і переважно один, вибраний з групи, до якої входять R2, R3, R4 та R5, представляє N-ацетилнейрамінову кислоту, Nглікольоїлнейрамінову кислоту, вільну або естерифіковану карбонову кислоту, гр упу сірчаної кислоти і групу фосфорної кислоти, а решта з R2, R3, R4 і R5 представляють гідрокси і/або водень. Переважно радикал, вибраний з групи, до якої входять R2, R3, R4 та R5, представляє Nацетилнейрамінову кислоту, Nглікольоїлнейрамінову кислоту, вільну або естерифіковану карбонову кислоту, гр упу сірчаної кислоти або групу фосфорної кислоти, а решта представляє гідрокси і/або водень. Навіть більш переважно радикал, вибраний з групи, до якої входять R2, R3 , R4 та R5, представляє вільну або естерифіковану карбонову кислоту, а решта з R2, R3, R4 та R5 представляють гідрокси і/або водень; а n є цілим числом і відноситься до кількості ділянок гексози (дивіться також нижченаведений Ступінь Полімеризації), яке може бути будь-якою ділянкою гексози. Придатне з є цілим числом з інтервалу від 1 до 5000. Переважно ділянка(и) гексози є ділянкою уронової кислоти. Найбільш переважно R1, R2 та R3 представляють гідрокси, R4 представляє водень, R5 представляє карбонову кислоту, з є будь-яким числом з інтервалу від 1 до 250, переважно з інтервалу від 1 до 10, а ділянка гексози є галактуроновою кислотою. Виявлення, вимірювання та дослідження переважних кислих олігосахаридів у тому вигляді, у якому вони використовуються в представленому способі, наведені у більш ранній заявці на патент заявників, яка відноситься до кислих олігосахаридів, тобто WO 0/160378. Для стимулювання збільшення товщини слизового шару по всій поверхні товстої кишки, представлена композиція переважно містить принаймні 10 вагових % кислих орлігосахаридів із ступінню полімеризації (DP), рівною 2-5 (тобто, 2, 3, 4 і/або 5), та принаймні 5 вагових % кислих 10 олігосахаридів із ступінню полімеризації (DP), рівною 10-60, причому згадані вагові % беруться від загальної ваги олігосахаридів. Кислі олігосахариди, використовувані у винаході, переважно одержуються з пектину, пектату, алгінату, хондроїтину, гіалуронових кислот, гепарину, гепарану, бактеріальних карбогідратів, сіалогліканів, фукоїдану, фукоолігосахаридів або карагенану, більш переважно з пектину і/або алгінату. Вміст олігосахариду Коли у готовій до вжитку рідкій формі представлена композиція переважно містить 0,1100 грамів неперетравлюваного олігосахариду на літр, більш переважно 0,5- 0 грамів на літр, навіть більш переважно 1-25 грамів на літр. Занадто високий вміст олігосахаридів може спричиняти дискомфорт внаслідок надлишкової ферментації, у той час як дуже низький вміст може призводити до непридатного слизового шару. Вагове відношення принаймні двох різних олігосахаридів становить переважно 1-10, більш переважно - 1-5. Ці вагові відношення стимулюють оптимальне вироблення муцину різних типів в різних місцях кишечнику. Переважно олігосахарид включають в представлену композицію згідно з винаходом у кількості, яка перевищує 0,1 вагових %, переважно, яка перевищує 0,2 вагови х %, більш переважно, яка перевищує 0,5 вагових %, і навіть більш переважно, яка перевищує 1 вагови х % від загальної ваги сухої композиції. Представлена композиція переважно має вміст олігосахаридів, нижчий 20 вагових %, більш переважно, нижчий 10 вагових %, навіть більш переважно - нижчий 5 вагових %. Додавання нуклеотидів і/або нуклеозидів до представленої композиції додатково покращує функцію слизового бар'єру травного каналу, особливо, коли вона інгібує і/або знижує дію бактеріальної транслокації і послаблює ушкодження кишок. Тому представлена композиція переважно також містить 1-500мг нуклеозидів і/або нуклеотидів на 100 грам сухої молочної суміші для дітей, навіть більш переважно - 5 -100 мг. Застосування Представлена композиція може корисно використовува тися у способі покращення цілісності бар'єру у ссавців, особливо у людей. Представлена композиція може також корисно використовува тися у способі лікування або профілактики хвороб, пов'язаних із погіршеною цілісністю бар'єру, причому згаданий спосіб включає призначення ссавцю представленої композиції. Представлена композиція переважно призначається орально. Для хворих та немовлят представлена композиція переважно змішується з усією їжею, включаючи протеїн, карбогідрат та жир. Представлена композиція переважно призначається немовлятам з віком 0-2 роки. Композиція може призначатися пацієнтам, які страждають від погіршеної цілісності бар'єру, та здоровим пацієнтам. Представлена композиція 11 81875 переважно використовується у способі задоволення харчових потреб недоношених дітей (немовля, народжене до закінчення періоду тривалістю 37 тижнів вагітності). Представлена композиція може також корисно використовува тися у способі лікування і/або профілактики ушкодження кишечника призначенням неї пацієнту до або після медичного лікування, яке може призвести до ушкодження кишечника. Таке медичне лікування може, наприклад, бути хірургічним або ентеральним медичним лікуванням (наприклад лікування антибіотиками, анальгетиками, засобами нестероїдної протизапальної терапії (NSAID), хемотерапевтичними агентами і т д.). Представлена композиція може також вигідно використовува тися для лікування або профілактики хвороб, у яких руйн ування інтестинального бар'єру базується на розвитку процесу хвороби, наприклад у способі лікування або профілактики хронічних запалень, особливо запалення кишечника (IBD), синдрому подразнення кишечника (IBS), целіакії, панкреатиту, гепатиту, артриту або діабетів. Більше того, винахід може використовуватися у способі годування пацієнтів, які піддавалися або піддаються абдомінальній хірургії, та пацієнтів, які відчувають післяопераційну дисфункцію кишечника, і/або пацієнтів, які погано харчуються. У подальшому варіанті втілення винаходу представлена композиція переважно призначається пацієнтам, які страждають від синдрому набутого імунного дефіциту (СНІД), і/або пацієнтам, які інфіковані вірусом іммуного дефіциту людини (ВІЛ), наприклад у способі лікування СНІДу і/або ВІЛ-інфекції. Згаданий спосіб включає оральне призначення представленої композиції, переважно, перемішаної з харчовими продуктами, вибраними з групи, до якої входять карбогідрат, протеїн та жир. Окрім того, винахід може також використовува тися для лікування або профілактики ускладнень, які витікають з погіршеної цілісності бар'єру, особливо у способі лікування і/або профілактики діареї, особливо діареї у немовлят. Внаслідок послабленої дії діареї у немовлят представлена композиція може також вигідно використовуватися для послаблення подразнення шкіри від повзунків. Призначення представленої композиції знижує потрапляння харчових та мікробних антигенів, особливо харчових алергенів, з кишкової порожнини в слизовий шар або у велике коло кровообігу і тому може корисно використовуватися у способі лікування або профілактики алергії і/або алергічної реакції, особливо у способі лікування або профілактики харчової алергії, наприклад алергічної реакції, яка випливає з перетравлювання харчових продуктів. Даними винахідниками було також виявлено, що DPA, DHA і/або AR A придатні послаблювати впливи IL-A на проникність кишечника. Тому один аспект представленого винаходу передбачає спосіб лікування і/або профілактики хвороб, у 12 якому підвищують концентрацію інтестинального IL-4 (наприклад алергійні хвороби), причому згаданий спосіб включає призначення LC-PUFA, переважно вибраного з групи, до якої входять ЕРА, DH A та AR A, переважно перемішані з представленими вибраними олігосахаридами. Тому, представлена композиція може також вигідно використовуватися у способі лікування атопічного дерматиту. Оскільки функція бар'єру новонароджених повністю не розвинута, то представлена композиція може вигідно призначатися малим немовлятам, тобто, немовлятам з віком 0-6 місяців. Композиція може призначатися немовляті у формі молочної суміші для дітей без жіночого молока або змішаною з жіночим молоком. Тому, представлений винахід також передбачає харчову молочну суміш, яка містить жіноче молоко та представлену композицію. Композиції, які містять жіноче молоко та представлену композицію, особливо придатні для годування недоношених дітей. Представлена композиція переважно надається у вигляді запакованого порошку або упакованої готової до вжитку молочної суміші. Для запобігання псування продукту, об'єм упаковки готової до вжитку молочної суміші переважно не перевищує одну дозу, наприклад переважно не перевищує 500мл, а об'єм упаковки представленої композиції у формі порошку переважно не перевищує 250 доз. Придатні об'єми упаковки для порошку становлять 2000 грам або менше, переважно на 1000 грам або менше. Упаковані продукти, оснащені етикетками, які явно або неявно спрямовують споживача на використання згаданого продукту у відповідності з однією або більшою кількістю вище або нижченаведених цілей, охоплені представленим винаходом. Такі етикетки можуть, наприклад, посилатися на представлений спосіб профілактики алергічної реакції на харчові алергени шляхом включення виразу такого як "знижена чутливість до харчів", "покращує кишкову сприйнятливість", "покращена харчова толерантність" або подібний вираз. Подібним чином, може робитися посилання на представлений спосіб лікування і/або профілактики алергії шляхом включення термінології, еквівалентної до "покращена стійкість" або "понижена чутливість". Молочні суміші для дітей Було виявлено, що представлена композиція може вигідно застосовуватися у харчових продуктах, таких як дитячі харчові продукти та лікувальні харчові продукти. Такі харчові продукти переважно містять ліпід, протеїн та карборгідрат і переважно призначаються у рідкій формі. Термін "рідкий харчовий продукт", як він використовується у представленому винаході, включає сухий харчовий продукт (наприклад порошки), які супроводжуються інструкціями щодо змішування згаданої сухої харчової суміші з відповідною рідиною (наприклад водою). Тому представлений винахід також відноситься до харчової композиції, яка переважно містить 5-50 енергетичних % ліпіду, 5-50 13 81875 енергетичних % протеїну, 15-90 енергетичних % карбогідрату та представлену суміш олігосахаридів та LC-PUFA's. Переважно представлена харчова композиція містить 10-30 енергетичних % ліпіду, 7,5-40 енергетичних % протеїну і 25-75 енергетичних % карбогідрату (енергетичних % мало для вмісту енергії і представляє відносну кількість, яку вносить кожне складове до загальної кількості калорій препарату). Переважно використовують суміш овочеви х ліпідів та принаймні одного жиру, вибраного з групи, до якої входить риб'ячий жир та омега-3 рослинна олія, олія з морських водоростей або бактеріальна олія. Протеїни, використовувані у харчовому препараті, переважно вибираються з групи нелюдських тваринних протеїнів (таких як молочні протеїни, м'ясні протеїни та протеїни яйця), овочевих протеїнів (таких як соєвий протеїн, пшеничний протеїн, рисовий протеїн та гороховий протеїн), вільних амінокислот та їх сумішей. Особлива перевага надається азотному джерелу, виділеному з коров'ячого молока, особливо протеїнів коров'ячого молока, таких як казеїн, та білкам сироватки молока. Джерело перетравлюваного карбогідрату може додаватися до харчової молочної суміші. Воно переважно надає приблизно 40%-80% енергії харчової композиції. Може використовуватися будь-який придатний (джерело) карбогідрат, наприклад цукроза, лактоза, глюкоза, фруктоза, тверді частинки кукурудзяного сиропу та малтодекстрини, і їх суміші. Представлена композиція переважно використовується як молочна суміш для немовлят і переважно містить 7,5-12,5 енергетичних % протеїну, 40-55 енергетичних % карбогідратів та 35-50 енергетичних % жиру. Оскільки представлена композиція належним чином використовується для послаблення алергічної реакції у немовляти, то протеїн молочної суміші для немовлят переважно вибирається з групи, до якої входять протеїн гідролізованого молока (наприклад гідролізований казеїн або протеїн гідролізованої сироватки), овочевий протеїн і/або амінокислоти. Використання цих протеїнів додатково послаблювало алергічні реакції немовляти. Нерегулярності спорожнення (наприклад важкі спорожнення, недостатній об'єм спорожнення, діарея) є основною проблемою в багатьох дітей та хворих суб'єктів, що приймають рідкі харчові продукти. Було виявлено, що проблеми спорожнення можуть послаблюватися призначенням представлених олігосахаридів у рідкому харчовому продукті, які мають осмотичний тиск 50-500мОсм/кг, більш переважно 100400мОсм/кг. З огляду на вищезгадане, також важливо, що рідкий харчовий продукт не має надлишкової теплової енергії, однак все ще надає достатньо калорій для годування суб'єкту. Тому рідкий харчовий продукт переважно має калорійність 0,1 14 2,5ккал/мл, навіть більш переважно 0,5-1,5ккал/мл, найбільш переважно - 0,6-0,8ккал/мл. ПРИКЛАДИ Приклад 1: Вплив LC-PUFA на цілісність бар'єру Моношари (МС) кишкових епітеліальних клітинних ліній Т84 (Американська Колекція Типів Культур (АТТС), Manassas, USA) вирощували на фільтрах компанії Transwell (Corning, Costar BV, The Netherlands), які дозволяють як відбір зразків слизу так і серози і стимулювання людських кишкових епітеліальних клітин. Через два тижні після злиття моношари інкубували в люмінальному відділенні з поліненасиченими жирними кислотами ARA (арахідонова кислота; 5,8,11,14-ейкозатетраенова кислота), DHA (цис4,7,10,13,16,19 докозакапроєва кислота), ЕРА (ейкозапентаенова кислота) або стандартною пальмітиновою (С 16:0) кислотою (Palm) (Sigma, St. Louis, USA). Остання процедура вибиралась для моделювання in vivo шля ху призначення харчових сполук. Клітини інкубували з ARA, DHA, ЕРА або пальмітиновою кислотою протягом 0, 24, 48 та 72 годин при різних концентраціях (10мкМ та 100мкМ). Експерименти проводили для оцінки цілісності основного бар'єру. Функцію епітеліального бар'єру визначали вимірюванням трансепітеліального опору (TER, W.см 2), здійснюваного епітеліальним вольтомметром (EVOM; World Precision Instruments, Germany), та проникності для 4кДа FITC-декстрану (маркер трансклітинної проникності, Sigma, USA). Опір (Епітеліальна проникність) для 4kDa FITCдекстрану визначався наступним чином. Перед витіканнями декстрану середовище освіжали середовищем культури без фенолу червоного протягом однієї години після додавання 5мкл (біомаса 100мг/мл) 4kDa FITC-декстрану до люменального відділення. Після 30 хвилинної інкубації 100мкл зразка збирали з серозального відділення, а флюоресцентний сигнал вимірювали при довжині хвилі збудження 485нм та хвилі випромінювання 520нм (FLUOstar Galaxy®, BMG Labtechnologies, USA). Витікання FITC-декстрану обраховувалися у пікомолях РІТСдекстрану/см 2/год. С татистичні дослідження проводилися з використанням програмного забезпечення ANOVA (SPSS версія 10). Результати впливу жирних кислот (100мкМ) на спонтанну цілісність бар'єру після 72 год. інкубації надані в Таблиці 1. Таблиця 1 показує, що LCPUFA's, AR A, ЕРА та DHA знижують молекулярне проникнення і покращують епітеліальний опір. На противагу цьому контрольні експерименти показують, що пальмітинова кислота має протилежні ефекти, тобто, піддає ризику цілісність бар'єру. Ці результати є показовими для корисного застосування ЕРА, DHA та AR A, і зокрема ARA в композиції згідно з представленим винаходом і для застосування у способі згідно з представленим винаходом, наприклад у способі покращення цілісності бар'єру. Ці результати додатково підтверджують синергічні ефекти представленої суміші жирних кислот та неперетравлюваних олігосахаридів. 15 81875 Фігура 1 показує тривалість та дозу (10мкМ і 100мкМ) залежних впливів різних жирних кислот (пальмітинова кислота, DHA, GL A та АА) на цілісність основного бар'єру (TER). Фігура 1 показує, що LC-PUFA's АА, DHA та GLA покращують цілісність епітеліального бар'єру, як це відображено підвищеним опором (TER). Ці результати є показовими для корисного застосування ЕРА, DHA, GLA та AR A, зокрема AR A, в композиції згідно з представленими винаходом та для застосування у способі згідно з представленим винаходом, тобто, у способі покращення цілісності бар'єру. Ці результати додатково підтверджують синергічні ефекти представленої суміші жирних кислот та неперетравлюванихолігосахаридів. Таблиця 1 Інгредієнт (LC-PUFA) Інтенсивність Опір (TER) Стандарт 79 1090 Пальмітинова 161 831 кислота DHA 72 1574 AR A 28 1816 ЕРА 65 1493 Приклад 2: Вплив LC-PUFA на руйнування опосередкованого IL-4 бар'єру Моношари (МС) кишкових епітеліальних клітинних ліній Т84 (АТСС, USA) вирощували на фільтрах компанії Transwell (Corning, Costar BV, The Netherlands), надаючи можливість відбору зразків слизу та серози, і стимулювання людських кишкових епітеліальних клітин. Через два тижні після злиття моношари інкубували в присутності IL-4 (2нг/мл, серозне відділення, Sigma, USA ) з або без поліненасичених жирних кислот ARA, DHA, GL A, ЕРА або стандартної пальмітинової кислоти (10мкМ або 100мкМ, слизове відділення, Sigma, St. Louis, USA). Клітини попередньо інкубували з ARA, DHA, ЕРА або пальмітиновою кислотою протягом 48 год. перед інкубуванням IL4. Сумісна інкубація PUFA's та пальмітинової кислоти з IL-4 тривала протягом інших 48 год., у той час як середовище культури та добавки міняли кожні 24 год. Фукцію епітеліального бар'єру визначали вимірюванням трансепітеліального опору (TER) та проникності, як це описано в Прикладі 1. Статистичне оцінювання проводили, як це описано в Прикладі 1. Результати впливу AR A, DH A, ЕРА та пальмітинової кислоти (100мкМ) на руйнування опосередкованого IL-4 бар'єру надані в Таблиці 2. Таблиця 2 показує, що LC-PUFA's AR A, DH A та ЕРА інгібують підвищену інтенсивність, спричинену IL-4. На противагу до цього, пальмітинова кислота мала шкідливий вплив та послаблювала руйнування бар'єру порівняно із стандартом. Ці результати є показовими для корисного застосування ARA, DH A та ЕРА у лікувальних композиціях та харчових композиціях для немовлят для запобігання або послаблення руйнування опосередкованого IL-4 бар'єру, наприклад, як це відбувається у харчовій алергії 16 або алергії від коров'ячого молока. Ці результати додатково підтверджують синергічні впливи представленої суміші жирних кислот та неперетравлюваних олігосахаридів. Фігура 2 показує тривалість та дозу (10мкМ та 100мкМ) залежних захисних впливів різних FA's (пальмітинова кислота, DHA, GL A та АА) на руйнування опосередкованого IL-4 бар'єру (Інтенсивність). Фігура 2 показує, що AR A, DH A та GLA захищають від руйн ування опосередкованого IL-4 бар'єру, як це відображено зниженою інтенсивністю потоку 4kDa декстрану. Ці результати є показовими для корисного застосування ARA, DHA та GL A в лікувальних композиціях та харчових композиціях для немовлят для запобігання або послаблення руйнування опосередкованого IL-4 бар'єру, наприклад, як це відбувається при харчовій алергії або алергії від коров'ячого молока. Ці результати додатково підтверджують синергічні ефекти представленої суміші жирних кислот та неперетравлюваних олігосахаридів. Таблиця 2 Інгредієнт (LCPUFA) Стандарт Пальмітинова кислота DHA AR A ЕРА Інтенсивність IL-4 582 IL-4 TER 374 777 321 271 218 228 547 636 539 Приклад 3: Вплив олігосахаридів на вироблення ацетату Мікроорганізми одержували із свіжого калу дітей, яких годують з пляшечки. Свіжий кал дітей віком 1-4 місяці змішували і поміщали у захисне середовище на 2 год. Як субстрат використовували або пребіотики (TOS); суміш TOS/інулін (HP) в пропорції 9/1 (в/в); інулін; суміш олігофруктоза (ОS)/інулін в пропорції 1/1 (в/в), або нічого (чистий). Трансгалактоолігосахариди (TOS) одержували з інгредієнтів Vivinal GOS, Borculo Domo, Zwolle (Нідерланди) і вони містять як неперетравлювані олігосахариди; 33 вагових % дисахаридів, 39 вагових % трисахаридів, 18 вагових % тетрасахаридів, 7 вагових % пентасахаридів та 3 вагових % гекса-, гепта- та октасахаридів. Інулін (HP), активні харчові інгредієнти Orafti, Tienen, Belgium, тобто, Raftiline HP®, з середнім значенням ступеня полімеризації (DP), рівним 23. Середовище: середовище McBain & MacFarlane: буферизована пептонова вода (3,0г/л), дріжджовий екстракт (2,5г/л), муцин (щіткові облямівки) (0,8г/л), триптон (3,0г/л), Lцистеїн-НСІ (0,4г/л), жовчні солі (0,05г/л), К2НРО4×3Н2О (2,6г/л), NaHCO3, (0,2г/л), NaCI (4,5г/л), MgSO4×7H2O (0,5г/л), СаСІ2 (0,228г/л), FeSO4×7H2O (0,005г/л). Наповнювали 500мл-ві пляшечки компанії Scott середовищем і стерилізували 15 хвилин при 121°С. Буферизоване середовище: К2НРО4×3Н2О (2,6г/л), 17 81875 NаНСО3 (0,2г/л), NaCI (4,5г/л), MgSO4×7H2O (0,5г/л), СаС12 (0,228г/л), FeSO4×7H2O (0,005г/л). Доводять значення рН до 6,3 ± 0,1 за допомогою К2НРО4 або NaHCO3. Заповнюють 500мл-ві пляшечки компанії Scott середовищем та стерилізують 15 хвилин при 121°С. Захисне середовище: Буферизований пептон (20,0г/л), L-цистеїн-НСІ (0,5г/л), тіогліколят натрію (0,5г/л), 1 таблетка ресазурину на літр, доводять значення рН до 6,7±0,1 за допомогою 1М NaOH або НСІ. Кип'ятять у мікрохвильовій пічці. Пляшки з сироваткою заповнюють 25мл середовища та стерилізують протягом 15 хвилин при 121°С. Зразки свіжого калу змішували із захисним середовищем та зберігали протягом декількох годин при температурі 4°С. Законсервований розчин калу центрифугували з швидкістю 13000об/хв протягом 15 хвилин, надосадову рідину видаляли і кал змішували з середовищем McBain & Мас Farlane у ваговому відношенні 1:5. 3мл суспензії цього калу змішували з 85мг глюкози або пребіотика або нічого не додавали (чиста) в пляшку і ретельно перемішували. Зразок видаляли (0,5мл). 2,5мл одержуваної суспензії подавали в діалізну тр убку в 60мл-вій пляшечці, заповненій 60мл-ми буферизованого розчину. Пляшку гарно закривали і інкубували при 37°С. Зразки брали з діалізної трубки (0,2мл) або діалізного буферу (1,0мл) за допомогою гіподермічного шприца після 3, 24 та 48 годин і негайно поміщали його на лід для припинення ферментації. Експеримент проводили з використанням наступних зразків: 1) 85мг TOS 2) 85мг інуліну 3) 85мг суміші TOS/інулін у пропорції 9/1 (в/в) та 4) 85мг OS/інулін у пропорції 1/1 (в/в). SCFA (ацетат, пропіонат, бутират) кількісно аналізували з використанням газового хроматографа Varian 3800 (GC) [Varian Inc., Walnut Creek, U.S.A.], оснащеного детектором іонізації в полум'ї. 0,5мкл зразка вводили при 80°С в колонці (Stabilwax, 15 x 0,53мм, товщина плівки 1,00мкм, Restek Co., U.S.A.) з використанням гелію як газаносія (3,0 фунти на кв. дюйм). Після введення зразка піч нагрівали до 160°С зі швидкістю 16°С/хв після нагрівання до 220°С зі швидкістю 20°С/хв і нарешті утримували при температурі 220°С протягом 1,5 хвилин. Температура ін'єктора та детектора становила 200°С. 2-етилмасляна кислота використовувалась як внутрішній стандарт. Фігура 3 показує абсолютний (Фігура 3А) та відносний профіль SCFA (Фігура 3В), який одержується з ферментації різних олігосахаридів. Фігура 3А показує, що суміш дво х різних олігосахаридів (TOS/інулін), у яких два окремі олігосахариди мають гомологічність в монозних ділянках, нижчу 90, а різна довжина ланцюгів надає значно та синергічно збільшені кількості SCFA (особливо ацетату) на грам волокна, а ніж одиничні компоненти. Фігура 3В показує, що додавання суміші TOS/інулін сприяло формуванню вищої пропорції корисного ацетату (В). 18 Виробництво ацетату in vivo переноситься на покращене вироблення слизу бокаловидними клітинами і на вимірювання товщини кишкового слизового шару (дивіться приклад 4). Ці результати є показовими для вигідного застосування представленої композиції. Приклад 4: Впливи SCFA на вироблення слизу Моношари кишкових епітеліальних клітин Т84 (АТСС, USA) вирощували в 24 або 96 лункових планшетах для культури клітин тканини (Coming B.V.). Т84, інкубували з ацетатом коротколанцюгових жирних кислот, пропіонатом та бутиратом (SCFA, Merck, USA) протягом 24 год. в діапазоні концентрацій 0,025-4,0млМ. Надосадові рідини і/або клітини збирали і визначали експресію MUC-2 (муцин). Спосіб точок-плям використовували для визначення експресії MUC-2 в культура х клітин, оскільки муцини є надзвичайно великими глікопротеїнами (понад 500кДа), що ускладнює оперування ними у вестерн-блотинзі. Спосіб обґрунтовували з використанням неімунної сироватки (негатив забарвлених Т84), негативних контрольних клітин CCD-18Co (АТСС, USA) та альбуміну сироватки великої рогатої худоби (BSA). Зразки клітин збирали в Laemmli (протеїновий ізоляційний буфер), а визначення протеїну здійснювали з використанням мікропротеїнового дослідження (Biorad, USA) згідно з протоколом виробників. Зразки (0,3-0,7-1,0мкг/2мкл) наносили на нітроцелюлозні мембрани (Schleicher & Schuell, Germany). Мембрани закривали в TBST/5% Protivar (Nutricia, The Netherlands) після 1 години інкубування з антитілом анти-МUС-2 (люб'язно подароване Др. Айнерхандом, Еразмський університет, Роттердам, Нідерланди). Після промивання, плями інкубували з козиною та протикроликовою пероксидазою хріну (Santacruz Biotechnology, USA) і використовували для виявлення ECL субстрату (Roche Diagnostics, The Netherlands). Денситометрію проводили з використанням люмінесцентного фотоприймача (Boehringer Mannheim B.V., The Netherlands), а сигнал виражали у світлових одиницях (BLU). BLU's також виражали відносно контрольних інкубацій (%ВLU). Для порівняння стимулюючого впливу SCFA на експресію MUC-2, віднімали основні рівні експресії MUC-2. Фігура 4 показує різні впливи SCFA (ацетат, пропіонат, бутират) на експресію MUC-2 в кишкових епітеліальних клітинах (МС Т84) та співкультурах епітеліально-мезенхімальних клітин (СС Т84). Фігура 2 також показує, що ацетат є більш сильною у стимуляції експресії MUC-2 (вироблення слизу) порівняно з пропіонатом та бутиратом. Тому, представлена суміш олігосахаридів (яка підвищує вироблення ацетату (дивіться приклад 3)) особливо корисна для стимулювання вироблення слизу і може вигідно використовува тися у способі стимулювання цілісності бар'єру. Приклад 5:формула І молока для немовлят Інгредієнти (на літр), енергія 672ккал; протеїн 15г; відношення сироватка:казеїн 60:40; жир 36г; карбогідрат 72г; вітамін А 750RE; перемішані природні каротиди 400IU; вітамін D 10,6мкг; вітамін 19 81875 F 7,4мг; вітамін К 67,0мкг; вітамін В1 (тіамін) 1000мкг; вітамін В2 (рибофлавін) 1500мкг; вітамін В6 (піридоксин) 600мкг; вітамін В12 (ціанакобалмін) 2,0мкг; ніацин 9,0мкг; фолієва кислота 80мкг; пантотенова кислота 3000мкг; біотин 90мкг; вітамін С (аскорбінова кислота) 90мг; холін 100мг; інозітол 33мг; кальцій 460мг; фосфор 333мг; магній 64мг; залізо 8,0мг; цинк 6,0мг; марганець 50мкг; мідь 560мкг; йод 100мкг; натрій 160мг; калій 650мг; хлорид 433мг та селен 14мкг; у яких вміст жиру включає 3 грами риб'ячого жиру та 3 грами масла 40% арахідонової кислоти (DSM Food Specialties, Delft, Netherlands), які додатково містять 4 грами трансгалактоолігосахаридів ЕІіхог™ (Borculo Domo Ingredients, Netherlands) та 4 грами Raftiline™ (Orafti Acti ve Food Ingredients, Belgium). 20