Застосування l-серину як лікарського засобу для попередження та/або лікування свербіжу шкіри

Реферат: Винахід стосується застосування L-серину як лікарського засобу для попередження та/або лікування свербіжу шкіри. UA 107666 C2 (12) UA 107666 C2 UA 107666 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Даний винахід стосується застосування L-серину як лікарського засобу для попередження та/або лікування запальної реакції шкіри, викликаної гіперекспресією/гіперактивацією рецепторів PAR2, і, зокрема, дерматокосметичної композиції, що містить L-серин, термальну воду Avène, гліцерин та косметично прийнятний носій. Активований протеазами рецептор 2 (PAR2) пов'язаний з патофізіологією деяких захворювань, що супроводжуються запальними реакціями (Rattenholl A et al.; Drug News Perspect; 2008 Sep;21(7):369-81). PAR2 належить до суперродини 7-трансмембранних рецепторів, сполучених з G-білками, але має унікальний шлях активації. Дійсно, PAR2 активується сериновими протеазами, такими як трипсин, триптаза та фактори Xa і VIIa. В результаті розщеплення зазначеними протеазами позаклітинної частини рецептора з'являється новий амінокінцевий домен (SLIGKV), який діє як ліганд, "прикріплений" до рецептора: він зв'язується сам із собою на позаклітинній петлі 2 і зазнає самоактивації. PAR2 експресується різними типами клітин шкіри: кератиноцитами, міоепітеліальними клітинами потових залоз, волосяних фолікулів, дендритними клітинами шкіри та ендотеліальними клітинами власної пластинки слизової оболонки та дерми (Steinhoff et al., Exp Dermatol.; 1999 Aug;8(4):282-94). У меланоцитах зазначений рецептор не експресується, незважаючи на те, що PAR2 відіграє важливу роль в процесі пігментації, забезпечуючи перенесення меланіну від меланоцитів до кератиноцитів (Seiberg et al., Exp Cell Res.; 2000 Jan 10;254(1):25-32). Серинові протеази, вироблені в епідермісі, мають хемотаксичну дією, викликаючи залучення лейкоцитів у шкіру. Вони також залучені в регуляцію гомеостазу, мітогенезу та епідермальної диференціації і модулюють бар'єрну функцію шкіри. Більш того, серинові протеази роблять внесок у патофізіологію шкірних захворювань, пов'язаних із запаленням, імунним захистом організму, канцерогенезом, фіброзом і нервовою стимуляцією. Активність серинових протеаз у фізіології та патофізіології шкіри частково пов'язана з PAR. Дійсно, при запальних захворюваннях шкіри, таких як атопічний дерматит, плескатий лишай і псоріаз, спостерігається гіперекспресія PAR2 в епідермісі, дермі та судинах (Steinhoff et al., Exp Dermatol; 1999 Aug;8(4):282-94). PAR2 також пов'язаний з виникненням свербежу у пацієнтів, які страждають атопічним дерматитом (Steinhoff et al., J Neurosci. 2003 Jul 16;23(15):6176-80). Активація PAR2 протеазою типу трипсину викликає продукцію IL-8 кератиноцитами (HaCaT) (Hou et al., Immunology, 1998, 94:356-362). Було показано, що у суб'єктів із чутливою шкірою спостерігається гіперактивація PAR2. Наслідком гіперактивації PAR2 у чутливих нервових волокнах є відчуття дискомфорту шкіри. Більш того, наслідком гіперактивації PAR2 в кератиноцитах є запалення та відновлення порушеної бар'єрної функції (зниженої секреції ламелярних тілець) (Hachem JP et al., J Invest Dermatol.; 2006 Sep;126(9):2074-86). Таким чином, насправді існує необхідність у розробці активних агентів, що знижують експресію та/або активність PAR2. Заявники несподівано виявили, що L-серин, L-аспарагін та/або L-валін забезпечують інгібування експресії/активації PAR2. Таким чином, даний винахід стосується L-серину та/або L-аспарагіну та/або L-валіну для застосування як лікарський засіб для попередження та/або лікування запальної реакції шкіри, викликаної гіперекспресією та/або гіперактивацією PAR2. Переважно даний винахід стосується L-серину для застосування як лікарський засіб для попередження та/або лікування запальної реакції шкіри, викликаної гіперекспресією та/або гіперактивацією PAR2. Переважно запальна реакція шкіри, викликана гіперекспресією та/або гіперактивацією PAR2, є причиною запальної патології шкіри, вибраної із групи, що включає атопічний дерматит, плескатий лишай, псоріаз, свербіж, себорейний дерматит, розацею, купероз та шкірну гіперчутливість. Таким чином, даний винахід переважно стосується L-серину та/або L-аспарагіну та/або Lваліну для застосування як лікарський засіб для попередження та/або лікування запальної патології шкіри, вибраної із групи, що включає атопічний дерматит, плескатий лишай, псоріаз, свербіж, себорейний дерматит, розацею, купероз і шкірну гіперчутливість. L-серин є C3 α-амінокислотою, гідроксилованим гомологом аланіну. L-серин є гідроксилованою аліфатичною амінокислотою із систематичною назвою 2-аміно-3оксипропіонова кислота, що має таку формулу: 1 UA 107666 C2 L-аспарагін (або амід аміноянтарної кислоти) є незарядженою та гідрофільною полярною αамінокислотою, яка є похідним аспарагінової кислоти і має таку формулу: 5 L-валін є неполярною та гідрофобною α-амінокислотою, що має таку формулу: 10 15 20 25 "Гіперекспресія PAR2" означає, що зазначені рецептори експресуються в більшій кількості, ніж за нормальних фізіологічних умов. "Гіперактивація PAR2" означає, що зазначені рецептори проявляють більшу активність, ніж за нормальних фізіологічних умов. Таким чином, L-серин та/або L-аспарагін та/або L-валін застосовуються для інгібування PAR2. "Інгібування PAR2" означає інгібування та/або зниження експресії PAR2, поряд з інгібуванням та/або зниженням активності PAR2. У контексті даного винаходу, терміни "попереджати" і "попередження" означають запобігання виникненню захворювання, порушення або однієї чи більше ознак та/або симптомів. Переважно L-серин та/або L-аспарагін та/або L-валін використовуються в комбінації з термальною водою Avène. Переважно L-серин використовується в комбінації з термальною водою Avène. Термальна вода Avène має такий склад: Склад, мг/л Хлориди Бікарбонати Гідрокарбонати Сульфати Силікати Оксид кремнію Нітрати Кальцій Магній Натрій Калій Залізо Селен Avène 5,4 226,7 13,1 14 42,7 21,2 4,8 0,8 0,005 0,005 2 UA 107666 C2 Склад, мг/л Кремній Цинк Мідь Сухий залишок Вміст мінералів pH Осмолярність 5 Avène 0,02 0,005 207 Низький 7,5 Гіпотонічний Переважно L-серин та/або L-аспарагін та/або L-валін використовуються в комбінації із гліцерином. Переважно L-серин використовується в комбінації із гліцерином. Ще краще, L-серин та/або L-аспарагін та/або L-валін використовуються в комбінації з термальною водою Avène і гліцерином. Переважно L-серин використовується в комбінації з термальною водою Avène і гліцерином. Гліцерин, або глицерол, стосується пропан-1,2,3-триолу такої формули: 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Переважно L-серин та/або L-аспарагін та/або L-валін використовуються в концентрації більше 30 мкМ, переважно більше 50 мкМ, краще в концентрації більше 80 мкМ, і найкраще в концентрації більше 100 мкМ. Згідно з іншим аспектом, даний винахід стосується фармацевтичної композиції, що містить L-серин та/або L-аспарагін та/або L-валін для застосування як лікарський засіб для попередження та/або лікування запальної реакції шкіри, викликаної гіперекспресією та/або гіперактивацією PAR2. Краще, даний винахід стосується фармацевтичної композиції, що містить L-серин для застосування як лікарський засіб для попередження та/або лікування запальної реакції шкіри, викликаної гіперекспресією та/або гіперактивацією PAR2. Краще, зазначена композиція є дерматологічною композицією. Найкраще, зазначена композиція є композицією для місцевого застосування. "Місцеве застосування" стосується нанесення безпосередньо на шкіру. Краще, фармацевтична композиція також включає термальну воду Avène та/або гліцерин, переважно за відсутності будь-якого іншого активного агента, що виявляє протизапальну дію, і найкраще, за відсутності будь-якого іншого активного агента. Згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу, L-серин та/або L-аспарагін та/або Lвалін є єдиними активними агентами композиції, що виявляють протизапальну дію, і найкраще, є єдиними активними агентами. Краще, L-серин є єдиним активним агентом композиції, що виявляє протизапальну дію, і найкраще, є єдиним активним агентом. Згідно з конкретним варіантом реалізації винаходу, композиція згідно із даним винаходом може також містити активні агенти, призначені, зокрема, для попередження та/або лікування шкірних ушкоджень. Краще, композиція згідно із даним винаходом застосовується як лікарський засіб для попередження та/або лікування чутливої шкіри. У цілому, чутливу шкіру визначають за особливою реактивністю шкіри. Зазначена реактивність шкіри, як правило, виявляється як ознаки дискомфорту у відповідь на контакт суб'єкта зі збуджувальним фактором, який може мати різну природу. Зазначеним фактором може бути нанесення косметичного продукту на поверхню чутливої шкіри, споживання певної їжі, дія раптових перепадів температури, забруднення повітря та/або вплив ультрафіолетового чи інфрачервоного випромінювання. Також існують супутні фактори, такі як вік і тип шкіри. Наприклад, чутлива шкіра частіше зустрічається у суб'єктів із сухою або жирною шкірою, порівняно із суб'єктами, що мають нормальну шкіру. У контексті даного винаходу, чутлива шкіра включає подразливу та нетолерантну шкіру. Нетолерантна шкіра є шкірою, яка реагує виникненням відчуття нагрівання, стиснення, поколювання та/або почервоніння, на різні фактори, такі як нанесення косметичних або дерматологічних продуктів або мила. В цілому, зазначені ознаки пов'язані з еритемою та з 3 UA 107666 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 гіперсеборейною або акнетичною або навіть розацейною шкірою із сухими бляшками чи без них. Подразлива шкіра є шкірою, яка реагує появою свербежу, тобто подразнення або печії, на різні фактори, такі як навколишнє середовище, емоції, їжа, вітер, тертя, гоління, жорстка вода з високою концентрацією кальцію, коливання температури, вологість і т.д. Краще, запальна реакція шкіри, викликана гіперекспресією та/або гіперактивацією рецепторів PAR2, є причиною запальної патології шкіри, де зазначена патологія переважно вибрана із групи, що включає атопічний дерматит, плескатий лишай, псоріаз, свербіж, себорейний дерматит, розацею, купероз і шкірну гіперчутливість. Таким чином, даний винахід переважно стосується фармацевтичної композиції, що містить L-серин та/або L-аспарагін та/або L-валін, для застосування як лікарський засіб для попередження та/або лікування патології, вибраної із групи, що включає атопічний дерматит, плескатий лишай, псоріаз, свербіж, себорейний дерматит, розацею, купероз і шкірну гіперчутливість. Атопічний дерматит описується як захворювання, пов'язане з порушенням метаболізму ліпідів рогового шару і, зокрема, церамідів. Зазначена патологія виражається у формі відносно хронічного ксерозу, який поширюється на більшу частину тіла та супроводжується запаленням і місцевими висипаннями, що викликають свербіж. Псоріаз також є хронічним прогресуючим запальним захворюванням шкіри, яке вражає 2 % популяції. Зазначене захворювання характеризується аномальним ростом епідермальних клітин, пов'язаним із запальною реакцією. Плескатий лишай, що має різноманітні зовнішні прояви, є аутоіммунним захворюванням, імовірно зв'язаним зі стресом. Воно починається раптово подібно до алергії: шкіра покривається екзематозними сквамозними папулами, що викликають свербіж. Плескатий лишай може бути генералізованим, або ж обмежується малими ділянками шкіри. Висипання плескатого лишаю можуть супроводжуватися м'язовим або ревматичним болем. Захворювання може тривати протягом 12-15 місяців. Себорейний дерматит є дерматозом шкіри обличчя та голови, який характеризується червоними плямами з нечітким контуром з тонкими неприлипаючими лусочками. Розацея є спочатку доброякісним, невиліковним шкірним захворюванням, що проявляється як хронічне почервоніння носа та щік і іноді підборіддя та чола. Зазначені симптоми супроводжуються відчуттям поколювання, зокрема, навколо очей. Купероз є перманентним почервонінням опуклих ділянок обличчя (носа, щік, чола, підборіддя…), іноді з видимими неозброєним оком дрібними судинами. Краще, композиція згідно із даним винаходом містить від 0,01 % до 10 % мас. L-серину та/або L-аспарагіну та/або L-валіну по відношенню до загальної маси композиції, краще, від 0,5 % до 3 % L-серину та/або L-аспарагіну та/або L-валіну по відношенню до загальної маси композиції. Краще, композиція згідно із даним винаходом містить від 0,01 % до 10 % мас. L-серину по відношенню до загальної маси композиції та, краще, від 0,5 % до 3 % L-серину по відношенню до загальної маси композиції. Композиція згідно з винаходом може бути виготовлена у формі для зовнішнього застосування, для перорального, підшкірного введення, введення шляхом ін'єкції, ректального або генітального введення. Краще, композиція згідно з винаходом виготовлена у формі для місцевого застосування. Композиції згідно з винаходом можуть бути запропоновані у всіх лікарських формах, звичайно використовуваних залежно від бажаного способу введення. Носій може мати різну природу залежно від типу бажаної композиції. Більш конкретно, у випадку композицій, призначених для зовнішнього застосування, носій може бути водними, водно-спиртовими або масляними розчинами, дисперсіями у формі розчинів або дисперсіями у формі лосьйону або сироватки, рідкими емульсіями або молочними напіврідкими емульсіями, кремообразними суспензіями або емульсіями, водними або безводними гелями, мікроемульсіями, мікрокапсулами, мікрочастинками або іонними та/або неіонними везикулярними дисперсіями. Зазначені композиції виготовляють стандартними методами. Зазначені композиції можуть бути, зокрема, кремами для очищення, захисту, лікування або догляду за обличчям, руками, ногами, великими анатомічними складками або тілом (наприклад, денні креми, нічні креми, креми для видалення макіяжу, креми-основи, сонцезахисні креми), засобами макіяжу, такими як рідкі тональні креми, молочко для видалення макіяжу, молочком для захисту або догляду за тілом, молочком після засмаги, лосьйонами для догляду за шкірою, 4 UA 107666 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 гелями та пінами, такими як очищувальні або дезінфікуючі лосьйони, сонцезахисні лосьйони, лосьйони для штучної засмаги, композиції для душу, дезодоруючі композиції, що містять бактерицидний агент, гелі або лосьйони після гоління, креми-депілятори або композиції для попередження укусів комах. Композиції згідно з винаходом також можуть бути представлені у вигляді твердих препаратів, які є милами або очисними засобами у вигляді олівця. Зазначені композиції також можуть використовуватися для волосся у формі розчинів, кремів, гелів, емульсій, піни, або у формі аерозольних композицій, що містять пропелент під тиском. Коли композиція згідно з винаходом є емульсією, вміст жирної фази може варіювати від 5 % до 80 % мас., і переважно від 5 % до 50 % мас., по відношенню до загальної маси композиції. Масла, емульгатори та допоміжні емульгатори, використовувані в композиції у формі емульсії, вибрані зі звичайно використовуваних в області косметології та/або дерматології. Вміст емульгатора та допоміжного емульгатора може варіювати в композиції від 0,3 % до 30 % мас., переважно від 0,5 % до 15 % мас., по відношенню до загальної маси композиції. Коли композиція згідно з винаходом є жирним гелем, жирова фаза може становити більше 90 % від загальної маси композиції. Косметична та/або дерматологічна композиція згідно з винаходом може також містити допоміжні речовини, звичайно використовувані в області косметології, фармацевтики та/або дерматології, такі як гідрофільні або ліпофільні желеутворюючі агенти, гідрофільні або ліпофільні активні агенти, консерванти, антиоксиданти, розчинники, ароматизатори, суспензії, фільтри, бактерицидні речовини, поглиначі запаху та барвники. Кількість різних зазначених допоміжних речовин відповідає кількості, звичайно використовуваній у відповідній області, наприклад, від 0,01 % до 35 % від загальної маси композиції. Зазначені допоміжні речовини можуть вводитися в жирову фазу та/або у водну фазу, залежно від їх природи. Як приклад жирів, що можуть використовуватися згідно з винаходом, можна навести мінеральні масла, такі як, наприклад, гідрогенізований поліізобутен і мінеральне (нафтове) масло, рослинні олії, такі як, наприклад, рідка фракція олії ши, соняшникова та абрикосова олії, тваринні жири, такі як, наприклад, пергідросквален, синтетичні масла, зокрема, пурцелінове масло, ізопропілміристат і етилгексилпальмітат, і фторовані масла, такі як, наприклад, перфторполіефіри. Також можуть використовуватися жирні спирти, жирні кислоти, такі як, наприклад, стеаринова кислота і такі як, наприклад, воски, зокрема, парафін, карнаубський віск і бджолиний віск. Також можуть використовуватися силіконові сполуки, такі як силіконові масла і, наприклад, циклометикон і диметикон, воски, смоли та силіконові полімери. Як приклад емульгаторів, що можуть використовуватися згідно з винаходом, можна навести, наприклад, гліцеринстеарат, полісорбат 60, суміш цетилового та стеарилового спирту, ® оксіетиловану 33 молями оксиду етилену, що продається під назвою Sinnowax AO (HENKEL), ® суміш PEG-6/PEG-32/глікольстеарат, що продається під назвою Tefose 63 (GATTEFOSSÉ), міристиловий ефір ППГ-3, силіконові емульгатори, такі як цетилдиметиконкoполіол і сорбітанмоно- чи тристеарат, стеарат ПЕГ-40 та оксіетилований сорбітанмоностеарат (200E). Як приклад розчинників, що можуть використовуватися згідно з винаходом, можна навести нижчі спирти, зокрема, етанол та ізопропанол і пропіленгліколь. Як приклад гідрофільних желеутворюючих агентів можна навести карбоксильні полімери, такі як карбомер, акрилові співполімери, такі як співполімери акрилат/алкілакрилат, поліакриламіди і, зокрема, суміш поліакриламіду, C13-14-ізопарафіну та лаурету-7, що ® продається під назвою Sepigel 305 (SEPPIC), полісахариди, наприклад, похідні целюлози, такі як гідроксіалкілцелюлоза і, зокрема, гідроксипропілцелюлоза та гідроксіетилцелюлоза, природні камеді, такі як гуарова камедь, камедь ріжкового дерева та ксантанова камедь, і глини. Як приклад ліпофільних желеутворюючих агентів можна навести модифіковані глини, такі як бентоніти, солі металів жирних кислот, такі як стеарати алюмінію, та гідрофобний оксид кремнію, або етилцелюлоза та поліетилен. Гідрофільні активні агенти, що можуть використовуватися, включають білки або білкові гідролізати, амінокислоти, поліоли, зокрема C2-C10-поліоли, такі як гліцерин, сорбіт, бутиленгліколь і поліетиленгліколь, сечовина, алантоїн, цукри та похідні цукрів, водорозчинні вітаміни, крохмаль і бактеріальні чи рослинні екстракти, такі як екстракт алое вера. Ліпофільні активні агенти, які можуть використовуватися, включають ретинол (вітамін A) та його похідні, токоферол (вітамін E) та його похідні, цераміди, ефірні масла та неомилювані речовини (токотриенол, кунжутна олія, гамма-оризанол, фітостероли, сквалени, воски, терпени). Згідно з іншим аспектом, даний винахід стосується косметичного застосування L-серину та/або L-аспарагіну та/або L-валіну для інгібування PAR2. 5 UA 107666 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Краще, даний винахід стосується косметичного застосування L-серину для інгібування PAR2. Згідно з іншим аспектом, даний винахід стосується способу косметичного та/або фармацевтичного лікування для попередження та/або лікування запальної реакції шкіри, викликаної гіперекспресією та/або гіперактивацією PAR2, який включає щонайменше один етап нанесення фармацевтичної або косметичної композиції згідно із даним винаходом. Етап нанесення може бути, наприклад, нанесенням кремів, гелів, сироваток, лосьйонів, молочка для видалення макіяжу або композицій для застосування після засмаги, на шкіру або сухе волосся, нанесенням лосьйону для волосся на вологе волосся, шампунів, або нанесенням зубної пасти на ясна. Краще, зазначений спосіб є дерматологічним способом, який включає щонайменше один етап нанесення на шкіру дерматологічної композиції, описаної вище. Косметичний та/або фармацевтичний спосіб згідно з винаходом може здійснюватися шляхом місцевого нанесення, наприклад, щодня, композиції згідно з винаходом. Спосіб згідно з винаходом може включати один лише етап нанесення. Згідно з іншим варіантом реалізації винаходу, спосіб косметичного лікування включає повторення етапу нанесення від двох до трьох разів на день, або більше, у цілому, протягом тривалого періоду, щонайменше чотирьох тижнів, навіть від чотирьох до 15 тижнів, з однією чи більше перервами, залежно від конкретного випадку. Згідно з іншим аспектом, даний винахід стосується композиції, що містить L-серин та/або Lаспарагін та/або L-валін, термальну воду Avène і гліцерин та фармацевтично або косметично прийнятний носій. Краще, даний винахід стосується композиції, що містить L-серин, термальну воду Avène і гліцерин та фармацевтично або косметично прийнятний носій. Краще, зазначена композиція є дермато-косметичною композицією. Краще, зазначена композиція не містить інших активних агентів, що виявляють протизапальну дію, і найкраще, не містить інших активних агентів. Приклад 1 Як модель кератиноцитів використовували клітинну лінію HaCaT. L-серин і L-аспарагін були отримані від компанії EVONIK, L-аргінін був отриманий від компанії AMINO, і L-валін був отриманий від компанії AJINOMOTO. Флуоресцентний зонд (Fluo-4/AM у концентрації 2 мкМ) включали в клітини, посіяні на 96лункові планшети, протягом 30 хвилин і аналізований активний агент інкубували протягом 30 хвилин. Тільки деетерифікована форма зонда, зв'язана з іонами кальцію, збуджує флуоресценцію при довжині хвилі 485 нм і випромінює з довжиною хвилі 535 нм. Як інкубаційний буфер використовували буферний розчин HBSS з додаванням розчину HEPES (20 мМ) і водорозчинного пробенециду (2,5 мМ). Клітини стимулювали 10 нМ трипсином. Використовувана як контроль молекула була молекулою STI (соєвого інгібітору трипсину) у концентрації 1 мкМ. Оцінювали L-серин і L-аспарагін, розчинені в дистильованій воді в концентрації 50 мг/мл (475,8 мМ для L-серину та 378,4 мМ для L-аспарагіну), у концентраціях 3 мкМ, 10 мкМ, 30 мкМ і 100 мкМ. L-аргінін розчиняли до 100 мМ у дистильованій воді. L-валін розчиняли до 200 мМ у дистильованій воді. L-аспарагінову кислоту розчиняли до 200 мМ у дистильованій воді. Струм кальцію, який відображає активацію PAR2, оцінювали шляхом вимірювання флуоресценції в реальному часі від лунки до лунки відповідно до кінетики флуоресценції до та після введення трипсину. Процентне інгібування активації PAR2 відповідало процентному інгібуванню струму кальцію. Результати, представлені в таблиці 1, показують, що нанесення L-серину приводило до інгібування активації PAR2 у дозозалежний спосіб. Результати, представлені в таблиці 1, показують, що нанесення L-аспарагіну приводило до інгібування активації PAR2, але не в дозозалежний спосіб. Результати, представлені в таблиці 1, показують, що нанесення L-валіну приводило до інгібування активації PAR2. Більш того, результати показують, що L-аргінін не приводив до істотного інгібування активації PAR2. 6 UA 107666 C2 Таблиця 1 Процентне інгібування Концентрація L-серин L-аспарагін L-аргінін L-валін 1 мкМ STI Активність по відношенню до PAR2 (процентне інгібування) 3 мкМ 10 мкМ 30 мкМ 100 мкМ 3% 13 % 20 % 33 %*** 23 %* 23 %* 22 %* 31 %*** -17 % 12 % -11 % 1% 6% 26 %* 20 % 34 %*** 106-109 %*** p